Transformação genética de laranja doce(Citrus sinensisL. Osbeck

51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
656
[email protected]
Banin, JK1; Schinor, EH2; Stipp, LCL1; Freitas Junior, W de1; Mourão Filho, FAA2; Harakava, R3; Mendes, BMJ1
1
CENA/USP, Av. Centenário 303, 13400-970, Piracicaba-SP; 2ESALQ/USP, Piracicaba-SP; 3Instituto Biológico Av. Conselheiro
Rodrigues Alves 1252, 04014-002, São Paulo-SP.
Transformação genética
de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck)
com uma seqüência conservada antisenso
do vírus da tristeza do citros (CTV)
A tristeza do citros (CTV) é considerada a virose de maior importância econômica para a citricultura
mundial.O vírus da tristeza dos citros, pertencente ao gênero Closterovirus, é transmitido por afídeos de
maneira semipersistente. O vírus é restrito ao floema de espécies cítricas, sendo facilmente disseminado
por enxertia ao serem utilizadas borbulhas infectadas. Recentemente, uma nova doença foi detectada
nos pomares brasileiros, denominada ‘Morte Súbita dos Citros’, podendo estar relacionada ao vírus da
tristeza dos citros. Com o objetivo de obter plantas tolerantes a essas doenças, segmentos de epicótilo
dos cultivares de laranja ‘Hamlin’, ‘Valência’ e ‘Natal’ foram transformados com as estirpes EHA105
e AGL1 de Agrobacterium tumefaciens, contendo uma seqüência conservada antisenso do vírus da tristeza
do citros, sob o controle do promotor constitutivo 35S. Após dois dias de co-cultivo em meio de
cultura EME, com acetoseringona, pH 5.5, os explantes foram transferidos para o meio de cultura
de seleção (EME), suplementado com BAP (1,0 mgL-1); canamicina (100 mgL-1), como agente de
seleção; cefotaxima sódica (500 mg L-1) ou timentin (300 mgL-1), para controlar o crescimento da A.
tumefaciens; e incubados por 2-3 semanas, a 27 ºC, no escuro. Após este período, foram mantidos sob
fotoperíodo de 16h de luz. As gemas adventícias foram avaliadas pelo teste histoquímico para atividade
do gene uidA e por PCR, usando primers específicos para detecção da seqüência conservada do CTV.
As gemas adventícias identificadas como transgênicas foram microenxertadas e após o desenvolvimento
da plântula, esta foi transferida para vasos para aclimatização. Foram obtidas 15 plantas de laranja
‘Hamlin’, (12 com AGL1 e 3 com EHA105),12 plantas de laranja ‘Valência’ (AGL1) e 8 plantas de
laranja ‘Natal’ (AGL1). As plantas serão avaliadas por “Southern blot” para confirmar a integração da
seqüência introduzida. Posteriormente, serão realizados bioensaios, visando avaliar a tolerância das
plantas transgênicas obtidas à morte súbita dos citros.