biologia molecular

BIOLOGIA MOLECULAR
Avaliação Escrita 2
Professores J. MIGUEL ORTEGA e SANTUZA TEIXEIRA
2o. SEMESTRE 2005
NOME:_____________________________________________MAT__________
1)- a- Faça um desenho esquemático de um vetor de clonagem bacteriano indicando pelo menos quatro
elementos necessários que devem estar presentes na molécula para que esta seja considerado um bom vetor.
b- Utilizando o seu vetor, um pesquisador reclama que a eficiência de clonagem de fragmentos de DNA
no seu vetor é muito baixa. Sugira duas estratégias à esse pesquisador para que ele possa aumentar a
eficiência de ligação do inserto no vetor.
(4 PONTOS)
2)- Suponha que voce esteja interessado em estudar os genes codificados por um plasmídeo identificado
como um fator de virulência em uma bactéria patogênica. Sabendo que o tamanho do plasmídeo é 3.000 pb,
e que uma sequencia de 20 pb desse plasmídeo é conhecida descreva em linhas gerais os procedimentos
necessários para:
(4 PONTOS)
a- purificar esse plasmídeo a partir de uma cultura desta bactéria
b- sequenciar completamente este plasmídeo
3)- Suponha que voce seja um pesquisador da EMBRAPA responsável pelo desenvolvimento de plantas
transgências resistentes a pragas. Seu projeto é clonar o gene que codifica uma toxina de Bacillus
thuringiensis, uma bactéria capaz de destruir várias pragas de lavoura. A partir do DNA purificado desta
bactéria e de pequenas quantidades da toxina purificada, você pensa em duas estratégias para obter esse gene
clonado. Escolha UMA das estratégias indicadas abaixo e descreva EM ETAPAS os procedimentos para:
(cite TODAS as enzimas necessárias em cada etapa)
(4 PONTOS)
a- Construir uma biblioteca genômica em E. coli e isolar um clone desta biblioteca que produz esta
toxina.
b- Amplificar e clonar um fragmento do DNA do Bacillus thuringiensis que codifica esta toxina
baseando-se na sequência dos cinco primeiros e nos cinco últimos aminoácidos da proteína.
4)- Explique a função do consenso de KOZAK e quando você usaria esse conhecimento em biotecnologia.
(4 PONTOS)
5)- Explique a importância do seqüenciamento completo do genoma humano para o estudo de alterações do
proteoma de tecidos humanos.
(4 PONTOS)