A Dupla Hélice: a estrutura secundária do DNA Em 1953, James Watson e Francis Crick propuseram o DNA como uma dupla hélice, a partir dos dados disponíveis, incluindo os resultados de difração de raio X de Maurice Wilkins e Rosalind Franklin, e os da equivalência de bases ( A=T e C=G) de Chargaff. As duas fitas do DNA se torcem para formar uma dupla hélice (estrutura secundária do DNA) Fatores que estabilizam a dupla hélice: • interações hidrofóbicas • forças de van der Walls • pontes de hidrogênio • interações iônicas Entre as bases nitrogenadas Entre os grupos fosfato do DNA e os cátions (Mg2+) presentes na solução fisiológica A dupla hélice apresenta dois tipos de sulcos aos quais se ligam as proteínas da cromatina Sulco menor Sulco maior • Erwin Chargaff técnica para medir a DNA (1950): - Regra de Chargaff: quantidade de cada tipo de base no DNA de diferentes espécies. Seus dados mostraram que: • . quantidade relativa de um dado nucleotídeo pode ser diferente entre as espécies, mas sempre A = T e G = C. • . razão 1:1 entre bases púricas e pirimídicas em todos os organismos estudados: A + G = T + C. • . quantidade relativa de cada par AT ou GC pode variar bastante de organismo para organismo: razão A+T/G+C é característica da espécie analisada. DNA - Pareamento • Bases são complementares. • Pontes de hidrogênio: entre os grupamentos amino e carbonil de duas bases: ocorrem em função da configuração eletrônica e da configuração espacial da molécula: • A = T ® 2 pontes de hidrogênio • G º C ® 3 pontes de hidrogênio • G º C É MAIS ESTÁVEL de Bases: Existem 6 tipos de DNA, A, B, C, D, E e Z O B-DNA é o predominante em condições fisiológicas A espiral do DNA pode torcer-se para a direita (sentido horário) ou para a esquerda (sentido anti-horário) DNA bactéria e levedura DNA plasmidial DNA de leveduras Características do DNA Efeito de substâncias alcalinas no DNA e no RNA Com o aumento da temperatura, as duas fitas se separam, causando um aumento na absorbância a 260nm. O ponto médio da curva é denominado Tm: Desnaturação e renaturação do DNA. Se uma solução de DNA é aquecida as fitas se separam (desnaturam). Se a solução é esfriada aos poucos, a dupla hélice se refaz (renaturação). O Empacotamento do DNA: a estrutura terciária do DNA DNA em procariontes: DNA circular nas formas não-superhelicoidal (esquerda) e super-helicoidal (direita) Estrutura do solenóide da cromatina Nucleossomo = DNA + histonas Solenóide Disposição do DNA nos cromossomos Regiões Codificadoras e NãoCodificadoras do DNA O DNA é formado por 2 regiões: Intergênicas Gênicas Região Gênica: É a porção que codifica para um produto final, que pode ser uma cadeia polipeptídica ou um RNA Intergênicas Gênicas Região Intergência: É a porção regulatória, que sinaliza o início ou o final de um gene, que influencia a transcrição gênica, ou que é o ponto de início para a replicação do DNA Regiões de um gene de um eucarionte intron exon Introns ou regiões nãocodificadoras intron exon intron exon Exons ou regiões codificadoras Genoma Celular É o conjunto de todos os genes e do DNA intergênico de uma célula