Caracterização genética de linhagens de fungos basidiomicetos 55º

55º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 55º Congresso Brasileiro de Genética • 30 de agosto a 02 de setembro de 2009
Centro de Convenções do Hotel Monte Real Resort • Águas de Lindóia • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Caracterização genética de linhagens de fungos
basidiomicetos
Dias, DC1; Vilela, FC1; Nakamura, SS2; Santos, RL2; Linde, GA3; Colauto, NB3; Valle, JS3
Acadêmica de Farmácia – PIBIC/Universidade Paranaense (UNIPAR)
Acadêmico de Farmácia – PIC/UNIPAR
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Laboratório de Biologia Molecular/UNIPAR
[email protected]
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Palavras-chave: Pleurotus, Schizophyllum, ITS, PCR-RFLP, caracterização genética
O gênero Pleurotus compreende um grupo de cogumelos ligninolíticos com propriedades medicinais e aplicações
biotecnológicas e ambientais importantes. Devido à produção de basidiomas de alta qualidade organoléptica
o cultivo de Pleurotus tem crescido nos últimos anos, sendo P. ostreatus o terceiro cogumelo mais cultivado
no mundo. Schizophyllum commune, espécie amplamente distribuída e encontrada em todos os continentes,
também apresenta propriedades ligninolíticas com potencial biotecnológico e tem chamado atenção devido a
sua capacidade em causar basidiomicoses em pacientes imunodeprimidos. As sequências de DNA que codificam
RNAs ribossomais (rRNA) têm sido utilizadas no estudo de relações taxonômicas e variabilidade genética em
fungos. Os genes rRNA nucleares de fungos estão arranjados em seqüências repetidas separadas por diferentes
espaçadores, dentre eles dois ITS (espaçadores internos transcritos), úteis na caracterização genética por serem
sequências curtas e facilmente amplificadas por PCR. Nesse trabalho empregamos a técnica de PCR-RFLP de ITS
para a caracterização genética de linhagens de P. ostreatus, P. florida e S. commune da micoteca da Universidade
Paranaense – UNIPAR. O DNA foi extraído de corpos de frutificação previamente secos e congelados. Os dois ITS
foram amplificados em uma única seqüência (ITS1-5.8S-ITS2) empregando-se os primers universais ITS1 e ITS4 (25
ng de DNA; 0,2 mM de cada primer; 1,5 U de Taq DNA polimerase; tampão 1x; 100 mM de dNTP e 1,5 mM MgCl2).
Os amplicons foram digeridos com três enzimas de restrição (EcoRI, HaeIII e HinfI) segundo recomendações do
fabricante. A PCR resultou na amplificação de um único fragmento com aproximadamente 650 pb para todas as
linhagens, o que está de acordo com os dados de sequenciamento dos ITS (GenBank) de espécies de Pleurotus
(média de 660 pb) e de S. commune (média de 650 pb). Cada enzima testada gerou dois padrões de restrição
para cada espécie, revelando dois haplótipos distintos capazes de distinguir o gênero Pleurotus de Schizophylum.
Tais marcadores moleculares podem ser úteis na identificação e caracterização de linhagens, auxiliando na
identificação taxonômica e na certificação de produtos comerciais a base desses cogumelos, linhagens para cultivo
e procedência de produtos de interesse biotecnológico. A técnica de PCR-RFLP constitui um método facilmente
aplicável e de custo relativamente baixo, permitindo uma análise rápida de sequências. Apesar das endonucleases
utilizadas terem sido suficientes na distinção dos gêneros, é fundamental que outras enzimas sejam avaliadas,
conferindo maior segurança na caracterização, além de possibilitar potencial distinção em nível de espécie.
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