Tema Livre

ISBN: 978-85-60167-01-02
Tema Livre
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DETECÇÃO E TIPAGEM DO VÍRUS DA DENGUE POR PCR EM TEMPO REAL
SANTANA, R. A. F.; SILBERT, S.; GRAÇA, C. H. N.; OYAKAWA, L.; PINHO, J. R. R.
Hospital Israelita Albert Einstein
Objetivos: Detectar e tipar o vírus da dengue em pacientes atendidos em um Hospital privado
no Estado de São Paulo, com suspeita clínica para esta infecção.
Casuística e Métodos: Foram analisadas 156 amostras de soro enviadas ao laboratório
clínico, no período de janeiro a maio de 2007. Todas as amostras foram testadas por PCR em
tempo real, seguindo o protocolo previamente descrito por Shu e cols (2003). Os primers
utilizados para detecção compreendem uma região altamente conservada na região do Core
do genoma do vírus da Dengue. Os primers específicos para tipagem também foram
selecionados desta região. O RNA viral foi extraído com o kit QIAmp MinElute Vírus Vacuum
(QIAGEN, Hilden, Germany). A PCR em tempo real foi realizada utilizando o kit Super Script III
Platinium SyBR Green One Step qRT-PCR (Invitrogen do Brasil) e o sistema ABI 7500 Real
Time PCR (Applied Biosystems, CA, EUA). Após a amplificação da PCR, a curva de melting foi
analisada para determinação da temperatura de melting (Tm), que é diferente para cada
subtipo do vírus da dengue.
Resultados e Conclusão: Entre as 156 amostras testadas, 134 foram negativas para o vírus
da dengue. Das 22 amostras positivas, 21 foram tipadas como dengue tipo 3 e apenas uma
como dengue tipo 2. Foi utilizada a técnica de seqüenciamento para confirmação do vírus da
dengue tipo 2. O tempo total para realização da PCR (detecção e tipagem do vírus) foi de 12h.
Assim sendo, concluímos que a PCR em tempo real é uma excelente ferramenta para o
diagnóstico rápido da dengue, e que a tipagem realizada com primers específicos permite a
identificação não só do vírus da dengue tipo 3, atualmente circulante, como o do vírus da
dengue tipo 2, pouco encontrado em nosso meio.