Caracterização e localização de seqüências de DNA repetitivo em

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Caracterização e localização de seqüências de DNA
repetitivo em Omophoita octoguttata (Coleoptera,
Chrysomelidae)
Tasior, D1; Goll, LG1; Nogaroto, V1; Vicari, MR1; Artoni, RF1; Almeida, MC de1
Universidade Estadual de Ponta Grossa, Departamento de Biologia Estrutural, Molecular e Genética - Ponta Grossa – PR
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Palavras-chave: DNA repetitivo, Omophoita octoguttata, FISH, cromossomos sexuais gigantes, PCR.
Devido a grande variabilidade de sistemas cromossômicos de determinação sexual e aos diferentes tipos de associação entre os cromossomos, os Coleoptera constituem um importante material para estudos citogenéticos. Este
trabalho tem como objetivo realizar o isolamento, a caracterização, a localização de famílias de DNA satélite nos
cromossomos de O. octoguttata (Alticinae), por meio da cinética de reassociação de sequênciais de DNA satélite
específicas. Para extração de DNA foi utilizado o protocolo de MURRAY E THOMPSON (1980) com algumas modificações. A prospecção de DNA repetitivo foi baseada na técnica de Cot-1 segundo Wei et al. (2005). Os fragmentos de interesse foram clonados no plasmídeo pMOS, utilizando-se o kit de purificação e clonagem, seguindo as
instruções dos fabricantes. Os clones selecionados foram seqüenciados e a identificação das possíveis homologias
foi realizada através do software BLAST (NCBI). Para a hibridação in situ fluorescente (FISH) as sondas foram marcadas ou pela técnica de nick translation ou por reação em cadeia da polimerase (PCR) marcado com biotina ou
digoxigenina. Posteriormente, o sinal foi detectado usando FITC e amplificado por antiavidina-biotinilada ou detectado por rodamina. A amplificação por PCR dos clones recombinantes contendo as seqüências de DNA obtidas
pela técnica de Cot-1, gerou fragmentos entre 200 a 1000 pb. Posteriormente, 5 clones de diferentes tamanhos foram
selecionados e seqüenciados. As seqüências obtidas foram submetidas ao software BLAST sendo identificado similaridade dessas sequências com o cromossomo Y e regiões centroméricas de Drosophila melanogaster, retrotransposon de Zaprionus indianus e Drosophila teissieri. A hibridação in situ com a sonda de Cot-1 total mostrou blocos
de marcações centroméricas em todos os autossomos e algumas marcações ao longo dos cromossomos sexuais.
No entanto, a FISH com as sondas obtidas a partir da amplificação de cada clone não mostrou marcação evidente
ao longo dos cromossomos. Possivelmente, essas seqüências sejam DNA de cópia simples ou pequenas repetições,
impossibilitando a detecção do sinal. Posteriormente, foram realizadas novas hibridações com outros clones ainda
não seqüenciados e obtiveram-se marcações em núcleos interfásicos e marcações espalhadas por toda a extenção
dos cromossomos sexuais e também em regiões centroméricas de alguns autossomos, o padrão das marcações obtidas, sugere a possibilidade de sequencias transponiveis. Elementos transponíveis são identificados como principal
componente de DNA satélite em certas famílias de insetos, contribuindo em alguns casos à formação e propagação
de DNA sat. A literatura sobre DNA repetitivo em insetos, mostra que o conhecimento deste tipo de DNA em insetos
é ainda fragmentado e insuficiente, desta forma novas estratégias para amplificação do sinal e/ou análise de novos
clones poderão fornecer melhores padrões de sinal e localização destas ou outras seqüências, possibilitando a compreensão sobre as funcões e a evolução de sequencias de DNA repetitivo em Alticinae (Coleoptera, Chrysomelidae).
Apoio: CNPq e Fundação Araucária