Produção do pigmento Orevactaeno, inibidor da replicação do vírus

Produção do pigmento Orevactaeno, inibidor da replicação do vírus
HIV-1, pelo fungo Epicoccum sp e sua atividade antibiótica.
Maria L. M. Pereira1 (IC)*, Angelo D. Garbi1 (IC),Taicia P. Fill1 (PG), Edson Rodrigues Filho1 (PQ)
[email protected], [email protected]
1. Laboratório de Bioquímica Micromolecular de Microorganismos (LaBioMMI) – UFSCa r- São Carlos-SP
Palavras Chave: Epicoccum sp, HIV-1, Orevactaeno.
Pigmento - Extrato
TPF_DIV_LCFSNa 886 (14.850) Cm (873:922)
437.6
TPF_DIV_LCFSPa Sm (Mn, 4x2)
Introdução
15.04
100
4.0e-1
3.5e-1
O
OH
OH
OH
O
OH
O
HO
O
OH
Figura 1: Pigmento vermelho produzido pelo fungo
(2)
Epicoccum sp .
Resultados e Discussão
Com o objetivo de testar a antibiose dos extratos
do fungo Epicocum sp e detectar a produção da
substância Orevactaeno por ele, o microorganismo
foi cultivado em meio sólido canjica (Yoki) durante
20 dias, a extração foi realizada adicionando-se
100mL de metanol ao meio de cultivo, seguida de
filtração à vácuo.
Posteriormente, estes extratos foram submetidos
à análise por ESI/MS em um espectrômetro triplo
quadrupolo (QuattroLC – MICROMASS). O fluxo
utilizado nas análises foi de 3.0mL/min em uma
corrida cromatográfica com gradiente entre
acetonitrila e água. O solvente utilizado para
redissolução dos extratos foi metanol.
O cromatograma obtido a partir das análises dos
extratos, o espectro de UV referente à banda
cromatográfica em 15 minutos, assim como o
espectro de massas obtido (full scan) para esta
banda cromatográfica, podem ser observados na
figura 2 abaixo.
31a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
%
AU
3.0e-1
2.5e-1
2.0e-1
1.5e-1
17.40
343.6
1.0e-1
0
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
231.6
5.0e-2
0.0
TPF_DIV_LCFSNa
0
200
300
400
500
600
700
14.85
TPF_DIV_LCFSPExu 294 (15.139) Sm (Mn, 4x1.10); Cm (287:306-(265:279+310:323))
1: Scan ES+
1.98e5
613.5
100
%
Os microorganismos desde a descoberta das
penicilinas têm se mostrado uma importante fonte
de
substâncias
biologicamente
ativas.
O
microorganismo
Epicoccum
sp.,
isolado
anteriormente da planta Cedrela fissilis, encontra-se
depositado na micoteca do LaBioMMi(1). A
descoberta da produção do pigmento vermelho
Orevactaeno pelo fungo Epicoccum sp. é de grande
importância devido a alta complexidade de sua
produção por vias sintéticas. Essa substância
apresentou atividade como inibidor da interação
entre a proteína Rev e seu sítio de ligação no mRNA
viral (RRE) impedindo a replicação do vírus HIV-1 (1).
A estrutura molecular da substância Orevactaeno
pode ser observada na figura1 abaixo.
146.3
635.6 663.6
292.4
1226.5
0
m/z
200
300
400
500
600
700
800
900
1000
1100
1200
1300
Figura 2: Cromatograma do extrato do fungo. (A), Espectro de
UV para o pigmento(B) e espectro de massas obtido.
A partir dos dados observados no espectro de
Ultra-violeta, λmax= 437nm, e no espectro de
massas, onde se visualiza um íon com relação
massa/carga 613, referente ao pico do íon molecular
protonado, pode-se verificar que o fungo Epicoccum
sp. foi apto na produção da substância Orevacteno
(MM= 612) no meio de cultivo proposto.
Quando testado, o extrato metanólico do fungo
Epicoccum sp., inibiu o crescimento das bactérias
ensaiadas Bacillus subtilis, Escherichia coli e S.
aureus, como se pode observar os halos de inibição
(Tabela 1), resultado da inibição do extrato frente as
bactérias. A viabilidade do experimento foi realizada
adicionando-se antibióticos controle, Vancomicina,
cujo halo de inibição é 2,5cm, para bactéria bacillus
subtilis e tetraciclina, cujo halo de inibição é 2,4cm,
para as demais bactérias.
Tabela 1: Halos de inibição apresentados
Microorganismo
Bacillus subtilis
S.aureus
E.Coli
Halo de inibição /cm
1,5
2,3
1,7
Conlusões
Os ensaios biológicos mostraram a inibição do
crescimento das bactérias testadas inspirando a
investigação contra outras espécies de bactérias.
Verificou-se que o fungo Epicoccum sp. foi apto na
produção da substância
Orevactaeno,
um
importante inibidor da replicação do vírus HIV-1.
Agradecimentos
Aos órgãos financiadores FAPESP, CAPES e CNPq.
--------------1
Pereira G. K..; Tese de mestrado, programa de Pós-Graduação em
Química-UFSCar, 2000,pp200.
2
Biorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol. 7. No. 17. pp 22952298, 1997