Ditetrazoledipyrido-[3,2

54º Congresso Brasileiro de Genética
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Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética • 16 a 19 de setembro de 2008
Bahia Othon Palace Hotel • Salvador • BA • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
Avaliação da interação com DNA e atividade
nucleásica do composto metálico Fe(II)5,6Ditetrazoledipyrido-[3,2-d:2’,3’-f]-Quinoxaline
(Fe(II)dpq-dTzol) desenvolvido de fenantrolina
Pich, CT3,4; Miranda, FS1; Almeida, WB3; Gonçalves, NS1; Neves, A2; Terenzi, H3
Laboratório de Equilíbrio Químico, Departamento de Química, CFM, Universidade Federal de Santa Catarina
Laboratório de Bioinorgânica e Cristalografia, Departamento de Química, CFM, Universidade Federal de Santa Catarina
3
Laboratório de Expressão Gênica, Departamento de Bioquímica, CCB, Universidade Federal de Santa Catarina
4
Grupo de pesquisa em Genética Ambiental, Universidade do Extremo Sul Catarinanse
[email protected]
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Palavras-chave: Compostos organometálicos, Nucleases sintéticas
As enzimas sintéticas baseadas em compostos organometálicos são substâncias produzidas através da engenharia química
que mimetizam a atividade de seus análogos naturais. Estas podem ser utilizadas, tanto como ferramenta biotecnológica,
bem como drogas em terapias antineoplásicas ou de reposição. Um novo grupo destas substâncias está em fase de síntese e
o composto Fe(II)dpq-dTzol está entre estes. Consiste de um núcleo de Fe(II) coordenado a um derivado de fenantrolina
e quatro moléculas de água. A molécula de fenantrolina já teve demonstrada sua capacidade de intercalar na molécula de
DNA e os mais variados derivados desta vem sendo estudados. Desta maneira este trabalho tem como objetivo a análise da
capacidade do composto de interagir e quebrar o DNA in vitro. Para determinar sua atividade em função do pH o composto
foi incubado nas concentrações de 0, 10, 20, 40 e 80μM em presença de DNA plasmidial supertorcido (600ng) nos pHs de
7,0, 7,5 e 8 em tampão HEPES pelo período de 16 horas a 50°C. O ligante dpq-dTzol foi incubado nas mesmas condições
como controle da atividade do composto. O local de interação com o DNA foi determinado em presença de distamicina,
um competidor pela cavidade menor da dupla fita e a forma de interação (hidrolítica ou oxidativa) foi avaliada através
de incubações realizadas em argônio tendo Fe(III)(EDTA) como controle, pois este corta DNA somente em presença de
oxigênio. Ambos experimentos foram incubados nas concentrações de 0, 160 e 320μM a 50°C por duas horas. A cinética de
clivagem foi calculada através da equação de Michaelis-Menten em reações nas concentrações de 0, 20, 40, 80 e 160μM em
pH 7,0 coletando-se alíquotas a cada 15 minutos em 90 minutos. Todas as incubações foram submetidas à eletroforese em
gel de agarose e fotografadas observando-se a transformação da forma supertorcida do DNA plasmidial em circular aberta
e linear cujas proporções foram calculadas com o programa LabWorks de análise de intensidade e tamanho de bandas.
Os compostos demonstraram atividade nucleásica diretamente correlacionada à concentração em todos os pHs testados,
sendo esta mais pronunciada no pH 7,0. A capacidade de linearização do DNA, mesmo em concentrações reduzidas,
demonstra uma possível especificidade na região de atuação do composto. O ligante isolado não demonstrou atividade. A
ausência de inibição por distamicina demonstrou que o local de atuação é cavidade maior do DNA. Uma manutenção de
atividade em atmosfera de argônio sugere que sua atividade é hidrolítica provavelmente envolvendo as moléculas de água
coordenadas. A sua cinética catalítica em pH 7,0 apresentou valores de Kcat de 2,94 h-1, KM de 0.000543 M. A eficiência
catalítica observada foi de 5419,46 h-1 M-1 e uma aceleração da degradação do DNA de 8,17x107, classificando-o como
uma nuclease sintética de grande atividade.
Apoio Financeiro: Capes – CNPq - FAPESC.