Ana Carolina Paschoalini Mafra - PRPPG

ANÁLISE DO PERFIL DE METILAÇÃO DO GENE MMP-14 EM
LINHAGENS TUMORAIS DE MAMA
Ana Carolina Paschoalini Mafra – Iniciação Científica / PIBIC/CNPq
Orientador: Giseli Klassen / Colaboradores: Edneia Ramos e Andressa Chequin
INTRODUÇÃO / OBJETIVOS
RESULTADOS / DISCUSSÃO
O câncer de mama é a principal causa de morte entre as mulheres,
sendo um problema de saúde pública mundial[1,2]. A epigenética estuda
as modificações da estrutura tridimensional do DNA que interferem na
expressão de genes. Por esse motivo, a epigenética pode estar
intimamente ligada ao agravamento de patologias, como o câncer de
mama[3]. As metaloproteases de matriz (MMPs) são conhecidas por
estarem envolvidas na progressão do câncer através do processo de
metástase[4]. Este projeto propõe a análise da regulação da expressão
epigenética do gene da metaloprotease MMP14 em linhagens tumorais
de mama e sua correlação com o potencial metastático das mesmas.
Planejamento dos iniciadores. Representação da região promotora do gene MMP14
com duas ilhas de CpG, locais propícios para a metilação do DNA. Os iniciadores
planejados para a clonagem e sequenciamento são representados pelas setas.
METODOLOGIA
Linhagens: MDA-MB 231,
MDA-MB 435, HB4a C3.6,
HB4a C5.2 e MCF-7.
CULTIVO CELULAR
EXTRAÇÃO DE DNA
TRATAMENTO COM
BISSULFITO DE SÓDIO
NESTED-PCR
AVALIANDO A METILAÇÃO
NAS LINHAGENS
CLONAGEM
SEQUENCIAMENTO
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] JEMAL, A.; BRAY, F.; FERLAY, J. Global Cancer Statistics. CA Cancer Journal, v. 61, n. 2, p. 69-90., 2011.
[2] INCA. Estimativas 2012: Incidência de câncer no brasil. Instituto Nacional do Câncer. M. D. S. D. B. D. E.
http://www.inca.gov.br. Rio de Janeiro 2011.
[3] NOWSHEEN, S.; AZIZ, K.; TRAN, P. T. et al. Epigenetic inactivation of DNA repair in breast cancer. Cancer
letters, p. 1-10., 2012.
[4] ARTACHO-CORDÓN, F.; RÍOS-ARRABAL, S.; LARA, P. C. et al. Matrix metalloproteinases: Potential therapy to
prevent the development of second malignancies after breast radiotherapy. Surgical oncology, p. 1-9., 2012.
RT-PCR do gene MMP14 e GAPDH em
linhagens tumorais de mama. O resultado
acima mostra as linhagens que expressam o
gene MMP14, sendo que a única que não
expressa é a MCF-7. Para verificar se a
expressão da MMP14 é regulada pela
metilação do DNA, seguiu-se com as etapas de
clonagem e sequenciamento.
Perfil de metilação da região promotora do
gene MMP14 na linhagem MCF-7. Após o
sequenciamento, pode-se observar as ilhas de
CpG com mais de 90% de metilação, indicando
que este processo regula negativamente a
expressão da proteína MMP14 na linhagem
MCF-7.
CONCLUSÃO
Neste trabalho foi confirmada a regulação da expressão de uma metaloprotease de
matriz por mecanismos epigenéticos, no caso a metilação do DNA. A alteração
dessa regulação pode controlar alguns processos envolvidos no câncer de mama,
como a metástase, denotando a importância deste estudo. Os próximos passos são
padronizar os métodos de análise para a clonagem e sequenciamento desse gene e
estudar todas as ilhas de CpG da região promotora, para maior entendimento da
relação epigenética – metástase.