Slide 1 - Moodle@FCT

Como pode efectuar-se a extracção do DNA de uma célula?
Versão professor
Introdução
Objectivos
Toda a informação necessária para criar um organismo
encontra-se no DNA.
Isolar DNA de células eucariotas.
Este ácido nucleico é usado durante o período de vida de
um organismo para fornecer instruções

para a síntese proteica e

funcionamento de vários processos celulares que
ocorrem constantemente.
Para isolar o DNA os cientista separaram-no dos outros
componentes celulares.
As células foram fragmentadas e o DNA separado do
conteúdo lipídico das membranas da célula e dos organitos.
Em seguida o DNA foi separado das proteínas.
Vais observar em 40 minutos aquilo que os cientistas
levaram muitos anos a descobrir, embora nesta actividade
se utilizem procedimentos e instrumentos muito simples
que não permitindo a separação do DNA de proteínas e de
RNA, possibilita a visualização do conteúdo nuclear, sob a
forma de filamentos brancos.
Nesta actividade vais usar diferentes tecidos e ficarás apto
a observar DNA de várias origens, uma vez que todas as
células contêm DNA ao longo do seu período de vida.
Algumas células, tais como os glóbulos vermelhos, perdem
o núcleo, bem como o DNA durante a sua maturação.
Material
Instrumentos de
laboratório
Reagentes
Bisturi
Água
Almofariz
Álcool
Balões
de
Erlenmeyer (500ml)
Funil
Papel de filtro
Proveta
Algodão hidrófilo
Gaze
Tubos de ensaio
Vareta
(95%)
Sal de cozinha
(1 colher de chá)
Detergente da louça
(1 colher de sopa)
Material de
estudo
1
Cebola
Fígado
Dicas para o professor

Antes de realizar a experiência com o aluno, o professor deve fazer a experiência antes da aula
para verificar se esta é viável.

No caso da cebola, é necessário uma grande quantidade de material para se verificar uma
precipitação de ADN significativa.

Todos os materiais utilizados não necessitam de qualquer tipo de tratamento para serem
eliminados, podem perfeitamente ser libertados no lavatório.
Procedimento
1. Corta a cebola toda (ou o
Fígado) em finos e pequenos
fragmentos e coloca-a(o)
num almofariz,
triturando posteriormente.
5. Filtra novamente o material
contido no Erlenmeyer para
uma proveta, utilizando o
algodão e a gaze (para impedir
que pedaços de fibra do
algodão se libertem ).
2. Mistura a água (até
metade da altura do balão de
Erlenmeyer), com o sal e o
detergente, e agita a solução
durante cerca de 5min
(poderá colocar-se um pouco
mais de sal e detergente)
6. Coloca a suspensão num
tubo de ensaio e junta pouco
a pouco álcool (com a mesmo
volume) pelas paredes do tubo
procurando observar a
formação de 2 fases:
3. Junta pouco a pouco,
cerca de metade da mistura
feita em 2 no almofariz
enquanto trituras mais um
pouco o material sólido.
4. Filtra a suspensão final
com um funil forrado com
papel de filtro para outro
Erlenmeyer.
Uma
superior alcoólica
Outra inferior aquosa
7. Mistura suavemente as 2
fases com a ajuda de uma
vareta fazendo movimentos
circulares até observares um
precipitado.
Tópicos para discussão
1. Onde se encontra o DNA na célula?
Cerca de 99% do DNA encontra-se no núcleo da célula ( visto tratar-se de uma célula eucariota). O restante DNA encontra-se em locais
específicos, como por exemplo organitos ( as mitocôndria e os cloroplastos possuem o seu próprio DNA ). Caso se tratasse de uma
célula procariota, o DNA estaria parte solto no hialoplasma e o resto concentrado (constituindo o nucléolo).
2. Porque motivo não se pode ver a dupla hélice que constitui a molécula de DNA? Será que o
que vemos é apenas DNA ou um aglomerado de outras substâncias? Quais?
A dupla hélice da cada molécula de DNA é demasiado pequena para se observar. Apesar de o DNA ser a maior molécula na célula, só
pode ser visto com um microscópio electrónico. A razão pela qual podemos observar o DNA na nossa experiência é que temos milhões
de cadeias de DNA e RNA aglomerados, para além de imensas proteínas.
Tópicos para discussão
3. Qual a função dos reagentes usados na experiência?
3.1. Detergente?
O detergente vai funcionar como um solvente da membrana celular das células, visto serem constituídas por lípidos. Com a rotura das
Membranas, o conteúdo celular incluindo as proteínas e o DNA, soltam-se e dispersam-se na solução.
3.2. Sal?
A adição do sal (NaCl) no início da experiência proporciona ao DNA um ambiente favorável para se descondensar (visto apresentar-se
normalmente enrolado em proteínas sob a forma de cromossomas).
3.3. Álcool?
O DNA não se dissolve no álcool na concentração que usamos na nossa experiência. Como resultado, o DNA aparece à superfície da
solução ou precipita, localizando-se normalmente à superfície visto ser menos denso que a mistura aquosa dos restos celulares.
Fontes

http://www.dbio.uevora.pt/LBM/Foco/Extraccao/Extraccao_DNA.html#_Toc485235128

http://www.ilo.org/public/english/index.htm
Como pode efectuar-se a extracção do DNA de uma célula?
Versão aluno
Introdução
Objectivos
Toda a informação necessária para criar um organismo
encontra-se no DNA.
Isolar DNA de células eucariotas.
Este ácido nucleico é usado durante o período de vida de
um organismo para fornecer instruções

para a síntese proteica e

funcionamento de vários processos celulares que
ocorrem constantemente.
Para isolar o DNA os cientista separaram-no dos outros
componentes celulares.
As células foram fragmentadas e o DNA separado do
conteúdo lipídico das membranas da célula e dos organitos.
Em seguida o DNA foi separado das proteínas.
Vais observar em 40 minutos aquilo que os cientistas
levaram muitos anos a descobrir, embora nesta actividade
se utilizem procedimentos e instrumentos muito simples
que não permitindo a separação do DNA de proteínas e de
RNA, possibilita a visualização do conteúdo nuclear, sob a
forma de filamentos brancos.
Nesta actividade vais usar diferentes tecidos e ficarás apto
a observar DNA de várias origens, uma vez que todas as
células contêm DNA ao longo do seu período de vida.
Algumas células, tais como os glóbulos vermelhos, perdem
o núcleo, bem como o DNA durante a sua maturação.
Material
Instrumentos de
laboratório
Reagentes
Bisturi
Água
Almofariz
Álcool
Balões
de
Erlenmeyer (500ml)
Funil
Papel de filtro
Proveta
Algodão hidrófilo
Gaze
Tubos de ensaio
Vareta
(95%)
Sal de cozinha
(1 colher de chá)
Detergente da louça
(1 colher de sopa)
Material de
estudo
1
Cebola
Fígado
Procedimento
1. Corta a cebola toda (ou o
Fígado) em finos e pequenos
fragmentos e coloca-a(o)
num almofariz,
triturando posteriormente.
5. Filtra novamente o material
contido no Erlenmeyer para
uma proveta, utilizando o
algodão e a gaze (para impedir
que pedaços de fibra do
algodão se libertem ).
2. Mistura a água (até
metade da altura do balão de
Erlenmeyer), com o sal e o
detergente, e agita a solução
durante cerca de 5min
(poderá colocar-se um pouco
mais de sal e detergente)
6. Coloca a suspensão num
tubo de ensaio e junta pouco
a pouco álcool (com a mesmo
volume) pelas paredes do tubo
procurando observar a
formação de 2 fases:
3. Junta pouco a pouco,
cerca de metade da mistura
feita em 2 no almofariz
enquanto trituras mais um
pouco o material sólido.
4. Filtra a suspensão final
com um funil forrado com
papel de filtro para outro
Erlenmeyer.
Uma
superior alcoólica
Outra inferior aquosa
7. Mistura suavemente as 2
fases com a ajuda de uma
vareta fazendo movimentos
circulares até observares um
precipitado.
Tópicos para discussão
1.
Onde se encontra o DNA na célula?
2. Porque motivo não se pode ver a dupla hélice que constitui a molécula de
DNA?
3. Qual a função dos reagentes usados na experiência?
2.1. Detergente?
2.2. Sal?
2.3. Álcool?