Soros e Vacinas

Varíola
Múmia de Ramsés V com marcas
sugestivas de varíola
Varíola: a primeira arma biológica ?
Hernan Cortez
(1485-1547)
Londres, 1844
POXVIRIDAE
-
os maiores vírus conhecidos (~ 300 nm)
simetria complexa
DNA duplo (codifica > 100 prots)
multiplicação intracitoplásmica
Varíola
Molusco contagioso
Ectima dos ovinos
Vários outros poxvírus
HISTÓRICO
-Edward Jenner
(1749-1823)
pai da vacinação
PRIMEIRA VACINAÇÃO:
1798
VARÍOLA
VARÍOLA x VARICELA
-OMS (1980):
Declara erradicada a varíola
O que é uma vacina?
-Visa induzir resposta imune (imunógeno)
- capaz de proteger o indivíduo frente a uma agressão
- Nem todos antígenos são bons imunógenos;
- Para uma boa vacina, muitas vezes são
necessários adjuvantes (ex. adj. Freund).
Resposta IMUNE
Resposta imune ativa:
- Naturalmente adquirida (infecção)
- Artificialmente adquirida (vacina)
Resposta imune passiva
Naturalmente adquirida:
- placenta
- colostro
Artificialmente adquirida
- soros (preparados contendo anticorpos policlonais)
- anticorpos monoclonais
Imunidade humoral adquirida
Vírus neutralizado
B
Célula infectada
com vírus
Anticorpo reconhecido
por LT com receptor Fc
Imunidade celular
perforinas
CD8
CD4
Gatilho da
Apoptose
necrose
apoptose
citocinas
Vírus eliminado
PROPRIEDADES DA VACINA IDEAL:
1- IMUNOGÊNICA
2- INÓCUA
3- ESTÁVEL
4- ECONÔMICA
Tipos de Vacinas:
Inativadas:
Vacinas “mortas” ou inativadas (microrganismos inativados).
Vacinas c/ microrganismos
inteiros
Vacinas de subunidades
(convencionais ou
recombinantes)
INATIVANTES
Proteotrópicos: ex: formalina
Nucleotrópicos: ex: beta-propiolactona, AEI , BEI
Universais: ex: raios X, gama, UV.
Tipos de Vacinas:
Vivas:
Atenuadas: - microrganismos atenuados por passagens em cultivo ou animais de laboratório. - capacidade de causar doença eliminada ou reduzida
-capazes de multiplicarem-se no organismo
- não necessitam grandes quantidades de antígeno
Vacinas produzidas por Engenharia Genética :
1- Vacinas geneticamente modificadas:
- Genes excluidos (ou incluidos) com vistas à atenuação ou aumento da
resposta imune
- podem ser atenuadas ou inativadas. ex: vacina diferencial gE-negativa
2- Vacinas com Vetores vacinais:
- microrganismos manipulados para produzir antígenos que desencadeiam a
produção de anticorpos protetores.
3- Vacinas de DNA: DNA de interesse administrado ao hospedeiro. (ainda experimental)
Vacinas produzidas por Engenharia Genética :
4- Vacinas em plantas/alimentos: plantas com genes de interesse introduzidos no genoma
capazes de sintetizar a proteína e produzir anticorpos em animais que ingerem a planta.
5- Vacinas sintéticas: antígenos sintetizados artificialmente. Geralmente baixo poder imunogenico
em função da conformação do antígeno
Uma amostra vacinal recombinante
brasileira:
Vacina diferencial gEA. C. Franco et al.
vacinados
Infectados
Estratégia de deleção da gE
UL
a)
US
gI
gE
US9
b)
c)
P1
P2
1100 bp
PstI
P3
P4
750 bp
PstI
Co-transfecção com o DNA viral
em células Ebtr
d)
pCR2.1
Detecção do vírus recombinante por
imunoperoxidase sobre células infectadas
ELISA DIFERENCIAL BHV-1
gE + (Infectado)
gE - (Vacinado)
Em andamento:
Vírus vacinal gE- contendo o
gene imunodominante
do vírus rábico (gene “G”)
vacinados
Infectados
Vacinas inativadas x atenuadas:
Inativadas:
- não se multiplicam no organismo
- maior massa antigênica
- mais caras
- adjuvantes
- imunizações freqüentes
Atenuadas / vírus vivo modificado
- vírus se multiplica no organismo
- melhor imunidade
- menor massa antigênica
- mais baratas
Vacinas Atenuadas x inativadas
Vacina
Atenuada
(viva/
modificada)
Inativada
morta,
subunidade
Vantagens
Mimetiza infecção
natural
Imunidade duradoura
Melhor imun. celular
Altas taxas de soroconversão
Títulos mais altos
Estável, segura
Desvantagens
Lábil
Pode causar doença
ou efeitos adversos
Imunidade curta
Pode requerer reforços
freqüentes
Massa antigênica grande
Efeito da vacina
ção e doses de refor
ço
vacinação
reforço
nos n
íveis de anticorpos
níveis
Nível de
anticorpos
2a
3a
4a
tempo
1a
POLIOMIELITE
Três tipos de vírus: 1, 2, 3
Paralisia progressiva ascendente
Muitas degenerações neurológicas permanentes
Membro mais movimentado mais afetado
Morte por paralisia respiratória
Vacinas contra a poliomielite
Vacina inativada intramuscular ( vacina tipo Salk)
- vírus inativado com formalina (3 sorotipos).
- induz anticorpos séricos, não induz imunidade local e assim não
- previne infecção local no intestino.
- previne a poliomielite paralisante pois a viremia não ocorre.
- casos de síndrome de Guillain-Barré
Vacina Oral ( vacina Sabin)
- amostras de vírus dos 3 sorotipos, atenuadas.
- induz imunidade local no intestino com produção de IgA,
assim como boa imunidade sistêmica.
- raramente pode causar poliomielite paralítica
(~ 1 caso em 3 milhões de doses).
Produção de vacina para Influenza:
Inoculação em ovos embrionados
Inoculação na membrana corioalantóica
Cavidade amniótica
Membrana da casca
Saco aéreo
Casc
a
Albumina
Inoculação amniótica
Inoculação na gema
Gema
Inoculação alantóica
Cavidade alantóica
Membrana corioalantóica
Influenza - HA
Toxóides:
- São toxinas cuja toxicidade é eliminada
- Retém a capacidade antigênica
Ex: toxóide tetânico
Adjuvantes
São substâncias adicionadas à vacina com o objetivo de
aumentar a resposta imune.
Ex:
Hidróxido de alumínio (alúmem)
Saponinas
Adjuvante de Freund (completo / incompleto)
Adjuvantes oleosos sintéticos ( Marcol
Adjuvantes do futuro:
Seqüências de nucleotídeos
Interleucinas, Interferon gama
Genes de estimuladores de IL e outras citocinas
Lipossomos
D.O. % - Ig G 1
CONTROLE
400
BHV-1
350
EXT. AQ. CASCAS
300
EXT. AQ. FOLHAS
D .O . %
250
EXT. AQ. RAMOS
200
QB-90
150
ALUMÍNIO
100
QUIL-A
50
ÓLEO
0
0
15
30
45
60
75
90 105 120 135 150 165 180
DIAS
O que é um “soro”?
Soro sangüineo contendo uma grande variedade
de anticorpos policlonais, usualmente obtido
de animais hiperimunizados com o(s) antígeno (s)
de interesse.
- homólogo
- heterólogo.
Soro Heterólogo:
- Produzido em indivíduos de espécies diferentes da espécie -alvo
Ex.: cavalos contra o tétano: soro anti-tetânico
- Não transmite infecções aos humanos
- Pode causar reações de hipersensibilidade. Podem ser submetidos à
digestão péptica para separar a região Fc da região Fab do anticorpo.
- Mais baratos.
- Pode levar a um excesso de formação de imunocomplexos
depósitos nas paredes internas dos vasos => reações inflamatórias sistêmicas.
Tipos de Soros Hiperimunes:
Soro Homólogo:
Produzido na mesma espécie-alvo.
- Risco de transmissão de doenças (AIDS, Hepatites)
- Menor chance de reações de hipersensibilidade.
- Mais caros.
Anticorpos monoclonais:
- Anticorpos derivados de um único linfócito produzidos em
camundongos.
- Produzidos usualmente em camundongos em linhagens singenéicas
ex. BALB-C
- podem ser “humanizados” pela introdução de células humanas em
camundongos irradiados
- Já utilizados para hepatite B e Vírus Resp. Sincicial Humano (HRSV)
Ana Cláudia Franco
Eber A S Oliveira
Fernando Spilki
EVI
Equipe de
virologia
Helena B. R. Batista
Paulo A Esteves
Alessandra D’Ávila
Rejane Schaefer
Tamahine Schmidt
LABVIR
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DM/ICBS
Eduardo Caldas
Marcelo Maronna Dias
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Construção do vírus vacinal recombinante
UL
US
gI
gE
P1
P2
PstI
US9
P3
P4
PstI
Co-transfecção com DNA do vírus original
em células de bovino
Detecção do vírus recombinante em
células infectadas por imunoperoxidase
Efeito citopático
Herpesvírus (coloração por imunoperoxidase)
Típica resposta sorológica
Nível de
Anticorpos
D
o
e
n
ç
a
0
IgG
Anticorpos
AnticorposIgG
IgM
30
60
90
Dias
anticorpos passivos
Interferência por anticorpos
maternos
*
“janela” de
suscetibilidade
*
*
Nível mínimo para
proteção
*
*
2
4
*
interfere com
vacinação
6
8
10
12
semanas após o nascimento
EFEITO CITOPÁTICO