Wordtemplate 2

artus® EBV QS-RGQ Kit
Características de desempenho
artus EBV QS-RGQ Kit, Versão 1,
4501363
Verificar a disponibilidade de novas revisões de rotulagem electrónica em
www.qiagen.com/products/artuscmvpcrkitce.aspx antes da realização do
teste. O estado de revisão actual é indicado pela data de emissão
(formato: mês/ano).
Sensibilidade analítica — plasma
O limite de detecção analítica relativo à purificação (limite de sensibilidade) foi avaliado para o
artus EBV QS-RGQ Kit utilizando amostras clínicas positivas para EBV em combinação com a
extracção no QIAsymphony SP.
Para o plasma, a sensibilidade analítica relativa à purificação do artus EBV QS-RGQ Kit foi
determinada utilizando amostras de plasma clínicas contaminadas com uma série de diluições de
material do vírus VEB de 3160 ao valor nominal de 1 VEB cópia/ml. Estas foram sujeitas a
extracção de ADN usando o QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi Kit, em conjunto com o
protocolo Cellfree1000 (volume de extracção: 1 ml, volume de eluição: 60 µl). Cada uma das
10 diluições foi analisada com o artus EBV QS-RGQ Kit em 4 dias diferentes, em 4 ensaios com
8 modelos de replicação cada. Os resultados foram determinados por análise de probit. A
figura 1. representa uma ilustração gráfica da análise de probit. O limite de detecção analítica
relativa à purificação do artus EBV QS-RGQ Kit em combinação com o Rotor-Gene Q é de
157 cópias/ml (p = 0,05). Isto significa que existe uma probabilidade de 95% de o limite
157 cópias/ml ser detectado.
Maio 2012
Sample & Assay Technologies
1.0
95%
Proporções
Proportions
0.8
2,20 ~ 157 cópias/ml (95%)
2.20 ~ 157 copies/ml (95%)
(109–260 cópias/ml)
(109–260 copies/ml)
0.6
0.4
0.2
0.0
-1
0
1
2
3
4
log (dose)
Figura 1. Análise de probit: plasma, EBV (Rotor-Gene Q). Sensibilidade analítica relativa à
purificação (plasma, utilizando o QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi Kit) do artus EBV QSRGQ Kit no Rotor-Gene Q.
Especificidade — plasma
A especificidade do artus EBV QS-RGQ Kit é, antes de mais, assegurada pela selecção dos primers
e sondas, bem como pela selecção de condições de reacção rigorosas. Os primers e as sondas
foram verificados em termos de possível homologia com todas as sequências publicadas nos
bancos de genes, por análise comparativa de sequências. A detectabilidade de todos os genótipos
relevantes foi assim assegurada.
Além disso, a especificidade foi validada com 30 amostras diferentes de plasma negativo para
VEB. Estas não geraram quaisquer sinais com os primers e sondas específicos do VEB que estão
incluídos no VEB RG Master.
Foi também testada a possibilidade de reacções cruzadas do artus EBV QS-RGQ Kit, usando o
grupo de controlo listado na Tabela 1 (abaixo). Nenhum dos patogénios testados demonstrou
reactividade. Não ocorreram reacções cruzadas com infecções mistas.
Características de desempenho: artus EBV QS-RGQ Kit
página 2 de 7
Tabela 1. Testes de especificidade do kit com patogénios com potencial de reacção
cruzada
Controlo Interno
Grupo de controlo
VEB (Cycling Green
(Cycling Yellow
[verde])
[amarelo])
–
+
–
+
–
+
–
+
–
+
–
+
Vírus herpes humano 1 (vírus herpes
simplex 1)
Vírus herpes humano 2 (vírus herpes
simplex 2)
Vírus herpes humano 3 (vírus varicelazoster 3)
Vírus herpes humano 5
(citomelagovírus)
Vírus da leucemia de células T humano
tipo 1
Vírus da leucemia de células T humano
tipo 2
Intervalo linear — plasma
O intervalo linear relativo à purificação do artus EBV QS-RGQ Kit foi determinado por análise de
uma série de diluições do material do vírus VEB, variando entre 1,00 x 107 cópias/ml e
1,00 x 102 cópias/ml, em plasma. A purificação foi efectuada em modelos de replicação (n = 4
para
concentrações
≥1,00 x 106 cópias/ml;
n
=
8
cada
para
concentrações
<1,00 x 106 cópias/ml) usando o QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi Kit em combinação com
o protocolo Cellfree1000 (volume de extracção: 1 ml, volume de eluição: 60 µl). Cada uma das
amostras foi analisada usando o artus EBV QS-RGQ Kit. O intervalo linear relativo à purificação
do artus EBV QS-RGQ Kit foi determinado para abranger as concentrações de 3,16 x 102
cópias/ml a 1,00 x 107 cópias/ml para plasma (figura 2).
Características de desempenho: artus EBV QS-RGQ Kit
página 3 de 7
log10 Concentração estimada (cópias/ml)
log10 estimated concentration (copies/ml)
10
8
6
yy =
= 1.0528x
1,0528x
– 0,1729
– 0.1729
22
R
=
0,9991
R = 0.9991
4
2
0
0
2
4
6
8
10
log10 log
Concentração
nominal (cópias/ml)
(copies/ml)
10 nominal concentration
Figura 2. Intervalo linear do artus EBV QS-RGQ Kit (plasma). Cálculo do intervalo linear. A
linha recta foi determinada por uma regressão linear das concentrações calculadas de log10 com
as concentrações nominais de log10. A equação da linha de regressão está incluída na figura.
Robustez — plasma
A verificação da robustez permite a determinação da taxa de insucesso total do artus EBV QS-RGQ
Kit. Para verificação da robustez, 30 amostras negativas de plasma para VEB foram contaminadas
com 500 cópias/ml de VEB (uma concentração aproximadamente três vezes superior ao limite de
sensibilidade analítica). Após extracção usando o QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi Kit, em
conjunto com o protocolo Cellfree1000_DSP (volume de extracção: 1 ml, volume de eluição:
60 µl), estas amostras foram analisadas com o artus EBV QS-RGQ Kit. Adicionalmente, a robustez
do controlo interno foi avaliada por purificação e análise das 30 amostras de plasma
contaminadas. Não foram observadas inibições. A robustez do artus EBV QS-RGQ Kit é, assim,
≥99%.
Sensibilidade analítica — sangue total
Para o sangue total, a sensibilidade analítica relativa à purificação do artus EBV QS-RGQ Kit foi
determinada utilizando amostras de sangue total humano contaminadas com uma série de
diluições de material do vírus VEB de 3160 ao valor nominal de 3,16 cópias de VEB/ml. Estas
foram sujeitas a extracção de ADN usando o QIAsymphony DNA Mini Kit em combinação com o
protocolo VirusBlood200 (volume de extracção: 200 µl, volume de eluição: 60 µl). Cada uma das
10 diluições foi analisada com o artus EBV QS-RGQ Kit em 3 dias diferentes, em 3 procedimentos
de ensaio com 11 modelos de replicação cada. Os resultados foram determinados por análise de
probit. A figura 3 representa uma ilustração gráfica da análise de probit. O limite de detecção
Características de desempenho: artus EBV QS-RGQ Kit
página 4 de 7
analítica relativa à purificação do artus EBV QS-RGQ Kit em combinação com o Rotor-Gene Q é
de 288,42 cópias/ml (p = 0,05). Isto significa que existe uma probabilidade de 95% de o limite de
288,42 cópias/ml ser detectado.
1.0
95%
Proporções
Proportions
0.8
0.6
0.4
2,46002
2.46002~~288,42
288.42cópias/ml
copies/ml(95%)
(95%)
(169.53–710.95 copies/ml)
0.2
0.0
-1
0
1
2
3
4
log (dose)
Figura 3. Análise de probit: sangue total, EBV (Rotor-Gene Q). Sensibilidade analítica relativa
à purificação (sangue total, utilizando o QIAsymphony DNA Mini Kit) do artus EBV QS-RGQ Kit no
Rotor-Gene Q.
Especificidade — sangue total
A especificidade do artus EBV QS-RGQ Kit é, antes de mais, assegurada pela selecção dos primers
e sondas, bem como pela selecção de condições de reacção rigorosas. Os primers e as sondas
foram verificados em termos de possível homologia com todas as sequências publicadas nos
bancos de genes, por análise comparativa de sequências. A detectabilidade de todos os genótipos
relevantes foi assim assegurada.
Além disso, a especificidade foi validada com 30 amostras diferentes de sangue total negativo
para VEB. Estas não geraram quaisquer sinais com os iniciadores e sondas específicos do VEB, os
quais estão incluídos no VEB RG Master.
Foi também testada a possibilidade de reacções cruzadas do artus EBV QS-RGQ Kit, usando o
grupo de controlo listado na Tabela 1 (consulte a página 3). Nenhum dos patogénios testados
demonstrou reactividade. Não ocorreram reacções cruzadas com infecções mistas.
Intervalo linear — sangue total
O intervalo linear relativo à purificação do artus EBV QS-RGQ Kit foi determinado por análise de
uma série de diluições do material do vírus VEB, variando entre 5,00 x 107 cópias/ml e
Características de desempenho: artus EBV QS-RGQ Kit
página 5 de 7
1,00 x 102 cópias/ml, em sangue total. A purificação foi efectuada em modelos de replicação (n =
4
para
concentrações
≥1,00 x 107 cópias/ml;
n
=
8
cada
para
concentrações
7
<1,00 x 10 cópias/ml) usando o QIAsymphony DNA Mini Kit em combinação com o protocolo
VirusBlood200 (volume de extracção: 200 µl, volume de eluição: 60 µl). Cada uma das amostras
foi analisada usando o artus EBV QS-RGQ Kit. O intervalo linear relativo à purificação do
artus EBV QS-RGQ Kit foi determinado para abranger as concentrações de 1,00 x 103 cópias/ml a
5,00 x 107 cópias/ml para sangue total (figura 4).
log10 estimated concentration (copies/ml)
log10 Concentração estimada (cópias/ml)
10
8
6
= 1.0261x
yy =
1,0261x– –0.0477
0,0477
2
R
R2 =
=0.9993
0,9993
4
2
0
0
2
4
6
8
10
log10
nominal (cópias/ml)
logConcentração
10 nominal concentration (copies/ml)
Figura 4. Intervalo linear do artus EBV QS-RGQ Kit (sangue total). Cálculo do intervalo
linear. A linha recta foi determinada por uma regressão linear das concentrações calculadas de
log10 com as concentrações nominais de log10. A equação da linha de regressão está incluída na
figura.
Robustez — sangue total
A verificação da robustez permite a determinação da taxa de insucesso total do artus EBV QSRGQ Kit. Para verificação da robustez, 30 amostras negativas de sangue total para VEB foram
contaminadas com 750 cópias/ml de VEB (uma concentração aproximadamente três vezes
superior ao limite de sensibilidade analítica). Após extracção usando o QIAsymphony DNA Mini
Kit, em conjunto com o protocolo VirusBlood200 (volume de extracção: 200 µl, volume de eluição:
60 µl), estas amostras foram analisadas com o artus EBV QS-RGQ Kit. Adicionalmente, a robustez
do controlo interno foi avaliada por purificação e análise das 30 amostras de sangue total
contaminadas. Não foram observadas inibições. A robustez do artus EBV QS-RGQ Kit é, assim,
≥99%.
Características de desempenho: artus EBV QS-RGQ Kit
página 6 de 7
Reprodutibilidade
Os dados de reprodutibilidade permitem uma avaliação regular do desempenho do artus EBV QSRGQ Kit, bem como uma comparação de eficiência com outros produtos. Estes dados foram
obtidos pela participação nos programas de competência estabelecidos.
Contaminação cruzada
A ausência de contaminação cruzada entre amostras para a totalidade do processo foi
comprovada pela detecção correcta de todas as amostras positivas e negativas conhecidas, em
posições alternadas (padrão xadrez) para o sistema artus QS-RGQ representativo.
Para informações actualizadas sobre licenciamento e limitações de responsabilidade específicas do
produto, consulte o respectivo manual do kit QIAGEN ou do utilizador. Os manuais do kit
QIAGEN e do utilizador estão disponíveis em www.qiagen.com ou podem ser pedidos à
Assistência Técnica ou ao distribuidor local da QIAGEN.
Marcas registadas: QIAGEN®, QIAsymphony®, artus®, Rotor-Gene® (QIAGEN Group); ATCC® (American Type Culture
Collection); Acrometrix® (Life Technologies).
May-12 © 2012 QIAGEN. Todos os direitos reservados
www.qiagen.com
France  01-60-920-930
The Netherlands  0800 0229592
Australia  1-800-243-800
Germany  02103-29-12000
Norway  800-18859
Austria  0800/281010
Hong Kong  800 933 965
Singapore  65-67775366
Belgium  0800-79612
Ireland  1800 555 049
Spain  91-630-7050
Canada  800-572-9613
Italy  800 787980
Sweden  020-790282
China  021-51345678
Japan  03-5547-0811
Switzerland  055-254-22-11
Denmark  80-885945
Korea (South)  1544 7145
UK  01293-422-911
Finland  0800-914416
Luxembourg  8002 2076
USA  800-426-8157
Sample & Assay Technologies