Superovulação e transferência de embriões em

Superovulação e transferência de embriões em
caprinos
Prof. Adelmo Ferreira de Santana – Caprinocultura e Ovinocultura
E-mail [email protected]
Departamento de Produção Animal
Escola de Medicina Veterinária
Universidade Federal da Bahia
CEP – 40210170 Salvador – Bahia
1. INTRODUÇÃO
A transferência de embriões é uma técnica inovadora que consiste em
aumentar a produção embrionária, através do aumento do número de óvulos
liberados, após a administração de hormônios, em uma fêmea geneticamente
superior, dentro de um período sexual, e transferir essas estruturas para o
trato reprodutivo de fêmeas de baixo valor zootécnico, para completarem a
gestação (OLIVEIRA & GONZALES, 1992).
Nas espécies domésticas a principal finalidade de utilização da técnica de
transplante embrionário é de aumentar a multiplicação da descendência de
fêmeas dentro de suas possibilidades naturais, e na espécie caprina essa
técnica começou a se desenvolver na França, em 1984 sob o impulso do INRA
( CASAMITJANA & PERRIN, 1989).
Para a implantação da técnica de transferência de embriões é necessário
seguir um plano de trabalho, partindo da seleção de doadoras e receptoras,
superovulação, sincronização do ciclo estral entre doadoras e receptoras,
colheita de embriões, avaliação e transferência dos mesmos( VALLE et al ,
1988).
A aplicação da técnica nos pequenos ruminantes necessita de adaptações,
que devem ser levadas em conta, pelas suas particularidades antômicas e
fisiológicas, bem como, a avaliação e controle dos embriões transferidos,
visando reduzir os riscos de transmissão de doenças (QUIRIN, 1989).
Entretanto, o sucesso da transferência de embriões depende de vários
fatores relacionados com o trinômio doadora/ embrião/receptora. A fertilidade
depende tanto da qualidade do embrião coletado como da condição da
receptora para a qual o embrião é transferido(THIBIER & NIBART, 1992), logo,
a receptora contribui com 50% para o sucesso de um programa de
transferência de embriões, e o tratamento hormonal contribui para uma
adequada preparação fisiológica desta fêmea, objetivando a formação de
corpos lúteos de boa qualidade que possam garantir níveis elevados de
progesterona circulante, pois, segundo ARMSTRONG et al (1983b) isto pode
ser um fator fundamental para assegurar a sobrevivência embrionária. Em
contra partida, vários fatores extrínsecos como: temperaturas elevadas,
mudanças podem influenciar na fertilidade da fêmea (THIBIER & NIBART,
1992).
2. PROCEDIMENTOS
A transplantação embrionária sudivide-se em quatro fases distintas que se
sucedem cronologicamente. È necessário um perfeito controle de cada uma
delas, para se obter uma taxa de coleta, transferência e sobrevivência dos
embriões, aumentando a percentagem de produtos nascidos.
2.1 Produção de embriões
A produção de embriões de boa qualidade, é o principal fator limitante da
técnica. Está fase subdivide-se em seis operações sucessivas.
2.1.1 Escolha das doadoras
As doadoras escolhidas para serem incluidas em um programa de
transferência de embriões, devem apresentar fertilidade comprovada, serem
pluríparas, idade entre 24 e 72 meses, progênie que tenha produção
compatível com uma média de destaque em nossas condições e fenótipo que
se enquadra nos padrões de qualidade leiteira(VALLE et al, 1988).
Na reprodução controlada com a transferência de embrião, é de
fundamental importância Ter um rigoroso esquema de seleção dos animais a
serem utilizados, pois, problemas de ordem nutricional ou sanitário podem
prejudicar o sucesso do trabalho, e estas fêmeas devem exteriorizar sinais de
estros regulares, em média a cada 21 dias, livres de doenças do sistema
reprodutor e boa aptidão leiteira (OLIVEIRA &GONZALES,1992).
A qualidade da genética é fator determinante na escolha das doadoras,
aliada ao estado fisiológico e sanitário que são de fundamental importância.
Além disso, outros critérios devem ser considerados: como a idade, histórico
reprodutivo sem problemas, devem apresentar-se em perfeito estado sanitário
ao exame clínico e ginecológico que deve ser feito três meses antes do início
do tratamento hormonal, respeitando um intervalo de no mínimo, cinco meses
entre a última parição e o início do tratamento(VALLET et al , 1991).
De acordo com BARIL et al (1989) , somente fêmeas primíparas e/ou
pluríparas devem ser utilizadas como doadores.
2.1.2 Sincronização do cio
Um dos métodos de sincronização mais usado no Brasil é o de esquema
curto, com 10 dias, usando-se esponjas vaginais empregnadas com
progestágenos e aplicação de outros hormônios por via intramuscular. A
retirada das esponjas ocorre no décimo dia e com aparecimento do estro em
torno de 24 a 36 horas (OLIVEIRA & GONZALES , 1992).
BARIL
et
al (1988), sincrocronizaram o estro de cabras com
administração de 100 Mg de cloprostenol (PGF2 ∝ ), no nono dia do tratamento
progestágeno com duração de 11 dias, usando esponjas vaginais empregnadas
com 45 mg de FGA.
GONZALEZ et al (1991) consideram a sincronização do estro uma prática
auxiliar da inseminação artificial, que objetiva, essencialmente, obter
ovulações síncronas em animais a serem inseminadas. Entretanto, a
sincronização de estro e da ovulação, no Brasil, em especial no Nordeste, ainda
tem seu uso limitado pelo elevado custo e pela pequena disponibilidade, no
mercado nacional, de hormônios ou substâncias correlatas comprovada
atividade gonadotrófica.
Diversos tratamentos progestativos diferem entre si, pelos agentes
progestágenos e a via de administração: esponjas vaginais, implantes ou
injeções. As esponjas vaginais são utilizadas impregnadas com Acetato de
Fluorogestona (FGA 45 mg) (ARMSTRONG & EVANS, 1983; BARIL & VALLET,
1990; VALLET et al, 1989; BARIL et al 1990 a), ou impregnadas com Acetato
de Medroxiprogesterona (MAP 60 mg) (KIESSLING et al, 1986; ARMSTRONG et
al , 1983 a ).
As injeções intramusculares de progestágeno são realizadas, diariamente,
por 17 a 22 dias na dose de 12mg / fêmea (MOORE & EPPLESTON, 1979;
TERVIT et al, 1984; HERBURN, 1987).
Dentre os diversos tratamentos, o mais utilizado, no momento, são as
esponjas vaginais impregnadas com 45mg de FGA .Na espécie caprina, as
esponjas permanecem por 11 dias (tratamento curto) e uma injeção
intramuscular de 50 a 100Mg de cloprostenol (prostaglandina sintética) é
efetuada no início da estimulação ovariana BARIL et al, 1990 a; BARIL &
VALLET, 1990).
2.1.3 Superovulação
A superovulação é definida como sendo a superestimulação ovariana,
através de gonadotrofinas exógenas, permitindo a obtenção de um número de
óvulos superior àquele que é normalmente produzindo em cada ciclo
reprodutivo (PINEDA , 1989).
Em cabra, a melhor resposta superovulatória, tem sido o FSH (Hormônio
Folículo Estimulante) de origem suina ou ovina. O FSH apresenta meia curta (2
a 5 horas) e, por esse motivo a sua administração é feita de 12 em 12 horas,
durante 3 a 4 dias em doses decrescentes, variando entre 12 a 18 mg nos
pequenos ruminantes (AKBAR et al, 1974).
Outro hormônio que vem sendo usado com resultados favoráveis como
agente superovulvante em cabras, é a Gonadotrofina da Menopausa Humana
(HMG), extraída da vagina da mulher em menopausa. A dose usada para a
superovulação nos pequenos ruminantes, é de 1.200 U.I., também
administrado em doses decrescentes. Os primeiros resultados do uso do HMG
como agente superovulante na Estação Experimental de Pendência (EMEPAPB), mostraram melhores taxas com relação ao número de corpos lúteos do
que o FSH nacional (OLIVEIRA et al, 1990).
A superovulação realizada com o uso de FSH-P nas doses de 16 a 24 mg
administradas de forma decrescente de 12 em 12 horas, a partir do oitavo ou
nono dia do tratamento progestágeno, obtendo uma média de 9,5 ±7,4
ovulações. O tratamento de 4 dias de duração e de 20 mg de FSH-P é melhor
que, o tratamento de 3 dias e 16 mg de FSH-P, dando uma média de 8,6
embriões viáveis (BARIL et al, 1988).
A análise de resultados obtidos pela superovulação em função da variação
de relação FSH/LH indica que o número de embriões transferíveis obtidos é
significativamente superior quando a relação decresce, da que quando
permanece constante ( COGNIÉ et al, 1986; BARIL et al, 1988).
NUTI et al (1986) e BARIL et al (1988), constataram dentro de muitas
raças de caprinos uma diminuição da resposta
aos tratamentos de
superovulação em função da repetição das mesmas.
Vários trabalhos utilizando como hormônio o PMSG, foram realizados por
ARMSTRONG et al (1983), onde foi estudado os efeitos do PMSG e FSH-P,
sobre a superovulação dentro da espécie caprina e confirmando a
superioridade do FSH-P, principalmente no que concerne o número de
ovulações e produtos nascidos após a transferência de embriões (ARMSTRONG
et al, 1983).
BARRY et al (1988) estudaram os efeitos de diferentes tratamentos
superovulatórios utilizando PMSG (Gonadotrofina de Soro de Ègua Prenhe ou
FSH-P, seguindo de GnRH ( Hormônio Liberador de Gonadotrofina) ou HCG
(Gonadotrofina Coriônica Humana) e obtiveram resultados inferiores para o
PMSG.
A literatura relata uma variação da atividade em função de uma parte da
origem do hormônio e de outra parte do hormônio utilizado (QUIRIN, 1989).
O extrato hipofisário suino usado na maioria dos casos é o produto
comercial FSH Burns Biotec (Omaha, USA) mas, alguns pesquisadores utilizam
a preparação de Combarnous Y:C.Y. 1175 INRA Nouzilly. As duas preparações
parecem ter um efeito significativamente diferente quanto à média das
ovulações observadas, com vantagem para a segunda (TORRES et al, 1984).
BARIL et al (1988) utilizaram dois tipos diferentes de FSH-P (Burns Biotec,
Shering ou Sanofi) , e não notaram nenhuma diferença quanto à origem do
hormônio empregado.
Os mesmos autores descreveram, em compensação, a presença de
folículos anavulatórios de tamanho superior ao normal em 20% dos casos,
acompanhado de uma diminuição do número de ovulações em consequência
da superovulação realizada com ajuda do FSH-P. A mesma observação foi
feita em relação com o PMSG por ARMSTRONG et al (1983) que notaram por
outro lado vários problemas de regressão luteal consecutivas ao tratamento
superovulatório com PMSG. Esses fenômenos foram relatados depois pôr
CHEMINEAU et al 1986; MOORE, 1987& TERVIT et al, 1983.
KIESSLING et al (1986), usaram esponjas vaginais para sincronização do
estro em dezoito cabras por um período de 16 a 18 dias. A superovulação em
6 cabras foi feita com PMSG e em 12 fêmeas com FSH. Após o estro as fêmeas
foram mantidas juntas com reprodutores, sendo colhidos os embriões no
quarto dia após o estro, obtendo embriões de 4 a 12 células, com média de
17± 2 para o FSH e 2 ± 2 para o PMSG. De 3 doadoras superovuladas com
FSH, 36 embriões foram transferidos para 14 receptoras, das quais onze
ficaram gestantes, produzindo 21 cabritos, dando em média 7 ± 2 por doadora.
ARMSTRONG et al (1982), conseguiram melhores resultados em relação a
taxa de ovulação, embriões colhidos e cabritos nascidos de cabras
superovuladas com FSH e PMSG, obtendo melhores resultados para o FSH.
TSUNODA & SUGIE (1989) obtiveram em cabras superovuladas com FSH e
PMSG, a percentagem de embriões colhidos foi altamente significativa em
favor do FSH, com uma média 9,4± 5,6, 5,7± 4,4 por fêmea tratada com FSH
e PMSG, respectivamente.
SELGRATH et al (1990) testaram três tratamentos de Gonadotrofina,
sendo PMSG (1000 U.I.), FSH-P (20mg) e FSH-P (24mg). Este último foi o que
apresentou melhor performance em relação ao número de embriões
fertilizados, enquanto o PMSG, apresentou maior taxa de oocistos não
fertilizados.
WALKER et al (1986) sugerem o uso de GnRH associado a PMSG ou FSH
em programas de colheitas embrionárias, pois parece melhorar a sua produção
ao beneficiar a taxa de fertilização.
Nas doadoras, a preparação fisiológica tem por objetivo a estimulação
ovariana (superovulação) capaz de produzir um número de ovócitos mais
elevados que o normal, de modo que multiplique sua genética(PERRIN, 1987).
Para a sincronização do estro das doadoras, um tratamento progestativo é
administrado, e no final deste, a estimulação do crescimento folicular é
provocada pela administração de gonadotrofinas com o objetivo de aumentar o
número de ovulações (VALLET et al, 1991).
Para estimular os ovários dois tipos de hormônios têm sido utilizados; o
Hormônio Folículo Estimulante de Origem Porcina (FSHp) e a Gonadotrofina
Sérica de Ègua Prenha (PMSG) (VALLET et al, 1991). O tratamento com o
FSHp permite obter um maior número de ovulações e de embriões
transferíveis superior ao tratamento com PMSG. A administração de FSHp é,
geralmente, efetuada nos últimos dois, três ou quatro dias do tratamento
progestativo. Cada fêmea recebe de 12 a 24 mg de FSHP dividido em doses
decrescentes com intervalos de 12 horas (ARMSTRONG et al, 1983 a; TERVIT
et al, 1984; TSUNODA & SURGIE, 1989; BARIL & VALLET, 1990).
ARMSTRONG & EVANS(1983) compararam o PMSG com o FSHp na
superovulação de cabras e ovelhas, obtendo uma maior taxa de ovulação, uma
menor incidência de falha de ovulação e uma maior média de embriões
colhidos pôr fêmea com o uso do FSHp do que com o PMSG.
ARMSTRONG et al (1983b) observaram que a taxa de ovulação foi,
significativamente, mais alta em cabras da raça Angorá submetidas a um
tratamento com FSHp duas vezes ao dia, em doses decrescentes(18mg total),
durante quatro dias, do que com uma única dose de 750 a 1250 U.I. de PMSG.
A regressão prematura dos corpos lúteos é um fenômeno, geralmente,
observado em cabras superovuladas, porém as causas não são ainda
determinadas. Este fenômeno, no momento da coleta(seis a sete dias após o
estro), tem como consequências uma baixa taxa de recuperação dos embriões
e uma má qualidade dos mesmos ( ARMSTRONG et al, 1983 a ; CHEMINEAU et
al, 1986; BARIL et al, 1989).
BARIL et al (1990 a) observaram uma diminuição na resposta ovariana
em cabras submetidas a tratamentos repetidos com FSHp, devido à presença
de anticorpos anti-FSHp.
Resultados preliminares com o uso do Hormônio Folículo Estimulante de
Origem Caprina (FSHc) demonstraram que a ovulação pode ser induzida com o
FSH homólogo. O mais importante passo será verificar se as superovulações
repetidas não acarretarão o mesmo decréscimo, ocorrido com o uso de FSHp,
na atividade ovariana BARIL et al (1990b).
2.1.4 Fecundação
Na prática o estro, quando o mesmo pode ser detectado em 90% dos
casos, é a prova mais confiável, que revela a proximidade da ovulação. Em
geral o estro é dectado três vezes por dia com a aguda de machos
vasectomisados, os quais são mantidos em contacto com as fêmeas afim de
determinar com precisão seus primeiros sinais (BARIL et al, 1988).
O início dos cios começa entre 24 e 54 horas após a retirada das
esponjas(BARIL et al, 1988).Os pesquisadores estimam que o número médio
de corpo lúteo contado é significativamente superior nas fêmeas cujo estro
começa 24 a 30 horas após a retirada da esponja, do que aquelas cabras onde
o estro começa mais tarde (BARIL et al, 1988) e na ovelha(TORRES et al,
1987).
A fecundação necessita da presença dentro do trato genital da fêmea de
um número satisfatório de espermatozóides móveis no momento adequado. A
ovulação é marcada pelo pico de LH (Hormônio Luteinizante) que dentro das
condições naturais, ocorre em torno de 62 horas após a retirada da esponja,
prazo reduzido para 56 horas, com administração de FSH-P (COG-NIÉ et al,
1970).
A ovulação tem em média 25 horas após o início do estro em ovelhas
superovuladas com aplicação do FSH-P (BARRY et al, 1988).
TORRES et al (1984) estimam que os espermatozóides devem se
encontrar dentro do útero 48 horas após a retirada das esponjas.
Duas técnicas podem ser utilizadas para assegurar a fecundação das
fêmeas: a monta natural e a inseminação artificial. A monta natural é
preconizada duas vezes no início e no meio do estro em ovelhas (BARIL et al ,
1988), e 12 horas e 24 horas após os primeiros sinais de cio na cabra(BARRY
et al, 1988).
A inseminação artificial deve ser realizada duas vezes (48 e 54 horas após
a retirada das esponjas) ou três vezes (30, 48 e 54 horas após a retirada) na
cabra , sendo recomendado doses de 200 milhões de espermatozóides dentro
do útero em cada inseminação (BARIL et al, 1988).
BARIL et al (1988) , observaram uma diferença da taxa de fecundação
obtida segundo a técnica empregada em cabra, encontrando 71% e 60,2%
para a monta natural e inseminação artificial respectivamente.
O aparecimento do estro nas doadoras, geralmente ocorre 24 a 36 horas
após a retirada das esponjas. As doadoras devem ser cobertas por reprodutor
selecionado, sendo a monta controlada a cada 12 horas a começar do início do
cio, até a não aceitação do macho pela fêmea (OLIVEIRA & GONZALES,
1992).
2.1.5 Coleta dos embriões
A coleta de embriões em caprinos pode ser realizada através de dois
métodos: a) cirúrgico e b) não cirúrgico.
a) Método cirúrgico
O método de coleta cirúrgico de embriões varia entre os autores. Para a
realização desta técnica, o animal deve ser anestesiado, contido em mesa
cirúrgica própria e, devendo proceder com uma incisão de 4 -5cm na linha
média ventral, imediatamente à frente da inserção do úbere, permitindo a
exteriorização dos cornos uterinos e ovários (OLIVEIRA & GONZALES, 1992).
MOORE (1982) utilizou o método de injeção de meio no corno uterino
recolhendo-o através de uma cânula de 2mm de diâmetro inserida no oviduto
pela fímbria. Outra técnica usada é a introdução do meio pelo oviduto, com
auxílio de uma cânula e o seu recolhimento através de catéter de Foley
pediátrico introduzido próximo à biburcação do útero (ARMSTRONG et al,
1983).
A técnica de lavagem dos cornos uterinos é mais utilizada do que a
lavagem dos ovidutos, por apresentar a vantagem de ser menos traumática.
Está técnica consiste na injeção de meio a 2-3 cm da junção útero-tubárica,
através de um catéter endovenoso e recolhimento por um catéter de Foley
introduzido próximo à bifurcação uterina. Como este método limita-se a
colheita de embriões que se encontram no útero, deve ser usado somente
após o quarto dia da cobertura (OLIVEIRA & GONZALES, 1992).
Está última técnica é a que provoca menos trauma e, consequentemente,
menos aderências a nível de ovários e ovidutos. Está ausência de lesões é
atribuída a uma mínima manipulação dos ovidutos e estruturas adjacentes
(TREVIT et al , 1983). Este método pode ser feito através do auxílio de uma
sonda de Foley pediátrica número oito de dupla via , também inserida próxima
à bifurcação dos cornos (OLIVEIRA et al, 1990).
O inconveniente da técnica de lavagem uterina é a dificuldade de
recolhimento de embriões que se encontram nas extremidades dos cornos
uterinos, muito estreitos, longos e tortuosos na cabra. Entretanto, a eficiência
da técnica de colheita depende de livre passagem do meio ao longo da luz do
útero e/ou oviduto (POTES, 1990).
Para a minimização da possível ocorrência de aderências nas partes de
trato genital exposto, que deve ser manipulado com cuidado e proceder uma
lavagem com soro fisiológico heparinizado, durante a exposição desde no meio
ambiente (OLIVEIRA & GONZALES, 1992).
A laporoscopia permite a observação direta dos órgãos abdominais e
pélvicos, com menos riscos cirúrgicos e de menor traumatismo para o animal.
Consequentemente, tanto na clínica médico-veterinária como na pesquisa,
surge como uma valiosa alternativa em relação à técnica da laporotomia. Nas
espécies ovina e caprina, a laporoscopia tem sido utilizada, dentre outros
objetivos, para a monitoração da atividade ovariana ao longo do ciclo estral
(SEEGER & KLATT, 1980).
A primeira colheita e transferência de embriões em caprinos foi realizada
por WARWICH & BERRY (1949), em cabras Angorá. Os autores relataram o
nascimento de um cabrito cujo embrião foi colhido e transferido na mesma
doadora.
As primeiras tentativas para a colheita de embriões em caprinos e ovinos
foram realizadas pela técnica cirúrgica através da laparotomia por HUNTER et
al (1955), sendo este método o mais difundido nos países do exterior e é o que
apresenta melhores índices de recuperação de embriões.
BONDURANT et al (19840, iniciaram as primeiras tentativas para a
colheita de embriões pelo método cirúrgico, ou seja, através da cérvix. Os
autores conseguiram recuperar 13 embriões, após a lavagem do útero
realizada em duas cabras.
No Brasil está técnica de transferência de embriões está sendo usada há
pouco menos de dez anos, sendo que a maioria dos trabalhos foram realizados
através da técnica cirúrgica(OLIVEIRA & GONZALES, 1992).
Seis a oito dias após o início do estro os embriões são colhidos por cirurgia
ou sob controle laporoscópico. Por estes dois métodos, a técnica consiste em
introduzir uma sonda no corno uterino da doadora que é posicionada e mantida
no local com ajuda de um “Ballonete”, para permitir a lavagem dos cornos
uterinos por meio de injeções e recuperação repetidas do meio de cultura(PBS
suplementado com soro fetal bovino).Cada corno uterino é perfusado
separadamente com cerca de 40 e 50 ml de PBS BARIL et al, 1989; VALLET et
al, 1991).
Sob controle laparoscópico, a taxa de coleta é menor do que pelo método
cirúrgico (62% vs 85%) mas, cada doadora pode ser coletada mais de sete
vezes sem problemas graves de aderências (BARIL et al, 1989).
b) Método não cirúrgico ( através da cérvix)
Embora a técnica de colheita de embriões em caprinos venha sendo
utilizada com bons índices de recuperação, apresenta o inconveniente de
limitar o seu uso doadores pôr no máximo 2 a 3 vezes, devido aos traumas
cirúrgicos, aderências pós-operatórias, custos elevados e exigência de mão-deobra especializada (OLIVEIRA & GONZALES, 1992).
Visando minimizar os traumas e diminuir a relação custos-benefício da
técnica cirúrgica, procurou-se adaptar ao caprino a técnica de colheita pela via
cervical, utilizada com êxito nos bovinos. Todavia, uma das dificuldades no uso
desta técnica é o diâmetro estreito do canal cervical da cabra, restringindo a
passagem do catéter. Várias técnicas vêm sendo usadas com o objetivo de
facilitar este processo (OLIVEIRA & GONZALES, 1992).
Um dos métodos utilizados e que apresenta bons resultados é a fixação da
cérvix com auxílio do dedo indicador na vagina, onde foi obtido sucesso em
42% dos casos (COONROD et al, 1986).
Outra tentativa de colheita via cervical bem sucedida, foi realizada por
NAGASHIMA et al, (1987) que, utilizando um catéter metálico de dupla via,
tiveram êxito em 51,4% dos animais, obtendo 69 estruturas.
Para a realização desta técnica, os animais também devem ser
anestesiados e contidos em mesa cirúrgica própria. Através de um espéculo
com fonte luminosa, visualiza-se a cérvix é, após o processo de tracionamento
e fixação desta, introduz-se uma sonda de aço inoxidável de dupla via no canal
cervical, inicia-se a lavagem uterina com o meio adequado pôr uma das vias e,
o seu recolhimento pela Segunda via em um recipiente esterilizado (OLIVEIRA
et al, 1990).
A primeira coleta não cirúrgica de embriões em pequenos ruminantes foi
reportada por BONDURANT et al (1984) que
obtiveram blastocistos de
caprinos leiteiros não cirurgicamente com auxílio de Luminaria japonica para
dilatação da cérvix.
Recentes estudos de transferência de embriões em pequenos ruminantes,
produzidos pôr procedimentos não cirúrgico e por laparoscópio, ambos
relativamente atraumático; produzem resultados que são competitivos com os
métodos cirúrgicos (KRAEMER, 1989).
2.1.6 Avaliação dos embriões
Após Ter deixado sedimentar os embriões dentro do líquido de coleta,
estes são avaliados em lupa binocular afim de observar sua viabilidade sobre
os critérios morfológicos em função do dia de coleta (KILLEN, 1981).
BARIL et al (19880 utilizaram uma classificação dos embriões
segmentados em degeneradores ou normais. Os
embriões normais são
classificados em mórula, blastocistos desenvolvidos, blastocistos recém
liberados. Foi observado a este nível a existência de uma diferença do estágio
de evolução dos embriões colhidos no sexto dia segundo a espécie ovina e
caprina. MARTINEZ et al (1985), observaram uma proporção de 35% de
blastocistos jovem em ovelhas aos seis dias, enquanto BARIL et al (1988)
relataram uma proporção de embriões no mesmo estágio de 16% em cabras.
Existe por outro lado diferenças intraespecíficas importantes, estas que
ocasiona as dificuldades de seleção dos embriões a transferir ou congelar.
ARMSTRONG (1983) constatou uma diminuição da taxa de mórulas
recolhidas com o aumento da taxa de ovulação, enquanto que TORRES (1984)
estabeleceu uma correlação crescente entre dois parâmetros.
A avaliação dos embriões, após a coleta, é um pré-requito para qualquer
manipulação futura como: microcirurgia, congelação e transferência
(WHITTINGHAM, 1978). Sob condições de campo, a viabilidade da
preimplantação de embriões é, geralmente, estimada com base na sua
aparência morfológica e na sua habilidade para continuar o desenvolvimento
“in vitro” durante o tempo de armazenamento entre a coleta e a transferência
(MEINECHE & MEINECKE –TILLMANN, 1990).
O aspecto morfológico do embrião é, atualmente, o único critério de
apreciação capaz de avaliar a sua viabilidade. Assim, no sétimo dia, o estádio
característico é de “ mórula” , ao oitavo dia é de “blastocisto” . Além da
diferença entre estes dois estádios, isto é, desenvolvimento mais ou menos
pronunciado da blastocele e início de formação do botão embrionário, os
embriões que não apresentam este tipo de arranjo celular são considerados
mortos ou degenerados, ou em via de degeneração. Somente os embriões
julgados, pelo menos, de boa qualidade devem ser utilizados (PERRIN, 1987).
Com base na morfologia, os embriões são classificados como:
degenerados, retardados ou mórulas compactas, blastocistos, blastocistos
expandidos ou fora da zona pelúcida. Entre estas estruturas, somente são
aproveitadas aquelas que apresentarem as qualidades requisitadas:
homogeneidade celular e integridade da zona pelúcida (BARIL et al, 1989;
VALLET et al, 1991).
2.2 Conservação dos embriões
Após ter selecionado os embriões transferíveis, vem uma segunda fase
também importante da técnica de transferência de embriões: a conservação
destes embriões, que pode ser de curta ou de longa duração(QUIRIN, 1989).
2.2.1
Conservação de curta duração
Os embriões selecionados são conservados dentro de meio próprio sob
atmosfera e temperatura controlada (5%CO2 , 5% O2, 90% N2) (MARTINEZ et
al, 1985). Após a conservação é recomendado que os embriões sejam
transferidos dentro de um espaço de duas horas seguintes a sua coleta, sem
ultrapassar das quatro horas(BARIL et al, 19880.
A viabilidade embrionária tem que ser preservada desde a colheita até a
transferência dos embriões. Vários tipos de meios são utilizados, entretanto, o
mais comum é facilmente encontrado no comércio, associado a melhores
resultados é o Dulbecco Salino fosfato tamponado (PBS) enriquecido com soro
fetal bovino, ovino ou caprino (5-10%) e antibióticos (OLIVEIRA & GONZALES,
1992).
2.2.2 Conservação de longa duração
Importantes progressos foram efetuados dentro do domínio
congelamento dos embriões dos pequenos ruminantes (QUIRIN, 1989).
de
COCERO et al (1988) retomando os trabalhos de TERVIT et al (1983),
demonstraram que o etileno glicol ( 1,5
M ), assegura uma melhor
crioproteção para os embriões de ovelhas do que o glicerol ( 1,4 M ), utilizado
correntemente até o presente. O mesmo crioprotetor foi estudado em cabras
por HEYMAN et al (1987).
O método consiste em colocar os embriões previamente conservados
dentro do PBS + 20 % de soro fetal bovino em contacto sucessivamente com
três soluções contendo o etileno-glicol ( A: 0,5 M por 10 minutos; B: 1,0 M
por 10 minutos; C: 1,5 M também por 10 minutos respectivamente), em
temperatura ambiente. Depois os embriões são colocados em “paillettes” (IMV
France) e submetidas a um resfriamento conduzindo ao congelamento
(CASAMITJANA & PERRIN, 1989).
BILTON & MOORE (1976) coletaram embriões de caprinos de 5 a 7 dias
após o estro in vitro a 37oC por 2 dias, ou armazenados a 5o C por 1 ou 2 dias,
e quando cultivados por 2 dias ou armazenados em nitrogênio líquido (-196oC)
por 2 a 4 semanas. Após a cultura alguns foram transferidos para fêmeas
receptoras. Os embriões foram conservados em PBS enriquecido com 25% de
soro caprino, adicionado com 1 M de glicerol ou 2M de dimetilsulfóxido (DMSO)
no congelamento.
Apenas os embriões de qualidade excelente devem ser congelados dentro
de um prazo que não ultrapassa duas horas após a coleta. Os embriões são
passados em banhos sucessivos de PBS, adicionado de glicerol a uma
concentração inicial de 0,7 M (10 minutos) e depois a uma concentração de 14
M (10 minutos) ou de etilenoglicol de 0,5 M (5 minutos), 1 M (minutos) e 1,5
M (5 minutos).Os embriões em seguida, são acondicionados em “ pailletes”
finos (0,25 ml) e congelados progressivamente, à razão de 1oC/minuto até –
7oC. Neste estágio, a cristalização é reduzida, depois o congelamento
prossegue à razão de 0,3oC/minuto, até atingir em média –28 a –30oC. o
congelamento lento permite a desidratação progressiva das células
embrionárias. Após quinze minutos os “pailletes” são mergulhados em
nitrogênio líquido (-196oC), sendo a conservação do embrião neste estágio, a
priori ilimitada (BARIL et al, 1989; VALLET et al, 1991).
LI et al (1990) coletaram embriões de cabras mestiças Cachemira x
Angorá de cinco, seis e sete dias após a ovulação, usando glicerol ou
dimetilsulfóxido (DMSO) como crioprotetor, obtendo melhores resultados com
o último, e quando os embriões eram coletados no sétimo dia, no estádio de
blastocisto com o desenvolvimento da blastocele.
2.2.3 Descongelamento dos embriões
O descongelamento faz-se colocando os “paillettes” em contacto com a
água a 37 oC. Na continuação desta operação de reaquecimento, é necessário
retirar o crioprotetor, introduzindo-os dentro de uma solução de PBS + 20 %
de soro fetal bovino e 0,25 M de glicose durante 10 minutos, sendo este
mesmo processo usado quando se utiliza o glicerol como crioprotetor
(CASAMITJANA &PERRIN, 1989).
Toda vez que os embriões forem descongelados e o crioprotetor retirado,
é necessário que se faça uma nova avaliação, observando-se em lupa
binocular.
Os resultados obtidos com o etileno-glicol são de 62,5% de embriões
sobreviventes após 24 horas de cultura(COCERO et al, 1988).
Outros agentes crioprotetores são utilizados; DMSO ( WILLADSEN et al,
1976) glicerol + solução de glicose (MERRY et al, 1984) mas dão resultados
mais baixos quanto ao número de embriões sobreviventes.
BARIL et al (19890 e VALLET et al (1991) estabeleceram que o
descongelamento seja realizado com a imersão dos “ pailletes” durante 30
segundos em banho-maria a 37oC. Os embriões são, sucessivamente,
passados em três a quatro banhos de PBS, adicionado de crioprotetos. A
concentração decrescente de etilenoglicol (1,0 M – 0,5 M. OM) ou gliceral (1 M
– 0,7 M – 03 M –OM) permite, desta forma, a reidratação progressiva das
células embrionárias. A qualidade dos embriões e novamente avaliada, pois, os
embriões danificados durante as operações procedentes são eliminados.
2.3
Transferência dos embriões
2.3.1
Escolha das receptoras
A escolha da fêmea que se portará como receptora tem a mesma
importância do que a doadora de embriões, visto que a
mesma deve
apresentar boas condições para levar a gestação até o seu final. Os critérios a
serem considerados para a escolha das fêmeas são baseadas nos seguintes
pontos: 1) as fêmeas devem exteriorizar sinais de estros regulares, em média
a cada 21 dias; 2) os animais devem encontrar-se em bom estado sanitário e
nutricional; 3) livres de doenças do sistema reprodutor; 4) boa habilidade
materna, ou seja, não serem predispostas à rejeição da cria; 5) boa aptidão
leiteira, isto é, capazes de alimentar e criar os produtos (OLIVEIRA &
GONZALES, 1992).
As receptoras são fêmeas que deverão assegurar a sobrevivência e o
desenvolvimento embrionário. O valor genético destas pouco importa. Todavia,
devem ser selecionadas com os mesmos critérios estabelecidos para as
doadoras (PERRIN, 1987).
O estado sanitário do rebanho de origem das receptoras é de grande
importância e os programas de transferência não devem ser conduzidos em
rebanhos que não estejam incluidos em um programa de controle sanitário. A
receptora deve Ter atividade cíclica regular, além de uma boa condição física
(com nenhuma perda de peso recente) e livre de qualquer doença, incluindo,
qualquer desordem reprodutiva (NIBART, 1991).
As fêmeas devem Ter idade, no mínimo, sete meses e pesar entre 30 a 35
Kg. As nulíparas são bem recomendadas, pois os resultados de fertilidade
obtidos são superiores, em torno de 10% sobre as pluríparas (VALLET et al,
1991).
Num programa de transferência de embriões em qualquer que seja a
espécie, nenhum tratamento (antiparasitário, descorna, limpez dos cascos
etc.) deve ser realizado três semanas antes da sincronizaçção (BROADBENT et
al, 1991). Mas, segundo VALLET et al (1991) desde três meses antes das
operações e até a parição, os diversos tipos de “stress”, como os de origem
alimentar, traumática e sanitária devem ser evitados. È fundamental que os
animais selecionados se integrem ao rebanho, ou sejam transferidos para um
mesmo local, pelo menos três meses antes do início do tratamento hormonal,
período necessário para uma boa adaptação. Em adição, as mudanças bruscas
no clima, como o calor intenso, contribuem negativamente na taxa de prenhez
(EVANS & MAXWEL, 1990; BROADBENT et al, 1991).
2.3.2 Sincrronização do Cio
A utilização de prostaglandinas e esponjas vaginais permitem a difusão
da progesterona, induzindo o ciclo a uma data determinada, sendo usado uma
aplicação de PMSG no dia da retirada da esponja (CASAMITJANA & PERREIN,
1989).
Uma das condições para que haja um perfeito funcionamento da técnica
da transferência de embriões, é a existência de uma perfeita sincronia entre a
fase de desenvolvimento embrionário e o estado correspondente ao trato
genital da receptora no momento da transferência. Desta forma, é necessário
que as receptoras estejam em estro, simultaneamente, ou com uma diferença
de no máximo 12 horas em relação às doadoras (OLIVEIRA & GONZALES,
1992).
Um dos métodos de sincronização mais usado no Brasil, é o do esquema
curto, com 10 dias, usando-se esponjas vaginais impregnadas com
progestágenos, e aplicação de outros hormônios por via intramuscular. A
retirada das esponjas ocorre no décimo dia, com aparecimento do estro em
torno de 24 a 64 horas. Está variação é menor nas doadoras (24-36 horas).
Isto deve-se às altas doses de hormônios que promovem o aumento na
produção de óvulos, desencadeando um processo de sincronização mais
preciso nas doadoras(OLIVEIRA & Gonzales, 1992).Considerando-se a maior
variação no período de exteriorização do estro nas receptoras, recomenda-se a
retirada das esponjas vaginais 24 horas antes das doadoras(TORRES et al,
1987).
MGONGO (1988) utilizando doses de prostaglandina diferentes por via
intramuscular e intravulvar subcutânea, observou que mesmo em pequenas
doses a via vulvar é tão eficiente quanto a intramuscular.
Existe hoje, como tratamento de sincronização na espécie caprina, uma
série de métodos que conduzem à aferição de diferentes resultados. Uma
gama enorme de hormônios e drogas utilizadas desde as protaglandinas, que
não oferecem bons resultados na espécie caprina GONZALEZ et al(1974 e
1979), aos progestágenos sintéticos, com resultados variados dependendo das
vias de aplicação e duração dos tratamentos (CORTEEL, 1975).
Atualmente, na França excelentes resultados são obtidos empregando-se
sincronização do estro com esponjas intravaginais impregnados com acetato
de fluorogestona associado a protaglandinas (NUNES, 1985).
O primeiro tratamento utilizado com esponjas consistia em colocar na
porção craneal da vagina da cabra uma esponja impregnada com 45 mg de
Acetato de fluorogestona(FGA) pôr vinte e um dias, aplicando-se dois dias
antes da retirada da esponja, uma injeção de 400 U . I . de PMSG (CORTEEL,
1975).
Recentemente, emprega-se um tratamento conhecido como curto, que
consiste na permanência de esponjas na porção craneal da vagina apenas onze
dias, com aplicação de 400 U. I. de PMSG e 100 Mg de cloprostenol por via
intramuscular, sendo que o tratamento longo (vinte e um dias), evidenciou
uma fertilidade mais baixa, em comparação com o primeiro (CORTEEL, 1975).
Diferentes fertilidades também foram obtidas dentro de cada tratamento,
quando se variou o local de deposição do sêmen: Cérvix ou útero ,
constatando-se inseminação intrauterina, sempre, uma
maior fertilidade,
independendo do tipo de tratamento (curto ou longo). No entanto, com o
tratamento curto obteve-se melhores resultados de fertilidade(CORTEEL,
1975).
A cabra, sendo sincronizada através de esponjas vaginais, em um
tratamento curto de dez dias, com aplicação de 200 U. I. de PMSG e 100 Mg
de cloprostenol, mostra um pique de estro 24 horas após a retirada da
esponja (SILVA & NUNES, 1984). Os mesmos autores, utilizando a endoscopia,
determinaram que o momento exato da ovulação, está em torno de 38 a 40
horas após a retirada da esponja.
Adicionalmente, em função das condições climáticas da região do globo
terrestre, a fêmea ovina e caprina poderão apresentar estro e ovular ou não,
ao longo de todo o ano (THIMONIER, 1981).
No momento os progestágenos mais utilizados para sincronização do estro
em ovinos e caprinos, são o acetato de medroxiprogesterona (MAP) e o acetato
de fluorgestona (FGA), na dosagem de 60 e 45 mg respectivamente,
ministrados por via vaginal, através de esponjas de poliuretano (CHEMINAU &
COGNIÉ, 1991). Em função da duração do período que a fêmea é exposta ao
progestágeno, o tratamento é classificado como curto (10 a 11 dias) ou longo
(12 a 18 dias) (PINEDA, 1989).
GONZALEZ-STAGNARO (1974) admite a possibilidade de que,
administrando apenas gonadotrofinas para a sincronização do estro, estas
possam provocar ovulação sem que o animal apresente sinais clínicos de estro,
aspecto este que cria problema de manejo quando a inseminação é feita
somente naqueles indivíduos que apresentam estro.
A esponja vaginal parece ser o método de eleição no controle da ovulação,
se tivermos em conta as limitações impostas pela administração diária da
progesterona e a ausência de resposta às prostaglandinas nas cabras em
anaestro ou nas cíclicas que se encontrem nos primeiros 4 -5 dias depois do
estro (MOORE & EPPLESTON, 1979).
No fim do diestro o útero segrega Prostaglandina F2 ∝
responsável pela
regressão natural do corpo lúteo, o que se traduz numa quebra da
concentração progesterônica. Está baixo progesteronemia serve como
estímulo, ou melhor desbloqueia o hipotálamo, e a hipófise passando está a
liberar FSH e LH. O ciclo ovárico pode portanto, ser controlado pela
administração de um agente luteolítico que encurte a vida útil do corpo lúteo,
provocando a sua regressão em 24 a 72 horas e o aparecimento do estro e
ovulação.
CORTEEL et al (1984) reportando-se a um trabalho de rotina onde foram
utilizadas 5363 cabras e em que comparam um tratamento longo de 21 dias
pôr meio de esponjas vaginais de FGA com um tratamento curto de 11 dias e
uma injeção de cloprostenol, concluiram que o tratamento curto se mostrou
mais eficiente tendo obtido uma fertilidade de 54,1% VS 56,9% no tratamento
longo.
A PGF 2 ∝ só exerce a sua ação sobre o corpo lúteo funcional, pelo que, a
fêmea a tratar, não só deve estar cíclica mas também encontrar-se ainda entre
o quinto e o décimo nono dia do ciclo. Fora deste período o corpo lúteo é
refratário, ou não tem receptores, à sua ação luteolítica (CORTEEL et al,
1982).
A posologia do PMSG recomendada por (CORTEEL et al, 1984 a) para
manter na espécie caprina uma fertilidade próxima de 63% após um
tratamento curto de progestágeno + cloprostenol é variável não só com a raça
( a raça Saanen mostrou-se menos fértil que a Alpina), mas também com a
produção de leite e período de tratamento. O PMSG pode também ser útil na
indução de um leve efeito superovulatório benéfico em algumas raças menos
prolíferas.
RITAR et al (1984) confirmaram que foi necessária a administração de
PMSG, para estimular, uma resposta ovulatória satisfatória em cabras em
lactação ou secas, tanto na estação reprodutiva como no anaestro sazonário.
Concluiram que houve uma antecipação da ovulação e do pique pré-ovulatório
de LH quando a gonadotrofina foi administrada 48 horas antes da remoção das
esponjas.
Um dos fatores para o sucesso da transferência de embriões é a adequada
sincronização entre o embrião e a receptora(THIBIER & NIBART, 1992).É
fundamental que, no momento da transferência, a receptora esteja em estado
fisiológico reprodutivo idêntico ao da doadora (ARMSTRONG et al, 1983 b;
PERRIN, 1987).
As fêmeas receptoras são submetidas ao mesmo tratamento progestativo
que as doadoras. O tratamento de estimulação ovariana, com PMSG, é idêntico
`aquele utilizado nos trabalhos de sincronização do estro para a inseminação
artificial. Os diversos tratamentos utilizados diferem pelos progestágenos
empregados e pela via de administração: esponjas vaginais, implantes ou
injeções (VALLET et al, 1991).
ARAÙJO (1994) observou em cem fêmeas caprinas pluríparas
sincronizadas pelo método CHRONOGET, 96 (96%) destas apresentaram
estros entre 12 a 48 horas após a retirada das esponjas, sendo 49 (98%)
pertencentes ao sistema de manejo intensivo e 47 (94%) ao sistema semiintensivo.
FONSECA et al (19870 utilizaram cabras (SRD), cíclicas e lactantes com o
objetivo de comparar a eficiência de esponjas impregnadas com 50mg de MAP,
associadas a 200 ou 400 U. I. de PMSG e
a 0,05 ou
0,125 Mg de
cloprostenol na sincronização do estro e observaram uma maior prolificidade
quando foram usados closes de 400 U. I. de PMSG, independente das doses de
cloprostenol.
A sincronização do estro em cabras nulíparas e cíclicas pode ser realizada
com resultados satisfatórios com a aplicação de esponjas impregnadas com
50mg de MAP, associadas a 200, 400 0u 750 U. I. de PMSG e a 0,05Mg de
cloprostenol, sendo que a prolificidade tende a ser maior quando se utiliza a
dose de 400 U. I. de PMSG (ESPESCHIT et al, 1987).
2.3.3 Transferência
Em caprinos, o método de transferir o embrião mais comumente usado é
o cirúrgico. Os procedimentos para este método são iguais aos utilizados para
a colheita cirúrgica. O animal é submetido à anestesia e contido em mesa
cirúrgica. Uma incisão na linha média ventral (4-5cm) é feita para
exteriorização do útero e observação da presença de corpos lúteos nos ovários.
O embrião é depositado no corno uterino correspondente ao corpo lúteo a 34cm da junção útero-tubárica. A transferência pode ser feita com uma seringa
de volume de 1ml acoplada a uma agulha de ponta romba ou um tubo de
hematócrito, inseridos na luz do útero previamente perfurado com agulha ou
estilete (OLIVEIRA & GONZALES, 1992).
Quando os embriões são coletados recentemente, recomenda-se não
ultrapassar de 2 horas antes da sua utilização. Quando eles forem congelados,
deve ser feita uma nova avaliação antes da colocação no útero da receptora
(MARTINEZ et al, 1985).
TORRES & SEVELEC (19870, mostraram que a posição do corpo lúteo não
influência sobre a taxa de gestação quando um embrião está localizado em
cada corno uterino em ovelhas.
O diagnóstico de gestação pode ser realizado por dosagem de
progesterona no décimo sexto dia na ovelha e no vigésimo primeiro dia do
ciclo na cabra ou após 45 dias pôr ecotomografia (MARTINEZ et al, 1985).
BILTON & MOORE (1976), de 15 embriões cultivados sem armazenamento
prévio, 13 desenvolveram durante 2 dias, sedo transferidos para nove
receptoras e destas cinco pariram, cada um cabrito.
As operações de transferência devem ser realizadas o mais rápido possível
após a coleta (menos de quatro horas) ou após o descongelamento(menos de
quarenta minutos).Dois ou três embriões são colocados em um catéter ou em
uma pipeta de vidro, contendo 5 a 20 ml de PBS e são transferidos, por
laparotomia ou pôr controle laparoscópico, no terço superior do corno uterino
ipsilateral ao ovário que apresente, pelo menos, um corpo lúteo funcional
(BARIL et al, 1989).
A identificação do ovário portador de corpo lúteo funcional é importante
por ter sido demonstrado que a transferência para o corno uterino ipsilateral
ao corpo lúteo leva a melhores resultados (NEWCOMB & ROWSON, 1980),
embora estes autores preconizam que a disposição do embrião ocorra na
extremidade do corno uterino epsilateral, mas PERRIN (1987) relata que a
deposição a 10 cm adiante da bifurcação é a mais adequada.
A sobrevivência embrionária foi significativamente melhorada quando dois
embriões foram transferidos. Cerca de 60% das receptoras com dois embriões
tiveram uma prenhez a termo com, aproximadamente 2 / 3 destes com partos
duplos. Em receptoras que receberam dois embriões, a sobrevivência foi
melhorada pela transferência de ambos embriões para o mesmo oviduto
(70%) do que quando transferidos para cada oviduto (62%) (ARMSTRONG et
al, 1983 b).
Comparando a eficiência das técnicas de transferência para laparotomia e
por laparoscopia, a maioria dos autores afirma que a taxa da sobrevivência
embrionária e de parição são sempre mais baixas após transferência por
laparoscopia com resultados em torno de 40% ou menos (ARMSTRONG &
EVANS, 1983; HEPBURN, 1987; BARIL et al, 1989).
BARIL et al (19890 concluiram que a transferência de embriões sob o
controle laparoscópio era, ainda, inadequada, sendo necessário melhorar esta
técnica que parece ser a mais rápida e menos traumática que a cirúrgica.
Entretanto, VALLET et al (1989) avaliando as duas técnicas, concluiram que a
técnica de laparoscopia quando comparada com a laparotomia, para
transferência de embriões em caprinos, mostra que não existem diferenças
significativas com relação à sobrevivência embrionária e a taxa de parição.
Porém, a laparoscopia permite, em condições de campo, evitar contaminação
do trato genital, além de hemorragias internas e aderências, sedo uma técnica
mais rápida ( 5’ vs 15’) que a laparotomia.
2.4
Avaliação dos resultados obtidos
BESSOUDO et al (1988 a ), obtiveram 2.785 embriões colhidos de 336
fêmeas Angorá, dos quais 149 degenerados, com uma média de 9, 47 , 7 , 34
e 11 , 32 pelos métodos não cirúrgico sem laparoscopia, não cirúrgico com
laparoscopia e cirúrgico respectivamente. BESSOUDO et al (1988b)
transferiram 2.904 embriões, obtendo o nascimento de 1.351 cabritos (46,
52%).
OLIVEIRA et al (1992) transferiram embriões para 23 receptoras, das
quais 11 pariram produzindo 16 produtos.
A situação da transferência de embriões no Exterior e no Brasil segundo o
método utilizado e a taxa de recuperação: Pelo método cirúrgico no Exterior:
CALL et al (1987), 54, 3, NUTI et al (1987) 67, 0 , HOLM et al (1990) 92 ,0 e
POTES (1990) 48,0%.Não cirúrgico no Exterior: COONROD et al (1986) 74 , 0
, NAGASHIMA et al (1987) 51 ,4 e BARRY & VAN NIEKERK (1990) 54,0%.No
Brasil, CHOW et al (1986) 100,00 LIMA (1989) 48,4 e OLIVEIRA et al (1992)
40,0% pelo método cirúrgico PEREIRA et al (1991) 89,6 e OLIVEIRA et al
(1992) 30, 6% pelo método não cirúrgico.
ARAÙJO (1994) transferindo 154 embriões, sendo 84 embriões em
receptoras submetidas ao sistema de manejo intensivo e 70 embriões em
receptoras no sistema semi-intensivo, obteve 31 e 14 produtos nascidos
respectivamente
Atualmente o controle da reprodução caprina é possível, aplicando
técnicas que têm demonstrado a sua eficiência. Desde da monta natural com
utilização sistemática do “ efeito macho”, até os métodos de diagnósticos de
gestação, passando pelos métodos de indução do estro, da ovulação, da
inseminação artificial e transplantes de embriões, é possível programar a data
do parto e o número de cabritos nascidos com uma precisão
razoável(CHEMINEAU et al, 1993).
Em explorações mais tecnificadas, o controle do estro e da ovulação são
ferramentas utilizadas com outros fins prioritários tais como: difusão de
genótipos selecionados em conjunto com a inseminação artificial, programação
da época de nascimento mais favoráveis para sobrevivência das crias,
melhorar a eficiência reprodutiva e preparar fêmeas doadoras e receptoras,
para o desenvolvimento da técnica de transferência de embriões(GONZÀLESZSTAGNARO, 1993).
3. ASPECTOS SANITÁRIOS DA TRANSFERÊNCIA DE EMBRIÕES
As três maneiras de realizar mudanças nos genes, visando o
melhoramento genético é através do animal vivo, sêmen e o embrião. Esta
última é sem dúvida o meio mais simples e mais eficaz do ponto de vista
genético, Entretanto, deve ser considerado também em relação ao aspecto
sanitário, pois os agentes infecciosos são totalmente diferentes daqueles do
sêmen da inseminação artificial.
O embrião possui um certo número de proteções contra os agentes
patógenos ( o corpo da mãe, cavidade uterina, a zona pelúcida e em fim a
membrana trofoblástica) (THIBIER, 1989). Ele está sujeito a dois tipos de
riscos: aquele que se apresenta antes da coleta “ in vivo “ e aquele da
transferência e as operações que acompanham in vitro (THIBIER, 1989).
Certas recomendações técnicas mais precisas, apoiam-se sobre trabalhos
científicos que permitem eliminar estes riscos, ao ponto que, o embrião seja
atualmente a forma de troca de matéria viva mais segura.
Nos pequenos ruminantes, os trabalhos têm demonstrado a ausência de
transmissão de vírus da Língua Azul CHEMINEAU et al (1986) concluiram que
há um risco mínimo na transmissão do vírus após a lavagem dos embriões.
Para evitar os riscos de transmissão de agentes infecciosos, a
regulamentação francesa não autoriza a transferência de embriões que não
apresentam a zona pelúcida, verdadeira barreira entre o embrião e o mundo
exterior, intacta e sem restos celulares periféricos, fonte de contaminação
residual. Eles devem ser submetidos pelo menos a dez lavagens sucessivas
(THIBIER, 1989).
Todas as medidas necessárias devem ser tomadas, e parece que a
transferência de embriões é a forma mais segura de permuta de genes do
ponto de vista sanitário, quer seja de um estado para outro de um continente
a outro. Assim, esta técnica permite contornar a proibição de importação de
animais vivos dentro de numerosos países THIBIEER & NIBART, 1986).
4. INTERESSES DA TRANSPLANTAÇÃO EMBRIONÁRIA
4.1 Transplantação embrionária e genética
a)
Melhoramento genético e difusão
O primeiro interesse, evidente para todo mundo, é aumentar o número
de produtos nascidos por fêmeas, por unidade de tempo durante a sua vida
produtiva. O crescimento da qualidade de produtos nascidos é importante
quando a fêmea considerada apresenta um ou mais caracteres excepcional
dentro de sua raça. A transplantação embrionária depende da inseminação
artificial, com a utilização de sêmen de reprodutores de qualidades
reconhecidas. A técnica utiliza a superovulação da doadora, sendo coletado um
número de embriões superior àqueles que a fêmea poderia produzir até ao
final, e isto é que justifica a sua coleta (QUIRIN, 1989).
A coleta dos embriões libera assim o útero da mãe e permite que a
gestação seja completada por fêmeas de valor genético inferior, liberando a
fêmea doadora para um novo tratamento superovulatório. Este objetivo
permite gerar e explorar os melhores estoques de ovácitos de um animal
julgado excepcional, estoque
este, que não se renova durante a vida
reprodutiva, o que acontece com os espermatozóides do macho os quais a
produção é permanente depois de puberdade até a morte (CASAMITJANA &
PERRIN, 1989).
Um segundo objetivo da transferência de embriões é mais difícil de
perceber e de ser mensurado que é o melhoramento genético. SMITH (1988)
estime que a diminuição do intervalo entre gerações é o fator mais importante
dentro da eficácia do progresso genético, obtendo uma taxa de crescimento
genético em ovinos de 2,1% por característica escolhida em reprodução
normal e de 3,4% utilizando a superovulação e transferência de embriões.
b) Conservação
Um outro interesse da transferência embrionária é a possibilidade de
conservação de uma raça da qual o efetivo diminue, de uma espécie em via de
extinção ou de uma população ameaçada (CHICOTEAU, 1987). O mesmo autor
demonstra a necessidade de criação de bancos de sêmen e de embriões de
raças resistentes as infecções causadas por protozoários.
c) Transporte
O interesse prático do ponto de vista de transporte, é a facilidade de
poder ser transportada uma quantidade elevada de embriões de um continente
para outro, por via aérea e sem precauções particulares, a não ser, a
verificação do nível do nitrogênio líquido dentro do recipiente termostático
antes da partida. Ao lado desta introdução, existe um outro interesses prático
que é a adaptação às condições do meio após o nascimento, o que não poderá
ser realizada com os animais adultos(VALLET et al, 1991).
d) Pesquisa
Enfim, a transplantação embrionária permite a realização de estudos de
genético pura, relativa a influência de meio, colocando gêmeos obtidos por
bissecção e transferidos dentro de condições diferente, e realização de
transferências interespecíficas, as quais podem ser realizadas. Contudo, em
todos os casos não se pode aplicar dentro de um quadro de programa de
melhoramento, que não seja bem orientado, com objetivos bem definidos e
seguindo de um controle das performances adequado (ELSEN et al, 1984).
4.2 Interesse econômico da T. E.
A transplantação embrionária apresenta nos pequenos ruminantes, assim
como nos bovinos, interesses econômicos e práticos importantes.
Economicamente a importação de uma grande quantidade de animais, o
custo sem dúvida seria altíssimo quando comparado com a importação de
embriões e sem riscos sanitários, diminuindo de forma o custo com o
transporte, comparado com aquele dos reprodutores vivos (CHICOTEAU,
1987).
Do ponto de vista dos países detentoras de raças de alta produtividade, a
transplantação embrionária poderá permitir a valorização de seus produtos, e
sobretudo de exportar os animais sem problemas sanitários, Este é o caso de
numerosos países subdesenvolvidos, onde diversas infecções virais foram
introduzidas pela importação de animais vivos (CHICOTEAU, 1987).
4.3 Custo da T. E.
A transplantação embrionária é uma técnica que necessita de meios de
cultivos elaborados e material de alto custo. Este é o seu principal fator
limitante dentro da espécie bovina e mais ainda nos pequenos ruminantes,
onde o recurso de cirurgia ou o uso de um endoscópico é indispensável.
CASAMITJANA & PERRIN (1989) estimaram os custos para a espécie
caprina na França sem determinar a parte relativa ao material de consumo,
material fixo e a mão-de-obra. O custo da técnica oscila entre 650 a 950
francos, quando o produtor possui a doadora e 800 a 2000 francos quando os
embriões são comprados pelo mesmo. Contudo, dentro de certos países em via
de desenvolvimento e que possui uma infraestrutura técnica e científica, será
interessante calcular a economia realizada do ponto de vista financeiro e o
ganho de tempo de melhoramento genético, vulgarizando a transplantação
embrionária.
5. CONCLUSÕES
A transferência embrionária é uma moderna tecnologia capaz de promover
o melhoramento genético dos rebanhos caprinos mais rapidamente, porém,
esta técnica inovadora, a exemplos de outros países, deve ser conduzida com
a implantação de estratégias de ações, de acordo com a realidade sócioeconômica.
A T . E. nos pequenos ruminantes é uma técnica de reprodução que não
está ainda acessível, pois requer técnicos altamente qualificados.
Os trabalhos conduzidos atualmente podem permitir no futuro a sua
realização através da colheita pela via cervical, seguindo o custo da técnica.
Diminui os custos e os riscos sanitários e como também facilita as trocas
de genes, aumenta o número de produtos nascidos pôr fêmea, e permite a
determinação do sexo, através da bissecção de embriões, sexagem dos
embriões ou dos espermatozóides e a fecundação in vitro
6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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