Instruções de Uso Ref.:110

HIV
Ref.: 110
Instruções de Uso
Finalidade . Sistema para detecção qualitativa rápida de anticorpos
anti-HIV-1/2/O em amostras de soro, plasma ou sangue total.
[Somente para diagnóstico in vitro.]
Princípio .
O sistema consiste em uma membrana com antígenos
recombinantes de HIV-1/O e HIV-2 (gp41 e gp36) imobilizados na linha
teste e um anticorpo anti-IgG imobilizado na linha controle. Na execução
do teste, a amostra é colocada para reagir com um conjugado composto
de partículas de ouro coloidal marcadas com antígenos recombinantes
de HIV-1/2/O e partículas de ouro coloidal marcadas com IgG. Com a
adição da solução diluente, a mistura amostra-conjugado se move
cromatograficamente na membrana por ação capilar. Na existência de
anticorpos anti-HIV/1/2/O na amostra, uma linha colorida se forma na
região teste, onde os antígenos de HIV estão imobilizados, significando
um resultado positivo. Como a mistura continua a migrar na membrana,
ocorre a formação de uma segunda linha colorida na região controle,
onde está aplicado o anticorpo anti-IgG, confirmando que o teste se
processou adequadamente.
A formação de duas linhas horizontais coloridas indica um teste positivo,
e a formação de uma só linha na posição controle indica um teste
negativo.
A ausência da linha colorida na posição controle indica que o teste não se
processou adequadamente e que deve ser repetido.
Características do sistema .
O sistema HIV - Labtest foi
desenvolvido para detectar anticorpos anti-HIV-1/2/O em amostras de
soro, plasma ou sangue total, utilizando antígenos recombinantes do
vírus, com elevadas sensibilidade e especificidade. A possibilidade do
uso de diferentes tipos de amostra confere versatilidade ao sistema.
Os estudos realizados demonstram que o sistema não apresenta
resultados falsamente positivos em amostras positivas para anti-HTLV,
anti-HCV, anti-T.cruzi, Sífilis, anti-HBc ou HBsAg.
O sistema não necessita de equipamento especial para a realização dos
testes, o que torna extremamente prática sua utilização.
Metodologia . Imunocromatografia.
Reagentes
1. Placa de Reação - Armazenar entre 2 - 30 ºC.
Contém conjugado ouro coloidal-antígenos recombinantes de HIV-1/O
(gp41) e HIV-2 (gp36), conjugado ouro coloidal-IgG, antígenos
recombinantes de HIV-1/2/O e anti-IgG aplicados ou imobilizados em
uma membrana. Não congelar. No momento de realização do teste, a
placa de reação deve estar à temperatura ambiente.
2.
2
- Solução Diluente - Armazenar entre 2 - 30 ºC.
Contém tampão PBS pH 8,3, albumina bovina e azida sódica <0,1%. Não
congelar. No momento de realização do teste, a solução diluente deve
estar à temperatura ambiente.
01 Português - Ref.: 110
MS 10009010151
Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições
indicadas são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Após
abertos, os reagentes devem ser manuseados de acordo com as boas
práticas de laboratório para evitar contaminações de natureza química e
microbiana que podem provocar redução da estabilidade.
Precauções e cuidados especiais
Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na
manipulação de amostras e reagentes.
Não misturar reagentes de lotes diferentes e não utilizar reagentes com
1
prazo de validade expirado .
Utilizar somente ponteiras descartáveis para pipetar cada amostra.
A Solução Diluente (No. 2) contém azida sódica, que é tóxica. Não ingerir
e, no caso de contato com os olhos, lavar imediatamente com grande
quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida pode formar
compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo ou cobre.
Portanto, utilizar grandes volumes de água para descartar os reagentes.
Para descartar os reagentes e o material biológico, sugerimos aplicar as
normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental.
Material necessário e não fornecido
1. Micropipetas e ponteiras descartáveis para medir amostras.
2. Cronômetro.
Amostra
Usar soro, plasma ou sangue total.
O analito é estável 2 dias entre 2 - 8 ºC. Armazenar a amostra de soro ou
plasma em temperatura igual ou inferior a 20 ºC negativos por até 6
meses em recipiente hermeticamente fechado para evitar evaporação.
A amostra de sangue total não deve ser congelada.
Assegurar que as amostras estejam descongeladas e homogeneizadas
antes da sua utilização. Partículas em suspensão devem ser eliminadas
por centrifugação.
As amostras não devem ser inativadas pelo calor, pois podem produzir
resultados incorretos.
Não usar amostras com sinais de contaminação ou amostras congeladas
e descongeladas repetidas vezes.
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) que
estabeleça procedimentos adequados para colheita, preparação e
armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos à amostra
podem ser muito maiores que os erros ocorridos no procedimento
analítico.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue
não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las, deve-se seguir as
normas de biossegurança.
Interpretação dos resultados
Interferências
Não foram observados resultados falsamente positivos em amostras
positivas para anti-HTLV, anti-HCV, anti-T.cruzi, Sífilis, anti-HBc ou
HBsAg.
Procedimento
As amostras e o produto devem estar à temperatura ambiente antes de
iniciar o ensaio.
Procedimento de teste
1. Remover a placa de reação do envelope protetor, identificá-la e
posicioná-la em uma superfície horizontal.
2. Adicionar 0,01 mL da amostra no orifício de amostra.
3. Logo em seguida, adicionar 3 gotas (0,1 mL) de Solução Diluente
(No. 2) no orifício de amostra.
4. Realizar a leitura dos resultados entre 10 e 15 minutos.
Negativo . ocorre a formação de uma linha colorida na posição controle e
ausência de linha colorida na posição de teste.
Positivo . ocorre a formação de uma linha colorida na posição teste e
outra linha colorida na posição controle. A linha na posição teste, mesmo
quando sua intensidade for menor que a linha na posição controle, indica
que o teste deve ser considerado positivo.
Não considerar resultados positivos quando a linha na posição teste
se mostrar visível apenas depois de decorridos 15 minutos do início do
teste.
Inválido . a ausência de formação da linha controle após 15 minutos
indica um erro de procedimento ou deterioração do sistema e o teste deve
ser considerado inadequado.
Toda amostra que apresentar um resultado positivo em um teste rápido,
devido a este ser um teste de triagem, deve ser analisada por metodologia
confirmatória, como imunofluorescência indireta ou Western Blot. Testes
rápidos podem ser utilizados como única metodologia para diagnóstico
da infecção pelo HIV somente em situações especiais, conforme portaria
9
n° 151, de 14 de outubro de 2009 .
Controle da qualidade .
C
T
C
T
C
T
A formação de uma linha colorida na
posição controle é indicativa de um desempenho adequado do teste.
Além disso, o campo de reação pode apresentar fundo com coloração
levemente rósea, de forma que não interfira na leitura do resultado do
teste. Para assegurar que o sistema não foi adversamente afetado e que
mantém os níveis adequados de desempenho, sugerimos associar um
sistema de controle da qualidade, usando duas amostras conhecidas,
sendo uma negativa e outra positiva.
Características do desempenho10
Positivo
Estudos de comparação .
Os estudos de comparação de
métodos foram realizados utilizando 496 amostras positivas e negativas
ensaiadas com o sistema HIV - Labtest e um produto similar como
método comparativo, obtendo-se os resultados apresentados na tabela
abaixo.
C
T
HIV
Método Comparativo
Positivos
Negativos
Positivos
4
0
Negativos
0
492
Negativo
C
T
Inválido
02 Português - Ref.: 110
C
T
Sensibilidade relativa: 100%
Especificidade relativa: 100%
Eficiência: 100% (intervalo de confiança: 99,2% - 100%)
Índice de Kappa: 1,0
O índice de Kappa maior que 0,75 indica uma excelente concordância
entre os dois métodos, demonstrando que o sistema HIV - Labtest é
substancialmente equivalente ao método comparativo.
Adicionalmente foram realizados estudos comparativos utilizando painel
de soro comercial contendo 13 amostras positivas e negativas para a
presença de anti-HIV-1/2. O sistema HIV - Labtest apresentou
desempenho semelhante a outros testes rápidos utilizados no painel.
Repetitividade - Imprecisão intra-ensaio .
A imprecisão
intra-ensaio foi verificada pela avaliação de 3 replicatas de cinco
amostras positivas e cinco negativas, utilizando três lotes do produto.
A concordância entre os resultados obtidos foi de 100% em todos os
testes.
Reprodutibilidade - Imprecisão total . A imprecisão total foi
verificada pela avaliação de cinco amostras positivas e cinco negativas
em 6 ensaios independentes, utilizando três lotes do produto.
A concordância entre os resultados obtidos foi de 100% em todos os
testes.
Significado clínico .
O vírus da imunodeficiência humana (HIV)
pertence ao gênero Lentivirus da família Retroviridae e foi descoberto em
2
1983 . Existem dois tipos de HIV: o HIV-1 e o HIV-2. O HIV-1 é mais
virulento e é o tipo predominante no mundo enquanto que HIV-2 está
3
restrito à África ocidental . Para esses dois tipos de vírus existem vários
subtipos. O HIV-1 se divide em subtipos M e O. O HIV-2 se divide em
subtipos A, B, C, D e E. Apesar das diferenças biológicas, sorológicas e
genômicas, os vários subtipos de HIV-1/2 apresentam uma reatividade
4
antigênica cruzada .
O vírus infecta células do sistema imune humano como linfócitos,
macrófagos e células dendríticas. A entrada do vírus na célula é mediada
pela interação da proteína gp120 do vírus com a molécula CD4 e com o
5
receptor CCR5 . À medida que se multiplica, o HIV mata os linfócitos T
CD4+, que têm papel central na resposta imune celular. Com a baixa dos
linfócitos T CD4+, a resposta imune celular deixa de funcionar
adequadamente. Esse quadro é conhecido como síndrome da
6
imunodeficiência adquirida (AIDS) . Após a manifestação da AIDS,
diversas infecções opor tunistas se instalam, inclusive de
microrganismos que, em pessoas saudáveis, não causam doenças. Um
indivíduo pode ficar infectado décadas com o HIV, porém, ao desenvolver
7
a AIDS, a sobrevida média gira em torno de 9 meses .
A transmissão do HIV se dá por três vias principais: contato sexual sem
proteção, contato com sangue contaminado (incluindo transfusões de
sangue e uso de seringas contaminadas) e transmissão de mãe para filho
durante a gravidez, parto ou aleitamento materno.
5. Coakley E, Petropoulos CJ, Whitcomb JM. Assessing chemokine
co-receptor usage in HIV. Current Opinion in Infectious Diseases 2005;
18 (1): 9-15.
6. Pattanapanyasat K, Thakar RT. CD4+ T cell count as a tool to monitor
HIV progression & anti-retroviral therapy. Indian Journal of Medical
Research 2005; 121 (4): 539-549.
7. Morgan D, Mahe C, Mayanja B, Okongo JM, Lubega R, Whitworth JA.
HIV-1 infection in rural Africa: is there a difference in median time to
AIDS and survival compared with that in industrialized countries? AIDS
2002; 16 (4): 597-603.
8. Brasil. Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Portaria
nº 488, de 17 de junho de 1998. Dispõe sobre a adoção de
procedimentos seqüenciados para a detecção de anticorpos anti-HIV.
Diário Oficial da União da República Federativa do Brasil, Brasília, 18
jun. 1998. Disponível em www.saude.gov.br/svs.
9. Brasil. Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Portaria
n° 151, de 14 de outubro de 2009. Dispõe sobre etapas seqüenciadas
e o Fluxograma Mínimo para o Diagnóstico Laboratorial da Infecção
pelo HIV em indivíduos acima de 18 meses, de uso obrigatório pelas
instituições de saúde pública e privadas. Diário Oficial da União da
República Federativa do Brasil, Brasília, 14 de outubro de 2009.
Disponível em www.saúde.gov.br/svs.
10. Labtest: Dados de Arquivo.
Apresentação
Produto
Referência
Conteúdo
Placa de Reação
110-10
HIV
2
Placa de Reação
110-20
2
Placa de Reação
110-40
2
10 Unidades
1 X 1,5 mL
20 Unidades
1 X 3,0 mL
40 Unidades
1 X 6,0 mL
Referências
1. Brasil. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária.
Resolução RDC nº 302, de 13 de outubro de 2005. Dispõe sobre
regulamento técnico para funcionamento de laboratórios clínicos.
Diário Oficial da União da República Federativa do Brasil, Brasília, 14
out. 2005. Disponível em <www.anvisa.gov.br/e-legis/>.
2. Barre-Sinoussi F, Chermann JC, Rey F, Nugeyre MT, Chamaret S,
Gruest J, Dauguet C, Axler-Blin C, Vezinet-Brun F, Rouzioux C,
Rozenbaum W, Montagnier L. Isolation of a T-lymphotropic retrovirus
from a patient at risk for acquired immune deficiency syndrome.
Science 1983; 220 (4599): 868-871.
3. Kandathil AJ, Ramalingam S, Kannangai R, David S, Sridharan G.
Molecular epidemiology of HIV. Indian Journal of Medical Research
2005; 121 (4): 333-344.
4. Travers K, Mboup S, Marlink R, Gueye-Nidaye A, Siby T, Thior I, Traore
I, Dieng Sarr A, Sankale JL, Mullins C. Natural protection against HIV-1
infection provided by HIV-2. Science 1995; 268 (5217): 1612-1615.
Informações ao consumidor
[Termos e Condições de Garantia]
A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto dentro das
especificações até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que os
cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas
instruções sejam seguidos corretamente.
Labtest Diagnóstica S.A.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
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Revisão: Outubro, 2007
Ref.: 040211
03 Português - Ref.: 110
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Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro
Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro
Symbols used with ivd devices
Conteúdo suficiente para < n > testes
Contenido suficiente para < n > tests
Contains sufficient for < n > tests
Risco biológico
Riesgo biológico
Biological risk
Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa)
Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa)
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy)
Marca CE
Marcado CE
CE Mark
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Tóxico
Tóxico
Poison
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Reagente
Reactivo
Reagent
Limite de temperatura (conservar a)
Temperatura limite (conservar a)
Temperature limitation (store at)
Fabricado por
Elaborado por
Manufactured by
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Representante autorizado en la Comunidad Europea
Authorized Representative in the European Community
Número do lote
Denominación de lote
Batch code
Consultar instruções de uso
Consultar instrucciones de uso
Consult instructions for use
Controle
Control
Control
Número do catálogo
Número de catálogo
Catalog Number
Controle negativo
Control negativo
Negative control
Adições ou alterações significativas
Cambios o suplementos significativos
Significant additions or changes
Controle positivo
Control positivo
Positive control
Produto diagnóstico in vitro
Dispositivo de diagnóstico in vitro
In vitro diagnostic device
Controle
Control
Control
Liofilizado
Liofilizado
Lyophilized
Corrosivo
Corrosivo
Corrosive
Ref.: 170309
04 Português - Ref.: 110