Identificação, filogenia molecular e análise de expressão de genes

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Identificação, filogenia molecular e análise de
expressão de genes envolvidos na resposta ao
estresse ácido em Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20
Ferreira, AB1; Freitas, FS1; Oliveira, MNV1; Conceição, LL1; Alfenas-Zerbini, P1; Queiroz, MV1; Borges, AC1;
Moraes, CA1
Departamento de Microbiologia, Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, Minas Gerais
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Palavras-chave: Lactobacillus, probióticos, estresse ácido, expressão de genes
Linhagens de Lactobacillus utilizadas como probióticos são expostas a diversos tipos de estresse, como baixo
pH, que pode afetar a sobrevivência durante a passagem pelo trato gastrointestinal. A reação de descarboxilação
de aminoácidos é um dos sistemas mais importante para a manutenção do pH intracelular em condições de
estresse ácido. Nesta reação, um aminoácido é transportado para dentro da célula, um próton é consumido e
o produto, uma amina, é exportado da célula. O resultado do consumo de um próton é o aumento do pH
intracelular. Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 apresenta características probióticas e potencial para uso em
alimentos fermentados. Este trabalho teve como objetivo identificar os genes que codificam as proteínas ornitina
descarboxilase e permease de aminoácidos em Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20. Essas proteínas fazem parte
do mecanismo de descarboxilação de aminoácidos e, em algumas Bactérias do Ácido Láctico, contribuem para
a tolerância ao ácido. O DNA total extraído a partir de L. delbrueckii UFV H2b20 foi submetido à reação de PCR
com primers construídos baseados nas seqüências dos genes que codificam as proteínas ornitina descarboxilase e
permease de aminoácidos de L. delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842. Os DNAs amplificados foram clonados,
transformados e seqüenciados. Árvores filogenéticas foram reconstruídas por inferência Bayseiana, utilizando
genes ortólogos capturados do NCBI (National Center for Biotechnology Information). A expressão desses dois
genes em resposta ao estresse ácido foi feita pelo método de PCR em tempo real. As seqüências de 1143 e 808 pares
de bases revelaram genes homológos aos da ornitina descarboxilase e permease de aminoácido, respectivamente,
confirmando a presença desses dois genes em L. delbrueckii UFV H2b20. Estas seqüências apresentaram alto valor
de identidade e agruparam na análise filogenética, com os respectivos genes de L. delbrueckii subsp. bulgaricus
ATCC 11842. A expressão desses genes foi alterada quando a bactéria em estudo foi exposta ao pH 3,5, indicando
uma resposta ao estresse ácido. A demonstração do papel desses genes na resposta ao estresse ácido é importante
para o desenvolvimento de culturas probióticas com melhores características de resistência as condições inibitórias
presentes no trato gastrointestinal.