10b Duplicação do DNA - IBB

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Carolina A. Araujo
Depto de Patologia (FMB)
Laboratório de Imunologia de Tumores (IBB)
[email protected]
As fitas servem de molde para a síntese de novas moléculas
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Propostas dos esquemas alternativos de replicação
Modelo proposto por Watson e Crick
Cada duplex filha deveria ser composta
de uma fita completa herdada da duplex
parental e uma fita completa recémsintetizada. Comprovado por Meselson e
Stah (1958).
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Genoma bacteriano: uma única origem para a replicação
Genoma eucarionte: muitas origens de replicação
Pontos de origem = Regiões do DNA ricas em bases A-T
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DNA polimerases – presentes em procariotos e eucariotos
atividade catalítica = adicionam desoxirribonucleotídeos à extremidade em
crescimento de um primes de fita simples.
Garantia de alta fidelidade durante a duplicação = discrimina os 4
diferentes nucleotídeos possíveis
DNA polimerase I – Remove os primers de RNA no final 5’ de cada fragmento
de Okasaki e os repõem com DNA.
DNA polimerase II – Função ainda é incerta.
DNA polimerase III – Sintetiza fitas de DNA durante a replicação
Somente sintetiza uma nova fita a partir de uma extremidade 3’.
Taq DNA polimerase
DNA polimerase termoestável amplamente utilizada em rotinas de
laboratórios de biologia molecular em reações de PCR.
Thermus aquaticus
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A DNA polimerase necessita de extremidade 3’-OH livre para adicionar
novos nucleotídeos.
Nova fita
5’
3’
Fita primer
3’
5’
Síntese de DNA é assimétrica
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Topoisomerase I e II - Auxiliam o enrolamento positivo da origem de
replicação
Helicase - Separação da dupla hélice
Fragmentos de Okazaki - Pequenos fragmentos de DNA da região 5’
sintetizados na cadeia tardia durante a síntese de DNA.
DNA ligase - liga os fragmentos de Okazaki
Proteína ligadoras do DNA de fita simples
Exonucleases
DNA polimerase III - síntese da fita molde líder 5’ – 3
DNA polimerase I – síntese da fita molde tardia – 3’ – 5’
RNA primase - substitui fragmentos de primers RNA-DNA
http://www.youtube.com/watch?v=teV62zrm2P0
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http://www.youtube.com/watch?v=AJNoTmWsE0s
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