EFEITO DO RESFRIAMENTO SOBRE EMBRIÕES DE TAMBAQUI

Anais do VII CONERA – Organismos Aquáticos
Acta Veterinaria Brasilica, v.8, Supl. 2, 2014
EFEITO DO RESFRIAMENTO SOBRE EMBRIÕES DE TAMBAQUI
(Colossoma macropomum)
[Chilling effect on Tambaqui (Colossoma macropomum) embryos]
Renata Vieira do Nascimento1*, Mayara Setúbal Oliveira1, Liliane Veras Leite1, Francisco Renan Aragão
Linhares1, Marcelo José Ascenção Feitosa Vieira 2, Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley1
1
Universidade Estadual do Ceará, Laboratório de Biotecnologia da Reprodução de Peixes. *Autor para correspondência. Email: [email protected].
2
Deparamento Nacional de Obras Contra as Secas.
ABSTRACT - The aim of this study was to assess the morphology of tambaqui embryos (Colossoma
macropomum) cooled at 4 °C. The embryos were selected from two embryonic stages: blastopore closure and
optic vesicle appearance. Viable embryos in the respective stages were taken from the incubator and exposed to
a cryoprotectant solution containing methanol (10%) and sucrose (0.5 M). Then embryos were submitted to a
cooling curve (0.5 ºC/min) until they reached 4 ºC and stored for 6 hours. It was observed that the embryos
cooled at optic vesicle appearance stage showed greater resistance to cooling (29.1± 4.7% of normal embryos)
compared to the ones cooled at blastopore closure stage (12.1 ± 2.6% of normal embryos). It follows that the
cooling of tambaqui embryos in optic vesicle stage, using a cryoprotectant solution composed of 0.5 M sucrose
plus 10% methanol, is more efficient and causes less changes on the embryo morphology.
Keywords: morphology; embryonic development; Colossoma macropomum.
Palavras-Chave: morfologia; desenvolvimento embrionário; Colossoma macropomum.
INTRODUÇÃO
O tambaqui (Colossoma macropomum) é um peixe
reofílico, da família Characidae. Existem poucos
estudos promissores com relação a conservação de
ovócitos e embriões (Zhang et al., 2007). Por isso
tem-se utilizado o resfriamento como alternativa
para fornecer informações que colaborem com as
pesquisas de criopreservação (Streit Jr. et al., 2007).
Entretanto, é necessário que haja a elaboração de
protocolos eficientes de resfriamento de embriões
utilizando soluções crioprotetoras adequadas. Além
disso, é preciso estabelecer o melhor estágio para o
resfriamento e o melhor tempo de estocagem.
Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo
avaliar a morfologia de embriões de tambaqui (C.
macropomun),
em
dois
estágios
de
desenvolvimento, resfriados a 4 oC em sacarose 5M
associado a metanol 10%.
MATERIAL E MÉTODOS
Foram selecionados reprodutores de tambaqui (C.
macropomun) do Departamento Nacional de Obras
Contra as Secas (DNOCS) localizado em
Pentecoste-CE. As fêmeas receberam tratamento
hormonal com duas doses de extrato hipofisário de
carpa (EHC), a primeira de 0,5 mg EHC/Kg de
peso vivo, e a segunda de 5 mg EHC/Kg de peso
vivo, com intervalo de 12 horas entre as aplicações.
Aos machos foi administrada dose única de 2,5 mg
EHC/kg de peso vivo. Os gametas foram coletados
cerca de 7 horas após a segunda dose da indução
hormonal (~231 horas/grau). Os ovos foram
transferidos para incubadoras com fluxo constante
de água e o desenvolvimento foi acompanhado por
meio de observações ao microscópio a cada 30
minutos.
Para o resfriamento dos embriões foram
selecionados
dois
estágios
embrionários:
fechamento do blastóporo (TB) e aparecimento da
vesícula óptica (TV). Para tanto, embriões viáveis
nos respectivos estágios foram coletados das
incubadoras e acondicionados em tubos contendo
solução crioprotetora de sacarose 0,5M adicionada
de metanol 10% segundo Lopes (2011).
Imediatamente após a diluição, os tubos foram
acondicionados em caixas térmicas e submetidos á
uma curva de resfriamento de -0,5 °C por minuto
até atingirem a temperatura de 4º C onde
permaneceram por 6 horas.
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Anais do VII CONERA – Organismos Aquáticos
Após o tempo de resfriamento, foi feita uma
avaliação quanto às alterações morfológicas,
utilizando microscopia óptica, para estimar a
porcentagem de embriões íntegros nos diferentes
tratamentos.
Este trabalho foi aprovado pelo Comitê de Ética
Para Uso de Animais com o processo n° 091443881.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Os embriões alcançaram o estágio de fechamento
do blastóporo e o aparecimento da vesícula óptica
aproximadamente 6h (~174horas-grau) e 9h (~261
horas-grau) após a fertilização, respectivamente.
Em ambos os tratamentos, após o resfriamento,
foram observadas ovos contendo uma massa celular
cinzenta e disforme no interior da membrana de
fecundação, caracterizando embriões degenerados.
Essas alterações na qualidade embrionária são
devido a sensibilidade ao frio, toxicidade das
soluções crioprotetoras e a formação de cristais de
gelo no interior do embrião (FORNARI, 2010).
Outro fator importante para o sucesso no
resfriamento de embriões de peixes é o estágio de
desenvolvimento embrionário. No presente
trabalho, foi observado que o estágio de vesícula
óptica apresentou uma maior resistência ao
resfriamento (29,1±4,7% de embriões normais)
quando comparado ao fechamento do blastóporo
(12,1±2,6% de embriões normais). Estes diferentes
resultados estão relacionados com a permeabilidade
das paredes dos ovos e ao mecanismo de
bombeamento osmótico que são diferentes
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dependendo do estágio embrionário (NAKATANI,
2001).
CONCLUSÃO
Desta forma, pode-se concluir que o resfriamento
de embriões em solução crioprotetora de sacarose
0,5M adicionada de metanol 10% no estágio de
vesícula óptica é mais eficiente, pois altera menos a
morfologia do embrião. Todavia, é necessário que
seja realizado mais estudos que visem estabelecer
os melhores crioprotetores a serem usados no
processo de resfriamento a fim de proporcionar
uma menor alteração na morfologia embrionária.
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