AVALIAÇÃO DOS DANOS DE DNA EM LEUCÓCITOS MONO E

AVALIAÇÃO DOS DANOS DE DNA EM LEUCÓCITOS MONO E
POLIMORFONUCLEARES DE EQÜINOS DA RAÇA ÁRABE SUBMETIDOS AO
EXERCÍCIO PROGRESSIVO EM ESTEIRA E SUPLEMENTADOS COM VITAMINA
E (DADOS PRELIMINARES). EVALUATION OF DNA BREAKS IN MONO AND
POLYMORPHONUCLEAR LEUCOCYTES IN ARABIAN HORSES SUBMITTED TO
EXERCISE ON TREADMILL AND VITAMIN E SUPPLEMENTATION
(PRELIMINARY DATA)
Silveira, V.F., Machado, L.P., Saito, M.E., Yonezawa, L.A., Watanabe, M.J., Braz,
M.G., Camargo, E.A., Thomassian, A., Rocha, N.S., Salvadori, D.M.F., Kohayagawa,
A. Departamentos de Clínica Veterinária, Cirurgia e Anestesiologia Veterinária da
FMVZ e Departamento de Patologia da FM da UNESP - Campus de Botucatu, e
Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade do Estado de Santa Catarina.
O exercício induz a liberação de radicais livres que são responsáveis por danos
oxidativos e lesão de DNA, afetando a integridade celular. O objetivo foi avaliar o
efeito do exercício e da vitamina E sob o DNA de leucócitos mono (MON) e
polimorfonucleares (PMN) do sangue periférico de eqüinos Árabes. Os eqüinos
foram divididos em dois grupos: controle (GC=3) e suplementado com vitamina E
(GVE=2), (1000UI/animal/dia) e submetidos ao treinamento e a uma prova de
exercício progressivo em esteira inclinada (+7%) com velocidades crescentes até a
exaustão. Foram colhidos 10mL de sangue, antes do exercício, 8,0m/s, 9,0m/s,
imediatamente após, 12h, 24h, 48h, 72h, 96h e 120h. A papa de leucócitos obtida foi
submetida separação simultânea por gradientes descontínuos de densidade
histopaque d=1,077 e d=1,119, a 500g por 30 minutos. As células MON e PMN
foram separadas e lavadas com PBS e a viabilidade foi verificada com Azul Tripan a
0,2%. Em seguida, as amostras de MON e PMN foram misturadas a agarose a 0,5%
LPM a 37ºC e dispensadas em uma lâmina com agarose a 1,5% PFN. Após serem
submetidas à solução de lise a 4ºC, estas foram lavadas com PBS e submetidas à
eletroforese por 40 minutos a 25V em 300mA a 4ºC em um tampão alcalino por 20
minutos e neutralizadas em solução tampão por 15 minutos e fixadas em etanol. A
migração dos fragmentos de DNA foi detectada por microscopia de fluorescência
(400x), utilizando analisador de imagens Comet Assay II. Para cada lâmina foram
contadas 50 células e utilizado o tail moment. Observou-se discreto aumento de
lesão de DNA apenas no GC às 96h para MON e às 12h para PMN com rápido
retorno aos valores basais, não havendo diferença nos animais suplementados.
Possivelmente, o exercício induz a produção de radicais livres e estes lesionam
leucócitos do sangue periférico e a suplementação com vitamina E possui um efeito
reparador dos danos oxidativos. Apoio: FAPESP