Contagem relativa dos leucócitos
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LEUCÓCITOS leukos = branco Valores de referência em Hematologia (Williams Hematology, 7th Ed., 2006) Valores de referência em Hematologia (Williams Hematology, 7th Ed., 2006) Valores de referência em Hematologia (Wintrobe Hematologia Clínica, 9ª Ed., 1998) HEMATOPOESE Compartimentos dos leucócitos • Medula óssea • Sangue periférico • Tecidos Leucograma avalia os leucócitos do sangue periférico Compartimentos dos leucócitos Fonte: Hoffbrand et al, 2004 – Fundamentos de Hematologia Leucograma • Contagem dos leucócitos totais Câmara de contagem de células Automação • Contagem diferencial relativa Contagem de no mínimo 100 leucócitos diferenciando pelo tipo de leucócito (um a um). • Contagem diferencial absoluta Com o número de leucócitos totais e as porcentagens de cada célula obtidas na contagem diferencial é possível calcular o número absoluto de cada um dos leucócitos Leucograma Contagem diferencial relativa • • Contagem de no mínimo 100 leucócitos diferenciando pelo tipo de células Se houver leucocitose (contagem global de leucócitos > 10 . 103/uL) deve-se contar na contagem diferencial maior número de células (200 ou 500). Para identificar cada um dos leucócito, utilize os seguintes critérios morfológicos: Tamanho da célula Razão núcleo/citoplasma Características do citoplasma (cor, presença ou ausência de grânulos, cor e tamanho dos grânulos) Características do núcleo (forma, cor, padrão de cromatina, presença e ausência de nucléolo) Os leucócitos podem ser classificados Granulações no citoplasma • Granulócitos (neutrófilos, eosinófilos e basófilos) • Agranulócitos (monócitos e linfócitos) Segmentação do núcleo • Polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos e basófilos) • Mononucleares (monócitos e linfócitos) De acordo com a função • Fagócitos (neutrófilos, eosinófilos, basófilos e monócitos) • Imunócitos (linfócitos) LEUCÓCITOS Granulócitos NEUTRÓFILOS EOSINÓFILOS BASÓFILOS Agranulócitos LINFÓCITOS MONÓCITOS Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula. Campo muito grosso Campo adequado Campo muito fino Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula. Campo muito grosso Campo adequado Campo muito fino Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula. A B A A – Cerca de 25 células B- Cerca de 50 células Contagem relativa dos leucócitos As células não tem distribuição uniforme na extensão sanguínea Cabeça Corpo Cauda Os linfócitos predominam no meio da extensão Neutrófilos e monócitos predominam nas margens e na cauda LEUCÓCITOS Monócito Linfócito Basófilo Eosinófilo Neutrófilo LEUCOGRAMA Avalia alterações quantitativas e morfológicas dos leucócitos Contagem dos leucócitos totais Valores de referência: 5,0 a 11,0 x 103/uL (ou 109/L) ou 4,0 a 11,0 x 103/uL - Leucocitose = leucócitos totais > 11,0 x 103/uL - Leucopenia = leucócitos totais < 4,0 x 103/uL Contagem de leucócitos totais: 9,0 x 103/L Exemplo Células % Número absoluto ( /L) Neutrófilos bastonetes 02 Neutrófilos segmentados 57 Eosinófilos 03 Basófilos 01 Linfócitos 31 Monócitos 06 total 100 Contagem de leucócitos totais: 9,0 x 103/L Neutrófilos bastonetes 9.000 -------------------------- 100% x -------------------------- 2% X= 180 neutrófilos bastonetes/ L Neutrófilos segmentados 9.000 -------------------------- 100% x -------------------------- 57% X= 5.130 neutrófilos segmentados/ L Fórmula leucocitária relativa e absoluta Células % Número absoluto /L de sangue Neutrófilos bastonetes 02 180 Neutrófilos segmentados 57 5.130 Eosinófilos 03 270 Basófilos 01 90 Linfócitos 31 2.790 Monócitos 06 540 total 100 9.000 Neutrófilos Neutrófilos • É o leucócito mais frequente no sangue periférico do adulto • Apresenta vários estágios de maturação (mieloblastos, promielócitos, mielócitos, metamielócitos, neutrófilos bastonetes e neutrófilos segmentados) A meia vida dos neutrófilos desde a fase de mieloblasto até a morte é de 9 a 10 dias • No sangue periférico são encontrados, fisiologicamente, poucos neutrófilos bastonetes ( 2 a 5%) e grande frequência ( 50 a 60%) são neutrófilos segmentados Disciplina de Fisiologia do Sistema Hematopoético 2011 NEUTRÓFILOS - características • No sangue do adulto é o leucócito mais predominante (40-70%) • Alto poder de fagocitose • Primeira linha de defesa contra microorganismos • Vida-média curta na circulação sanguínea (6 horas) • Pool de neutrófilos: Medula Óssea, Circulação Sanguínea e Tecidos Williams 7ª ed. NEUTRÓFILOS - morfologia • Núcleo - polimórfico - 2-5 lóbulos - cromatina condensada de coloração púrpura • Citoplasma - ligeiramente acidófilo - granulações abundantes, finas e de coloração rósea • Tamanho: 12-15 µm Williams 7ª ed. Constituintes dos grânulos dos neutrófilos GRÂNULOS PRIMÁRIOS ou Grânulos Azurófilos MPO (mieloperoxidase) Lizozimas Elastase Colagenase Catepsina G GRÂNULOS SECUNDÁRIOS ou Grânulos específicos Lactoferrina Lizozima Fosfatase alcalina Colagenase tipo IV NEUTRÓFILOS – maturação e morfologia Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489. NEUTRÓFILOS – maturação e morfologia NEUTRÓFILOS – maturação IL-3 Atua em fases precoses da hematopoese, afetando as células pluripotentes. GM-CSF Estímulo de granulócitos-monócitos G-CSF Estímulo de granulócitos Stem Cell factor Estímulo para células progenitoras Regulam a produção, sobrevivência e atividade funcional NEUTRÓFILOS – grânulos Granulação Início Conteúdo Grânulos azurófilos Promielócito Hidrolases Fosfatase ácida Β-glicuronidase Mieloperoxidase Elastase Arilsulfatase Proteínas cationicas Grânulos específicos Mielócito Lisozima Lactoferrina Colagenase Ativador de plasminogênio Aminopeptidase Grânulos terciários Mielócito Gelatinase Organelas citoplasmáticas Fosfatase alcalina NEUTRÓFILOS – funções • Quimiotaxia Citocinas Monocinas Toxinas bacterianas Células e tecidos necrosados • Diapedese Selectinas e integrinas Moléculas de adesão intercelular (ICAM) • Comunicação com outras células Recrutamento de células para o local da infecção NEUTRÓFILOS – Funções Fagocitose Degranulação ou ação enzimática; Geração de radicais oxidantes Queda do pH no interior do fagossoma. Fagocitose Fagocitose 1) 2) 3) Reconhecimento e fixação da partícula Engolfamento Destruição ou degradação Mecanismos dependentes de O2 (O2- e MPO) Lizozima, lactoferrina, proteína básica principal NEUTRÓFILOS – quimiotaxia e diapedese Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489. NEUTRÓFILOS – quimiotaxia e diapedese Borregaard, 2010. Immunity, 33. NEUTRÓFILOS – mecanismos de ação Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489. NEUTRÓFILOS – comunicação com outras células Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489. NEUTRÓFILOS – inflamação Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489. Produção de neutrófilos, eosinófilos e basófilos Granulopoese Neutrófilos Mieloblastos (mais imaturo) Promielócitos Mielocítos Metamielócitos TECIDOS Neutrófilos bastonetes Neutrófilos segmentados Fonte: Hoffbrand et al, 2004 – Fundamentos de Hematologia GRANULOPOESE Borregaard, 2010. Immunity, 33. Cinética dos neutrófilos MEDULA ÓSSEA Pool mitótico Quatro ou cinco divisões Pool mitótico (2 a 3 dias) Stem cell, mieloblastos, promielócitos e mielócitos Maturação e estoque (5 a 7 dias) Metamielócitos, bastonetes e neutrófilos segmentados) Cinética dos neutrófilos SANGUE PERIFÉRICO NEUTRÓFILOS – compartimentos Maturação Sangue (margem) Medula óssea Tecidos Sangue Reserva (pool circulante) Tempo médio de vida: 5-10 dias Cinética dos neutrófilos Em condições de estresse e em processos reacionais O tempo de maturação pode ser diminuído O número de divisões podem ser abolidas As células podem ser liberadas no sangue periférico precocemente Em processo infecciosos O tempo decorrido do estágio de mielócito a neutrófilo segmentado no sangue periférico pode ser reduzido a 48 horas. Cinética dos neutrófilos Os neutrófilos circulam no sangue periférico cerca de 6 a 10 horas Aproximadamente a metade da quantidade de neutrófilos presentes no sangue periférico estão marginados Mudanças na posição de marginados para circulantes podem ocorrer em condições de estresse, exercícios físicos ou após a administração de adrenalina, levando a leucocitose transitória A taxa de produção de neutrófilos é de 1,63 x 109 células/ kg de peso corpóreo Esta produção pode aumentar dramaticamente frente a um estímulo inflamatório Neutrofilia Número de neutrófilos > 8.000 /uL (contagem absoluta desta célula no hemograma) NEUTROPENIA Número de neutrófilos < 2.000/ul Intensidade da neutropenia: • Discreta: 1.000 a 2.000 neutrófilos/uL de sangue • Moderada: 500 a 1.000 neutrófilos/uL de sangue • Grave: < 500 neutrófilos/uL de sangue EOSINÓFILOS Eosinófilos célula de 10-15µm granular, com afinidade por eosina originada a partir de cél. hematopoética CD34+ IL3, IL5 e GM-CSF são críticas para a estimulação da MO para a sua produção essas citocinas também são produzidas por linfócitos T, CD4 e CD 8+ EOSINÓFILOS - morfologia Citoplasma com granulação grosseira alaranjada Núcleo polimórfico (normalmente bilobulado) Tamanho: 10-15 µm; Frequência relativa: até 4% EOSINÓFILOS - grânulos Grânulos contém proteína básica tóxica para parasitas e células Também contém hidrolases ácidas, peroxidases, fosfolipases e catepsinas Neutraliza a heparina e induz liberação dos basófilos Os eosinófilos secretam IL-1, IL-3, IL-6, IL-8, TNF-α e GM-CSF EOSINÓFILOS - características • Grânulos ricos em enzimas • Vida média na circulação = 14-18h • Migram para os tecidos permanecendo por aproximadamente 12 dias • Eosinófilos maduros expressam CD16 e CD32. EOSINÓFILOS - funções • Combate a parasitas multicelulares Degranulação “Fagocitose frustrada” Citotóxico para parasitas e células hospedeiras Através dos receptores Fc, os eosinófilos se conjugam com os parasitos recobertos com anticorpos, degranulam e liberam o seu conteúdo granular sobre a cutícula dos parasitos • Fagocitose de complexos Ag-Ac • Resposta alérgica EOSINÓFILOS - FUNÇÕES • Liberação de mediadores pró-inflamatórios Estimula liberação de histamina pelos basófilos • Apresentação de Ag à linfócitos T • Redução de respostas inflamatórias VALORES DE REFERÊNCIA PARA EOSINÓFILOS Valores da normalidade no sangue periférico • 50-500/µL • Eosinofilia: • Leve: 500-1500/µL • Moderada: 1500-5000/µL • Severa: > 5000/µL BASÓFILOS BASÓFILOS - morfologia Citoplasma com granulação grosseira preta ou roxa Núcleo polimórfico Tamanho: 12-14 µm Frequência relativa: 0-1% BASÓFILOS - FUNÇÕES • Participam de reações alérgicas – reações de hipersensibilidade imediata •Promovem atração de eosinófilos •Produzem mediadores químicos importantes BASÓFILOS - Mediadores químicos principais • Histamina – participa reação inflamatória • Prostaglandinas – dor e broncoconstrição • IL-3 – atração de eosinófilos BASOFILIA (> 0,3/ L ) • reações de hipersensibilidade • leucemia mielóide crônica • policitemia vera, metaplasia mieloide MONÓCITOS MONÓCITOS - morfologia Citoplasma azul acinzentado (vacúolos) Núcleo irregular (reniforme) Maior leucócito circulante Vida na circulação: 1-3 dias Tamanho: 12-20 µm Frequência relativa: 1 a 10% MONÓCITOS - funções Fagocitose – bactérias, debris celulares, células senescentes, partículas Processamento de antígenos Imunidade celular - citotoxicidade celular dependente de anticorpos Produção de citocinas Macrófagos MACRÓFAGOS - tecidos Tamanho maior que o monócito Grânulos no citoplasma Formas heterogêneas Vacúolos Modula respostas à citocinas Secreção de moléculas bioativas MACRÓFAGOS Macrófagos alveolares Células de Kupffer Foam cell MACRÓFAGOS Localizações comuns: • Intestino • Trato Genitourinário • Pele • Pulmões • Medula óssea (histiócito) MACRÓFAGOS Ingersoll et al. Trends in Immunology 32(10). 2011. Ingersoll et al. Trends in Immunology 32(10). 2011. Shi e Pamer. Nat Rev Immunol. 11(11):762-74. 2011. LINFÓCITOS LINFÓCITOS Tipos de linfócitos Linfócitos T Linfócitos B Natural killer - NK Não é possivel identificar cada um dos tipos de linfócitos através da análise morfológica (corantes de Romanovsky) Identificação é feita através dos antígenos de diferenciação (citometria de fluxo) CD “cluster differentiation” LINFÓCITOS - morfologia Citoplasma azul acinzentado Núcleo pleomórfico Alta relação N/C Tamanho: 8-10 µm Meia vida na circulação: dias, meses ou anos Frequência relativa sangue adulto: 25 a 35% Frequência diferente em crianças e adultos LINFÓCITOS Tipos de linfócitos Linfócitos T (resposta imune celular) Linfócitos B (resposta imune humoral) Natural killer – NK (resposta imune inespecífica) LINFÓCITOS Tanto os linfócitos T como os B são capazes de recircular do vaso para tecido e vice versa Ativação da resposta imune depende: Interação entre linfócitos T, B e células dendríticas Moléculas de adesão presentes nas membranas celulares Os linfócitos T podem ser ativados Estas células que apresentam morfologia de células maduras, após a ativação readquire a aparência de blastos e entra em divisão LINFÓCITOS LINFÓCITOS T A maioria dos linfócitos circulantes são linfócitos T (~ 80%) Função Imunidade mediada por células (reconhecimento de antígenos) Inclui a hipersensibilidade tardia, rejeição de enxertos, reações enxerto-hospedeiro, defesa contra organismos intracelulares (como os bacilos da tuberculose e brucelose) e provavelmente defesa contra células neoplásicas. Funções do Linfócito T • Imunidade celular • Produção de citocinas • Regulação dos linfócitos B • Tipos: T helper e T citotóxico. SUB-TIPOS DE LINFÓCITOS T (Classificados quanto a função) Linfócitos T auxiliares (Helper) – CD4 São aqueles que induzem a síntese de imunoglobulinas pelos linfócitos B. Ativam LT CD8 e Macrófagos (MØ). São sub-divididos em: CD4 tipo 1 ou Th1: secretam IL2 e interferon gama, mas não secretam IL 4,5 e 6 – predomínio de resposta celular (LT e MØ). CD 4 tipo 2 ou Th2: secretam IL 4,5 e 6 e não secretam IL2 e interferon gama – predomínio de resposta humoral (LB) Disciplina de Fisiologia do Sistema Hematopoético 2011 LINFÓCITO Linfócitos ATIPICOS (reativos) SUB-TIPOS DE LINFÓCITOS T (Classificados quanto a função) Linfócitos T citotóxicos – CD8 -Células infectadas -Células neoplásicas -Células alogênicas LINFÓCITOS LINFÓCITOS B (~10-15%) atuam na imunidade humoral, ou seja, na produção e secreção de anticorpos, após a transformação em plasmócito (Agespecífico). Marcadores de linfócitos B CD34+ CD38+ CD10+ CD19+ Disciplina de Fisiologia do Sistema Hematopoético 2011 Funções do Linfócito B Imunidade humoral Produção de anticorpos Apresenta Ag para o Linfócito T Linfócito Medula óssea Plasmócito LINFÓCITOS NK “natural killer” São desprovidos de marcadores de células T e de células B, são chamados de células “null” Cerca de 5 % do total da população de linfócitos Sua função é destruir as células infectadas e células neoplásicas. Tem receptor para Fc de IgG Marcadores: CD16+ e CD56+ Funções das células NK • Imuno-regulatórias - potente capacidade de produção de citocinas • Função citotóxica – destruição de células infectadas e células tumorais LINFOCITOSE O aumento de células em divisão nos linfonodos e no baço é responsável pela linfocitose no sangue periférico Linfocitose = aumento do número absoluto de linfócitos no sangue periférico Número de linfócitos > 4,5 .103/uL no adulto Número de linfócitos > 9,0 . 103/uL na criança LINFOCITOPENIA ( < 1.000/ L ) Cecil linfopenia < 1.500 linfócitos/ L fase aguda das infecções corticoterapia, quimioterapia, radioterapia lupus eritematoso sistêmico infecções por vírus, AIDS, sarampo, polio, varicela estresse e desnutrição protéico calórica Maturação e distribuição dos linfócitos Martini. Fundamentals of Anatomy & Physiology. 6ed. Cap22, 2004. Vivier et al. Nat Immunol. 9(5). 2008 NK CELLS Williams 7ª ed. NK cell functions. The known and suspected biological roles of NK cells are indicated in red and blue, respectively. Vivier et al. Nat Immunol. 9(5). 2008 Células NK
