Efeito da antibioticoterapia sobre a comunidade bacteriana

55º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 55º Congresso Brasileiro de Genética • 30 de agosto a 02 de setembro de 2009
Centro de Convenções do Hotel Monte Real Resort • Águas de Lindóia • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
25
Efeito da antibioticoterapia sobre a comunidade
bacteriana endofítica de microplantas de abacaxizeiro,
manjericão e pupunheira
Abreu-Tarazi, MF¹; Leone, GF¹; Almeida, CV²; Tsai, SM³; Almeida, M
¹Laboratório de Morfogênese e Biologia Reprodutiva de Plantas, ESALQ/USP.
2
In Vitro Palm Consultoria EDB Ltda. 3Laboratório de Biologia Celular e Molecular, CENA/USP.
[email protected]
Palavras-chave: in vitro, bactéria, endófitos, antibióticos, 16S rRNA.
A utilização biotecnológica e agrícola da microbiota endofítica já foi constatada em inúmeras culturas, porém raros
são os relatos sobre bactérias endofíticas de plantas micropropagadas, sem inoculação artificial. Essa carência de
estudos pode ser conseqüência da característica fastidiosa ou não cultivável, de grande parte dos endófitos, levando
à necessidade de aplicação de técnicas independentes de cultivo para seu estudo. Sabendo-se que as interações
simbióticas entre plantas e bactérias podem influenciar a morfogênese vegetal, o presente trabalho buscou
avaliar por meio de técnicas de biologia molecular, o efeito do uso de antibióticos sobre a comunidade endofítica
de bactérias de microplantas de abacaxizeiro (Ananas comosus (L.) Merrill) cv. IAC Gomo-de-mel, manjericão
(Ocimum basilicum L.) e pupunheira (Bactris gasipaes Kunth-Arecaceae) e suas conseqüências na morfogênese
in vitro. Seguindo rigorosos critérios de assepsia, foram selecionadas oito microplantas assintomáticas de cada
espécie. As unidades experimentais foram tubos (50ml), contendo duas microplantas por espécie, inoculadas em
meio com metade da concentração de sais de MS livre de antibióticos, ou com solução estéril de antibióticos
(estreptomicina, ampicilina, tetraciclina e ciprofloxacina) na concentração de 200μg.ml-1. Foram realizadas quatro
repetições. Os tubos foram mantidos no escuro, sob rotação horizontal (150rpm), a 25 ±2°C, por 10 dias. Após esse
período, para cada tubo, uma microplanta foi utilizada para extração do DNA genômico total, e a outra mantida
em sala de crescimento para avaliação morfogenética por 30 dias. A partir do DNA extraído, foram realizadas
reações para amplificação (PCR) do fragmento do gene 16S rRNA de Bacteria com os primers fD1 e rD1. Em
seguida, foi realizada outra PCR, desta vez com o intuito de garantir a exclusão de 16S rRNA cloroplastidial com
os primers f799 e r1492. Os resultados revelaram que, independente da espécie estudada, os produtos de PCR
com os primers fD1 e rD1, para todas as microplantas (tratadas com antibióticos ou não), geraram fragmentos
de aproximadamente 1500pb, evidenciando a presença inicial de fragmentos do gene 16S rRNA. Por outro lado,
as reações de PCR com os primers f799 e r1492 resultaram em dois fragmentos distintos (entre 700 e 1100pb),
sendo que o fragmento menor, proveniente de bactérias, não foi detectado nas amostras de plantas submetidas
à antibioticoterapia, comprovando a ausência de DNA bacteriano após a atuação de antibióticos. Em relação à
morfogênese, todas as microplantas submetidas à antibioticoterapia apresentaram inicialmente estagnação do
crescimento, seguido de amarelecimento de folhas, ou oxidação de raízes e/ou parte aérea e conseqüentemente
morte das culturas. Conclui-se que o uso de antibióticos causa alteração na microbiota bacteriana endofítica,
evidenciada pela redução ou eliminação de fragmentos do gene 16S rRNA de bactérias em microplantas de
abacaxizeiro, manjericão e pupunheira, causando um desequilíbrio nas relações planta-microrganismo e levando
a alterações na morfogênese das culturas in vitro.
Apoio Financeiro: FAPESP e InVitroPalm.