Noções Básicas em Microscopia Óptica

11/11/2013
Noções básicas em Microscopia Óptica
Disciplina: Microbiologia Geral
Noções Básicas em
Microscopia Óptica
Noções básicas em Microscopia Óptica
• Instrumentos de microscopia
• Comerciante alemão e cientista Antony Van Leeuwenhoek
(século XVII) foi o primeiro a observar microrganismos através
de lentes de aumento
Localização da amostra
Lentes
Noções básicas em Microscopia Óptica
• Como os microrganismos e seus componentes são
muito pequenos eles são medidos em unidades ainda
menores que não são familiares na nossa vida diária.
• Ex:
• Um Micrômetro = 1 um = 0,000001 m (10-6m).
• Micro: indica que a unidade após ele deve ser dividida
por 1 milhão ou 106
• Um Nanômetro = 1 nm = 0,000000001 m (10-9m).
• Os microrganismos são pequenos demais para serem
vistos a olho nú;
• Deve-se observá-los através de um microscópio.
MICROSCÓPIO
Latim
Micro
Pequeno
Grego
Scopos
Olhar
Noções básicas em Microscopia Óptica
• Como selecionar, medir e contar os espécimes que iremos
estudar?
• Como utilizar o sistema métrico para medir os
microrganismos
• Unidades de Medida
• A unidade-padrão de comprimento no sistema métrico é o
Metro (m)
– Neste sistema as unidades estão relacionadas uma às
outras por fatores de 10:
1metro = 10 decímetros (dm), ou 100 centímetros (cm)
ou 1000 milímetros (mm)
Dimensões dos Microrganismos
• Os procariotos (bactérias e arqueas):
– Variam entre 300 nm e 1 um.
• Os eucariotos (fungos, algas e protozoários)
constituem o grupo mais heterogêneo:
– Variam entre 10 um a 100 um
• Os vírus, cuja a organização estrutural não
corresponde a uma célula:
– Variam de 27 nm até 300 nm de diâmetro
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Dimensões dos
Microrganismos
• Olho nu, enxerga
estruturas
com
diâmetro de 0,2 nm
• Desse
modo,
é
necessário
a
utilização de um
microscópio para a
visualização
de
microrganismos
Noções básicas em Microscopia Óptica
• Microscopia óptica: Uso de qualquer
microscópio que use luz para observar
espécimes
• Microscópio óptico Composto (MO):
• Tem uma série de lentes e utiliza a luz visível
como fonte de iluminação
• A luz passa da base do microscópio através do
espécime e alcança seu olho através da
TRANSILUMINAÇÃO
Base ou Pé
• É a peça que liga a base até a
parte superior do microscópio e
onde se deve segurar o
microscópio
para
ser
transportado.
Braço ou coluna
•É a peça que liga a base
até a parte superior do
microscópio e onde se
deve
segurar
o
microscópio
para
ser
transportado
Oculares
Aumenta a imagem do objeto após o
aumento já proporcionado pela
objetiva.
É através desta lente que o
observador vê a imagem do objeto
(por isso o nome ocular, uma vez que
o olho do observador está colocado
a frente dela
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Canhão
Parte mais superior do microscópio,
contém um conjunto de espelhos
que projetam a imagem em direção
às oculares nele encaixadas
Objetivas
•São lentes que projetam uma
imagem aumentada do objeto
nas oculares.
•A objetiva de 100x é também
chamada objetiva de imersão
(utilizada com óleo especial,
que permite maior refração da
luz para dentro da objetiva,
corrigindo
a
pouca
luminosidade nas observações
feitas em grandes aumentos).
• Após o uso, o óleo é removido
com xilol, éter ou benzina,
embebido em algodão.
Condensador
•Situado entre a platina e a
base, converge os raios
luminosos
provindos
da
lâmpada e projeta-os como um
cone de luz sobre o material
que está sendo examinado.
Revólver
Peça encontrada abaixo do
canhão na qual se inserem
várias lentes objetivas
Mesa ou Platina
•É uma placa de metal com um
orifício no centro, por onde
passam os raios luminosos.
•O objeto que vai ser
observado é colocado sobre
uma lâmina de vidro e esta,
sobre a platina, exatamente em
cima do orifício.
Diafragma
•Fica acima do receptáculo do
filtro, se liga a uma alavanca
que permite sua abertura ou
fechamento,
levando
ao
controle da passagem total ou
parcial da luz.
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Fonte de luz
•Normalmente uma lâmpada
ou, em modelos mais antigos,
um espelho, que se apóia na
base do microscópio.
• Uma série de lentes finamente
polidas
forma
uma imagem
claramente focada, que é muitas
vezes maior que a amostra em si.
• Ampliação é obtida:
– Raios
de
luz
de
um
“iluminador”, a fonte de luz;
– São passados através do
“condensador” que possuem
lentes que dirigem os raios de
luz através da amostra;
– Os raios de luz passam para as
“lentes objetiva”, que são
aquelas
que
estão
mais
próximas da amostra;
– A imagem da amostra é
novamente
ampliada
pela
“lente ocular”
Parafusos Macrométrico e
micrométrico
•O
macrométrico
permite
grandes avanços ou recuos da
platina em direção à objetiva.
•O
micrométrico
permite
pequenos avanços ou recuos.
•Esse movimento da platina
leva à focalização do material
observado
em
diferentes
aumentos.
Noções básicas em Microscopia Óptica
• O limite de resolução M.O: aproximadamente 0,5 um
• Aumento final: até 1200 vezes dependendo do tipo de
lentes e condensadores
• Entretanto, além de ampliar é preciso resolver
(distinguir) pequenos detalhes de uma estrutura
• Resolução: Capacidade que um sistema óptico tem de
distinguir objetos separados por pequenas distâncias
• Limite de resolução: A distância mínima entre dois
objetos a partir da qual estes podem ser vistos como
entidades individualizadas
• Poder de resolução: É uma grandeza inversamente
proporcional ao limite de resolução. Quanto menor o
limite de resolução do microscópio, maior será o seu
poder de resolução.
Como proceder:
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Cuidados no uso do microscópio Óptico
• a) Nunca forçá-lo. Todas as conexões devem funcionar
suavemente. Caso contrário, chame o professor;
• b) As lentes da objetiva nunca devem tocar a lâmina.
Portanto, nunca focalizar abaixando o canhão com o
parafuso macrométrico olhando para a ocular;
• c) Não tocar as lentes. Se estiverem sujas, limpe-as com
algodão ou lenço de papel que serão fornecidos;
• d) Limpar sempre a objetiva de imersão após o uso;
• e) Não esquecer a lâmina no microscópio após o uso;
• f) Manter a platina sempre limpa e seca. Limpa-la com o
guardanapo apropriado.
Cuidados no uso do microscópio Óptico
• g) Não inclinar o microscópio, pois neste curso quase
todas as técnicas empregadas exigem que a lâmina seja
examinada sempre na posição horizontal;
• h) Quando o microscópio não estiver em uso, deverá ser
coberto;
• i) Habitue-se não deixar a fonte de luz acesa quando
não estiver utilizando o microscópio.
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