TÍTULO: ANÁLISE DA VARIABILIDADE GENÉTICA EM

TÍTULO: ANÁLISE DA VARIABILIDADE GENÉTICA EM MYRMECOPHAGA TRIDACTYLA
(TAMANDUÁ-BANDEIRA), UTILIZANDO-SE MARCADORES MICROSSATÉLITES
CATEGORIA: EM ANDAMENTO
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE
SUBÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
INSTITUIÇÃO: CENTRO UNIVERSITÁRIO DE RIO PRETO
AUTOR(ES): RICARDO QUITERIO SARTORI
ORIENTADOR(ES): LILIAN CASTIGLIONI
COLABORADOR(ES): ALESSANDRO GARCIA LOPES, CINARA DE CÁSSIA BRANDÃO DE MATTOS,
FAMERP, HOSP. VETERINÁRIO DR. HALIM ATIQUE/UNIRP, LUIZ CARLOS DE MATTOS,
SACCAS/UNIRP, VINÍCIUS MATHEUS FERRARI
RESUMO
A fragmentação de habitats por interferência antrópica pode provocar diversos
distúrbios ecológicos que afetam a diversidade biológica de uma região. Assim, o
presente trabalho tem como objetivo analisar a estrutura genética da espécie
Myrmecophaga tridactyla, na região Noroeste do Estado de São Paulo, utilizando os
marcadores moleculares microssatélites, que são eficientes para esta finalidade.
Estudos dessa natureza apresentam grande relevância e podem auxiliar na criação
de planos de ação para a conservação das populações de tamanduá-bandeira
remanescentes.
INTRODUÇÃO
Há um grande esforço referente à preservação da fauna brasileira, em
especial aos animais ameaçados de extinção. Para obtenção de sucesso nessa
difícil tarefa é fundamental um conhecimento consistente da biologia da espécie em
questão. Assim, estudos de variabilidade genética nas populações remanescentes
dessa espécie, principalmente os que utilizam marcadores moleculares, podem ser
fundamentais para a compreensão da dinâmica populacional, das taxas de
migração, da estrutura genética, das similaridades entre isolados populacionais e
dos efeitos de fragmentação de habitat, fornecendo as ferramentas necessárias para
o desenvolvimento de programas de preservação da espécie (COLLEVATTI et al.,
2007; GUERRA et al., 2010).
OBJETIVOS
O presente trabalho objetiva caracterizar a estrutura genética das populações
de Myrmecophaga tridactyla, na região Noroeste do Estado de São Paulo, utilizando
marcadores
moleculares
microssatélites
e
obter
subsídios
genéticos
para
implantação de programas de manejo e conservação dessa espécie.
METODOLOGIA
As amostras analisadas foram obtidas em um Hospital Veterinário da região,
onde são realizados atendimentos emergenciais em animais silvestres acidentados,
trazidos por órgãos competentes. O DNA genômico foi extraído utilizando-se o kit
1
u
m
a
ci
t
a
ç
ã
o
d
o
d
o
c
u
m
e
n
t
o
o
u
o
r
e
s
u
m
o
d
e
u
QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN), de acordo com as instruções do fabricante. Para
amplificação dos fragmentos microssatélites foram utilizados dois pares de
iniciadores desenvolvidos para Myrmecophaga tridactyla (primer MtriUSP 07:
5’AGGAGGATAAGATTAGGCAG3’,
MtriUSP
13:
5’TGTGTCCTGTGAAGTAATGG3’
5’CTGCTCAGGTAACATTCC3’,
e
primer
5’TGGTAAAGAATGAGGTC3’;
GARCIA et al., 2005). A amplificação dos segmentos de DNA foi efetuada em
termociclador, utilizando-se 25µl de solução, contendo 0,8 mM de dNTP, 1,5 mM de
MgCl2, tampão de enzima Taq DNA polimerase (Tris-HCl 20 mM pH 8,4 e KCl 50
mM), 100 ng de primers e 1 unidade de enzima Taq Polymerase (Invitrogen). Cada
ciclo de PCR consiste basicamente na desnaturação a 95ºC por 3 minutos, 95ºC por
50 segundos, anelamento dos primers a 55ºC por 50 segundos e extensão a 72ºC
por 1 minuto, com 35 repetições. Após a amplificação do DNA, os produtos foram
visualizados em gel de poliacrilamida a 7,5%, corados com corante Sybr Safe.
DESENVOLVIMENTO
Em
função
da
grande
ameaça
de
extinção
sofrida
pela
espécie
Myrmecophaga tridactyla, e pelas características econômicas da região Noroeste
Paulista, a qual tem sido alvo intenso de ações antrópicas, principalmente
relacionadas ao desmatamento de grandes áreas destinadas ao plantio de culturas,
é fundamental a realização de estudos que abordem a estrutura genética desta
espécie (GARCIA et al., 2005).
Os efeitos deletérios do endocruzamento na estrutura genética de populações
são
conhecidos
de
longa
data.
Do
ponto
de
vista
conservacionista,
o
endocruzamento e a perda de variabilidade genética em populações pequenas e
isoladas podem causar sérias preocupações, devido aos seus efeitos deletérios para
a viabilidade populacional, reduzindo o sucesso reprodutivo e a sobrevivência,
aumentando o risco de extinção (COLLEVATTI, 2007).
Assim, o desenvolvimento do presente trabalho auxiliará na criação de planos
de ação para a conservação das populações de tamanduá-bandeira remanescentes
na
região,
bem
como
identificar estratégias
reprodutivas utilizadas pelos
representantes deste grupo de organismos. As amostras analisadas até o presente
são decorrentes de parcerias importantes entre a Polícia Ambiental, IBAMA e o
2
Hospital Veterinário de uma Instituição de ensino. Os resultados preliminares,
descritos a seguir, são interessantes e relevantes na área.
RESULTADOS PRELIMINARES
A amplificação genômica de 10 amostras de M. tridactyla evidenciou a
presença de oito loci microssatélites, sendo quatro monomórficos e quatro
polimórficos. As análises preliminares dos mesmos indicaram baixa variabilidade
genética entre os animais avaliados, o que está de acordo com dados da literatura
para esta espécie. O baixo nível de polimorfismo nas populações em estudo pode
ser atribuído à fragmentação de habitats da região e à presença de endogamia. A
continuidade deste estudo, com a obtenção de novas amostras e inclusão de outros
primers, bem como o sequenciamento dos fragmentos microssatélites, permitirá
elucidar a variabilidade genética atual das populações de tamanduá-bandeira da
região Noroeste paulista e desenvolver estratégias de manejo e conservação das
mesmas.
FONTES CONSULTADAS
COLLEVATTI, R. G.; LEITE, K. C. E.; MIRANDA, G. H. B.; RODRIGUES, F. H. G.
Evidence of high inbreeding in a population of the endangered giant anteater,
Myrmecophaga tridactyla (Myrmecophagidae), from Emas National Park, Brazil.
Genetics and Molecular Biology, v. 30, n. 1, p. 112-120, 2007.
GARCIA, J. E., VILAS BOAS, L. A., LEMOS, M. V. F., MACEDO LEMOS, E. G.,
CONTEL, E. P. B. Identification of microsatellite DNA markers for the giant anteater
Myrmecophaga tridactyla. Journal of Heredity, v. 96, p. 600-602, 2005.
GUERRA,
A.L.,
LIMA,
A.V.B.,
TADDEI,
F.G.,
CASTIGLIONI,
L.
Genetic
polymorphism, molecular characterization and relatedness of Macrobrachium species
(Palaemonidae) based on RAPD-PCR. Genetics and Molecular Research, v. 9, p.
2317-2327, 2010.
3