(hpv) em tumores associados ao vírus

PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE GOIÁS
PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA
PROGRAMA DE MESTRADO EM GENÉTICA
e
ASSOCIAÇÃO DE COMBATE AO CÂNCER EM GOIÁS
HOSPITAL ARAÚJO JORGE
Projeto de Pesquisa:
PREVALÊNCIA E DISTRIBUIÇÃO GENOTIPICA DO
PAPILLOMAVÍRUS HUMANO (HPV) EM TUMORES
ASSOCIADOS AO VÍRUS

Coordenadora :
Dra. Vera Aparecida Saddi

Colaboradores:
Dra. Luciana Ximenes, Colaboradora
Dra. Luísa Lina Villa, Colaboradora
Dra. Megmar Aparecida dos Santos Carneiro, Colaboradora
Dra. Rita de Cássia Alencar, Colaboradora
Dra. Silvia Helena Rabelo, Colaboradora
Dra.Rosane Ribeiro Figueiredo Alves, Colaboradora

Mestrandos Envolvidos:
Brhuna Carla Rodrigues da Cunha, Mestranda
Caio Bruno Quinta de Souza Leal, Mestrando
Guilherme Petito, Mestrando
Thatyane Ribeiro, Mestranda
Locais de realização:

Laboratório de Transplante de Medula Óssea – TMO/ACCGO/HAJ – Goiás

Serviço de Anatomia Patológica –ACCGO/HAJ – Goiás

Laboratório de Diversidade Genética – PUC Goiás
RESUMO
Estudos clínicos, biológicos e epidemiológicos já demonstraram claramente a
relação causal entre a infecção pelo Papilomavirus Humano (HPV) e o câncer
cervical. De forma similar, outros tumores genitais como os de vagina e ânus
também estão fortemente associados ao HPV, além de uma fração significativa dos
tumores de vulva, pênis e orofaringe. A detecção e genotipagem do HPV nos
diferentes tumores associados a este vírus é de fundamental importância para avaliar
com precisão o potencial oncogênico, a epidemiologia da infecção em todo o mundo,
bem como, a associação de genótipos de alto risco com o desenvolvimento dos
tumores. Tipos específicos de HPV determinam diferentes riscos para a persistência e
a progressão determinada pelo vírus. A análise da distribuição dos diferentes tipos do
HPV em carcinomas humanos e associação destes achados com as características
clínico-epidemiológicas dos tumores, a severidade das lesões, o grau de
diferenciação, o prognóstico e sobrevida das pacientes com estas neoplasias
constituem-se nas principais metas deste projeto. Os resultados esperados com
desenvolvimento desta pesquisa são fundamentais também para estabelecer e
monitorar a eficácia da vacina contra o HPV na região. A carência de estudos
demográficos específicos sobre os cânceres associados ao HPV no Brasil e uma
melhor compreensão da patologia tumoral relacionada ao HPV e aos diferentes tipos
deste vírus detectados em tumores no Estado de Goiás motivam a realização do
presente estudo.
2
1. INTRODUÇÃO
Estudos clínicos, biológicos e epidemiológicos demonstram claramente a
relação causal entre a infecção pelo Papilomavirus Humano (HPV) e o câncer
cervical (Bosch et al., 1995; Walboomers et al., 1999; Clifford et al., 2003). De
forma similar, outros tumores genitais como os de vagina e ânus também estão
fortemente associados ao HPV, além de uma fração significativa dos tumores de
vulva, pênis e orofaringe (Munoz et al., 2006; Shukla et al., 2009; ).
Estudos sobre o papel do HPV em outros cânceres genitais, exceto o câncer
cervical, são limitados. As investigações epidemiológicas disponíveis indicam que os
cânceres de vagina e ânus assemelham aos de colo do útero em relação ao papel do
HPV. Em ambos, o DNA do HPV é detectado na grande maioria dos casos. Cânceres
vaginais apresentam o genoma do HPV em 64-91% dos casos, enquanto que nos
cânceres anais, o DNA do HPV é detectado em 88-94% dos casos. Em todos os
tumores anogenitais associados ao HPV, o HPV-16 é o genótipo mais prevalente,
seguido pelos genótipos 18, 31 e 33 (Munoz et al., 2006).
Um relatório recente da INTERNATIONAL AGENCY FOR RESEARCH ON
CANCER (IARC) demonstra evidências suficientes para a associação do HPV-16
com os carcinomas de vulva, vagina, pênis e ânus; evidências limitadas para a
associação do HPV-18 com os carcinomas de vulva, vagina, pênis e ânus; e
evidências também limitadas para a associação entre o HPV-6 e -11 e os carcinomas
de vulva, pênis e ânus (carcinomas verrucosas).
Os Papilomavírus Humanos (HPV) são pequenos vírus de DNA de fita dupla,
que pertencem à família Papilomaviridae, inicialmente, identificados, clonados e
sequenciados a partir de amostras de tumores cervicais humanos. Posteriormente,
foram estabelecidos como importantes agentes etiológicos da carcinogênese cervical.
Estudos demonstram que a infecção causada pelo HPV está associada também ao
câncer de vulva, vagina, ânus, pênis e cabeça e pescoço (Shukla et. al. 2009; Insinga
et. al. 2009; Grulichet et. al. 2010).
Atualmente, mais de 200 tipos de HPV são reconhecidos, sendo que cada um
apresenta tropismo próprio particular para sítios anatômicos específicos. A IARC,
que pertence à Organização Mundial da Saúde (OMS), classifica os tipos de HPV 16
e 18 como os principais tipos carcinogênicos em humanos. Mais recentemente, com
base em dados de 11 estudos realizados em vários países, 15 tipos de alto risco
3
oncogênico foram identificados (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52,56, 58, 59, 68, 73 e
82), sendo os tipos 26, 53 e 66 classificados como de possível alto risco oncogênico,
e tipos 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81 e CP6108 classificadas como de baixo
risco oncogênico (Cerdeira et. al. 2009; Borsatto et. al. 2010).
A infecção por HPV é transmitida principalmente pelo contato sexual, mas
não necessariamente. A maioria das infecções por HPV são transitórias e
assintomáticas, sem manifestações clínicas. Mais de 90% das novas infecções por
HPV, incluindo aquelas com tipos de alto risco oncogênico, desaparecem ou tornamse indetectáveis em dois anos, geralmente se manifestando nos primeiros 6 meses
após a infecção. A infecção persistente com HPV de alto risco oncogênico é o fator
de risco mais importante para o desenvolvimento de lesões precursoras do câncer de
células escamosas (CCEs) e o adenocarcinoma do colo do útero (Hariri et. al. 2011).
O câncer do colo do útero é atualmente o terceiro câncer mais comum entre
as mulheres, com uma estimativa de 530 mil novos casos em 2008 no mundo. E o
segundo câncer mais frequente em mulheres entre 15 e 44 anos de idade. Mais de
85% deles, e mais de 50% do total de óbitos ocorrem em países em desenvolvimento.
Estudos em 22 países, coordenados pelo IARC, demonstram que aproximadamente
99,7% dos cânceres cervicais são associados com tipos de HPV de alto risco
(Cerdeira et. al. 2009).
Nos últimos 15 anos, cresceram também as evidências implicando o HPV
como um importante agente associado a um subconjunto de tumores de células
escamosas (CEC) de cabeça e pescoço, os CEC de cavidade oral e orofaringe.
Inúmeros estudos têm identificado associações estatisticamente significativas entre
os marcadores de HPV (DNA e / ou sorologia) e o CEC de cabeça e pescoço
(Kreimer et al., 2005). Tal como nos cânceres genitais, o HPV-16 é também o
genótipo mais comumente observado nestes tumores (Herrero et al., 2003).
O câncer de vulva corresponde a cerca de 4% dos tumores ginecológicos e o
câncer de vagina equivale a 1 a 2% desses tumores. Ambas as neoplasias são raras e,
frequentemente, coincidem, precedem ou se desenvolvem com o câncer cervical. Em
Goiânia, Goiás, no período de 1996 a 2005, foram diagnosticados 57 novos casos de
câncer de vagina e 96 novos casos de câncer de vulva. Dados estatísticos sobre a
mortalidade relacionada a esses tumores são escassos no Brasil (Campos, 2004;
INCA, 2010). A infecção pelo HPV está associada a uma considerável parcela dos
4
tumores vulvares e vaginais (40 a 60%), tornando esses tumores passíveis de
prevenção primária. O risco de desenvolvimento de doença está associado a
infecções persistentes pelo HPV, sobretudo aquelas que envolvem os tipos de alto
risco oncogênico (Linhares & Villa, 2006; Bragueto & Suzuki, 2008; Drumond et.
al, 2011; Pandhi e Sonthalia, 2011).
Segundo o INCA (2011), em 2012, são estimados 30.140 novos casos de
câncer anal no Brasil, perfazendo 6% do total de neoplasias esperadas este ano no
país. O câncer anal já está incluído entre os 10 tipos de tumores mais incidentes no
mundo. Em Goiás, a estimativa é de 840 novos casos de câncer anal em 2012,
correspondendo a 5% do total de neoplasias esperadas para este estado. Só em
Goiânia, são esperados 310 novos casos de carcinomas anais (INCA). Os tumores de
canal anal são mais frequentes no sexo feminino, enquanto os tumores de margem
anal são mais frequentes no sexo masculino (Torres Neto et al., 2007). Esses tumores
exibem diferentes tipos histológicos, sendo que o carcinoma epidermóide é mais
prevalente, ocorrendo em cerca de 98% dos casos. Os fatores de risco para o câncer
anal incluem dieta pobre em fibras, a prática de sexo anal, o alto consumo de tabaco,
a fístula anal crônica, e as infecções pelo HPV. A porcentagem global de câncer anal
atribuída ao HPV é de 90%, com destaque para os genotipos 16/18, que
correspondem a 92% deste total (Shirish Shukla et al., 2009).
A detecção e genotipagem do HPV são de fundamental importância para
avaliar com precisão o potencial oncogênico, a epidemiologia da infecção em todo o
mundo, bem como, a associação de genótipos de alto risco com o desenvolvimento
de doença. É fundamental também para estabelecer e monitorar a eficácia da vacina
contra o HPV. Tipos específicos de HPV determinam diferentes riscos para a
persistência e a progressão determinada pelo vírus. Há indicações de que a progressão
da infecção pelo HPV16 difere de outros genótipos de HPV cacinogênicos. O HPV
18 é um fator de pior prognóstico em pacinetes com câncer cervical. Assim, a análise
da distribuição dos diferentes tipos do HPV em carcinomas humanos e associação
destes achados com as características clínico-epidemiológicas dos tumores, a
severidade das lesões, o grau de diferenciação, o prognóstico e sobrevida das
pacientes com estas neoplasias constituem-se nas principais metas deste projeto.
A prevalência da infecção pelo HPV e a distribuição dos tipos varia em
diferentes países e, dentro do mesmo país, nas diferentes regiões. Desse modo, a
5
epidemiologia da infecção necessita ser avaliada em cada região, tanto assim que a
IARC promove pesquisas sobre a infecção em todo o mundo (Peyton et al., 2001,
Castellsaqué et al., 2001, Matos et al., 2003).
A carência de estudos demográficos específicos sobre os cânceres associados
ao HPV no Brasil e uma melhor compreensão da patologia tumoral relacionada ao
HPV e aos diferentes tipos deste vírus detectados em tumores no Estado de Goiás
motivam a realização do presente estudo.
2. JUSTIFICATIVAS
A prevalência da infecção pelo HPV e a distribuição dos seus genótipos varia
em diferentes países e dentro do mesmo país. Desse modo, a epidemiologia da
infecção e dos diferentes genótipos necessita ser avaliada em cada região, tanto que o
IARC incentiva e promove pesquisas sobre a infecção em todo o mundo. Os
resultados do presente estudo poderão esclarecer se os marcadores relacionados aos
tipos especificos de HPV são capazes de predizer a história natural dos carcinomas
associados ao HPV, no que diz respeito ao grau de diferenciação, gravidade da lesão e
sobrevida.
Do ponto de vista clínico, a possível identificação de marcadores
relacionados à infecção pelo HPV que permitem predizer o comportamento da
neoplasia será importante para selecionar os indivíduos com tumores associados ao
HPV que devem ser submetidos a condutas mais agressivas ou indicar aqueles nos
quais uma conduta mais conservadora pode ser adotada com mais segurança.
6
3. OBJETIVOS
3.1 Objetivo Geral:

Determinar a prevalência e a distribuição genotípica do HPV nos tumores
associados a este vírus (carcinomas cervicais, de vulva, vagina, anus e de
cabeça e pescoço), diagnosticados no Hospital Araújo Jorge, em Goiânia,
no período de 2003 a 2007.
3.2 Objetivos específicos

Identificar os tipos específicos de HPV detectados nos diferentes tumores
(carcinomas cervicais, de vulva, vagina, anus e de cabeça e pescoço).

Avaliar as possíveis associações entre os achados de detecção e
genotipagem do HPV com os fatores clínico-epidemiológicos dos tumores
avaliados.

Avaliar o impacto dos diferentes genótipos do HPV na severidade, grau de
diferenciação, prognóstico e sobrevida dos pacientes com tumores
associados a este vírus.
7
4. METODOLOGIA
4.1 Tipo de Estudo: Estudo retrospectivo com a utilização dos dados clínicopatológicos colhidos a partir dos prontuários.
4.2 Casuística: O estudo visa determinar a prevalência do genoma do HPV
em grupos de 100 pacientes com cada um dos seguintes tumores: carcinomas
cervicais, de vulva, vagina, ânus e de cabeça e pescoço. Os casos incluídos deverão
ser aqueles diagnosticados no Hospital Araújo Jorge, em Goiânia, que apresentem
dados clínicos e histopatológicos registrados nos respectivos prontuários, blocos de
parafina disponíveis no Serviço de Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge e
seguimento clínico por um período mínimo de cinco anos.
4.3 Seleção de sujeitos: A seleção será feita a partir de uma busca ativa nos
registros informatizados dos exames anátomo-patológicos realizados no Setor de
Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge, com os diagnósticos histopatológicos
já especificados. O período de inclusão deve se iniciar a partir de novembro de 2007,
retrospectivamente, até atingir o número de casos estabelecidos para cada um dos
grupos. Serão revistas as lâminas coradas pela hematoxilina-eosina de cada exame
anátomo-patológico e os casos selecionados de acordo com o diagnóstico histológico
obtido. Os blocos de parafina correspondentes às lâminas revisadas serão
selecionados para as análises moleculares.

Critérios de Inclusão: Pacientes com diagnóstico de carcinomas de colo
de útero, vulva, vagina, ânus e cabeça e pescoço, comprovados histopatologicamente,
que apresentem blocos de parafina disponíveis no Serviço de Anatomia Patológica do
HAJ e seguimento clínico por um período mínimo de cinco anos.

Critérios de Exclusão: Pacientes com diagnóstico de carcinomas de colo
de útero, vulva, vagina, ânus e cabeça e pescoço, sem comprovação histopatológica,
cujos blocos não se encontram no Setor de Anatomia Patológica do HAJ, ou que não
apresentem seguimento clínico por um período mínimo de cinco anos.
Variáveis
Variáveis dependentes
8
Diagnóstico histopatológico de carcinomas de colo de útero, vulva, vagina, ânus e
cabeça e pescoço
Variáveis independentes
Tipo específico de HPV presente nos tumores avaliados
Severidade e grau de diferenciação da lesão especificada
Sobrevida em cinco anos
4.4 Técnicas, Testes e Exames
Extração de DNA: O DNA genômico será isolado de amostras parafinadas de
tumores, de acordo com protocolo já padronizado no laboratório, utilizando o kit
comercial Wizard distribuído pela Promega.
Detecção e Genotipagem do HPV: A detecção e genotipagem do DNA do HPV
será realizada com o Kit comercial INNO-LiPA HPV Genotyping Extra
(Innogenetics), que é um line probe assay baseado no princípio de hibridização
reversa, projetado para identificação de 28 diferentes genótipos do vírus do papiloma
humano (HPV) através da detecção de sequências específicas na região L1 do
genoma do HPV.
O ensaio utiliza primers de SPF10 definidos para a amplificação
altamente sensível da maioria dos genótipos clinicamente relevantes do HPV. Além
disso, um conjunto de primers utilizado para a amplificação do gene HLA-DPB1
humanoé adicionado a fim de monitorar a qualidade da amostra e extração, bem
como a adição de UNG à mistura de amplificação como uma medida preventiva de
contaminação. O ensaio cobre todos os genótipos conhecidos atualmente, HPV de
alto risco e prováveis genótipos de alto risco do HPV (16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45,
51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68 , 73, 82), bem como um número de genótipos de HPV
de baixo risco (6, 11, 40, 43, 44, 54, 70) e alguns tipos adicionais (69, 71, 74). A
detecção e a genotipagem do HPV serão realizadas pelo Laboratório de Transplante
de Medula Óssea da Associação de Combate ao Câncer em Goiás e Laboratório de
Diversidade Genética da PUC-Goiás. Os tipos do HPV serão classificados em baixo
e alto risco oncogênico com base no padrão filogenético, conforme a classificação
proposta pela The International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV).
9
4.5 Análises Estatísticas: Os dados serão codificados e armazenados no
programa EpiData. Para análise, os arquivos serão transferidos para os aplicativos de
análise estatística Epi Info na versão 6.0 e Statistical Package for Social Sciences.
Será determinada a prevalência da infecção, do tipo de HPV e da possível infecção
por múltiplos tipos desse vírus simultaneamente em cada grupo histológico. Análise
de regressão logística não condicional será realizada para avaliar a associação entre as
infecções por diferentes tipos virais, severidade e grau de diferenciação das
neoplasias. A sobrevida em cinco anos também será avaliada em relação ao tipo de
HPV presente na lesão.
4.5 Aspectos éticos:
Serão respeitados os princípios enunciados na Declaração de Helsinque31,
mantendo-se em sigilo a identidade das pacientes, cujos dados serão identificados
apenas pelo número de registro no projeto. A princípio, as análises realizadas neste
estudo não implicarão em quaisquer modificações no tratamento da doença e em
momento algum serão introduzidas condutas adicionais. Não foram previstos
quaisquer riscos ou transtornos às pacientes, pois toda a pesquisa será realizada
através de prontuários e manuseio dos respectivos blocos de parafina. Por ser um
estudo retrospectivo e não havendo possibilidade de contatar muitas das mulheres
tratadas e sendo uma pesquisa isenta de risco, considerou-se que a assinatura de um
termo de consentimento não seria aplicável a este projeto. Entretanto, se ocorrer
alguma
descoberta
que
possa
modificar
positivamente
o
tratamento
e
acompanhamento das pacientes, estas poderão ser localizadas e informadas a respeito
nos casos em que o Comitê de Ética em Pesquisa da HAJ julgar procedentes.
10
5. CRONOGRAMA
O projeto foi sendo submetido ao Comitê de Ética da ACCG em março de
2013 e as atividades de pesquisa tiveram início após sua aprovação. Em agosto de
2012, dois subprojetos (HPV em câncer anal e HPV em câncer cervical) foram
submetidos ao Edital Universal 03/2012 da FAPEG e ambos foram aprovados. A
verba destinada ao desenvolvimento dos projetos foi liberada em dezembro de 2013.
Em março de 2014, foi solicitada a prorrogação do projeto junto à PROPE,
que concedeu o pedido, prorrogando o projeto por mais dois anos. Assim, um novo
cronograma é apresentado a seguir.
11
NOVO CRONOGRAMA – 2014-1
Revisão
Bibliográfica
sobre o tema
Submissão do
projeto à FAPEG
para obtenção de
financiamento
CH 05/2012
Resultado da
aprovação e
contratação do
financiamento da
FAPEG
Liberação da
Verba de
financiamento do
projeto
Submissão do
Projeto ao CEP
do Hospital
Araújo Jorge
Levantamento
dos casos de
tumores
associados ao
HPV partir dos
registros do SAP
Levantamento
dos blocos de
parafina a serem
avaliados e
preparação dos
cortes
histológicos
Revisão de
prontuários para
coleta de dados
clínicos
Extração de
DNA das
amostras
tumorais
Detecção e
Genotipagem do
HPV
Tratamento
estatístico dos
resultados
obtidos
Redação de
artigo científico
referente aos
resultados
obtidos
Redação e defesa
da dissertações
de mestrado
Jan-fev/2016
Nov-dez/2015
Set-out/2015
Jul-ago/2015
Mai-jun/2015
Mar-abr/2015
Jan-fev/2015
Nov-dez/2014
Set-out/2014
Jul-ago/2014
Mai-jun/2014
Mar-abr/2014
Jan-fev/2014
Nov-dez/2013
Set-out/2013
Jul-ago/2013
Mai-jun/2013
Mar-abr/2013
Jan-fev/2013
Nov-dez/2012
Set-out/2012
Jul-ago/2012
Mai-jun/2012
Mar-abr/2012
Atividade/Meses
X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
X
X X
X
X X
X X X X X X X X
X X X X X X
X X X X X X X X X X
X X X X X X X X X X
X X
X X
X
X
X
X X X
X X
X
X
X X
X X
X
X
X
X X
X
X
X X
6. PLANO DE TRABALHO (REFORMULADO)
Houve atraso no início do projeto em decorrência do atraso na contratação e
liberação de verba pela FAPEG.










1º Semestre de 2012:
Revisão bibliográfica sobre o tema.
Submissão do projeto à FAPEG (Chama Pública 05/2012) para obtenção de
financiamento.
Solicitação de bolsas de iniciação científica e inserção de alunos de mestrado
no projeto
Preparação de fichas de coleta de dados clínicos.
Treinamento dos alunos em técnicas moleculares.
2º Semestre de 2012:
Revisão bibliográfica sobre o tema.
Aprovação do projeto pela FAPEG (Chama Pública 05/2012) para liberação
do financiamento.
Orientação de alunos de iniciação científica (quatro) e alunos de mestrado no
projeto (quatro)
Orientação de duas alunas de Graduação (TCC) do curso de Medicina.
Treinamento dos alunos em técnicas moleculares.
1º Semestre de 2013:





Revisão bibliográfica sobre o tema.
Contratação do projeto pela FAPEG (Chama Pública 05/2012) para liberação
do financiamento.
Submissão e aprovação do projeto n Comitê de Ética em Pesquisa da
Associação de Combate ao Câncer em Goiás.
Orientação de alunos de iniciação científica (quatro) e alunos de mestrado no
projeto (quatro).
Orientação de duas alunas de Graduação (TCC) do curso de Medicina.
Levantamento de casos de tumores associados ao HPV a partir do setor de
Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge.
Revisão de prontuários dos pacientes com tumores associados ao HPV.
Treinamento dos alunos em técnicas moleculares.
Elaboração e apresentação de relatórios parciais do projeto.

2º Semestre de 2013:

Revisão bibliográfica sobre o tema.




13


Liberação da verba do projeto pela FAPEG (Chama Pública 05/2012) em
dezembro de 2013.
Início da aquisição do material de consumo destinado ao projeto.
Orientação de alunos de iniciação científica (quatro) e alunos de mestrado no
projeto (quatro).
Conclusão da orientação de duas alunas de Graduação (TCC) do curso de
Medicina.
Levantamento de casos de tumores associados ao HPV a partir do setor de
Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge.
Revisão de prontuários dos pacientes com tumores associados ao HPV.
Início da realização dos ensaios de extração de DNA e detecção de HPV.
Análise estatística dos resultados parciais do projeto.
Apresentação de trabalhos contendo os resultados parciais da pesquisa em
eventos científicos.
Elaboração e apresentação de relatórios parciais do projeto.

1º Semestre de 2014:


Revisão bibliográfica sobre o tema.
Aquisição do material de consumo destinado ao projeto com processo de
importação dos kits de genotipagem de HPV.
Orientação de alunos de iniciação científica (quatro) e alunos de mestrado no
projeto (quatro). Inclusão de mais uma aluna de mestrado no projeto.
Defesa de dois trabalhos de mestrado junto ao MGENE em junho/2014
(Detecção e genotipagem do HPV 16 e 18 em carcinomas de cavidade oral e
orofaringe e Detecção e genotipagem do HPV 16 e 18 em carcinomas de
vulva e de vagina).
Elaboração e submissão de dois artigos científicos contendo os resultados
parciais da pesquisa.
Publicação de artigo relativo à orientação do TCC das alunas do curso de
Medicina (Clinicopathologial aspects and prevalence od Human
Papillomavirus in anal câncer, JOURNAL OF COLOPROCTOLOGY, 2014.
http://dx.doi.org/10.1016/j.jcol.2014.03.004).
Complementação do levantamento de casos de tumores associados ao HPV a
partir do setor de Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge.
Complementação da revisão de prontuários dos pacientes com tumores
associados ao HPV.
Solicitação de novas bolsas de Iniciação Científica.
Realização dos ensaios de extração de DNA e detecção de HPV.
Início dos ensaios de genotipagem de HPV nos tumores associados ao vírus.
Análise estatística dos resultados parciais do projeto.
Elaboração e apresentação de relatórios parciais do projeto.


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
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



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
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14

2º Semestre de 2014:





Revisão bibliográfica sobre o tema.
Aquisição do material de consumo destinado ao projeto.
Orientação de alunos de iniciação científica (quatro) e alunos de mestrado no
projeto (três).
Defesa de dois trabalhos de mestrado em agosto/2014 (Detecção e
genotipagem do HPV 16 e 18 em carcinomas de colo uterino e Distribuição
genotípica de HPV e análise de marcadores associados à infecção pelo HPV
em carcinomas de vulva e de vagina).
Elaboração e submissão de dois artigos científicos contendo os resultados
parciais da pesquisa.
Publicação de dois artigos relativos aos mestrados defendidos em 2014-1.
Complementação do levantamento de casos de tumores associados ao HPV a
partir do setor de Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge.
Complementação da revisão de prontuários dos pacientes com tumores
associados ao HPV.
Realização dos ensaios de extração de DNA e detecção de HPV.
Realização dos ensaios de genotipagem de HPV nos tumores associados ao
vírus.
Análise estatística dos resultados parciais do projeto.
Elaboração e apresentação de relatórios parciais do projeto.

1º Semestre de 2015:




Revisão bibliográfica sobre o tema.
Conclusão da aquisição do material de consumo destinado ao projeto.
Orientação de alunos de iniciação científica (quatro) e uma aluna de mestrado
no projeto.
Publicação de dois artigos relativos aos mestrados defendidos em 2014-2.
Complementação do levantamento de casos de tumores associados ao HPV a
partir do setor de Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge.
Complementação da revisão de prontuários dos pacientes com tumores
associados ao HPV.
Repetição e conclusão dos ensaios de extração de DNA e detecção de HPV.
Realização dos ensaios de genotipagem de HPV nos tumores associados ao
vírus.
Elaboração e apresentação de relatórios parciais do projeto.

2º Semestre de 2015:


Revisão bibliográfica sobre o tema.
Prestação de contas e elaboração do relatório final do projeto junto à FAPEG.












15




Conclusão dos ensaios de genotipagem de HPV nos tumores associados ao
vírus.
Análise estatística dos resultados finais do projeto.
Conclusão da quinta dissertação de mestrado do projeto e elaboração do
artigo científico correspondente.
Elaboração e apresentação de relatórios parciais do projeto.


1º Semestre de 2016:

Defesa da quinta dissertação de mestrado do projeto.

Preparação e submissão do artigo científico correspondente.

Elaboração do relatório final do projeto.
16
7. MAPA DE COMPOSIÇÃO DE GASTOS DO PROJETO DE
PESQUISA
a) Gastos previstos com material de consumo:
Estimativa de custo
Quantidade / Discriminação
Unitário
Total
03 caixas - Luvas de látex livres de talco
R$ 45,00
R$ 135,00
02 Ponteiras plásticas para micropipetas, com filtro, estéreis –
R$170,00
R$ 340,00
R$ 195,00
R$ 390,00
04 Microtubos de centrifuga estéreis-1500l (pcte c/500)
R$ 45,00
R$ 180,00
04 Microtubos de centrifuga estéreis- 500l (pcte c/500)
R$ 90,00
R$ 360,00
02 Microtubos para PCR estéreis- 200l (pcte c/1000)
R$ 140,00
R$ 280,00
01 kg Tris-Base - Invitrogen
R$ 350,00
R$ 350,00
04 Proteinase K – (100 mg) - Invitrogen
R$ 586,00
R$ 2.344,00
10 Kit INNO-LIPA HPV Genotyping extra e
R$ 2.400,00
R$ 24.000,00
01 100 bp DNA ladder 250 - Invitrogen
R$ 436,00
R$ 436,00
01 Acrilamida (1000 g) - Invitrogen
R$ 650,00
R$ 650,00
01 N-N-Metilenobisacrilamida (100g)- Invitrogen
R$ 695,00
R$ 695,00
01 TEMED (25 ml) - Invitrogen
R$360,00
R$ 360,00
01 Acetato de Sódio - 1Kg
R$ 95,00
R$ 95,00
01 Kit Comercial Wizard da Promega para extração de DNA
R$ 2.460,00
R$ 2.460,00
01 Papel protetor de bancada 51 x 91 cm
R$ 215 ,00
R$ 215 ,00
20-200l (pcte /1000)
02 Ponteiras plásticas para micropipetas, com filtro, estéreis –
1000l (pcte /1000)
INNO-LiPA HPVGenotyping Extra Amp
Sub-total R$
R$ 33.290,00
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