Instruções de Uso - Biometrix

Instruções de Uso
1.
Nome Comercial e marca da família de produtos
Reagente corante fixador FluoroQuench AO/EB
Marca: One Lambda.
2.
Formas de apresentação do produto e composição
Número do Catálogo
Nome Comercial
FQAE-100
Fluoroquench AO-EB – 100ml
FQAE-500
Fluoroquench AO-EB – 500ml
3.
Descrição da finalidade ou uso do produto
Esse reagente é usado para corar fluorescentemente e fixar linfócitos em uma placa
teste do tipo Terasaki, em ensaios de microlinfotoxicidade. Os produtos
FluoroQuench AO/EB incluem uma mistura de reagentes para facilitar a avaliação
microscópica das células e para prolongar a conservação das placas para uma
posterior avaliação.
4.
Princípio de ação e reação do produto: base científica, explicação da
metodologia, técnicas e reações envolvidas
Em teste HLA, um reagente fixador pode significantemente reduzir o plano de fundo
fluorescente. EDTA é usado para parar a reação complemento-dependente de lise
celular. Brometo de etídio (EB) é usado para corar as células mortas. Laranja de
acridina (AO) é usada para corar células vivas. Favor se referir ao esquema abaixo
para melhor entendimento do princípio:
Ag + Ac = Ag<->Ac + COMPLEMENTO → LISE CELULAR
linfócito
+
Soro específico
Reação Ag-Ac
1
+ Complemento
Ag-Ac-SC
+ corante
Lise
Positivo
PRINCÍPIOS
O corante, após a lise celular, penetrará nas células mortas corando-as de vermelho
e nas células vivas corando-as de verde – o processo de coloração das células é a
etapa final do teste sorológico HLA.
Na tabela abaixo damos uma idéia de como as leituras devem ser feitas:
0-10%
11-20%
51-80%
21-50%
81-100%
O procedimento prático é resumido conforme diagrama abaixo:
2
4
6
2
1
3
5
7
5.
Componentes fornecidos com o produto: especificações ou características
qualitativas ou quantitativas
Esse reagente corante/fixador é composto de:
Hemoglobina bovina
Ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA)
Brometo de etídio (EB)
Laranja e acridina (AO)
Azida sódica
FluoroQuench AO/EB pode ser apresentado pronto para uso em dois frascos
diferentes: um com 100mL (FQAE-100) e outro com 500mL (FQAE-500)
6.
Relação de todos os materiais, artigos, acessórios, insumos ou
equipamentos necessários e não fornecidos, para uso com o produto, indicando as
formas e condições de aquisição
INSTRUMENTOS REQUERIDOS, mas não fornecidos:
Nenhum instrumento especial é requerido.
Materiais requeridos, mas não fornecidos
Dispensador 5uL, tampas plásticas.
7.
Condições de armazenamento, transporte, limites de temperatura,
umidade ou proteção à luz
Deve ser armazenado em temperatura entre 2 e 8 ºC.
O transporte pode ser realizado em temperatura ambiente ou gelo reciclável.
Esse produto deve ficar protegido da luz solar e umidade excessiva.
8.
Precauções e esclarecimentos sobre riscos com o uso do produto
Pode causar irritação aos olhos, pele, membranas das mucosas, trato respiratório
superior. Não deixe entrar em contato com olhos, ou pele, ou vestimenta.
Pode ser tóxico por inalação, em contato com a pele, ou se engolido.
3
Exposição ao produto pode causar náusea, dor de cabeça e vômito.
Evite exposição prolongada ou repetitiva.
Pode causar dano em herança genética (mutagênese).
Em contato com ácido, libera gás altamente tóxico.
Deve ser manipulado tomando-se as precauções conforme a utilização adequada de
EPI – equipamento de proteção individual. Sempre use luvas e evite contato dos
reagentes ou amostras com a pele.
Controles de Engenharia: A ventilação geral do laboratório deve ser adequada para
a utilização normal.
Proteção respiratória: Normalmente não é necessária nenhuma.
Proteção das mãos: Utilizar luvas resistentes a produtos químicos.
Proteção para os olhos: É recomendada a utilização de óculos de segurança.
Proteção da pele: Usar vestimenta de laboratório.
Outros Controles: Recomenda-se ducha de segurança e lavagem ocular.
Ingestão: Pode causar irritação do trato intestinal e outros efeitos adversos. Contém
<0,1% de azida sódica. Há relatos de que a ingestão de azida sódica pode causar falta
de ar, náuseas, vômitos, agitação, diarréia, queda de tensão arterial (hipotensão) e
colapso.
Contacto com a Pele: Pode causar irritação. O contacto prolongado e extenso pode
resultar em absorção com sintomas sistêmicos semelhantes à ingestão. O contacto
repetido com a pele pode causar reações alérgicas (sensibilidade).
Contacto com os Olhos: Pode causar irritação.
9.
Orientação sobre os cuidados com a amostra biológica objeto do
diagnóstico
Tratar a amostra como potencialmente infecciosa, devido sua origem biológica.
10.
Descrição do Processo de Medição
Importante: Agite antes de usar. Para evitar contaminação, não reaproveite o
reagente não usado – não o devolva para o frasco de solução mãe.
1.
Use seus métodos atuais para isolar e identificar sua amostra teste.
2.
Depois da incubação com complemento, dispense 5uL de FluoroQuench AO/EB
em cada poço. Use a técnica de “softdrop” (dispensação suave que é obtida
aspirando um pouco de ar antes de aspirar o reagente – “colchão de ar”).
3.
Coloque a lâmina plástica para tampar a placa.
4.
Deixe as placas descansarem a 20-25ºC por aproximadamente 15 minutos
antes da avaliação microscópica.
5.
Placas podem ser armazenadas a 2 – 5 ºC por 2 – 3 dias no escuro.
Detalhamento da parte prática
1)
deve-se partir de uma amostra com linfócitos na quantidade de 2 x 106/mL
4
2)
1uL de linfócito é dispensado no interior de cada poço da placa tipo Terasaki
3)
quando se utiliza uma placa sem o complemento inserido no poço, deve ser
feita uma incubação por meia hora, à temperatura ambiente.
4)
adiciona-se 5uL de complemento de coelho em cada poço
5)
deve-se proceder com a incubação pelo período de uma hora, à temperatura
ambiente.
6)
adiciona-se então o corante (no caso, 5uL de fluorquench) em cada poço.
7)
as placas são então lidas em microscópio.
11.
Procedimentos de calibração do processo de medição
Não se aplica.
12.
Procedimentos de cálculos e obtenção dos resultados da medição
Os resultados dependerão da análise individual, sendo que a tabela abaixo deve ser
observada:
1
2
4
6
8
0
0% - 10% de células mortas
11% - 20% de células mortas
21% - 50% de células mortas
51% - 80% de células mortas
81% - 100% de células mortas
Poço sem leitura devido a uma de inúmeras
razões
Negativo
Negativo
Fraco positivo
Positivo
Positivo
13.
Limitações do processo de medição (utilização de testes adicionais mais
específicos ou sensíveis, quando os resultados obtidos assim o sugerirem)
Dificuldades com a separação das células e contaminação nas preparações de
linfócitos com células vermelhas, leveduras, monócitos, plaquetas, ou granulócitos
podem causar resultados errôneos. Adicionalmente, resultados errôneos podem
ocorrer quando a concentração celular for acima ou abaixo do nível aceitável.
14.
Controle interno de qualidade a ser adotado pelo usuário para assegurar o
desempenho adequado do processo de medição
Deverá haver sempre uma segunda pessoa para re-ler a primeira leitura. A
quantidade de células deverá estar sempre sendo checada e dentro do valor de 2 x
106 linfócitos/mL. Para validação do produto e novo lote o laboratório poderá
realizar um teste com células com tipagem conhecida em duplicata com o produto
antigo e o novo recebido.
15.
Valores de referência obtidos em populações sadias ou valores
demográficos, epidemiológicos, estatísticos, desejáveis, terapêuticos ou tóxicos
Não existe este tipo de dado para a metodologia em questão.
5
16.
Características de desempenho do produto
Plano de fundo fluorescente não específico será reduzido, e lise celular
complemento-dependente será interrompida. Células mortas fluorescerão vermelha
enquanto que células viáveis fluorescerão verde.
17.
Referências Bibliográficas que comprovem ou fundamentem as informações
fornecidas
Dombrausky, Monahan, “Comparision of 10% Hemoglobin/ 5% EDTA Quench vs.
FluoroQuench”. HLA Technical Workshop, 1994.
18.
Identificação do Distribuidor do produto
Biometrix Diagnóstica Ltda
Estrada da Graciosa, 1081 - Curitiba - PR
CEP: 82840-360
Tel: (41) 2108-5250
Fax: (41) 2108-5252
DDG: 0800-7260504
E-mail: [email protected]
www.biometrix.com.br
CNPJ: 06.145.976/0001-39
19.
Indicação do Fabricante do produto
País de Origem: Estados Unidos da América
Fabricante: One Lambda, Inc.
21001 Kittridge Street
Canoga Park – CA – EUA
20. Registro ANVISA número
80298490108
21. Responsável Técnica
Ana Carolina Martins
CRF/PR: 12700
22.
Revisões
Revisão
00
01
02
Descrição da Alteração
Elaboração
Revisão: Formação, layout, revisão geral do
texto e alteração de Responsável Técnica.
Data
10/2003
Alteração do DDG.
09/2012
11/2011
6