HBc Total (HBcT)

Manual do ensaio ADVIA Centaur
HBc Total 1 / 14
HBc Total (HBcT)
0088
Ensaio para a detecção de anticorpos totais para
o antígeno central da hepatite B
Resumo do ensaio
Tipo de amostra
Volume da amostra
Calibrador
Sensibilidade e limite do ensaio
Soro, plasma com EDTA
50 µL
HBcT
Índice 0,07 – 8,00
Conteúdo
REF
07566733
Número de
Conteúdo
testes
1 embalagem de reagente primário ReadyPack® contendo ADVIA Centaur® HBcT 200
Reagente fluorescente, Fase sólida e Reagente caotrópico
1 embalagem auxiliar com reagente auxiliar HBcT ADVIA Centaur
Cartão de curva principal HBcT ADVIA Centaur
1 frasco de calibrador baixo HBcT
1 frasco de calibrador alto HBcT
Cartão de valor atribuído ao calibrador HBcT ADVIA Centaur
Para a definição dos símbolos utilizados nos rótulos dos produtos, por favor consulte Para
entender os símbolos no Anexo D.
Aplicação
O ensaio HBc Total ADVIA Centaur® é um teste de diagnóstico in vitro para a determinação
qualitativa de anticorpos totais para o antígeno central do vírus da hepatite B (HBc Total) no
soro humano ou plasma com EDTA através do Sistema ADVIA Centaur. Este ensaio pode ser
utilizado como um meio auxiliar para o diagnóstico de indivíduos com o vírus da hepatite B
aguda ou crónica (VHB) e na determinação do estado clínico de indivíduos infectados pelo
VHB em conjunto com outros marcadores serológicos do VHB associada à infecção pelo VHB.
Este ensaio também pode ser utilizado como um meio auxiliar no diagnóstico diferencial em
indivíduos que apresentem sinais e sintomas de hepatite cuja etiologia é desconhecida.
Materiais necessários mas não fornecidos
REF
07569996
01137199
(112351)
07702998 Rev. F, 2006-05
Descrição
Material de controlo de qualidade do ensaio HBcT
ADVIA Centaur
Líquido de lavagem 1
ADVIA Centaur
Conteúdo
Controlo negativo de 2 x 7,0 mL
Controlo positivo de 2 x 7,0 mL
Cartão do valor previsto
2 x 1500 mL/embalagem
HBcT
HBc Total 2 / 14
Manual do ensaio ADVIA Centaur
Resumo e explicação do teste
O ensaio ADVIA Centaur HBc Total é um imunoensaio quimioluminométrico de
micropartículas de ligação cruzada de antígenos utilizado para a detecção de anticorpos para o
antígeno central da hepatite B no soro ou plasma humano.
O vírus da hepatite B (VHB) é endémico em todo o mundo e é a principal causa de doença no
fígado. O VHB transmite-se através do contacto directo com o sangue ou fluídos corporais. As
principais formas de transmissão incluem transfusões de sangue, troca de agulhas, contacto
directo com ferimentos e exposição perinatal durante o parto.1,2
O período de incubação médio da infecção provocada pelo VHB é de 6 a 8 semanas (intervalo
entre 1 a 6 meses). Os sintomas clínicos comuns incluem mal-estar, febre, gastroenterite e
icterícia. A infecção pelo VHB pode resultar em hapatite ictérica típica, hepatite anactérica
subclínica, hepatite fulminante ou hepatite crónica ou persistente. Nos adultos, 90 a 95% dos
doentes com infecção pelo VHB recuperam completamente da doença aguda e o vírus
desaparece. Aproximadamente 5 a 10% dos doentes com VHB tornam-me portadores crónicos.
Nos recém-nascidos infectados pelo VHB, aproximadamente 90% desenvolvem hepatite B
crónica. Estima-se que mais de 300 milhões de pessoas em todo o mundo sejam portadoras
crónicas do vírus. A infecção pelo VHB, especialmente em casos de infecção crónica, está
claramente associada ao desenvolvimento do carcinoma hepatocelular.1,2,3
O antígeno central da hepatite B (HBcAg), encontrado em células hepáticas, não circula no
sistema vascular. Contudo, os anticorpos IgM e IgG para o HBcAg podem ser detectados
serologicamente em indivíduos infectados pelo VHB. O Anti-HBc IgM é detectável primeiro e
permanece detectável durante aproximadamente seis meses. Pouco tempo após a resposta do
IgM, o anti-HBc IgG aparece e pode permanecer detectável indefinidamente. A presença do
anti-HBc IgM é característica da infecção aguda, enquanto que a presença do anti-HBc IgG é
característica de estados crónicos ou de recuperação da infecção pelo VHB. Os ensaios AntiHBc Total detectam as respostas do IgM e do IgG anti-HBc. Frequentemente os níveis de antiHBc irão coincidir com os níveis detectáveis de outros marcadores do VHB. Raramente, o antiHBc pode constituir o único marcador do VHB detectável. Isto pode ocorrer durante um curto
período em que o antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) foi eliminado do sistema
vascular e por isso os anticorpos para o antígeno de superfície da hepatite B (anti-HBs)
tornaram-se detectáveis. Por este motivo, não se recomenda a utilização de ensaios anti-HBc
Total para detectar infecções agudas. Os ensaios anti-HBc Total devem ser utilizados em
conjunto com outros ensaios de marcadores para avaliar a exposição actual ou anterior ao
VHB.1,2,4,5
Princípio do ensaio
O ensaio HBc Total ADVIA Centaur é um imunoensaio do tipo sanduíche com duplo antígeno
através do qual os antígenos são ligados pelo anticorpo presente na amostra do doente. A fase
sólida contém um complexo pré-formado de micropartículas paramagnéticas revestidas com
streptadivina e antígeno HBc recombinante biotinilado e é utilizada para capturar anti-HBc na
amostra do doente. O reagente fluorescente contém antígeno HBc recombinante marcado com
ester de acridino e é utilizado para detectar anti-HBc na amostra. A fase sólida e o reagente
caotrópico são adicionados à amostra, seguidos do reagente auxiliar e do reagente fluorescente.
Os complexos anticorpo-antígeno formar-se-ão se os anticorpos anti-HBc (IgM e IgG)
estiverem presentes na amostra.
O sistema efectua automaticamente os seguintes passos:
HBcT
•
distribui 50 µL de amostra numa cubeta e incuba durante 6 minutos a 37°C
•
distribui 125 µL de fase sólida e incuba durante 18 minutos a 37°C
•
distribui 30 µL de reagente caotrópico (NOTA: A cor do reagente caotrópico varia entre o
incolor e o rosa.)
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Manual do ensaio ADVIA Centaur
HBc Total 3 / 14
•
lava a cubeta com o líquido de lavagem 1
•
distribui 100 µL de reagente auxiliar e incuba a mistura durante 5,75 minutos a 37°C
•
distribui 50 µL de reagente fluorescente e incuba a mistura durante 18 minutos a 37°C
•
separa a fase sólida da mistura e aspira o reagente não ligado
•
lava a cubeta com o líquido de lavagem 1
•
distribui 300 µL de reagente ácido e de reagente básico para iniciar a reacção
quimioluminescente
•
comunica os resultados de acordo com a opção seleccionada, conforme descrito nas
instruções de funcionamento ou no sistema de ajuda online
Existe uma relação directa entre o nível de anticorpos anti-HBc encontrados na amostra do
doente e a quantidade de unidades de luz relativa (ULRs) detectada pelo sistema. É
determinado um resultado positivo ou negativo de acordo com o nível de índice estabelecido
com os calibradores. Consulte Interpretação de Resultados para uma descrição do cálculo do
valor de "cutoff".
Recolha e manuseamento da amostra
O soro ou o plasma com EDTA são os tipos de amostra recomendados para este ensaio. Não
utilize amostras com contaminação microbiana óbvia. Os Valores de Índice de amostras
reactivas anti-HBc recolhidas em tubos de colheita com barreira de gel de heparina de lítio
podem ser reduzidos ou tornarem-se não-reactivos se estes tubos forem invertidos antes da
análise. Para evitar resultados erróneos, as amostras devem ser novamente centrifugadas antes
da análise. O desempenho do ensaio HBc Total ADVIA Centaur não foi determinado com
sangue do cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém nascidos, amostras sanguíneas de
cadáveres, amostras inactivadas por calor, ou outros fluídos corporais para além do soro e do
plasma tais como saliva, urina, líquido amniótico ou fluídos pleurais.
As recomendações gerais que se seguem para o manuseamento e armazenamento de amostras
de sangue são fornecidas pelo Clinical and Laboratory Standards Institute6 (CLSI) e
completadas com estudos adicionais sobre o manuseamento de amostras com a utilização do
ensaio ADVIA Centaur HBc Total:
•
Manuseie todas as amostras como potenciais transmissores de doenças.
•
As amostras são processadas através da centrifugação, normalmente seguida por uma
separação física do soro ou plasma dos eritrócitos. A etapa de centrifigação pode ocorrer até
24 horas após a colheita. Ao testar 10 amostras nas quais a etapa de centrifugação variou
até 24 horas após a colheita, não foram observadas diferenças clínicas significativas.
•
Analise as amostras o mais rapidamente possível após a sua recolha. Armazene as amostras
entre 2 a 8°C se não forem imediatamente analisadas.
•
Armazene sempre as amostras vedadas e na vertical entre 2° e 8°C e até um máximo de
7 dias em tubos secundários.
•
Armazene os tubos de amostras primários entre 2° to 8°C até 7 dias. Mantenha sempre as
amostras vedadas e na vertical. As amostras do tubo primário incluem soro armazenado
coagulado, plasma armazenado em glóbulos vermelhos empacotados e amostras
processadas e armazenadas em tubos de recolha de amostras com barreira de gel. Ao testar
10 amostras que permaneceram nestes tubos primários até 7 dias, não foram observadas
diferenças clínicas significativas.
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Manual do ensaio ADVIA Centaur
•
Para um período de armazenamento mais longo, congele as amostras, destituídas dos
eritrócitos, a uma temperatura de -20°C ou inferior. Não guarde as amostras num frigorífico
com descongelamento automático. Após terem sido submetidas 10 amostras a 2 ciclos de
congelamento/descongelamento, não foram observadas quaisquer diferenças clínicas
significativas. Misture bem e centrifugue as amostras descongeladas antes de as utilizar.
•
Embale e coloque as etiquetas nas amostras para envio de acordo com os regulamentos
federais e internacionais aplicáveis respeitantes ao transporte de amostras clínicas e agentes
etiológicos. As amostras mantidas à temperatura ambiente durante 12 horas ou arrefecidas
durante 7 dias não demonstraram diferenças qualitativas. Armazene as amostras vedadas e
na vertical entre 2° a 8°C após a sua chegada. Se o período de envio ultrapassar os 7 dias,
envie as amostras congeladas.
Antes de colocar as amostras no sistema, verifique o seguinte:
•
As amostras não contêm fibrina ou outras partículas. Remova as partículas através da
centrifugação.
•
As amostras não contêm bolhas ou espuma.
Reagentes
Armazene os reagentes na posição vertical, a uma temperatura entre 2° e 8°C.
Agite manualmente todas as embalagens de reagentes primários antes de as colocar no sistema. Inspeccione
visualmente a parte inferior da embalagem do reagente, para se certificar de que todas as partículas estão
dispersas e em suspenção. Para obter informações detalhadas sobre a preparação dos reagentes, consulte o
Apêndice C, Manuseamento de Reagentes.
Proteja da luz solar
Proteja as embalagens dos reagentes de todas as fontes de luz. As embalagens dos reagentes carregados
no sistema encontram-se protegidas da luz. Armazene as embalagens de reagentes não utilizadas
a 2° e 8°C num local afastado de fontes de luz.
Embalagem de
reagente
Embalagem de
reagentes
primários
ReadyPack do
ADVIA Centaur
HBcT
Embalagem de
reagentes
auxiliares
ReadyPack do
ADVIA Centaur
HBcT
HBcT
ArmazeIngredientes
namento Estabilidade
antígeno central da hepatite B
2–8°C até à data de validade no
recombinante (~ 0,2 µg/mL)
rótulo da embalagem.
marcado com ester de acridino
Para a estabilidade de
tamponizado com tensioactivo e
utilização, consulte
conservantes
Estabilidade de utilização
e intervalo de calibração.
Fase sólida 25,0 mL/ micropartículas paramagnéticas 2–8°C até à data de validade no
embala- revestidas com streptadivina prérótulo da embalagem.
gem de
formada com HBcAg
Para a estabilidade de
reagente recombinante biotinilado
utilização, consulte
(~ 0,2 µg/mL) tamponadas com
Estabilidade de utilização
tiocianato de potássio (5,0%),
e intervalo de calibração.
albumina de sangue bovino,
surfactante e azida sódica
(< 0,1%)
Reagente
6,0 mL/ tampão com tiocianato de
2–8°C até à data de validade no
caotrópico* embala- potássio (40%) e tensioactivo
rótulo da embalagem.
gem de
Para a estabilidade de
reagente
utilização, consulte
Estabilidade de utilização
e intervalo de calibração.
Reagente
25,0 mL/ tampão com tiocianato de
2–8°C até à data de validade no
auxiliar
embala- potássio (5,0%) e tensioactivo
rótulo da embalagem.
gem de
Para a estabilidade de
reagente
utilização, consulte
Estabilidade de utilização
e intervalo de calibração.
Reagente
Volume
Reagente
10,0 mL/
fluorescente embalagem de
reagente
07702998 Rev. F, 2006-05
Manual do ensaio ADVIA Centaur
Embalagem de
reagente
Frascos do
calibrador HBcT
1†
*
†
ArmazeIngredientes
namento Estabilidade
plasma humano processado
2–8°C até à data de validade do
positivo para os anticorpos HBc,
frasco
albumina de soro humano e
ou
conservantes
utilização–8 horas
7,0 mL/ plasma humano processado
2–8°C até à data de validade do
frasco
negativo e positivo para o
frasco
anti-HBc com conservantes
ou
utilização–8 horas
1500 mL/ salina tamponada de fosfato
2–25°C até à data de validade do
embala- com azida sódica (< 0,1%) e
frasco
gem
tensioactivo
ou
utilização–14 dias
Reagente
Volume
Calibradores 2,0 mL/
frasco
qualidade HBcT
Controlos
frascos de material
de controlo†
ADVIA Centaur
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Líquido de
lavagem 1
A cor do reagente caotrópico varia entre o incolor e o rosa.
Consulte Materiais necessários mas não fornecidos
NOTA: A azida sódica pode reagir com o cobre e o chumbo existentes nas canalizações,
formando azidas metálicas explosivas. Quando eliminar os reagentes, utilize água em
abundância, para evitar a acumulação de azidas. Certifique-se primeiro de que a eliminação
destes materiais através da rede de esgotos cumpre a legislação em vigor.
R22, R32 Nocivo! Nocivo por ingestão. Em contacto com ácidos liberta gases muito tóxicos. Manter
S14, S28 afastado de ácidos. Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com sabão e água.
Contém: tiocianato de potássio; reagente caotrópico, reagente auxiliar
R43
Irritante! Pode causar sensibilização se em contacto com a pele. Evitar o contacto com a pele.
S24, S37 Usar luvas adequadas. Contém: 5-cloro-2-metil-2H-isotiazol-3-ona e 2-metil-2H-isotiazol-3-ona;
Controlos
PRECAUÇÃO! POTENCIAIS RISCOS BIOLÓGICOS: Alguns componentes deste produto contêm material de
origem humana. Não existe qualquer método de ensaio conhecido que ofereça a segurança total de que os
derivados do sangue humano não transmitam agentes infecciosos. Todos os produtos fabricados a partir de
material de origem humana devem ser manuseados como potencialmente infecciosos. Manuseie este produto
de acordo com as boas práticas de laboratório e com as precauções universais.7-9
O controlo negativo foi ensaiado através de métodos aprovados pela FDA e considerados não reactivos para o
antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg), anticorpo da hepatite C (VHC) e anticorpo do HIV-1/2. O
controlo positivo e os calibradores contêm plasma humano que pode ser reactivo para o HBsAg. As unidades
foram tratadas com um procedimento de inactivação de beta-propiolactona - raios ultra-violeta, contudo,
todos os produtos fabricados com o uso de material de origem humana devem ser manuseados como
potencialmente infectantes.
Para utilizar no diagnóstico In Vitro.
Carregar os reagentes
Certifique-se de que o sistema contém embalagens suficientes de reagentes primários e
auxiliares. Para obter informações mais detalhadas sobre a preparação do sistema, consulte as
instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
Agite manualmente todas as embalagens de reagentes primários antes de as colocar no sistema.
Inspeccione visualmente a parte inferior da embalagem do reagente, para se certificar de que
todas as partículas estão dispersas e em suspensão. Para obter informações detalhadas sobre a
preparação dos reagentes, consulte o Apêndice C, Manuseamento de Reagentes.
Carregue as embalagens de reagentes primários ReadyPack nos compartimentos dos reagentes
primários e utilize as setas das embalagens para as colocar correctamente. O sistema mistura
automaticamente as embalagens dos reagentes primários para manter uma suspensão
homogénea dos reagentes. Carregue as embalagens dos reagentes auxiliares ReadyPack na
entrada do reagente auxiliar. Para informações detalhadas sobre como carregar os reagentes,
consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
07702998 Rev. F, 2006-05
HBcT
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Manual do ensaio ADVIA Centaur
NOTA: Os calibradores baixo e alto fornecidos neste kit são combinados com a embalagem de
reagentes primários ReadyPack. Não misture lotes de calibradores com lotes diferentes de
embalagens de reagentes.
NOTA: O reagente auxiliar fornecido neste kit é combinado com a fase sólida e com o reagente
fluorescente. Não misture os lotes de reagente auxiliar com lotes diferentes de fase sólida e de
reagente fluorescente.
Estabilidade de utilização e intervalo de calibração
Estabilidade de utilização
28 dias
Intervalo de calibração
14 dias
Adicionalmente, o ensaio ADVIA Centaur HBc Total requer uma calibração de dois pontos:
•
ao alterar os números de lote das embalagens dos reagentes primários
•
quando substituir os componentes do sistema
•
quando os resultados do controlo de qualidade se encontram repetidamente fora dos limites
NOTA:
•
Elimine as embalagens dos reagentes no final do intervalo de estabilidade de utilização.
•
Não utilize os reagentes para além da data de validade.
Calibração da curva principal
O ensaio HBc Total ADVIA Centaur requer uma calibração da curva principal ao utilizar um
novo número de lote do reagente fluorescente, fase sólida e reagente caotrópico. Para cada novo
lote de reagente fluorescente, fase sólida e reagente caotrópico, utilize o leitor de código de
barras ou o teclado para introduzir os valores da curva principal no sistema. O cartão da curva
principal contém os valores da curva principal. Para informações detalhadas sobre a introdução
dos valores de calibração, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de
ajuda online.
Calibração
Para a calibração do ensaio HBc Total ADVIA Centaur, utilize os calibradores HBc Total
ADVIA Centaur fornecidos com cada kit. Os calibradores fornecidos com este kit são
combinados com a embalagem de reagentes primários ReadyPack.
Utilização das etiquetas de código de barras
NOTA: As etiquetas de código de barras são específicas do número do lote. Não utilize etiquetas
de códigos de barras de um lote de calibradores com qualquer outro lote de calibradores.
Utilize as etiquetas de código de barras dos calibradores HBc Total ADVIA Centaur para
identificar os copos das amostras do calibrador baixo e do alto ao executar o ensaio HBc Total
ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no copo da amostra de forma a que os
caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no copo da amostra.
Efectuar uma calibração
Cada lote de calibradores contém um cartão de valor atribuído ao calibrador para facilitar a
introdução dos valores de calibração no sistema. Introduza os valores utilizando um leitor de
código de barras ou o teclado. Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores do
calibrador, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
NOTA: Este procedimento utiliza volumes do calibrador suficientes para medir cada calibrador
em duplicado.
HBcT
07702998 Rev. F, 2006-05
Manual do ensaio ADVIA Centaur
HBc Total 7 / 14
1. Introduza os calibradores na lista de trabalho.
2. Coloque etiquetas de código de barras dos calibradores em dois copos de amostra: uma para
o baixo e outra para o alto.
NOTA: Cada gota do frasco do calibrador tem aproximadamente 50 µL.
3. Misture suavemente os calibradores baixo e alto e distribua pelo menos 4 a 5 gotas nos
copos de amostra adequados.
4. Carregue os copos de amostra num rack.
5. Coloque o rack na fila de entrada das amostras.
6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão carregados.
7. Inicie a fila de entrada, se necessário.
NOTA: Elimine qualquer quantidade de calibrador que permaneça nos copos das amostras
durante mais de 8 horas. Não encha novamente os copos das amostras quando o conteúdo se
tiver esgotado; se necessário, distribua calibradores novos.
Controlo de qualidade
Para o controlo de qualidade do ensaio HBc Total ADVIA Centaur, utilize os materiais de
controlo de qualidade HBc Total ADVIA Centaur. Consulte o cartão de valor previsto para os
valores esperados sugeridos, específicos para o número de lote dos controlos positivo e
negativo.
Utilização das etiquetas de código de barras
NOTA: As etiquetas de código de barras dos controlos são específicas do número do lote. Não
utilize etiquetas de códigos de barras de um lote de controlos com qualquer outro lote de
controlos.
Utilize as etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade HBc Total ADVIA Centaur
para identificar os copos das amostras positivas e negativas ao executar o ensaio HBc Total
ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no copo da amostra de forma a que os
caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no copo da amostra.
Efectuar um controlo de qualidade
Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores do controlo de qualidade, consulte
as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
Para monitorizar o desempenho do sistema e as tendências do gráfico, como requisito mínimo,
as amostras de controlo de qualidade devem ser ensaiadas em cada turno em que as amostras
foram analisadas. As amostras de controlo de qualidade também devem ser ensaiadas ao
efectuar uma calibração de dois pontos. Manuseie as amostras de controlo de qualidade da
mesma forma que as amostras de doentes.
NOTA: Este procedimento utiliza volumes do controlo suficientes para medir cada controlo em
duplicado.
1. Introduza as amostras de controlo de qualidade na lista de trabalho.
2. Coloque etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade em dois copos de
amostra: uma para o positivo e outra para o negativo.
NOTA: Cada gota do frasco do controlo tem aproximadamente 50 µL.
3. Misture suavemente os materiais de controlo de qualidade e distribua pelo menos
5 a 6 gotas nos copos de amostra adequados.
4. Carregue os copos de amostra num rack.
07702998 Rev. F, 2006-05
HBcT
HBc Total 8 / 14
Manual do ensaio ADVIA Centaur
5. Coloque o rack na fila de entrada das amostras.
6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão carregados.
7. Inicie a fila de entrada, se necessário.
NOTA: Elimine quaisquer materiais de controlo da qualidade que permaneçam nos copos das
amostras durante mais de 8 horas. Não encha novamente os copos das amostras quando o
conteúdo se tiver esgotado; se necessário, distribua materiais de controlo de qualidade novos.
Efectuar uma acção correctiva
Se os resultados do controlo de qualidade não coincidirem com os valores esperados ou com os
valores estabelecidos pelo laboratório, faça o seguinte:
•
considere os resultados da amostra inválidos e repita os testes dos controlos que não se
encontrem dentro dos limites
•
reveja estas instruções para se certificar de que este ensaio foi efectuado de acordo com os
procedimentos recomendados pela Bayer HealthCare
•
verifique se os materiais se encontram dentro da validade
•
verifique se a manutenção necessária foi efectuada
•
se necessário, contacte a Bayer HealthCare para mais assistência
Volume da amostra
Este ensaio requer 50 µL de amostra para uma única determinação. Este volume não inclui o
volume não utilizável no recipiente da amostra ou o volume adicional necessário ao efectuar
duplicados ou outros testes na mesma amostra. Para informações detalhadas sobre o volume
mínimo necessário, consulte Requisitos do volume da amostra no Manual de referência
ADVIA Centaur.
Procedimento do ensaio
Para informações detalhadas sobre os procedimentos, consulte as instruções de funcionamento
do sistema ou o sistema de ajuda online.
PRECAUÇÃO: Não carregue mais do que um tamanho do recipiente da amostra em cada rack. O
indicador do rack deve estar colocado no posicionamento correcto para o tamanho do recipiente
da amostra.
1. Prepare o recipiente da amostra para cada amostra e coloque etiquetas de códigos de barras
nos recipientes das amostras, como necessário.
2. Carregue cada recipiente da amostra num rack e certifique-se de que as etiquetas do código
de barras estão visíveis.
3. Coloque os racks na fila de entrada.
4. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão carregados.
5. Inicie a fila de entrada, se necessário.
Notas sobre procedimentos
Eliminação
A eliminação de material perigoso ou biologicamente contaminado deve ser efectuada de
acordo com as práticas da sua instituição. Elimine todos os materiais de uma forma segura e
aceitável e em conformidade com todos os regulamentos federais, estatais e locais.
HBcT
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Manual do ensaio ADVIA Centaur
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Interpretação dos resultados
Para obter informações detalhadas sobre a forma como o sistema calcula os resultados, consulte
as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
O sistema comunica os resultados anti-HBc Total em valores de índice e como sendo reactivos
ou não reactivos.
•
As amostras com um valor calculado com um valor de índice inferior a 0,50 são
consideradas não reactivas para os anticorpos totais para o antígeno central da hepatite B.
•
As amostras com um valor calculado superior ou igual ao valor de índice 0,50 são
consideradas reactivas para os anticorpos totais para o antígeno central da hepatite B.
•
O "cutoff" para o ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi verificado com base nos resultados
da curva característica receptor-operador (ROC)10 e no acordo clínico gerado a partir de
estudos clínicos.
•
Os resultados das amostras são inválidos e têm de ser repetidos se os controlos estiverem
fora dos limites.
Limitações
•
O ensaio HBc Total ADVIA Centaur é limitado para a detecção de anticorpos totais para o
antígeno central da hepatite B no soro humano ou plasma com EDTA. Os ensaios para a
detecção do anti-HBc podem não identificar todas as amostras de doentes que contêm vírus
da hepatite B ou unidades de sangue potencialmente infectantes e podem gerar resultados
reactivos falsos.
•
As características de desempenho do ensaio não foram estabelecidas quando o ensaio
HBc Total ADVIA Centaur é utilizado em conjunto com ensaios de outros fabricantes para
os marcadores serológicos específicos do VHB.
•
As características de desempenho do ensaio não foram estabelecidas para a utilização do
ensaio HBc Total ADVIA Centaur como um meio auxiliar na determinação da
susceptibilidade à infecção pelo VHB antes ou após a vacinação de bebés, crianças ou
adolescentes.
•
O desempenho do ensaio HBc Total ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do
cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém nascidos, amostras sanguíneas de
cadáveres, amostras inactivadas por calor, ou outros fluídos corporais para além do soro e
do plasma, tais como saliva, urina, líquido amniótico ou fluídos pleurais.
•
O desempenho do ensaio não foi estabelecido para populações de doentes hospedeiros
imunodeprimidos ou imunodeficientes.
•
Não utilize amostras com contaminação microbiana óbvia.
Resultados esperados
Numa população de 4945 dadores de sangue, o número de amostras consideradas reactivas
(Valor de índice ≥ 0,50) para o anti-HBc através da utilização do ensaio HBc Total
ADVIA Centaur foi 21 (0,42%).
Da mesma forma que para todos os ensaios de diagnóstico in vitro, cada laboratório deve
determinar o(s) seu(s) próprio(s) limite(s) de referência para a avaliação diagnóstica dos
resultados do doente.11
07702998 Rev. F, 2006-05
HBcT
HBc Total 10 / 14
Manual do ensaio ADVIA Centaur
Características de desempenho
O desempenho do ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi determinado através do teste de um
total de 5564 amostras em dois locais. Os resultados do HBc Total ADVIA Centaur foram
comparados com resultados de teste de um imunoensaio enzimático automatizado (EIA)
anti-HBc Total comercialmente disponível. As amostras incluíram as seguintes populações:
amostras positivas para o VHB, dadores de sangue normais e doentes hospitalizados. Foi
efectuada uma avaliação posterior com as amostras discordantes através de um ensaio
comercialmente disponível para o anti-HBc Total.
Especificidade clínica
Uma população de 4945 dadores de sangue aleatórios e 217 doentes hospitalizados foi testada
através do ensaio HBc Total ADVIA Centaur e um imunoensaio enzimático automatizado
anti-HBc Total comercialmente disponível. O desempenho do ensaio HBc Total
ADVIA Centaur é mostrado na seguinte tabela:
Grupo de doentes
Dadores de sangue
aleatórios
Doentes hospitalizados
Total
Número
4945
Não reactivo (%)
4924 (99,57%)
Reactivo (%)
21 (0,42%)
Reactivo
confirmado
12
Especificidade
99,82%
217
5162
206 (94,93%)
5130 (99,38%)
11 (5,1%)
32 (0,62%)
7
19
98,09%
99,75%
A especificidade de resolução do ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi de 99,75% (5130/5143)
com 95% de intervalo de confiança (CI) de 99,57 a 99,87%.
Sensibilidade clínica
Uma população de 402 amostras de doentes com VHB anteriormente determinadas como
positivas para o HBsAg foi testada com o ensaio HBc Total ADVIA Centaur e um ensaio
anti-HBc Total comercialmente disponível. 402 destas amostras de doentes com VHB foram
consideradas positivas para o anti-HBc Total através do ensaio comparativo com a mesma
aplicação e 402 foram positivas através do ensaio HBc Total ADVIA Centaur. A sensibilidade
relativa inicial foi 100% (402/402).
Ensaio HBc Total ADVIA Centaur
Reactivo
Não reactivo
Total
Ensaio de referência Anti-HBc Total
Reactivo
Não reactivo
402
0
0
0
402
0
Total
402
0
402
A especificidade de resolução do ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi de 100% (402/402)
com 95% de intervalo de confiança (CI) de 99,09 a 100%.
Reactividade cruzada
O ensaio HBc Total ADVIA Centaur foi avaliado para a reactividade cruzada com outros
anticorpos virais e amostras de situação de doença. O estado anti-HBc Total de cada amostra foi
verificado através da utilização de outro ensaio anti-HBc Total comercialmente disponível. Os
seguintes resultados foram obtidos através da utilização do ensaio HBc Total ADVIA Centaur.
Categoria clínica
Infecção por hepatite A (VHA)
Infecção por hepatite C (VHC)
Doença do fígado não-viral
IgG contra o Vírus Epstein-Barr (EBV)
IgM contra o Vírus Epstein-Barr (EBV)
HBcT
Número
testado
9
11
9
10
10
Número de resultados positivos Anti-HBc Total
Ensaio ADVIA Centaur
Ensaio de referência
3
3
5
5
0
0
2
2
3
3
07702998 Rev. F, 2006-05
Manual do ensaio ADVIA Centaur
HBc Total 11 / 14
Categoria clínica
IgG contra o Vírus Herpes Simplex (HSV)
IgM contra o Vírus Herpes Simplex (HSV)
IgG contra o Citomegalovírus (CMV)
IgM contra o Citomegalovírus (CMV)
Toxoplasma IgG
Toxoplasma IgM
IgG contra a Sífilis
Vírus da imunodeficiência humana (HIV1/2)
IgG contra o vírus varicela zoster
Multiparidade
IgG contra a rubéola
Hepatite alcoólica
Artrite reumatóide
Anticorpo anti-nuclear (ANA)
Lúpus eritematoso sistémico (SLE)
HAMA
Frasco da vacina anti-gripe
Total de amostras testadas
*
Número
testado
10
10
10
3
10
10
10
10
10
10
10
2
10
10
10
10
10
204
Número de resultados positivos Anti-HBc Total
Ensaio ADVIA Centaur
Ensaio de referência
3
3
4
4
7
7
1
1
2
2
0
0
1
1
2
2
4
4
1
1
5
4*
0
0
0
0
1
1
1
1
0
0
3
3
48
47
O resultado positivo não confirmado do ADVIA Centaur HBc Total foi positivo para o anti-HBs
ADVIA Centaur.
Amostras de soro que é . . .
hemolizado
lipémico
ictérico
ictérico
hiper-proteinémico
hipo-proteinémico
hiper IgG
Demonstraram ≤ 10% de alterações dos resultados até . . .
500 mg/dL de hemoglobina
1000 mg/dL de intralípidos
60 mg/dL de bilirrubina conjugada
40 mg/dL de bilirrubina não conjugada
12,0 g/dL de proteína
3,5 g/dL de proteína
60 mg/mL de imunoglobina G
O ensaio de interferência foi determinado de acordo com o CLSI Document EP7-A2.12
Painéis de seroconversão
O painéis de seroconversão para doentes com VHB comercialmente disponíveis foram testados
com o ensaio HBc Total ADVIA Centaur para determinar a sensibilidade de seroconversão do
ensaio. O desempenho do ensaio HBc Total ADVIA Centaur nos painéis de seroconversão
coincidiram bastante com o desempenho do ensaio comparativo. Foram obtidos os seguintes
resultados:
Resultado positivo Anti-HBc Total da data da colheita inicial
Identificação do
Ensaio comparativo
Ensaio ADVIA Centaur
painel
(Dias)
(Dias)
RP-009
36
36
RP-0016
60
57
RP-0017
71
71
BCP-62433
41
41
Nabi-SB0413
69
69
Nabi-SB0411
35
35
Serológicos 2263-D 78
63
*
Ensaio comparativo vs Ensaio
ADVIA Centaur Diferença nos
números da sangria*
0
+1
0
0
0
0
+3
A diferença nos números de sangria é relativa ao ensaio comparativo. Por exemplo, um +1 significa que o
ensaio comparativo necessitou de 1 sangria adicional antes da reactividade ser determinada em comparação
com o ponto no qual o ensaio ADVIA Centaur foi confirmado como positivo.
07702998 Rev. F, 2006-05
HBcT
HBc Total 12 / 14
Manual do ensaio ADVIA Centaur
Precisão
A precisão foi avaliada de acordo com o protocolo Clinical and Laboratory Standards Institute
EP5-A2.13 Um painel de cinco membros e controlos foram ensaiados em duas réplicas, duas
vezes por dia, durante 20 dias. Foram obtidos os seguintes resultados através da utilização de 1
lote de reagentes e uma curva de calibração armazenada.
Amostra
Soro 1
Soro 2
Soro 3
Soro 4
Soro 5
Soro 6
*
Média
Índice
0,06
1,13
1,22
1,35
2,40
4,54
Durante o
processamento
SD
CV (%)
0,02
NA*
0,06
5,1
0,04
3,6
0,08
5,8
0,12
4,9
0,20
4,4
Processamento-aprocessamento
SD
CV (%)
0,01
NA
0,05
4,5
0,05
4,2
0,05
3,8
0,08
3,4
0,21
4,7
SD
0,02
0,09
0,08
0,10
0,19
0,29
Total
CV (%)
NA
8,4
6,8
7,1
7,7
6,5
NA = Não aplicável
Sensibilidade analítica
Para analisar a sensibilidade analítica do ensaio HBc Total ADVIA Centaur, foi utilizada a
amostra de referência do anti-HBc Total do Paul Ehrlich Institute (PEI) para preparar uma série
de diluição que foi ensaiada com dois lotes do reagente HBc Total ADVIA Centaur. Foi
utilizada a regressão linear para determinar a concentração da amostra de referência do PEI que
corresponde ao "cutoff" do ensaio HBc Total ADVIA Centaur (valor de índice = 0,50). A
concentração de Unidade Internacional (IU) do PEI no "cutoff" do ensaio foi determinada como
sendo 0,22 PEI IU/mL.
Normalização
A rastreabilidade do ensaio HBc Total ADVIA Centaur baseia-se no acordo clínico relativo
com os ensaios anti-HBc Total comercialmente disponíveis. Consulte Características de
desempenho. Os valores atribuídos para os calibradores e controlos são determináveis para esta
normalização.
Assistência técnica
Para serviços de atendimento ao cliente, contacte o seu distribuidor ou fornecedor de assistência
técnica.
Referências
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HBcT
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Standards Institute; 2000. NCCLS Document C28-A2.
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Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline - Second Edition. Wayne, PA: Clinical and
Laboratory Standards Institute; 2004. NCCLS Document EP5-A2.
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07702998 Rev. F, 2006-05
HBcT
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07702998 Rev. F, 2006-05