1 - Germstar

RELATÓRIO
Eficácia virucida do higienizador Germstar contra
o novo vírus da gripe suína H1N1
Promotor:
Germstar
Director do estudo:
Sagar M. Goyal, Professor de Virologia,
Departamento de Medicina de População Veterinária,
Universidade do Minnesota, 1333 Gortner Ave,
Saint Paul, MN 55108, EUA.
Submetido a:
9 de Outubro de 2009
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CONDIÇÕES DE TESTE
Vírus desafio: Novo vírus da gripe suína H1N1 (A/Califórnia/4/2009/H1N1).
Hospedeiro: Células renais caninas Madin-Darby (MDCK)
Produtos: Higienizador 1: com 63% de álcool etílico.
Higienizador 2: com 63% de álcool etílico, reduzido odor a álcool.
Higienizador 3: com 70% de álcool isopropílico.
Temperatura de exposição: Temperatura ambiente (aprox. 23 ºC)
Diluente: Meio de manutenção de cultura de células
Meio de crescimento: meio essencial mínimo (MEM) com sal de Earle (Cell grow, Media
Tech, VA, USA) contendo antibióticos (150 IU/mL penicilina, 150 μg/mL estreptomicina,
50 μg/mL neomicina e μg/mL fungizona), 8% soro fetal de vitela, 0.05% tripsina e
edamina S como aditivo.
Meio de manutenção: o mesmo meio que acima excepto não foi adicionado nenhum soro
fetal de vitela.
Protocolo para o teste de superfície: discos em aço inoxidável esterilizados
(aproximadamente 1 cm de diâmetro) foram colocados em pratos de cultura de tecidos de
24 poços esterilizados. Em cada disco foram colocados 20 μL do vírus de teste em separado
e deixados secar durante 30 minutos. Foi colocada 1X concentração de um dos três
higienizadores em quantidades de 40 μL em discos com o vírus. Foram mantidos controlos
negativos nos quais foram utilizados 40 μL de salina tamponada em fosfato em vez de
higienizador. A quantidade de vírus eluidada a partir dos poços de controlo negativo foi
retirada como a quantidade de vírus inicial. O vírus do controlo e os discos tratados foram
eluidados após o tempo de contacto de 0,5, 1 e 2 minutos adicionando 0,9 mL de 3%
extracto de carne de bovino (pH 7,2) em cada poço. O extracto de carne de bovino foi
deixado em contacto com o disco durante 30 minutos a temperatura ambiente numa câmara
de biossegurança. A solução foi pipetada vigorosamente para libertar qualquer vírus
restante do disco. Foram preparadas diluições 10 x em série de todos os eluidados no meio
de manutenção. Todas as diluições foram inoculadas em células MDCK crescidas em
pratos de cultura de tecidos de 96 poços. As células foram observadas durante 5 duas após a
infecção quanto ao aparecimento de efeitos citopáticos específicos do vírus. Os efeitos
virucidas foram expressos como redução log10 em titulação de vírus, que foi calculado a
partir da diferença entre a titulação de vírus da mistura vírus-higienizador e a titulação de
vírus da suspensão de controlo. A percentagem de redução de vírus em vários momentos
foi calculada e os resultados encontram-se na Tabela 1.
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Tabela 1: Actividade virucida do Germstar contra o novo vírus da gripe suína H1N1
conforme determinado pelo teste de superfície
Redução de percentagem em titulação do vírus
após tempo de contacto indicado (minutos)
0,5
1
2
Higienizador 1
Higienizador 2
Higienizador 3
99,76
99,68
99,76
99,46
99,76
99,76
99,87
99,87
99,87
Conclusão: Os resultados apresentados são uma média de 3 experiências.
Verificou-se que os três higienizadores reduzem a titulação do vírus em >99,0% dentro de
30 segundos.
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