NewGene prep é reagente utilizado para diagnóstico in vitro

NewGene PCVRefQ
Próprio para uso conjunto com o KIT
NewGene® PCVAmp, permite a elaboração
da curva padrão para a quantificação absoluta
de circovírus suíno tipo 2 (PCV2) por PCR em
Tempo Real, conferindo precisão e acurácia. É
composto pelos reagentes PA e PB, de carga
viral definida (PA = Ponto de Alta Carga e PB = Ponto de Baixa Carga – Standards) e CIQ (CIQ = Controle
Interno de Qualidade, a ser lido como Unknown). A quantificação absoluta das amostras-teste é realizada
pela interpolação dos resultados de leitura dos pontos (CT’s) na curva padrão.
Componentes do Kit
O kit de controles NewGene PCVRefQ inclui reagentes suficientes para 100 reações (50 quantificações),
com as respectivas cargas virais abaixo:
Componente
Carga viral (vírus/mL)
Quantidade
PA
PB
CIQ
1.500.000
5.000
50.000
5 tubos de 40 µL
5 tubos de 40 µL
5 tubos de 40 µL
Limite de detecção da técnica (LOD)
Calculada pelo teste de Probit, definido como:
4.500 vírus/mL – com 95% das repetições com resultados positivos e
1.000 vírus/mL – com 50% das repetições com resultados positivos.
Equipamentos necessários
- Termociclador para PCR em tempo real com
canal de detecção para fluoróforo FAM e
TAMRA;
- Conjunto de micropipetas (10, 20 e 200 µL)
- Microcentrífuga para tubos de 1,5 mL;
- Agitador de tubos tipo vórtex;
-
Ponteiras com barreira descartáveis;
Microplacas ou tubos para PCR;
Filme plástico para vedação da placa;
Luvas plásticas (sem talco) para procedimento.
Estocagem e estabilidade
Armazenar em freezer (-20°C).
Retirar somente os tubos de reagentes necessários para o teste evitando ciclos desnecessários de
congelamento/descongelamento.
Período de validade
Válido por 1 ano a partir da data de produção, respeitadas as condições de estocagem e estabilidade.
Indicação
Exclusivamente para uso diagnóstico in vitro.
Utilização
Aplicar 2,0 µL (duplicata) para cada ponto da curva e controles - PA, CIQ e PB.

Descongelar os kits NewGene PCVAmp, NewGene PCVRefQ, controles negativos e amostras de
DNA, mantendo-os na bancada até que alcancem temperatura próxima a do ambiente.

Limpar a bancada com álcool 75% antes do início das atividades e colocar luvas (sem talco).

Homogeneizar todos os reagentes.
Amplificação
Proceder conforme protocolo de amplificação especificado na bula do kit NewGene PCVAmp.
Avaliação
1. Identificar as amostras-teste como “UNKNOWN”, conforme indicado no manual do Termociclador Real
Time utilizado;
2. Identificar o ponto CIQ, definindo-o com “UNKNOWN”, da mesma forma acima descrita.
3. Identificar os pontos de referência (PA e PB), definindo-os como “STANDARD” no software do
equipamento Termociclador Real Time utilizado, informando as seguintes cargas:
PA – 1.500.000 vírus/mL
PB – 5.000 vírus/mL
4. Configurar o software para duas amostras padrão analisadas em duplicata.
5. Definir o Baseline.
6. Posicionar o Threshold em um ponto em que as curvas ascendentes de amplificação apresentem-se
paralelas.
7. Acionar o quadro Analyse e salvar o documento.
8. Registrar os resultados:
POSITIVO/ CARGA: presença de leitura (CT) e determinação da carga viral
NEGATIVO: ausência de leitura (invalid)
Parâmetros para validação dos resultados

Para validação dos resultados de quantificação é necessário que pelo menos três pontos de
referência que apresentaram leitura (CT) sejam utilizados como STANDARD. O índice de regressão
2
(R ) obtido por estes três pontos de referência deve ser superior a 0,9.

O ponto CIQ será utilizado para avaliar a qualidade do ensaio e serve como parâmetro de controle de
qualidade. O valor encontrado para CIQ deve estar entre 15.800 e 158.000 vírus/mL.
Os dados da análise devem ser rejeitados caso um ou mais destes parâmetros não sejam observados,
sendo indicado o reteste de amostras.
Suporte Técnico
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