uma DNA polimerase de síntese translesão?

54º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética • 16 a 19 de setembro de 2008
Bahia Othon Palace Hotel • Salvador • BA • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
Caracterização da proteína TcRev1-like:
uma DNA polimerase de síntese translesão?
Vieira-da-Rocha, JP1; Franco, GR1; Macedo, AM1; Pena, SDJ1; Teixeira, SMR1; Machado, CR1
Departamento de Bioquímica e Imunologia, Instituto de Ciências Biológicas (ICB), Universidade Federal de Minas Gerais
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Palavras-chave: Rev1, síntese translesão, Trypanosoma cruzi
O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas, possui uma estrutura populacional complexa. Esse
parasito apresenta uma grande variabilidade genética que foi confirmada por vários estudos baseados em diferentes
marcadores moleculares. A geração dessa variabilidade pode estar associada aos processos de replicação do DNA por
DNA polimerases de baixa fidelidade. Esse grupo de DNA polimerases é caracterizado principalmente por perder a
atividade revisora 3’-5’ e/ou por possuir um sítio catalítico menos estringente, permitindo a entrada de formas distorcidas
de DNA. Dentro dessa classe de enzimas, a DNA polimerase Rev1, pertencente à Família Y, é caracterizada por ser
altamente especializada em incorporar C frente a G e sítios abásicos, num mecanismo de síntese de DNA que utiliza um
molde protéico. Além disso, essa proteína está associada aos processos de mutagênese celular, induzidos pelos diversos
tipos de lesões que ocorrem no material genético. Dentre esses eventos mutagênicos, a Rev1 participa principalmente
da via de síntese translesão, ao recrutar outras DNA polimerases especializadas para os sítios de dano no DNA, não
exercendo, dessa forma, a sua função de desoxicitidiltransferase. Nesse contexto, iniciamos um projeto que pretende
caracterizar in vitro e in vivo a TcRev1-like, para que possamos entender a função dessa proteína encontrada no T. cruzi.
A sua seqüência deduzida de aminoácidos apresenta os cinco motivos específicos das DNA polimerases da Família Y,
juntamente com uma região C-terminal, que contém um possível sítio de interação com outras proteínas envolvidas
na síntese translesão. Além disso, quase todos os aminoácidos importantes para a incorporação específica de C frente
a G, incluindo a arginina 324 utilizada para parear-se com os dCMPs, estão presentes no sítio catalítico dessa suposta
desoxicitidiltransferase. Entretanto, diferentemente da Rev1 de outros organisnos, a TcRev1-like não possui o domínio
BRCT, nem alguns dos aminoácidos específicos que são responsáveis em deslocar o molde G para fora da dupla-hélice
(W417 e M686) durante a síntese de DNA. Estudos preliminares realizados por nosso grupo, utilizando a proteína
recombinante TcRev1-like, revelaram que essa enzima apresenta atividade de DNA polimerase. No entanto, essa DNA
polimerase não possui as propriedades de uma desoxicitidiltransferase, ou seja, ela não é específica em incorporar apenas
o nucleotídeo desoxicitidilato (dCMP). Além disso, a cepa de T. cruzi que superexpressa a TcRev1-like não apresenta
um fenótipo diferente da cepa selvagem, em relação à resistência ou sensibilidade a agentes genotóxicos. Através de
experimentos de microscopia confocal, determinamos que a proteína TcRev1-like em fusão com GFP apresenta
localização nuclear, indicando que essa polimerase participa apenas do metabolismo do DNA nuclear do T. cruzi, não
exercendo, portanto, um papel na maquinaria de manutenção do DNA do cinetoplasto.
Apoio financeiro – CNPq, FAPEMIG, Howard Huges Medical Institute.
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