ESTIMATIVA DA VIABILIDADE POLINICA DE CANA-DE

XII CURSO DE INVERNO DE GENÉTICA – FCAV/UNESP
ESTIMATIVA DA VIABILIDADE POLINICA DE CANA-DEMACACO BASEADO NO USO DE 2,3,5 CLORETO DE
TRIFENILTETRAZOLIO
ESTIMATE OF VIABILITY POLLEN OF MONKEY CANA
BASED
ON
USE
OF
2,3,5
CHLORIDE
TRIPHENYLTETRAZOLIUM
Bruna Natália Veloso dos Santos(1)
Weslaine de Almeida Macedo(1)
Vanessa dos Santos de Mello(2)
Jenifer Fernanda Damasio(2)
Lorena Cristina Batista dos Santos(3)
Douglas Machado Leite(4)
Isane Vera Karsburg(5)
Resumo
Costus spiralis (Jacq.) Roscoe, popularmente conhecida como cana-de-macaco ou cana-dobrejo é uma herbácea natural da América do Sul e do Brasil, é reconhecida por seu potencial
medicinal, ornamental e ecológica, sendo frequente seu uso na medicina popular. A
viabilidade do pólen é um estudo de grande importância para plantas, visto que estima-se a
potencialidade reprodutora masculina da espécie, cultivar ou população, auxiliando em
estudos taxonômicos, ecológicos, palinológicos. O presente trabalho teve como objetivo
avaliar a viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis, por meio de diferentes
concentrações de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) e diferentes tempos de exposição, a
fim de obter informações que corroborem para a conservação dessa espécie. Para avaliação da
viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis foram utilizados flores frescas em pré
antese, sendo coletado todo os dias uma flor. O pólen foi retirado e colocado em tubos do tipo
eppendorf com 4mL das diferentes concentrações 0,30% e 0,075% de Cloreto de 2,3,5Trifeniltetrazólio (TTC) separadamente, permanecendo 12 e 24 horas de exposição.
Verificou-se que a concentração de 0,30% com 12 horas de exposição obteve coloração
vermelho intenso os grãos de pólen viáveis. Na concentração 0,75% observa-se que nas
exposições de 12 e 24horas não houve diferença na coloração dos grãos de pólen viáveis.
Palavras-chaves: Costus spiralis (Jacq.) Roscoe. Costaceae. Pólen. Zingiberales.
Abstract
Costus spiralis (Jacq.) Roscoe, popularly known as cane monkey or cane of the swamp is a
natural Herbaceous from South America and Brazil, is recognized for its medicinal,
ornamental and ecological potential, and frequent use in folk medicine. The pollen viability is
_________________________________________________________________________________________
1
Graduandas do curso de Licenciatura Plena e Bacharelado em Ciências Biológicas – UNEMAT, Alta Floresta MT. E-mail: [email protected]. 2Mestrandas em Genética e Melhoramento de Plantas pela
Universidade do Estado de Mato Grosso- UNEMAT Campus Alta Floresta – MT. 3Bióloga, Educadora da
Escola Estadual Vitória Furlani da Riva de Alta Floresta – MT. 4Graduando do curso de Bacharelado em
Engenharia Florestal – UNEMAT, Alta Floresta – MT. 5Professora Adjunta do Departamento de Ciências
Biológicas-UNEMAT – Campus de Alta Floresta – MT.
a very important study for plants, seen it is estimated the male reproductive potentiality of the
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species, cultivar or population, assisting in taxonomic studies, ecological, palynological. The
present study aimed to assess the viability of Costus spiralis pollen grains by means of
different concentrations of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) and different exposure
times in order to get information in support for the conservation of this species. For assessing
viability of the pollen grains of C. spiralis were utilized fresh flowers in pre anthesis, being
collected every day a flower. The pollen was taken down and laid in Eppendorf tubes with
4mL different concentrations of 0.30% and 0.075% of 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride
(TTC) separately remaining 12 to 24 hours of exposure. It is found that the concentration of
0.30% with 12 hours of exposure has obtained intense red staining of viable pollen grains. In
concentration 0.75% is observed that the exposures of 12 and 24 hours there was no
difference in the color of viable pollen grains.
Keywords: Costus spiralis (Jacq.) Roscoe. Cactaceae. Pollen. Zingiberales.
1. Introdução
Costus spiralis (Jacq.) Roscoe, popularmente conhecida como cana-de-macaco ou
cana-do-brejo é uma herbácea natural da América do Sul e do Brasil, podendo ser encontrada
em florestas chuvosas, savanas e em afloramentos graníticos (SANTOS, 2009).
Costus spiralis é reconhecida por seu potencial medicinal, ornamental e ecológica,
sendo frequente seu uso na medicina popular para tratar infecções urinárias, pedras nos rins e
diabetes, além de atuar como um antioxidante, um agente antibacteriano, diurético e
cicatrizante, no Brasil ocorrem nos estados do: Amazonas, Ceará, Goiás, Mato Grosso, Minas
Gerais, Pará, Paraná, Pernambuco, Santa Catarina e São Paulo (ASCÊNCIO et al., 2014).
Suas flores vêm se destacando no mercado ornamental devido suas características
morfológicas e exuberantes presentes em espécies tropicais cultivadas do gênero Costus e por
apresentar uma ótima durabilidade pós colheita (SANTOS, 2009).
Segundo Araújo & Oliveira, (2007), a polinização nesse gênero é limitada, indicando
alto grau de especialização de acordo com seus polinizadores como as abelhas Eulaema
(Apeulaema) nigrita, beija-flores sendo a espécie mais vista Phaethornis pretrei e borboletas
da família Hesperiidae.
A viabilidade do pólen é um estudo de grande importância para plantas, visto que se
estima a potencialidade reprodutora masculina da espécie, cultivar ou população, auxiliando
em estudos taxonômicos, ecológicos, palinológicos, apresentando informações básicas para
conservação e melhoramento genético (AULER et al., 2006). O presente trabalho teve como
objetivo avaliar a viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis, através de diferentes
concentrações de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) e diferentes tempos de exposição, a
fim de obter informações que corroborem em avaliações referentes a fertilidade das espécies.
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2. Material e Métodos
As análises foram realizadas no Laboratório de Citogenética e Cultura de Tecidos da
Universidade do Estado de Mato Grosso – UNEMAT, sendo o material coletado no município
de Alta Floresta – MT. Para avaliação da viabilidade dos grãos de pólen de Costus spiralis
foram utilizados flores frescas, sendo coletado todo os dias uma flor. O pólen foi retirado e
colocado em tubos do tipo eppendorf com diferentes concentrações 0,30% e 0,075% de
Cloreto de 2,3,5-Trifeniltetrazólio (TTC) permanecendo em diferentes horários de exposição
12 e 24 horas. Cada flor coletada foi submetida as duas concentrações e observado em um
determinado horário, não sendo a mesma flor utiliza para demais horários.
Para esse corante, a viabilidade foi determinada pela capacidade de coloração dos
grãos de pólen, sendo considerados viáveis os pólens que apresentaram tonalidade em
vermelho e inviáveis aqueles que apresentaram tons mais claras ou transparentes. Foram
avaliadas 5 lâminas de acordo com cada concentração e horário, sendo contabilizados 300
grãos de pólen por lâmina por meio do método de varredura, observados em microscópio
óptico com aumento de 40x.
As médias obtidas com as diferentes concentrações do corante foram submetidos ao
teste de Tukey a 5% de probabilidade através do Programa Estatístico Sisvar 5.1 ®
(FERREIRA, 2011).
3. Resultados e Discussão
Na avaliação da viabilidade dos grãos de pólen C. spiralis com uso das diferentes
concentrações de TTC, verificou-se que 0,30% com 12 e 24 horas obtiveram as maiores
medias de polens viáveis (Tabela 1) e melhor coloração dos polens viáveis, (Figura 1). O TTC
na concentração de 0,075% não apresentou distinção nítidas dos grãos de pólen viáveis dos
inviáveis (Figura 1).
Segundo Neto et al., (1988) o teste cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) reage
através da atividade enzimática desidrogenase do ácido málico, no qual reduz o sal de
tetrazólio nos tecidos vivos onde íons de H+ são transferidos para o referido sal. Assim ocorre
uma reação de redução nas células vivas, formando um composto vermelho, não difusível,
conhecido como trifenilformazan, que mostra a atividade respiratória nas mitocôndrias e,
logo, que o tecido é viável (vivo) (ZONTA et al., 2009).
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O teste do TTC é considerado confiável por permitir a distinção entre os pólens
viáveis por apresentar a reação química e os não viáveis com ausência de coloração, sendo um
corante relacionado com a respiração celular do pólen, sendo corado apenas os que se
encontram vivos ou viáveis através desta técnica.
FIGURA 1- Grãos de pólen de C. spiralis corados com tetrazólio. TTC 0,30% exposição de
12 horas a) viável b) inviável; TTC 0,30% exposição de 24 horas c) viável d)
inviável. TTC 0,075% exposição de 12 horas e) viável f) inviável; 0,075%
exposição 24 horas g) viável h) inviável. Barra = 10µm.
TABELA 1-Valores médios percentuais de viabilidade polínica de C. spiralis, com os
corantes: Tetrazólio 0,075% e Tetrazólio 0,30%, sob diferentes horários de
exposição.
Concentrações
Tempos
12 horas
24 horas
91,46 Bb
96,20 Aa
97,20Aa
96,19 Aa
1,82
0,075%
0,30%
Coeficiente
de variação (%)
Médias seguidas pela mesma letra maiúscula nas linhas e minúsculas nas colunas não diferem entre si,
pelo teste de Tukey ao nível de 5% de significância.
4. Conclusão
A partir dos dados, conclui-se que a concentração de 0,30% com 12 horas de
exposição foi satisfatório na coloração dos grãos de pólen para a espécie em questão.
Referências
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Chemical assessment and antimicrobial and antioxidant activities of endophytic fungi extracts
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