PROBITI TESTE DE TOXICIDADE EMBRIONÁRIA EM ZEBRAFISH (DANIO RERIO) DE COMPOSTO ORGANOMETÁLICO DERIVADO DO ÁCIDO VALPROICO [CU(VALP)2FEN] Avaliar a toxicidade embrionária de [Cu(Valp)2Fen] e AV em zebrafish com protocolo validado por uma agência internacional. METODOLOGIA A avaliação da toxicidade embrionária para [Cu(Valp)2Fen] e AV nas concentrações (0,37; 1,11; 3,33; 10 e 30 μMol) e (8; 40; 200; 1000 e 5000 μMol), respectivamente, foram realizadas de acordo com a orientação do protocolo 236 da Organização para a Cooperação Econômica e Desenvolvimento em zebrafish (Fig. 1). Os seguintes parâmetros foram avaliados: coagulação de embriões fertilizados; ausência de formação de somito; ausência de descolamento da cauda, ausência de batimento cardíaco e determinação da concentração letal (LC50). [Cu(Valp)2Fen] 0,37; 1,11; 3,33; 10; 30 μMol 24; 48; 72 e 96h AV Seleção de ovos fertilizados e determinação da taxa de fertilidade 8; 40; 200; 1000 e 5000 μMol Fig. 1. Metodologia para determinação da toxicidade embrionária. RESULTADOS Os embriões expostos à faixa de concentração do [Cu(Valp)2Fen] não apresentaram alterações morfológicas nas concentrações testadas, e as mesmas não provocaram a coagulação dos embriões durante o período de avaliação (96 horas pós fertilização - hpf). O grupo tratado com AV com concentrações de 8 e 40 µMol não apresentou alterações morfológicas ao final de 96 h. Apesar de não causar alterações morfológicas, as concentrações de 10 µMol ([Cu(Valp)2Fen]) e 1000 µMol (AV) provocaram alterações na frequência cardíaca, sendo estatisticamente significante (p <0,05). Entretanto, as demais concentrações não apresentaram este mesmo perfil (Fig. 2) (Fig. 3). S u r v iv a l S u r v iv a l 30 30 D e a th D e a th n u m b e r o f a n im a ls OBJETIVO Tratamentos Ovos fertilizados O ácido valproico (AV) é um fármaco destinado ao tratamento da epilepsia refratária e apresenta alguns efeitos adversos importantes, como por exemplo, teratogenicidade [1]. Estudos recentes sobre complexos organometálicos com AV com íons de cobre divalentes apresentaram efeito terapêutico muito superior ao AV [2]. Neste estudo, estes íons metálicos foram coordenados com ligantes orgânicos como a 1,10fenantrolina, além de duas moléculas de AV, resultando em um complexo [Cu(Valp)2Fen]. A utilização dos embriões de zebrafish para testes de toxicidade engloba tanto a rapidez quanto o baixo custo, além da possibilidade de serem testados mais de um candidato a fármaco em um único experimento [3]. n u m b e r o f a n im a ls INTRODUÇÃO População reprodutora Zebrafish Camila Cervi Pires1; Lauren Dockhorn Grünspan1; Pablo Ricardo Bertelli2; Miriana da Silva Machado2; Sidnei Moura e Silva1; Leandro Tasso1 1Universidade de Caxias do Sul, UCS; 2Universidade Federal do Rio Grande do Sul, UFRGS L iv e 20 10 L iv e 20 10 [1] PERUCCA E. Pharmacological and therapeutic properties of valproate: a summary after 35 years of clinical experience. CNS Drugs, v.16, n. 10, p. 695-714, 2002. [2] DUMAS, F. et al. Synthesis, structural analysis and anticonvulsant activity of ternary Cu II mononuclear complex containing 1, 10-phenanthroline and the leading antiepileptic drug valproico acid, Biochimie. v 91, p. 1286-1293, 2009. [3] OECD. OECD guidelines for the testing of chemicals: fish embryo acute toxicity (FET) test. OECD, 2013. 22 p. Disponível em: <http://www.oecdilibrary.org/environment/test-no-236-fish-embryo-acute-toxicity-fet test_9789264203709-en;jsessionid=2eckxs1wiwdl9.x-oecd-live-03. Acesso em: agosto 2015. 00 50 00 10 0 20 o C M o lv en t Fig. 2. Sobrevivência dos animais em diferentes concentrações de [Cu(Valp)2Fen] . S M 40 n 0 3 0 1 ,3 3 ,1 1 7 ,3 0 2 H e REFERÊNCIAS tO H O tr o l 0 8 0 Fig. 3. Sobrevivência dos animais em diferentes concentrações de AV. CONSIDERAÇÕES FINAIS A partir desses resultados foi possível avaliar que as doses testadas do derivado organometálico não provocam efeito toxicológico neste modelo animal, sendo possível avaliar a atividade anticonvulsivante com segurança e acurácia. AGRADECIMENTOS: UCS, FAPERGS