avaliação in vitro de isolados de bactérias endofíticas do nim no

I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA,
AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA)
09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP,
Câmpus de Jaboticabal, SP
AVALIAÇÃO IN VITRO DE ISOLADOS DE BACTÉRIAS
ENDOFÍTICAS DO NIM NO CONTROLE DE PATOGÉNOS
SOLO.
IN
VITRO
ENDOPHYTIC
EVALUATION
OF
BACTERIA
ISOLATED
ON
GROUND
OF
NIM
CONTROL
PATHOGENS.
Maria Josiane Martins (1)
Adelica Aparecida Xavier (2)
Bruna Hanielle Carneiro dos Santos (3)
Regina Cássia Ferreira Ribeiro (4)
Resumo: O Brasil é maior produtor mundial de maracujá amarelo. O potencial produtivo da
cultura está entre 30 a 35 t/ha, porém aqui se produz apenas de 14,48 t/ha. Essa baixa
produtividade geralmente está associada a problemas fitossanitários dentre eles podridão do
colo causada por Fusarium solani. Seu controle é uma tarefa difícil uma vez que não existem
produtos químicos registrados para a cultura do maracujá. O controle biológico vem como
numa estratégia importante para o manejo dessa doença. Dentre os principais organismos
estudados no controle biológico de fitopatógenos, destacam-se as bactérias endofíticas. O
objetivo deste trabalho foi selecionar isolados de bactérias endofíticas obtidos de plantas de
nim (Azadirachta indica) capazes de reduzir in vitro o desenvolvimento de F. solani. Foram
utilizados os isolado 52 e 57 de F. solani, obtidos a partir de plantas de maracujazeiro com
sintoma de podridão do colo e 31 isolados de bactérias endofíticas isoladas de plantas de nim.
Os isolados bacterianos e fúngicos foram pareados em uma placa de petri em seguida
incubados em BOD a 25ºC em escuro continuo por sete dias. Após esse período mediu-se o
raio da colônia e halo de inibição. Dos isolados 31 isolados bacterianos estudados três
inibiram até 60 % o crescimento micelial do isolado 52 e um inibiu ate 60 % o crescimento
micelial do isolado 57 de F. solani.
Palavras-chave: Antibiose. Podridão do colo. Maracujá
Abstract:Brazil is world's largest producer of yellow passion fruit. The productive potential
of the culture is between 30 to 35 t / ha, but here is produced only 14.48 t / ha. This low
productivity is generally associated with plant health problems among them stem rot caused
by Fusarium solani. Its control is a difficult task since there are no chemicals registered for
1
Graduanda em Engenharia agronômica pela Universidade Estadual de Montes Claros (UNIMONTES).
[email protected], (38991826963).
2 (Engº Agro. Dsc. Profs.Depto. Ciências Agrárias. UNIMONTES. Caixa Postal 91, CEP: 39440-000. Janaúba/MG. adelica.unimontes.br
(38938212756)
3 (Engº Agro. Doutoranda em Produção Vegetal no semiárido/UNIMONTES. [email protected]
(38991843278)
4 (Engº Agro. Dsc. Profs. Depto. Ciências Agrárias .UNIMONTES. Caixa Postal 91, CEP: 39440-000. Janaúba/MG.
[email protected],(383821 2756)
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the passion fruit crop. Biological control comes as an important strategy for the management
of this disease. Among the main bodies studied the biological control of plant pathogens,
there are the endophytic bacteria. The objective of this work was to select endophytic bacteria
isolates obtained from neem plant (Azadirachta indica) can reduce in vitro the development
of F. solani. the isolated 52 and 57 of F. solani were used, obtained from passion fruit with
neck rot symptom and 31 isolates of endophytic bacteria isolated from neem plants. Bacterial
and fungal isolates were paired in a petri dish and then incubated at 25 ° C in BOD in
continuous darkness for seven days. After this period was measured and the radius of the
colony inhibition halo. The isolated bacterial isolates studied 31 three inhibited to 60%
mycelial growth isolated 52 and inhibited to 60% mycelial growth isolated 57 of F. solani.
Keywords: Antibiosis . Stem rot . Passion frui
1 Introdução
O Brasil é maior produtor mundial de maracujá amarelo (Passiflorae edulis Sims f.
flavicarpa Deg.), cerca de 820 toneladas (IBGE, 2014). O potencial produtivo da cultura está
entre 30 a 35 t/ha, porém no Brasil é produzido apenas de 14,48 t/ha. Essa baixa
produtividade geralmente está associada a problemas fitossanitários, dentre eles as doenças
são as que mais contribuem. A podridão do colo causada por F. solani assume grande
importância por matar precocemente a planta, diminuindo a longevidade dos pomares
(ROCHA, 2013). Seu controle é uma tarefa difícil uma vez que não existem produtos
químicos registrados para a cultura do maracujá. O controle biológico se constitui como numa
estratégia importante para o manejo dessa doença. Dentre os principais organismos estudados
no controle biológico de fitopatógenos, destacam-se as bactérias endofíticas. Esses
microrganismos podem atuar na produção de compostos orgânicos que de forma direta ou
indireta agem sobre a população de fitopatógenos habitantes do solo e concomitantemente
podem estimular as plantas a crescer e induzir mecanismos de resistência (HALLMANN et al,
1999). Para selecionar microrganismos que possam ser efetivos no controle biológico pode se
realizar testes in vitro por servirem como uma seleção preliminar para avaliar a capacidade
antagonista do microrganismo (GRIGOLETTI Jr, 2005).
O objetivo deste trabalho foi selecionar isolados de bactérias endofíticas obtidos de
plantas de nim capazes de reduzir in vitro o desenvolvimento de F. solani.
2 Material e Métodos
O experimento foi desenvolvido no laboratório de Fitopatologia da Universidade
Estadual de Montes Claros, UNIMONTES, campus Janaúba -MG.
Foram utilizados os
Ciência & Tecnologia: FATEC-JB, Jaboticabal (SP), v. 8, Número Especial, 2016. (ISSN 2178-9436).
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isoladoS 52 e 57 de F. solani, obtidos a partir de plantas de maracujazeiro com sintoma de
podridão do colo e 31 isolados de bactérias endofíticas isoladas de plantas de nim. Os isolados
fúngicos, foram multiplicados em meio “Batata Dextrose Agar” (BDA) a 25 º C e escuro
contínuo por sete dias. Os isolados de bactérias endofíticas foram multiplicados em meio
“Trypic Soy Agar” (TSA), incubados em BOD a 25ºC escuro contínuo por 24 horas. Com
auxílio de uma alça de platina células bacterianas multiplicadas foram transferidas em forma
de risca no lado direito de uma placa de Petri, contendo meio BDA. Em seguida, um disco de
aproximadamente 5 mm de diâmetro retirado da borda da colônia de F. solani foi transferido
para a extremidade oposta à risca a uma distância de 5 cm do isolado bacteriano. Depois as
placas foram incubadas em BOD a 25ºC em escuro contínuo por sete dias. Após esse período
mediu-se raio da colônia de F. solani e o halo de inibição formado entre a colônia de F.
solani, e a colônia bacteriana. O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado (DIC) e
os 31 isolados de bactérias endofíticas constituíram os tratamentos com três repetições. O
tratamento testemunha recebeu apenas o isolado de F. solani. Os dados foram submetidos ao
cálculo de percentual de redução pela formula descrita por Mourão et al ( 2003).
(% de redução) = (1- (media tratamento média testemunha)) x 100.
3 Resultados e Discussão
Dos 31 isolados de bactérias endofíticas testados sete apresentaram de 10 a 20 % de
inibição de crescimento micelial, sendo os mesmos valores para aquelas bactérias que
inibiram de 21 a 30%, 31 a 40% e de 41 a 50%, três dos isolados inibiram de 51 a 60 % o
crescimento micelial do isolado 52 de F. solani. Em relação ao isolado 57 de F. solani, as
bactérias endofíticas que inibiram até 10% do crescimento micelial foram duas, seis delas
inibiram de 11 a 20%, doze inibiram de 21 30%, oito inibiram de 31 a 40%, duas inibiram de
41 a 50 % e uma inibiu de 51 a 60 % o crescimento micelial (Figura 1).
Shiomi et al (2008), estudando a seleção de bactérias endofíticas do milho com ação
antagônica a fitopatógenos, encontrou taxas de inibição superiores a 50%. Nesci et al ( 2005)
estudando a antibiose de Bacillus subtilis e Pseudmonas solanacearum a Arpegillus flavus e
Arpegillus parasiticus observou visível redução do crescimento micelial de ambos os fungos
em testes de antagonismo. Segundo Amorim e Melo (2002), os mecanismos envolvidos no
controle de fitopatógenos d estariam relacionados à produção de composto que são tóxicos
Ciência & Tecnologia: FATEC-JB, Jaboticabal (SP), v. 8, Número Especial, 2016. (ISSN 2178-9436).
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aos mesmos. A inibição encontrada de até 60% sugeri que tais bactérias possam ser
promissoras no controle de F.solani.
FIGURA1- Porcentagem de isolados de bactérias endofíticas distribuídos em diferentes
classes de inibição do crescimento micelial dos isolado 52 e 57 de F. solani.
O tamanho do halo de inibição de F. solani 52 variou de 0 a 5, 5.1 a 12 mm e até 20
mm em 71 e 19 e 10% dos 31 isolados bacterianos respectivamente. Em F. solani 57 o halo
de inibição variou de 0 a 5 e de 5,1 a 12 mm em 55% e 45% dos isolados bacterianos
respectivamente (Figura 2).
FIGURA 2- Porcentagem de isolados de bactérias endofíticas distribuídos em diferentes
classes de tamanho de halo inibição dos isolados 52 e 57 F. solani.
Souza et al ( 2013) estudando Streptomyces spp. no controle de Fusarium spp. e
Rizoctonia solani verificaram que houve inibição no crescimento de Fusarium spp. sendo
registrados valores dos halos de inibição entre 14 e 20 mm de diâmetro. A formação de um
halo de inibição é um indício da supressão do crescimento do fitopatógeno (antibiose) (
BRITO, et al, 2010).
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4 Conclusão
Dos isolados 31 isolados estudados três inibiram até 60 % o crescimento micelial do
isolado 52 e um inibiu ate 60 % o crescimento micelial do isolado 57 de F. solani.
5 Agradecimentos
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação
de Apoio e Amparo a Pesquisa de Minas Gerais (FAPEMIG).
6 Referências
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