6º Seminário de Iniciação Científica Goiânia, de 29 de agosto a 01 de setembro de 2012 PROPRIEDADE ANTIOXIDANTE IN VITRO DE EXTRATOS ORGÂNICOS DA RAIZ DA PLANTA SPIRANTHERA ODORATISSIMA Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica no Ensino Médio (PIBIC-EM / CNPq) Resumo: A espécie Spiranthera odoratissima, popularmente conhecida como manacá é uma espécie típica do Cerrado brasileiro. Suas propriedades antioxidantes são popularmente conhecidas e o chá de suas raízes e outras partes é amplamente consumido. O objetivo desse trabalho foi quantificar o potencial antioxidante da raiz do manacá, possibilitando sua indicação para substituir em partes e/ou na totalidade os antioxidantes sintéticos amplamente aplicados na conservação de alimentos, determinar o teor proantocianidinas e antioxidantes totais. A determinação do teor de proantocianidina foi realizada pelo método da vanilina e expressa em equivalente em ácido tânico e a determinação de antioxidantes totais determinado em equivalente em ácido ascórbico. Os resultados para proantocianidinas mostram a presença desses compostos na concentração de 7,28 mg/mL de extrato, equivalente em ácido tânico, de acordo com a metodologia utilizada e indica a importância de pesquisas nesta área em relação à planta. Os resultados para antioxidantes totais mostram a presença na concentração de 0,46 mg/mL de extrato, equivalente em ácido ascórbico, indicando que a espécie estudada possui esta propriedade e deve ser melhor analisada em futuros projetos de pesquisa. O trabalho realizado mostrou o potencial da planta, manacá, como antioxidante. As espécies do Cerrado brasileiro são um amplo campo para a pesquisa dos produtos naturais e devem ser cada vez mais incentivadas. Palavras-chave: Antioxidante. Radicais livres. Spiranthera odoratissima, Manacá Introdução As células do nosso organismo têm a necessidade constante de receber oxigênio para converter nutrientes absorvidos dos alimentos em energia. Neste processo são liberadas moléculas altamente reativas que são os radicais livres. Os fatores exógenos são os principais contribuintes para a formação em excesso de radicais livres, como resultado provoca um desequilíbrio no organismo que é o estresse oxidativo. (BIANCHI, 1999) Nos últimos anos pesquisas mostram que cada vez mais a população vem produzindo em excesso radicais livres, a má alimentação, a poluição e consumo excessivo de álcool e cigarro são os fatores predominantes para o diagnostico deste quadro. (SOUZA, 2007) Na tentativa de encontrar fontes exógenas de antioxidantes, cientistas de varias partes do mundo voltaram os olhos para a pesquisa de antioxidantes em plantas e alimentos. Algumas destas pesquisas revelaram uma 6º Seminário de Iniciação Científica do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Goiás/IFG. 1 6º Seminário de Iniciação Científica Goiânia, de 29 de agosto a 01 de setembro de 2012 substância chamada proantocianidinas esta substância são bioflavonoides ativos. (MONTEIRO, et al., 2005) Em busca de antioxidantes exógenos esta pesquisa analisou a raiz da espécie Spiranthera odoratissima. A planta foi coletada no jardim botânico de Brasília-DF, identificada e classificada pela equipe de técnicos do local. Esta espécie é conhecida popularmente como manacá nos estados de Mato grosso e Goiás, é uma planta medicinal cujas raízes são freqüentemente comercializadas em feiras livres de todo o estado de Goiás para tratar principalmente o reumatismo. Outras atribuições etnofarmacológicas atribuídas a esta espécie é ação contra dores de estômago, dores de cabeça, dores musculares, disfunções hepáticas e para estimular o apetite. (GALDINO, et al., 2007) Essa interceptação dos radicais livres é importante para os processos do metabolismo e torna interessante o estudo dos antioxidantes naturais, como os encontrados em plantas típicas da região do Cerrado brasileiro. Objetivos Identificar e quantificar o potencial antioxidante da raiz da planta Spiranthera odoratissima (manacá), típica da região do Cerrado, possibilitando sua indicação para substituir em partes e/ou na totalidade os antioxidantes sintéticos amplamente aplicados na conservação de alimentos. Determinar o teor proantocianidinas e antioxidantes totais. Metodologia 1- Coleta e preparo da planta Foram coletados pedaços da raiz da planta, Spiranthera odoratissima (manacá), no Jardim Botânico de Brasília/DF. O material foi seco e armazenado à temperatura ambiente, a raiz foi cortada em pequenos pedaços. 2- Preparação do extrato em água Em um béquer foi colocado 10 gramas do material seco juntamente com 100 mL de água aquecida a 90°C, por um período de três minutos. Após o aquecimento a solução foi filtrada, restando apenas o extrato do material que foi armazenado em um frasco âmbar sob refrigeração a 5 °C. (MORAIS, 2009) 3- Determinação de proantocianidinas Para a determinação das proantocianidinas foi utilizado o método da vanilina. Em um balão volumétrico de 10,0 mL foram adicionados 0,4 mL do extrato e o balão completado com água destilada. Desta solução foi retirada uma alíquota de 1,0 mL e transferida para um tubo de ensaio. Neste mesmo tubo de ensaio adicionaram-se 2,0 mL de uma solução recém preparada de vanilina (Aldrich Co.) em ácido sulfúrico 70%, na concentração de aproximadamente 10,0 mg mL . A mistura foi mantida em um banho de água a uma temperatura de 50 ºC por 15 min. A amostra foi resfriada e a absorbância registrada a 500 nm. Da mesma forma, foi feita uma curva de calibração com ácido tânico. As leituras foram registradas contra um branco. O teor de proantocianidinas foi expresso em mg equivalentes de ácido tânico por mL de solução do extrato. (MORAIS, 2009) -1 6º Seminário de Iniciação Científica do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Goiás/IFG. 2 6º Seminário de Iniciação Científica Goiânia, de 29 de agosto a 01 de setembro de 2012 4- Determinação da atividade antioxidante total A atividade antioxidante total do extrato foi determinada de acordo com o método de Prieto et al (PRIETO P, 1999). Resumidamente, 0,3 mL de solução do extrato (5 % v/v) foi misturado com 3,0 mL de solução reagente (0,6 M de ácido sulfúrico, 28 mM fosfato de sódio e 4 mM de molibdato de amônio). A mistura de reação foi incubada a 95 °C por 90 min em banho-maria. Absorbância de todas as amostras da mistura foi medida em 695 nm. A atividade antioxidante total foi expressa como o número de equivalência de ácido ascórbico. Uma curva de calibração do ácido ascórbico foi preparada e a atividade antioxidante total padronizada contra o ácido ascórbico e expressa em mg equivalentes de ácido ascórbico por mL de solução do extrato. Resultados e discussão 1) Teor de proantocianidinas Pelas análises realizadas obtemos resultados que indicam à presença de proantocianidina no extrato. Esses resultados podem ser observados na tabela 1. Tabela 1 – Teor de proantocianidina no extrato do manacá, equivalente em ácido tânico. Concentração (mg/mL) Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 6,96 7,44 7,28 ± 0,27 7,44 Média ± SD Largamente encontrados no reino vegetal, os taninos condensados ou proantocianidinas são polímeros de flavan-3-ol e/ou flavan- 3,4-diol, produtos do metabolismo do fenilpropanol. As proantocianidinas, assim denominadas provavelmente pelo fato de apresentarem pigmentos avermelhados da classe das antocianidinas, apresentam uma rica diversidade estrutural. Apesar de várias pesquisas realizadas sob diferentes abordagens com teores de taninos, a associação dessas informações com o aproveitamento de plantas medicinais é escassa. Os resultados mostram a presença desses compostos, de acordo com a metodologia utilizada e indica a importância de pesquisas nesta área em relação à planta. 2) Atividade Antioxidante Total Com as análises realizadas para determinar a capacidade antioxidante total da planta pôde-se comprovar a presença desses antioxidantes, (Tabela 2). Tabela 2 – Teor de antioxidantes totais no extrato de manacá, equivalente em ácido ascórbico. Concentração (mg/mL) Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 0,448 0,469 0,469 6º Seminário de Iniciação Científica do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Goiás/IFG. 3 6º Seminário de Iniciação Científica Goiânia, de 29 de agosto a 01 de setembro de 2012 Média ± SD 0,46 ± 0,01 Os antioxidantes são muito importantes para o organismo, e as pesquisas tem buscado fontes naturais dessas substâncias que possam substituir os produtos sintéticos, largamente usados pelas indústrias. Os resultados mostram a presença de antioxidante total, equivalente em ácido ascórbico, indicando que a espécie estudada possui esta propriedade e deve ser melhor analisada em futuros projetos de pesquisa. Conclusões O trabalho realizado mostrou o potencial da planta Spiranthera odoratissima (manacá) como antioxidante devido à comprovação da presença de substâncias equivalentes em ácido tânico e ácido ascórbico. As espécies do Cerrado brasileiro são um amplo campo para a pesquisa dos produtos naturais e devem ser cada vez mais incentivadas. Para uma caracterização mais completa da planta é necessária à utilização de metodologias variadas, permitindo uma maior comparação e também a pesquisa com outras partes (caule, folhas e frutos), avaliando o seu completo potencial. Agradecimentos Ao Prof. Douglas Queiroz Santos, que deu início a este projeto, ao CNPq, ao Instituto Federal de Goiás e ao Jardim Botânico de Brasília. Referências BIANCHI, M. D. L. P. e L. N. M. G. Antunes. Radicais livres e os principais antioxidantes da dieta. Revista de Nutrição, v.12, p.123-130. 1999. GALDINO, P. M; HONÓRIO, T. C. D.; PAULA, Marcio André de; MATOS, Lécia Garcia de; PAULA, José Realino de; COSTA, Elson Alves.Especis vegetais do cerrado,avaliadas no laboratório de farmacologia de produtos naturais-ICBUFG,quanto ao potencial neurofarmacológico de seus extratos. Revista eletrônica de farmácia. 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