Análise da expressão gênica através de PCR em tempo real da

55º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 55º Congresso Brasileiro de Genética • 30 de agosto a 02 de setembro de 2009
Centro de Convenções do Hotel Monte Real Resort • Águas de Lindóia • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Análise da expressão gênica através de PCR em tempo
real da enzima álcool desidrogenase em linhagens
industriais da levedura Dekkera bruxellensis
Liberal, ATS; Morais Jr, MA
Laboratório de Genética de Microorganismos, Departamento de Genética, UFPE
[email protected]
Palavras-chave: Fermentação alcoólica, Dekkera bruxellensis, ADH
A levedura Dekkera bruxellensis é a principal contaminante de diversos processos fermentativos, inclusive na
fermentação das destilarias de álcool combustível. Nosso grupo de pesquisa vem identificando e analisando genes
responsáveis pelas vias do metabolismo central e genes relacionados com a adaptação dessa levedura ao processo
industrial a partir do banco de dados do seqüenciamento desta levedura. Identificamos recentemente dois genes
na D. bruxellensis, ADH3Db e ADH7Db ambos relacionados ao gene ADH que codifica enzimas da família álcool
desidrogenase, enzima que catalisa a conversão de acetaldeído a etanol na última etapa da via do metabolismo
fermentativo. O objetivo deste trabalho foi o de analisar a expressão gênica dos dois genes ADH identificados na
D. bruxellensis, através da PCR em tempo real. Foram utilizadas duas linhagens da levedura D. bruxellensis: a 248,
isolada da fermentação alcoólica, e a CBS 74, isolada da fermentação de cerveja. Estas leveduras foram inoculadas
em meio Yeast Nitrogen Base (YNB) com glicose 2% a 37ºC. Foram coletadas alíquotas do cultivo em 0,1DO e 1DO
de concentração celular, que foram submetidas à extração de RNA (Kit Total RNA isolation – NucleoSpin RNA II). A
partir do RNA extraído foi sintetizado o cDNA (kit ImProm-II™ Reverse Transcription System Promega II). Os ensaios
de PCR em Tempo Real foram realizados na plataforma ABI Prism 7300 Applied Biosystems (kit SYBR Green PCR
Master Mix). A expressão dos genes ADHDb sempre foi maior ao ser atingida 1DO de crescimento celular, sendo
que, a linhagem 248 apresentou maior expressão do gene ADH7Db enquanto a linhagem CBS 74 apresentou maior
expressão do gene ADH3Db. O gene ADH7Db apresentou quatro vezes mais expressão na linhagem 248 que na CBS
74; enquanto que o gene ADH3Db apresentou quinze vezes mais expressão na linhagem CBS 74 quando comparada
à linhagem 248. Por serem linhagens de D. bruxellensis isoladas de processos fermentativos diferentes é esperado
diferenças na expressão gênica. Esta diferença ocorre devido ao metabolismo diferenciado que é necessário em
cada processo fermentativo específico e que podem estar relacionadas ao momento ou a intensidade da expressão.
O gene ADH7 está mais relacionado à síntese de álcool e tolerância ao aldeído, como a linhagem 248 foi isolada
da produção de álcool, apresenta maior resposta ao seu meio utilizando esse gene. Entretanto a linhagem CBS
74 foi isolada da fermentação de cerveja, tendo assim maior expressão do gene ADH3 que está relacionado à
fermentação/respiração do metabolismo fermentativo. A análise de expressão dos dois genes permitiu verificar as
diferenças nos dois momentos metabólicos estudados entre as duas linhagens de D. bruxellensis.
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