Identificação de mutantes letais sintéticos em combinação com o

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Identificação de mutantes letais sintéticos em combinação
com o mutante dfg16∆ de Saccharomyces cerevisiae
Bentivoglio,EC1; Barros, MH2; Ferreira-Júnior,JR1
Escola de Artes, Ciências e Humanidades, Universidade de São Paulo
Laboratório de Biogênese Mitocondrial, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo
[email protected]
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Palavras-chave: Saccharomyces cerevisiae, biogênese mitocondrial, letal sintético, DFG16, mitocôndria.
No organismo eucarioto Saccharomyces cerevisiae a proteína Ssn6p é um repressor transcricional dos genes
ativados na presença de glicerol, uma fonte de carbono não fermentável. Nosso laboratório obteve um alelo de SSN6
(ssn6E359) que causa o fenótipo de deficiência de crescimento nesse meio de cultura. Experimentos de supressão
mostraram que o crescimento das células que possuem esse alelo pode ser parcialmente recuperado, quando o
gene DFG16 é superexpresso. Como Ssn6p encontra-se no núcleo e, Dfg16p, na membrana citoplasmática, não
está muito claro como essas proteínas interagem. Logo, para saber como tal interação ocorre, o objetivo deste
trabalho foi construir ferramentas para realizar varredura de genes letais sintéticos, que poderiam auxiliar
no entendimento das prováveis interações genéticas de DFG16 com outros genes, envolvidos na biogênese
mitocondrial. Tais ferramentas são o vetor pMW29-DFG16 e a linhagem aYMW2 dfg16D. Para a construção de
pMW29-DFG16 foram necessárias três etapas, onde o gene DFG16 foi transferido do vetor YIplac211 para o
vetor pYES2 e, finalmente, de pYES2-DFG16 para o vetor pMW29. Necessitou-se, igualmente, para a obtenção
da linhagem aYMW2 dfg16D, de três etapas, que consistiram em PCR do cassete de rompimento dfg16::KanMX,
transformação do mesmo em levedura e seleção dos transformantes em geneticina. Com as ferramentas construídas,
o próximo passo do trabalho será a varredura de genes letais sintéticos em combinação com o mutante dfg16D.
Apoio Financeio: CNPq, FAPESP, USP