15/10/2009 GENÉTICA BACTERIANA GENOMA BACTERIANO Cromossoma (nucleóide nucleóide)) Informação genética essencial. Ácido desoxirribonucléico (DNA). Disciplina: Microbiologia Geral Único cromossoma circular, com exceções: Curso: Nutrição Ex. Prof. Renata Fernandes Rabello Borrelia (linear) e Vibrio cholerae (> 1 comossoma). Não está separado dos demais materias celulares por uma membrana nuclear. Plasmídeos (DNA extraextra-cromossômico cromossômico)) Moléculas de DNA de fita dupla circulares que se replicam independente do cromossoma. Informação genética adicional (ex. resistência antimicrobiana, virulência …). Tamanho e no de cópias variáveis. Célula eucariótica Plasmídeos incompatíveis. Célula procariótica Características conferidas por plasmídeos: Plasmídeos promícuos (em diferentes espécies). No citoplasma ou integrados ao cromossoma (epissoma). fertilidade (plasmídeo F, E. coli); Elemento genético móvel. virulência (ex. toxinas, enzimas, proteínas de superfície); Conjugação: principal resistência antimicrobiana (plasmídeos R); mecanismo plasmídeos entre bactérias. de transferência de bacteriocinas; outros. 1 15/10/2009 ALTERAÇÕES NO GENOMA Cura: eliminação de plasmídeos; Mutações. espontânea ou através de vários tratamentos. Transferência de genes: transformação; Emprego na pesquisa. conjugação; transdução; Mutação pontual. MUTAÇÃO Alteração herdável na sequência de bases do DNA. Espontânea (erros na replicação do DNA) F. Induzida (agentes mutagênicos): Mutações mais significativas (deleção, substituição, inserção ou inversão). Mutante genótipo ≠ da célula parenteral (selvagem). químicos (ex. análagos de bases); Genótipo conjunto de genes de um organismo. físicos (ex. radiações); Fenótipo conjunto das características observáveis. biológicos (ex. transposons). MUTAÇÕES PONTUAIS Mutante: genótipo ≠ da célula parenteral e o mesmo fenótipo genótipo e fenótipo ≠ da célula parenteral; Ex. Cepa selvagem Transcrição Sensível a quinolonas Mutação DNA girase/topoisomerase Tradução (duplicação do DNA) Cepa mutante Cepa mutante Sensível a quinolonas Resistente a quinolonas 2 15/10/2009 EXPERIMENTO DE GRIFFTH TRANSFORMAÇÃO (DÉCADA DE 20) DNA na forma livre é incorporado por uma célula Cepas rugosas (avirulentas) Cepas lisas (virulentas) Cepas lisas mortas Cepas lisas mortas e rugosas vivas Streptococcus pneumoniae receptora. GP e GN (ex. S. pneumoniae, N. gonorrhoeae, H. influenzae). Competência: proteínas específicas para captação e processamento do DNA. Camundongo vivo Camundongo morto TRANSFORMAÇÃO Camundongo vivo Camundongo morto TRANSFORMAÇÃO DNA transformante Cromossoma Doadora Proteínas de ligação ao DNA Proteínas de ligação ao DNA de fita simples Nuclease DNA livre Proteína RecA Receptora Gram-positivas CONJUGAÇÃO Competência induzida: [sais] e temperaturas; eletroporação (pulsos elétricos); experimentos de engenharia genética. Transferência de genes que envolve o contato entre 2 células. Plasmídeos conjugativos pili sexual. Célula receptora Célula doadora (“fêmea”) (“macho”) 3 15/10/2009 CONJUGAÇÃO CONJUGAÇÃO (Gram Gram--negativas negativas)) Corte em uma das fitas Pilus sexual Plasmídeo conjugativo Ex. Plasmídeo F (E. coli), outros a) Formação do pilus sexual e corte de uma das fitas do plasmídeo b) Transferência de uma das fitas do plasmídeo para célula receptora e replicação de DNA na cúla doadora. c) Replicação da fita de DNA transferida na célula receptora. d) Finalização do processo de conjugação. Obs. Cromossoma bacteriano não demonstrado nas figuras. Epissoma: Entre diferentes espécies e gêneros. integração ao cromossoma do hospedeiro; transferência de regiões do cromossoma. Ocorre principalmente entre GN. Em GP: Plasmídeo F (E. coli): não envolve pilus sexual; F+ (doadora); feromônios (célula receptora); F- (receptora); Hfr (doadora) epissoma, frequência de agregação de células. recombinação. TRANSDUÇÃO TRANSDUÇÃO Infecção por um fago Transferência de DNA de uma célula para outra por meio de um vírus. Cromossoma Transdução generalizada Ciclo lítico Transdução especializada Ciclo lisogênico Bacteriófago (fago). Partícula transdutora GN e GP (mas nem todas). Partícula transdutora Fagos T4 na superfície de uma E. coli Transdução especializada. Recombinação Transdução generalizada. Célula transduzida 4 15/10/2009 Transdução generalizada: TRANSDUÇÃO DNA derivado de qualquer região do cromossoma; substitui genoma viral. Transdução especializada: vírus temperados; DNA de uma região específica do cromossoma integra-se ao DNA viral. 5