Biossegurança e Rotina Laboratorial - DBM
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IX Semana de Biologia da UFPB Técnicas Microbioló Microbiológicas Biosseguranç Biossegurança e Rotina Laboratorial Biosseguranç Biossegurança Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Biosseguranç Biossegurança Conjunto de procedimentos, ações, técnicas, metodologias, equipamentos e dispositivos capazes de eliminar ou minimizar riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, desenvolvimento, tecnológico, ensino e prestação de serviços, que podem comprometer a saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos. Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Histó Histórico 1941 – Meyer e Eddie – 74 casos de brucelose associados a laboratórios Conclusão: “A manipulação de culturas, espécies ou inalação de poeira contendo a bactéria Brucella é eminentemente perigosa para os trabalhadores de um laboratório.” Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Histó Histórico Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Histó Histórico 1949 – Sulkin e Pike – Pesquisa sobre infecções associadas a laboratórios 222 infecções, sendo 21 fatais – 12% por acidentes relatados 1951 - Sulkin e Pike – Nova pesquisa 1342 casos de infecções, sendo 72% das infecções por brucelose, tuberculose, tifo e infecção estreptocócica Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica 1 Histó Histórico Histó Histórico 1974 – Classificação de Risco dos Agentes Etiológicos 1999 – Fundação da Associação Nacional de Biossegurança (ANBio) 1980 – Precauções universais na manipulação de fluídos corpóreos 1999 – Primeiro Congresso Brasileiro de Biossegurança 1984 – Primeiro Workshop Brasileiro de Biossegurança - Fiocruz 2000 – Biossegurança como discíplina científica universitária 1995 – Lei Brasileira de Biossegurança – Lei 897/95 2001 – Indução de ações em biossegurança pelo CNPq Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Tipos de Riscos Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Tipos de Riscos Físicos Físicos -Provocados por algum tipo de energia; Químicos Químicos - A caracterização depende do equipamento; Biológicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos Acidentes e Ergonômicos - Principais: Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Tipos de Riscos Biológicos * Equipamentos de baixa temperatura; * Material radioativo Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Tipos de Riscos Físicos Químicos * Equipamentos que geram calor ou chamas; Físicos -Conhecimento das substâncias químicas; - Cuidados adequados para o manuseio. Acidentes e Ergonômicos Químicos - Agentes microbiológicos: Biológicos Acidentes e Ergonômicos Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica - Decorrentes da exposição à produtos de animais, vegetais e microrganismos; * * * * * Grau de patogenicidade Poder de invasão Resistência a esterilização Virulência Capacidade mutagênica - Vias de contaminação. Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica 2 Tipos de Riscos Classificaç Classificação dos Microorganismos Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos - Fatores que gerem situações de risco para a integridade física e moral; - Fatores que possam interferir nas características psicofisiológicas. Classe 2: Risco individual moderado e baixo risco para a comunidade. Nível de Segurança 2 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Uso de Barreiras Equipamentos de Proteção Individual (EPI): Proteção contra o contato com agentes infecciosos, tóxicos ou corrosivos, calor excessivo, fogo dentre outros. Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Uso de Barreiras Equipamentos de Proteção Coletiva: Proteção dos pesquisadores, do ambiente e da pesquisa desenvolvida. Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Biosseguranç Biossegurança Manuseio de produtos biológicos envolve: Limpeza Descontaminação Desinfecção Anti-sepsia Esterilização Assepsia Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica 3 Esterilizaç Esterilização Esterilizaç Esterilização Processos Físicos: Processos Físicos: Calor Calor Radiação Radiação - Calor úmido (vapor sob pressão) – Autoclave, maior poder de penetração e redução do número de microrganismos. Filtração Filtração - Calor seco - Incineração, flambagem ar quente (estufa) Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilizaç Esterilização Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilizaç Esterilização AUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a entrada de vapor sob pressão. ESTUFA - Calor seco Ação: desnaturação das proteínas microbiana Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilizaç Esterilização Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilizaç Esterilização Processos Físicos: Processos Físicos: - Flambagem Calor Esterilização de alças e agulhas. Calor Radiação Radiação Filtração Filtração Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica - Radiação eletromagnética Exemplos: • microondas • radiação ultravioleta • raios X • raios γ • elétrons Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica 4 Esterilizaç Esterilização Esterilizaç Esterilização Radiação ultravioleta – Capela de Fluxo Laminar Processos Físicos: Calor Radiação - Remoção dos microrganismos de líquidos e gases sensíveis ao calor: * Glicose * Antibióticos Filtração Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilizaç Esterilização Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilizaç Esterilização Filtração: Tipos de filtros: A) * Reagentes químicos B) C) A) Filtro de profundidade B) Membrana filtrante C) Filtro de trilhas de nuleação Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilizaç Esterilização Esterilizaç Esterilização Filtro de trilhas de nucleação - microscopia eletrônica de varredura Produtos Químicos – Desinfetantes e Esterilizantes Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica 5 Biosseguranç Biossegurança Técnicas Microbioló Microbiológicas Atividades no laboratório: Planejamento das tarefas Condições adequadas Material necessário Maior segurança Menor desperdício Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Cultivo e Manutenç Manutenção Meios de Cultura: Rotina Laboratorial Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Cultivo e Manutenç Manutenção Meios quimicamente definidos: (Meios com finalidades especiais) Mistura de nutrientes requeridos para a sobrevivência e crescimento dos microorganismos em um sistema artificial. Meios seletivos Podem ser em caldo (líquido) ou ágar (sólido). Meios de enriquecimento Meios líquidos - úteis para a obtenção de grande biomassa de microrganismos Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Métodos de Cultivo Inoculação: Meios diferenciais Meios para anaeróbios Meios para o cultivo de bactérias (Geral-BHI) Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Medida do Crescimento • Técnica de esgotamento por estrias Método Quantitativo: • Avaliação do número de células - UFC/mL – Unidades Formadoras de Colônias por mL • Técnica da semeadura em superfície ex.: Contagem celular microscópica ou eletrônica, contagem em placa ou através de membrana filtrante.. • Inundação • Diluição por extinção (Obtenção de cultura pura, originada à partir de uma única célula (UFC) – A suspensão original da amostra é diluída seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluição)) Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Método Qualitativo: Avaliação do peso celular ou estimativa de unidades de absorbância da massa de células em caldo ou suspensões (turbidez). Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica 6 Identificaç Identificação dos Microorganismos Estocagem Conservação de Culturas Puras: Características Culturais Microscopia Óptica Morfologia Colonial Características Metabólicas Características Morfológicas Características Fisiológicas Coloração simples Características Antigênicas Coloração diferencial Características patogênicas Coloração de Gram Características genéticas Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Material: Tubos de Cultura e Placas de Petri Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica • Conservação por um curto período (dias a meses): Armazenagem à temperatura de refrigeradores (4°C a 10°C) - Repiques freqüentes • Conservação por longos períodos: Nitrogênio líquido a -196°C Freezers a -70°C/ -120°C Liofilização – congelamento a seco - viabilidade das culturas por muitos anos - coleção de microrganismos como referência. Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Material Instrumentos para Transferência de Culturas Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Obrigada!!!!! Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica 7
