FINALIDADE Sistema para determinação rápida

transaminases, sendo estes processos
transitórios. Os 20% restantes evoluem
para cirrose ao longo dos anos. Metade
destes pacientes mostram quadro estável
da cirrose com discretos aumentos
de TGO, aumento das globulinas,
diminuição da enzima colinesterase e
comprometimento transitório da crase
sanguínea. Outra metade dos cirróticos
evolui em período variável (5 -25 anos),
indo ao óbito , alguns por insuficiência
hepática grave ou por hemorragia fatal,
pela ruptura de varizes esofageanas
secundárias à hipertensão portal. Parcela
significativa deste grupo tem como causa
morte Carcinoma hepatocelular.
As hepatites B e C são responsáveis,
etiologicamente, pela quase totalidade
dos hepatocarcinomas.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
Sensibilidade e Especificidade
O teste foi realizado com um total de
904 amostras, sendo 127 amostras
sabidamente positivas e 777 negativas.
Foi realizado o teste comparativo com
um kit comercial.
Durante os estudos realizados observouse uma sensibilidade de 100% e
Especificidade de 99,8% para o método.
Repetitividade
Foram realizados ensaios em 04 amostras
estudadas. As amostras eram divididas
em 01 negativa e 03 positivas. Houve
correta identificação em 100% das
vezes.
Reprodutibilidade
Foram realizados ensaios de 10 amostras
durante 03 dias diferentes. As amostras
eram divididas em 06 negativas e 04
positivas. Houve correta identificação
em mais de 100% das vezes.
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA
• Bendinelli, M. et al.: Hepatitis C virus:
biology, pathogenesis, epidemiology,
clinical description, and diagnosis,
In: Specter, S. Editor. Viral hepatitis
diagnosis, therapy, and prevention.
Humana Press: 65-127, 1999.
• Choo, Q. –L.; Kuo, G. et al.: Isolation of
cDNA clone derived from a blood-borne
4/4
non-A, non-B viral hepatitis genome.
Science, 244:359-62, 1989.
• Fagn, E.A. and Harrison, T.J.: Hepatitis
C virus (HCV). Viral Hepatitis, bios
Scientific Publishers Limited: 13166,2000.
Part II. Detection and quantitation of
HCV in serum. In: Lau, J.Y.N. editor.
Hepatitis C protocols, Humana Press:
27-111, 1998.
• Price, C.P. et al.: Disposable integrated
immunoassay devices. In: Price, C. P.
and Newman, D.J. editors. Principles
and practice of immunoassay, 2nd ed.
• Macmillan Reference: 581-603, 1997.
Urdea, M.S. etal.: Hepatitis C: diagnosis
and monitoring. Clinical Chemistry, 43
(8B): 1507-1511, 1997.
• Kumar, V., Abbas, A.K., Fausto, N.,
Robbins, S.L., Cotran, R.S. Título:
Bases patológicas das doenças: 937938. 2004.
• Doles. Dados de Arquivo.
• http://portal.saude.gov.br/saude/
visualizar_texto.cfm?idtxt=22541.
Acesso: 10/02/2010.
TERMOS E CONDIÇÕES DE GARANTIA
DA QUALIDADE DO PRODUTO
As garantias do fabricante ao consumidor
seguem estritamente as relacionadas
na Lei no 8.078, de 11 de setembro de
1.990 - Código de Defesa do Consumidor.
Os reagentes que compõem este sistema
para diagnóstico são garantidos na
sua performance, reprodutibilidade e
qualidade até a data de vencimento.
Os produtos que apresentarem
problemas técnicos comprovados
serão substituídos, sem ônus para
o consumidor.
Doles Reag. Equip. para Laboratórios
Ltda.
CNPJ: 01.085.513/0001-05
Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07
Chácara Retiro, Conjunto Palmares.
CEP: 74775-027
Goiânia - GO – Brasil
e-mail: [email protected]
M.S.: 10231810108
Revisão: 04 (05/2011)
HCV
TESTE RÁPIDO
FINALIDADE
Sistema para determinação rápida e
qualitativa de anticorpos IgG específicos
contra o vírus da hepatite C (HCV) em
soro ou sangue total.
Somente para uso diagnóstico in
vitro.
Ref. A
Placa-Teste: 10 unidades
Solução Diluente: 1x 3mL
PRINCÍPIO
Os anticorpos anti-HCV presentes
na amostra ligam-se ao conjugado
antigamaglobulina humana - ouro
coloidal formando um complexo. Este
flui pela membrana da placa teste
indo se ligar aos antígenos do HCV
imobilizados, na área da reação positiva
(T), determinando o surgimento de uma
banda colorida rosa-clara.
Na ausência de anti-HCV não haverá
aparecimento da banda colorida na área
teste (T). A mistura da reação continua
a fluir atingindo a área controle (C).
O conjugado não ligado une-se aos
reagentes desta área, produzindo uma
banda colorida rosa-clara, demonstrando
que os reagentes estão funcionando
corretamente.
Ref. C
Placa-Teste: 40 unidades
Solução Diluente: 2 x 6mL
METODOLOGIA
Imunocromatográfico
REAGENTE E APRESENTAÇÃO
Placa-Teste: Composta por uma base
plástica onde são acondicionados:
o filtro de amostra (fibra de vidro),
uma base conjugada (fibra de vidro)
impregnada com conjugado (proteina
G marcado com ouro coloidal) uma
membrana de nitrocelulose pré-aplicada
com duas bandas, uma Linha de Teste
(com frações antigênicas do HCV: Core,
NS3, NS4 e NS5) e Linha de Controle
(anti-IgG camundongo) e uma base
absorvente. Todo material montado
nesta base plástica é acondicionado
em um cassete plástico embalado em
envelope de alumínio contendo síllica.
Solução Diluente: Frasco conta-gotas
contendo solução de fosfato de sódio
0,001M (PBS) com 0,1% Triton X-100 e
0,5% BSA e azida sódica 0,095%.
Ref. B
Placa-Teste: 20 unidades
Solução Diluente: 1 x 6mL
EQUIPAMENTOS E MATERIAIS
NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS
Recipientes para descarte do material
Pipeta semiautomática
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE
DOS REAGENTES
Placa-Teste: Conservar entre 2 e 30ºC.
Não congelar. As placas são sensíveis
a umidade; não abrir até que tenha
alcançado a temperatura ambiente para
evitar condensação. Estável até a data
de vencimento indicada no rótulo do
produto, obedecidas as condições de
armazenamento.
Solução Diluente: Pronta para uso.
Conservar entre 2 e 30ºC. Não congelar.
Se armazenado em geladeira, não
utilizar até que tenha alcançado a
temperatura ambiente. Estável até a
data de vencimento indicada no rótulo
do produto, obedecidas as condições de
armazenamento.
CUIDADOS E PRECAUÇÕES COM O
USO DOS REAGENTES
Todos os reagentes são somente para
uso diagnóstico in vitro. Seu manuseio
deve ser cuidadoso, evitando-se o
contato com pele e mucosas. Em caso
de contaminação acidental, lavar a
área afetada em água corrente. O
descarte do material utilizado deverá
ser feito obedecendo-se aos critérios
de biossegurança estabelecidos pelo
laboratório, de acordo com as normas
locais, estaduais ou federais.
Observar a simbologia
constante nos rótulos
do produto:
Irritante
1/4
AMOSTRA
Soro límpido ou Sangue Total
(colhido por punção digital sem o
uso de anticoagulante). A amostra
utilizada deve estar isenta de hemólise,
l i p e m i a e c o n t a m i n a ç ã o. U t i l i z a r
preferencialmente amostras recém
colhidas. Se as amostras (soro) não
forem testadas imediatamente, devem
ser refrigeradas à temperatura de 2
a 8°C por no máximo 48 horas. Para
períodos de armazenamento superior
a dois dias, o congelamento (-20ºC) é
recomendado. As amostras congeladas
deve ser descongeladas gradualmente
e homogeneizadas ao atingir a
temperatura ambiente. Evitar repetidos
congelamentos e descongelamentos;
na ocorrência desta situação haverá
possibilidade de surgimento de falsos
resultados.
6.Qualquer banda de coloração que
surja após 20 minutos não tem
valor diagnóstico.
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
Negativo
Haverá a formação de uma banda rosa
clara na área do controle (C).
Positivo
Haverá a formação de duas bandas, uma
na área de teste (T) e a outra na área
do controle (C).
Não utilizar amostras de plasma. A
presença de anticoagulantes na amostra
poderá interferir na ação do conjugado,
o que causará interferência no ensaio.
Não utilizar amostras diluídas devido
a possibilidade de falsos negativos.
PROCEDIMENTO TÉCNICO
As placas e amostras devem estar
equilibradas com a temperatura ambiente
antes do início do teste.
1.Retirar a placa teste do envelope e
colocá-la sobre uma superfície plana.
2.C o m o a u x í l i o d e u m a p i p e t a
semiautomática dispensar 10µL
de amostra (sem bolhas de ar)na
cavidade da amostra da placa teste.
3.Adicionar 02 gotas(100µL ) da solução
diluente na cavidade da amostra da
placa teste.
4.Deixar a placa sobre uma superfície
plana.
5.A leitura deve ser feita entre 10 e 15
minutos, após a adição da amostra.
2/4
Nota: a formação de bandas teste e controle,
com diferenças de intensidade de coloração,
não afeta o desempenho do teste.
Inválido
O teste será considerado inválido se não
ocorrer a formação de banda na área
controle.
LIMITAÇÕES DO SISTEMA
•Para se obter ótimo desempenho do
sistema, é necessário que o procedimento
técnico seja rigorosamente seguido
conforme instruções de uso. Qualquer
alteração poderá levar a resultados
errôneos.
•Antes do início do teste, a placa teste
e a amostra devem estar equilibradas
com a temperatura ambiente.
•A leitura não deve ser feita após 20
minutos.
•O produto é indicado para determinar a
presença de anticorpos anti-HCV, sendo
um teste de triagem utilizado com a
finalidade de detectar tais anticorpos.
A ocorrência repetida de resultados
positivos para este teste, é presumível
da presença do vírus na amostra. Em
se tratando de um método de triagem
os resultados deverão ser confirmados
por testes mais específicos.
CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA
•Ler cuidadosamente as instruções de
uso antes de realizar o teste.
•A data de validade corresponde ao
último dia do mês assinalado na
etiqueta do envelope da placa-teste e
da caixa do kit.
•Deve-se evitar expor o kit a temperaturas
elevadas, bem como diretamente ao
sol.
•Não congelar a placa-teste, pois isto
causará deterioração irreversível.
•Deixar os reagentes adquirirem a
temperatura ambiente antes de iniciar
os testes.
•Não usar componentes do kit após a
data de validade.
•Utilizar as Boas Práticas de Laboratório
(BPLs) na conservação, manuseio e
descarte dos materiais.
•Não substituir componentes deste
kit com o de outros fabricantes, nem
usar componentes de lotes e códigos
diferentes.
•Quando realizado o teste, a formação
da banda controle na placa teste indica
o perfeito desempenho do produto e
do procedimento técnico.
SIGNIFICADO CLÍNICO
Hepatite C é causada por um vírus do
gênero da família Flaviviridae. O mesmo
é um vírus de RNA monofilamentar
que devido a características de sua
estrutura é instável dando origem a
múltiplos genótipos e subtipos. Sua
instabilidade genômica com variabilidade
antigênica tem dificultado e impedido o
desenvolvimento de uma vacina HCV.
Estima-se que a infecção pelo vírus, na
população mundial, sitiua–se entre 1,5
e 2%. Nos Estados Unidos, 1,8% da
população tem sorologia positiva para
HCV. No estado de São Paulo resultados
semelhantes foram encontrados em
trabalho de campo.
As principais vias de transmissão são:
inoculação e transfusão de sangue.
Após introdução, na década de 90, de
testes diagnósticos para HCV no sangue
a ser transfundido, a contaminação
transfusional caiu drasticamente,
sendo responsável, atualmente, por
pequena quantidade de contaminados.
A transmissão sexual
é rara,
elevando–se entre os homossexuais,
podendo comprometer 15% do grupo.
Aproximadamente 5% dos infectados
são representados por pacientes em
hemodiálise e profissionais da área de
saúde. A transmissão peri-natal é rara.
O período de incubação oscila entre
2 e 26 semanas, com predominância
entre 6ª e 12ª semanas. Esta fase
é assintomática. No início clínico da
doença, os sintomas são leves, e por
vezes, imperceptíveis. Nas 3 primeiras
semanas
da doença, elevam se os
níveis de anticorpos IgM e IgG anti
HCV havendo posteriormente queda
progressiva dos mesmos.
Evolução: aproximadamente 15% dos
pacientes mostram evolução favorável
com resolução, sem sequelas. Nos
restantes 85%, o quadro clínico evolui
para hepatite crônica . Hepatite
fulminante (necrose maciça do fígado e
colapso) é rara.
80% dos pacientes com hepatite crônica
mostram quadro clínico estável com
anticorpos específicos presentes de
títulos variáveis e por vezes icterícia
discreta, com pequenas elevações das
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