Viroses e Fitoplasmas da videira na Região dos

XI Jornadas Técnicas
“Ano vitivinícola 2013
na Região dos Vinhos Verdes”
CVRVV
Viroses e Fitoplasmas da videira
na Região dos Vinhos Verdes
Ana Maria Nazaré Pereira
Ana Maria Nazaré Pereira (Dep. Agronomia, ECAV-UTAD)
anazare @ utad.pt
Departamento de Agronomia
Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro (UTAD)
Videira
» 75 agentes transmissíveis via ENXERTIA
ncpngrapes.org , 2013
Vírus, Viróides, Fitoplasmas, …
. várias doenças
. algumas de etiologia ainda desconhecida
. nem todas da mesma gravidade
(longevidade …, quantidade…, qualidade…)
. algumas latentes
. algumas têm vectores
VÍRUS
parasitas obrigatórios; só com um tipo de ácido nucleico
(RNA ou DNA) envolvido por proteínas; multiplicam-se nas células do
hospedeiro usando componentes celulares induzindo doença.
Inóculo: viriões (intracelular; alguns têm vectores)
Todos os vírus são transmitidos por enxertia
Viriões
purificados
(TEM)
Plant Virology, The principles, 1976
VIRUS
Famílias e Géneros
GFLV
Ampelovirus
GLRaV-3
GCFaV
Agrios, 2005
o mais recente! Não na Europa…
Agrios, 2005
Vírus da videira
Identificados 63 vírus em vários Géneros
GÉNERO
VÍRUS
VECTOR (
Nepovirus
GFLV, ArMV, …
nemátodes
Ampelovirus
GLRaV-1, -3, -4, -5, …
cochonilhas
Closterovirus
GLRaV-2
?
Velarivirus
GLRaV-7
?
Vitivirus
GVA, GVB, …
Foveavirus
GRSPaV
Maculavirus
GFkV, GSV-1, …
? (Fam.Geminiviridae)
GCFaV
cochonilhas
Martelli, 2012
Urticado ou nó curto da videira
GFLV
Nepovirus
“
Vector:
Nemátodes
Doença degenerativa
Desavinho, bagoinha
Compendium of grape diseases, 1988
“Fanleaves”
no indicador
V. rupestris St. George
Maladies á virus et affections similaires de la vigne, 1980
GFLV – estirpes deformantes
fasciações,
zig-zag
entre-nós
curtos e
longos
“fanleaves”
fasciação
Compendium grape disease, 1988
GFLV – estirpes cromogénicas
Amarelos “/panachure”
Maladies à virus et affections similaires de la vigne, 1980
“ringspots”
A. Pereira
Outros Nepovirus associados à degenerescência da videira
. Arabis mosaic virus - ArMV
. Grapevine deformation virus - GDefV
GDefV pode ter resultado da recombinação
entre GFLV e ArMV
. Raspberry ringspot virus-grapevine – RpRSV-Gra
. Tomato black ring virus – TBRV
. Cherry leaf roll virus – CLRV
. Strawberry latent ringspot virus - SLRSV
… só os identificados em
vinhas europeias !
Laimer et al , 2009
NEMÁTODES
Reino: Animalia
300um - 4 mm comp. x 15-20 larg.
Ectoparasitas
Estragos directos
Ovo, I-IV estádio juvenil, adultos
Meloidogyne spp.
nódulos nas raizes
Inóculo: nematodes (vírus)
adult
Vectores de Nepovirus
Xiphinema index, X. italiae
X. diversicaudatum, etc
raiz
G.Agrios, 2005
Longidorus spp.
juvenil
Ovos no solo
Análise de solo antes
da plantação
Ampelovirus
Closterovirus
Velarivirus
Enrolamento foliar da videira
GLRaV
Vectores
Pseudococcus citrus, Ps
ficus, Ps longispinus, Ps
viburni, …
Vários vírus associados a esta doença
enrolamento foliar e
avermelhamento (clorose)
Alteração da qualidade
(açúcar, antocianas, polifenois, pH,…)
Também perda de produção
Maladies à virus et affections similaires de la vigne , 1980
Enrolamento foliar da videira
GLRaV-3
o mais disseminado
na Europa
avermelhamento
(clorose) precoce
nervuras 1ª e 2ª
verdes
Formigas: bom indicador de
cochonilhas
A. Pereira, Qta Prados
Alterações induzidas por GLRaV-3 em alguns clones
. pigmentos fotossintéticos
. açucares solúveis
. proteínas solúveis
…
. amido
. antocianas
. acidez
…
(clorofila total e carotenóides)
GLRaV-3
sintomas
iniciam-se nas
folhas da base
Restos de raízes no solo contêm o
vírus…mesmo depois da planta
arrancada ( e poderão servir de inóculo
para as cochonilhas ?)
A. Pereira,
Quinta de Prados
Enrolamento foliar tem etiologia complexa
Género do Vírus
Closterovirus
GLRaV-2
Vector
?
Ampelovirus
Sub-grupo I (c.a. 15000-18000nts)
GLRaV-1
GLRaV-3
cochonilhas
cochonilhas
Sub-grupo II (c.a. 13000-14000nts)
GLRaV-4
cochonilhas
GLRaV-5, -6, -9, -De, -Pr e -Car são variantes de GLRaV- 4
Velarivirus
GLRaV-7
?
Martelli et al, 2012
GLRaV-3
é o principal vírus associado à doença do enrolamento
foliar da videira
. atrasa a maturação
. diminui o teor de açúcar, antocianas, polifenois nos bagos
. aumenta a acidez
p.e. infectados não manifestam sintomas
GLRaV-2 pode ser assintomático na vinha
Também está associado a outros problemas
. incompatibilidade de enxertia
. declínio de videiras jovens
GLRaV-7 pode ser assintomático na vinha
Esteves, F. et al,. 2012 . … GLRaV-5 in Portugal…
Archives of Virology 157: 1747-1765
na
. Colecção de variedades do INRB (Dois Portos)
. Vinha particular no Algarve
GLRaV-5 é uma variante de GLRaV-4
Martelli et al , 2012
Não identificada na Europa
mas Atenção !
“Grapevine Red Blotch Disease”
GCFaV
2008 Califórnia em Cabernet Sauvignon
actualmente em vários estados dos EUA e no Canadá
Já detectado em castas tintas e brancas
Cabernet Sauvignon, Cabernet franc,
Chardonnay, Malbec, Merlot, Mourvèdre,
Petit Syrah, Petit Verdot, Pinot noir,
Riesling e Zinfandel
ncpngrapes.org, 2013
Phytopathology 103: 1069-1076
“Red blotch disease”
Merlot
UC CE photos ….ucanr.edu/
Cab. Sauv.
Enrolamento
vs
“Red blotch”
GLRaV
GRBaV
. manchas vermelhas entre as nervuras
sim
sim
. enrolamento marginal
sim
não
. nervuras 1ª e 2ª verdes
sim
não
. nervuras 1ª e 2ª vermelhas
não
sim
. redução do teor em açúcar nos bagos
sim
sim
. vector
cochonilhas
? sugere
. diagnóstico
ELISA, PCR
PCR
ncpngrapes.org, 2013
Vírus - Prospecção Vinhos Verdes - 2011
só para GLRaV-3
Concelhos …
Freguesias …
Parcelas …
Castas ..
em 1514 plantas individuais testadas
+
67,57%
ver ficheiros …
Vírus - Prospecção Vinhos Verdes - 2012
Material para Homologação
398 plantas individuais testadas
. Porta-enxertos: 101-14 , 1103 P
. Clones das Castas: Loureiro, Arinto,
Vinhão, Trajadura, Alvarinho e Touriga Nacional
GLRaV-3
+
8 (2%)
Directiva 2005/43/ CE
GLRaV-1
GFLV
ArMV
0
0
0
ver ficheiros …
Marmoreado
GFkV
“fleck”
Maculavirus
manchas
cloróticas ou
translúcidas
aclaramento das
nervuras secundárias
indicator V. rupestris St George
Vírus muito frequente mas com pouco significado
na qualidade / quantidade da produção
Obrigatório testar p.e
Directive 2005/43/ CE
Maladies à virus et affections similaires de la vigne, 1980
Lenho rugoso “Stem pitting”
GRSPaV
Foveavirus
(…GVA ? GVB ? GVD ?)
Vectores ??
Pólen (?)
Caneluras
Sintomas só no garfo ou só no cavalo
por baixo do ritidoma
Maladies à virus et affections similaires de la vigne , 1980
variantes
GRSPaV-1
. “stem pitting” em Vitis rupestris
. “vein necrosis” em 110R
GRSPaV-SG1 e
GRSPaV-virusB
. latente em Vitis rupestris
. muito agressiva em 110R
(GVB)
Syrah decline ?
não é devido a GRSPaV
provavelmente
. Fungos …
. Grapevine Syrah virus 1 …
mas também GVA
associado a “Shiraz Disease” na Africa do Sul,
Austrália e EUA (Califórnia)
“Corky bark”
GVB (?) , …
Planococcus ficus,…
GLRaV
Corky bark
Avermelhamento
total (ou clorose)
Inchaço das varas
proliferação do tecido
do floema)
Híbrido LN-33 é
bom indicador
Cuidado com os sintomas !
K- cultiv. branca
Mg-cultiv. branca
K-cultiv. tinta
B-cultiv. branca
Mn-cultiv. branca
Compendiumof grape
diseases, 1988
Maladies at Virus et
Affections similares de
la vigne, 1980
Outros problemas frequentes
Geada
Granizo
Genético
Fitotoxicidde herbicida
Junho 2005
Importância dos Métodos de diagnóstico
Observações de campo, evolução dos sintomas
Historial da parcela
e
1. Análise foliar e do solo (problemas nutricionais)
2. Comparação dos sintomas com bibliografia
3. Câmara húmida (suspeita de fungo)
4. Isolamento do fungo em meio de cultura
5. ELISA, PCR,… (suspeita de vírus, fitoplasma,…)
6. (Observação viriões no TEM) (investigação)
Transmissão de vírus da videira
1 - a longas distancias
. material de propagação infectado
2- a curtas distancias (na vinha e para vinhas contiguas)
. material de propagação infectado
. vectores
nematodes movem-se muito lentamente
(manchas de cepas doentes perceptíveis de longe)
cochonilhas não voam nem saltam…
são arrastadas pelo vento, ou por formigas,
ou por manuseamento de material (lenha de poda,…)
FITOPLASMAS
Phytoplasmas
PRB - Phloem restricted Bacteria
Bactérias sem parede celular
(pleomorfismo)
Classe Mollicutes
. parasitas obrigatórios
. multiplicam-se no hospedeiro
Plantas - só no floema
e
Insectos
. transmitidos por insectos
Ciccadellidae e Psylidae
Image by Dr . Chiesa
. grande leque de hospedeiros
várias culturas
Grapevine Yellows (GY)
. sintomas são idênticos
. diferentes insectos vectores
na Europa as principais doenças são:
Flavescence dorée (FD)
Bois noir (BN)
Doença de quarentena
para a UE desde 1993
EPPO A2 list
Flavescência dourada
FD
“amarelos”
Vector da FD
Scaphoideus titanus
manchas angulares
ao longo das nervuras
Pragas, mas não
vectores de FD:
Cigarrinha verde
(Empoasca vitis,
Jacobiasca lybica)
folhas enroladas
e douradas
Compendium of grape diseases, 1988
O que é que os fitoplasmas fazem à videira?
Floema
bloqueiam os tubos crivosos
. atraso na rebentação
. folhas duras, enroladas, dispostas em forma de telhas
. manchas foliares prematuras (vermelha ou dourada)
delimitadas pelas nervuras secundárias
. varas flexíveis (prostrada) por falta de atempamento
. inflorescências (ou cachos) murchas, caem ao toque
. baixa (ou sem) produção
Quebra na produção
…Morte da videira
+ para FD
Qta Nª Srª Lourdes, 2010, Vila Real
DRAPN/DPCF
Possível FD ou BN
Resultados de PCR
ainda não disponíveis
Possível FD
Tinta Barroca
Setembro 2012
Qta. Nª. Sª Lourdes
Vila Real
Tinta Barroca
Setembro 2012
Qta. Nª. Sª Lourdes
Vila Real
Manchas típicas
das picadas por
cicadelideos
NÃO típico de
FD ou BN
Tinta Barroca
Setembro 2012
Qta. Nª. Sª Lourdes
Vila Real
Sintomatologia típica de FD
mais evidente de fins de julho a fins setembro
MAS
quando a videira apresenta os sintomas típicos …
a infecção já se deu há muito tempo!
por
material de propagação vegetativa infectado
e/ou pelo
vector (S. titanus)
Sintomatologia depende
. da casta
. do vigor da videira (stress hídrico ou carência nutritiva acentuam)
. do grau de infecção
. do grau de pressão por S.t.
. outras doenças na planta
GLRaV3 + FD
!
Esca + FD
nervura principal verde mantem-se
morte rápida da videira
Porta-enxertos
. não manifestam sintomas de FD
. FD distribui-se muito irregularmente (estudo ENTAV)
Como os detectar?
diagnóstico laboratorial é essentials
ELISA
(serologia)
PCR / RFLP (biologia molecular)
Não
Sim
… Problema da distribuição irregular dos
fitoplasmas na videira (especialmente nos p.e.)
Diagnóstico laboratorial
Método OEPP “PM 7/79 (1)”
Nested PCR para grupo V
16SrV-C
e
16SrV-D
Problemas
. custo / demorado para muitas amostras
. falsos negativos (variação sazonal e irregularidade na planta)
Melhor altura e material
. Agosto /Setembro
. amostras: pecíolos, raspas do floema, S.t.
Fitoplasmas detectados na videira e seus vectores
FD-C
FD-D
BN
PGY
Grapevine yellows na Europa
P. Bianco
Duas doenças
Flavescence dorée (FD)
Bois noir (BN)
GRUPO de
Phytoplasma
16SrV-C e 16SrV-D
Ca. P. solani (16SrXII-A)
VECTOR
Scaphoideus titanus
Hyalesthes obsoletus
DISSEMINAÇÃO
NA VINHA
rápida e epidémica
lenta
Duas doenças
com idênticos sintomas
Ciclo de vida BN
Hyalesthes obsoletus
Vitis vinifera
Urtica
dioica
Scaphoideus titanus
Convolvulus
arvensis
Flavescence
Ciclo disease
de vidacycle
FD
Videira infectada com FD ou BN
. morre ao fim de alguns anos
OU
. pode recuperar (“recovery” “ remissão dos sintomas”)
o fitoplasma não está acessível a ser adquirido pelo vector
mas passado alguns anos pode voltar a
manifestar os sintomas
Se não houver vector o fitoplasma não sai da planta ...
O que é “recovery” ?
• Remissão expontanea dos sintomas em
plantas doentes
• Pode envolver ou não a eliminação do
fitoplasma do hospedeiro
• alguns ensaios mostram que a concentração
do fitoplasma fica muito baixa para o vector
conseguir adquirir por isso não servem de
inóculo (Bulgari et al , 2011. Appl. and Environ. Microbiology 77:
5018-5022)
Variedade
susceptibilidade FD
Cabernet sauvignon
++
+++
Barbera
+++
+++
Chardonnay
+++
+-
Prosecco
+++
+++
Pinot noir
+++
++
Garganega
+++
+
Recovery
P. Bianco
Qual das doenças está na vinha?
. Análise laboratorial adequada
Correcto diagnóstico
Estratégias de protecção adequadas
evitar:
. desperdiçar dinheiro
. poluição ambiental
. aumento de resistências
. perda de biodiversidade
Protecção contra FD e BN (1)
Medidas convencionais
já não podem ser erradicadas mas podem ser “contidas”!
. só usar material de propagação vegetativa são
cuidado com passaporte fitossanitário laranja de França!
. monotorização de vectores
. monitorização dos sintomas típicos.
. arranque e queima de cepas infectadas FD até 31 de março
do ano seguinte
. retirar material de poda da vinha
. arranque e queima de vinhas abandonadas
. tratamentos contra S.titanus ( variar as s.a.)
. termoterapia (p.e. / garfos em H2O a 50ºC durante 45´)
nas ZIP
Tratamento por água quente
Tipo “panela de pressão “ com agitação das varas no interior
Método OEPP “PM 10/18(1)”
material dormente
guardado a 4ºC
aclimatação
15ºC - 12h
50ºC - 45 min.
aclimatação
15ºC - 12h
guardado a 4ºC
(www.recs-fr.com).
Linder et al., 2010
Rev. suice Viticulture, Arboriculture , Horticulture I vol 42(2): 132-135
Protecção contra FD e BN
Será que os fitoplasmas estão “sózinhos “
dentro da planta?
Assumimos que no floema há apenas seiva com
nutrientes …
… Vírus e Fitoplasmas estão no floema mas
são considerados esporádicos …
Há muitos Organismos Endófitos
(bactérias e fungos)
Proteção contra FD e BN (2)
Novas medidas em estudo (?)
• Feromonas (confusão sexual) para vector (S. titanus)
• Luta biológica contra vector (endosimbiontes)
. Fungos entomopatogénicos que ocorram naturalmente na vinha
. Bactéria no intestino de S. titanus,…)
. Bactérias no sistema reprodutivo dos machos de H. obsoletus
• Luta biológica contra fitoplasma (bactérias e fungos endófitos)
•
manter a BIODIVERSIDADE na vinha
• Compostos quimicos naturais indutores de R (quitosana,…)
• “Recovery”
•
•
Variedades R
aproveitar a VARIABILIDADE das nossas castas
???
. Novos grupos (strains, types)? de FD vs vector desses grupos?
. Vectores de FD alternativos a S.titanus?
Dictyophara europaea transmite de Climatis vitalba para videira em lab.
Orientus ishidae associado à FD na Europa
. Infestantes possíveis hospedeiras de FD?
. Indução de R ? remissão sintomas de BN com
aplicação de indutores de R
(Resistência sistémica induzida)
. Diferentes S das castas ao fitoplasma
Trajadura parece ser mto S ao fitoplasma
. Preferência alimentar de St em diferentes castas
Loureiro e Vinhão são mto S ao vector
. Efeito do tratamento térmico na capc. de enraizamento
Interacções no ecossistema vinha
Solo, Clima,
Sist. económico, Sist. Social
Nossa cultura vs Culturas “do vizinho”
Cultura anterior, Outras plantas na vinha
Práticas culturais, Adubações e
Fertilizações, Tratamentos fitossanitários
Inimigos da cultura
Organismos auxiliares
VINHA
Castas
ESPAÇO
os inimigos das culturas não têm “fronteiras”
Autoridade europeia
Espaço países terceiros
Autoridade nacional
Espaço europeu
Território nacional
Região agrária
VINHA
DRAPs
Viticultor
Triângulo da Doença sensu lato
Quantidade
de Doença
Vector
Total de condições que favoreçam a suscetibilidade
VIDEIRA
Adptado de Agrios , 2005
Conclusão
DOENÇAS
estratégias de protecção preventiva ...
QUEBRAR O
DA DOENÇA
VIDEIRA
... mas temos de actuar rapidamente
e
ANTES do aparecimento dos sintomas!
“ qualquer acto de protecção de plantas
é uma intervenção no ecossistema,
com as consequências daí resultantes”
Baeta Neves
Património genético vitícola
. Centenas de castas autóctones em Portugal
. Cada casta com grau de variabilidade muito grande
+
Biodiversidade na vinha
+
Material de propagação de qualidade
Sustentabilidade do ecossistema VINHA