quantex ASO plus standard

BIO-FLASH ®
LER ALTERAÇÕES DESTACADAS
®
BIO-FLASH anti-HCV
3000-8572
100 testes
BIO-FLASH anti-HCV é um ensaio imunológico quimiluminescente de dois passos totalmente
automatizado para a determinação de anticorpos IgG contra o vírus da hepatite C (HCV) em soro ou
plasma humano com o instrumento BIO-FLASH.
Sumário
A hepatite C é uma infecção viral do fígado que foi denominada como hepatite não A, não B de transmissão
parenteral até 1989 quando foi identificado o agente causal. A descoberta e caracterização do vírus da hepatite C
(HCV) levou à compreensão do seu papel primordial na hepatite pós-transfusional e da sua tendência em induzir
1
infecção persistente.
O HCV é um vírus de RNA de cadeia simples de sentido positivo, que possui envelope. O vírus infecta as células
2
do fígado onde pode causar inflamação severa com complicações a longo prazo. O início da doença é
geralmente insidioso, com anorexia, vago desconforto abdominal, náuseas e vômitos, febre e fadiga, progredindo
para icterícia em cerca 25% dos pacientes. Das pessoas expostas à hepatite C, cerca de 40% se recuperam
totalmente, mas os restantes, tenham ou não sintomas, tornam-se portadores crônicos. Destes, 20% desenvolvem
3,4
cirrose. Dos que apresentam cirrose, até 20% desenvolvem câncer hepático.
O HCV é a principal causa de hepatite aguda e doença crônica hepática, incluindo cirrose e câncer de fígado.
Globalmente, estima-se que 170 milhões de pessoas estejam cronicamente infectadas com o HCV e que entre 3 e
4 milhões de pessoas são infectadas cada ano por primeira vez. O HCV se dissemina primordialmente por contato
direto com sangue humano. As principais causas de infecção por HCV no mundo são as transfusões de sangue
5
não controladas e a re-utilização de agulhas e seringas que não foram adequadamente esterilizadas.
A presença de anticorpos anti-HCV não pode ser confirmada até 12-27 semanas depois da exposição, criando um
6
período de janela de soronegatividade e potencial infecciosidade.
Princípio
Quando as micropartículas paramagnéticas de BIO-FLASH anti-HCV são misturadas e incubadas com a amostra,
se esta apresenta anticorpos específicos anti-HCV, estes se combinam com os antígenos de HCV que recobrem as
micropartículas. Depois de uma separação magnética e lavagem para eliminar resíduos da amostra, se adiciona um
traçador que consiste em um anticorpo monoclonal anti-IgG humana marcado com isoluminol que se une aos
anticorpos IgG anti-HCV capturados pelas micropartículas. Depois de uma segunda incubação, separação
magnética e lavagem, se adicionam os reagentes que ativam a reação quimiluminescente. O luminômetro do
BIO-FLASH mede a luz emitida como unidades relativas de luz (URL) que são diretamente proporcionais à
concentração de IgG anti-HCV da amostra.
O BIO-FLASH utiliza um método de redução de dados com ajuste a uma curva logística de 4 parâmetros (4PLC)
para gerar uma Curva de Calibração Mestre (CCM). Esta curva vem predefinida, depende do lote e é guardada no
instrumento através do código de barras do cartucho. Com a leitura dos calibradores (que se fornecem em um kit
separado), a CCM predefinida se transforma em uma Curva de Calibração de Trabalho (CCT) nova e específica
para o instrumento. As concentrações dos calibradores estão incluídas nos códigos de barras dos tubos dos
calibradores.
Esquema da reação:
Ativadores
(Triggers)
Ativadores
(Triggers)
Partícula magnética
Amostra
Traçador
URL
URL
Emissão de luz
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8572 R02 07.2012 por.doc
0459
BIO-FLASH ®
Componentes
Cartucho de reagentes
O kit BIO-FLASH anti-HCV contém um cartucho de reagentes para 100 determinações (REF 3000-8572).
Nota: O desenho do cartucho está protegido por patente (US D565,741 / Desenho CE 000762992-0001)
Composição do cartucho de reagentes:
O cartucho está composto por 4 frascos que contêm:
A.
1
frasco
cilíndrico
de
suspensão
de
micropartículas recobertas com antígenos
recombinantes de HCV que representam os
seguintes epitopos de HCV: core, NS3, NS4 e
NS5.
B.
1 frasco de tampão de ensaio. Contém < 0,1%
de azida sódica e 1,0% de Triton X-100.
C.
1 frasco opaco de traçador que consiste em
anticorpo monoclonal murino anti-IgG humana
marcado com isoluminol. Contém < 0,1% de
azida sódica e 8,0% de etilenoglicol.
D.
1 frasco com diluente de amostra. Contém
< 0,1% de azida sódica
Preparação
Veja a figura seguinte.
Cartucho: as micropartículas sedimentam durante o transporte e o armazenamento, por isso é preciso misturá-las
para voltar a ressuspendê-las.

Antes de utilizar o cartucho pela primeira vez, inverta-o suavemente 30 vezes evitando a formação de
espuma (as bolhas podem fazer com que os sensores de líquido do instrumento dêem leituras errôneas).

Comprove que as micropartículas estejam totalmente em suspensão. Se não for assim, continue invertendo o
cartucho até que as micropartículas se ressuspendam totalmente.

Se as micropartículas não se ressuspendem ou detecta que o pré-cinto dos reagentes está furado, NÃO
UTILIZE O CARTUCHO.

Uma vez que as micropartículas estejam em suspensão, coloque o cartucho sobre uma superfície sólida e
retire com cuidado a lingüeta vermelha de segurança para o transporte.

Mantendo o cartucho sobre a superfície sólida, aperte as duas abas situadas nos dois lados da tapa
perfurante (peça cinza) e pressione a parte superior do cartucho até que fique em posição de bloqueio. Uma
vez em posição de bloqueio, as abas têm que ficar ocultas. Não inverta o cartucho aberto.

Deixe o cartucho repousar durante 5 minutos antes de carregá-lo no instrumento.

Uma vez carregado o cartucho, o instrumento mistura seu conteúdo de forma automática em intervalos periódicos.
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8572 R02 07.2012 por.doc
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BIO-FLASH ®
Precauções
Os reagentes BIO-FLASH são para diagnóstico IN VITRO.
Uso exclusivo para profissionais.
O tampão de ensaio contém azida sódica < 0,1% e Triton X-100 1,0%. Nocivo por ingestão (R 22). Em caso de
ingestão, procurar assistência médica (S 46).
O traçador contém azida sódica < 0,1% e etilenoglicol 8,0%. Nocivo por ingestão (R 22). Em caso de ingestão,
procurar assistência médica (S 46).
A azida sódica pode reagir com encanamentos e ralos de chumbo ou cobre originando azidas metálicas altamente
explosivas. Ao eliminar os restos de reagentes, fazê-lo em abundante volume de água.
ATENÇÃO: MATERIAL DE RISCO BIOLÓGICO.
Descartar todos os materiais usados em recipientes adequados para material bio-contaminante.
Por favor, não reutilize nem reintroduza reagentes nos cartuchos ou frascos.
Coleta e conservação das amostras
Usar soro fresco (também se pode utilizar tubos com gel separador de soro) ou plasma (EDTA, Li-heparina,
Na-heparina, citrato e ACD). Outros anticoagulantes devem ser comprovados antes de utilizar-se. As amostras
não devem ser inativadas por calor. As partículas em suspensão devem ser eliminadas por centrifugação. Nas
diretrizes CLSI H18-A3 e H21-A5 encontrará mais informação sobre o manuseio, o transporte, o processamento e
a conservação das amostras.
Soro
As amostras de soro podem ser conservadas a 2-8°C durante 8 dias. Para um período de tempo mais longo, devem
ser congeladas a uma temperatura igual ou inferior a -20°C. As amostras podem congelar-se/descongelar-se no
máximo 3 vezes. Misturá-las bem depois de descongelar. Comprove que não haja bolhas nas amostras e, em caso
contrário, elimine-as todas antes da análise.
Plasma
As amostras de plasma podem ser conservadas a 2-8°C durante 8 dias. Para um período de tempo mais longo,
devem ser congeladas a uma temperatura igual ou inferior a -20°C. Descongelar o plasma a 37°C. Descongelar as
amostras somente uma vez. Misturá-las bem depois de descongelar. Comprove que não haja bolhas nas
amostras e, em caso contrário, elimine-as todas antes da análise.
Volume de amostra
O volume de amostra necessário para realizar um único teste com BIO-FLASH anti-HCV varia em função do tipo
de recipiente que se utilize. Um teste requer ao menos 26 µL mais o volume morto, que é de 200 µL se é utilizada
a copa de amostra recomendada (REF 3000-8209).
Outros materiais
Os seguintes materiais não são fornecidos com o cartucho de reagentes e devem ser comprados por separado.
REF 3000-8573
BIO-FLASH anti-HCV Calibrators (Calibradores)
REF 3000-8574
BIO-FLASH anti-HCV Controls (Controles)
Leia com atenção as instruções correspondentes se deseja mais informação.
Não utilize outros calibradores. A informação que necessita o instrumento BIO-FLASH para calibrar o ensaio
BIO-FLASH anti-HCV está incluída nos códigos de barras dos tubos.
Utilizar controles de outros fabricantes pode dar lugar a resultados imprevistos.
Assegure-se de que no instrumento BIO-FLASH haja uma quantidade suficiente dos seguintes consumíveis antes
de processar amostras, calibradores ou controles:
REF 3000-8206
BIO-FLASH Cuvettes (Cubetas)
Nota: O desenho das cubetas está protegido por patente (US D560,816 / Desenho CE 000762984-0001).
REF 3000-8204
BIO-FLASH Triggers (Ativadores)
REF 3000-8205
BIO-FLASH System Rinse (Solução do sistema)
Instrumento / realização do ensaio
No Manual do Usuário do BIO-FLASH encontrará as instruções completas para realizar o ensaio.
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8572 R02 07.2012 por.doc
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Calibração
O código de barras do cartucho contém uma Curva de Calibração Mestre (CCM) que é válida para o lote de reagentes.
No entanto, para todos os reagentes se necessita uma Curva de Calibração de Trabalho (CCT), que é específica para
cada lote e válida até a data de validade do lote. É preciso obter uma nova CCT quando os resultados dos controles
saiam fora do intervalo de aceitação ou quando se tenha realizado ajustes no instrumento.
Leia com atenção o Manual do Usuário do BIO-FLASH para configurar uma CCT.
Controle de qualidade
Para realizar um programa completo de controle de qualidade é recomendável passar dois níveis de controles. Os
controles BIO-FLASH anti-HCV negativo e positivo foram desenhados para tal programa. Os controles devem ser
analisados ao menos cada 24 horas por dia de utilização. Assegure-se de que os resultados dos controles se
encontram dentro dos limites de aceitação já que, se não for assim, pode ser indicativo de resultados não válidos,
ante os quais o usuário deverá tomar medidas corretivas. Neste caso, verifique todos os resultados obtidos desde
a última comprovação de controle de qualidade aceitável do analito em questão. Pode ser necessário re-calibrar o
instrumento. No Manual do Usuário do instrumento encontrará mais informação. Para a identificação e resolução
7
de situações anormais de controle de qualidade, consulte Westgard et al.
Conservação e estabilidade
Os reagentes que não tenham sido abertos se mantêm estáveis até a data de validade indicada no rótulo do
cartucho se forem conservados a 2-8°C em posição vertical.
Uma vez aberto, a estabilidade do cartucho carregado no instrumento BIO-FLASH ou guardado a 2-8°C é de
6 semanas.
Interpretação de resultados
A quantidade de analito em cada amostra se determina a partir da luz emitida (URL), por interpolação na Curva de
Calibração de Trabalho guardada. Os resultados obtidos com o BIO-FLASH anti-HCV são expressos como S/CO
(Sinal da amostra/Valor de corte). Como o ensaio é qualitativo, o valor numérico do resultado só é indicativo da
quantidade de anticorpo presente.
A determinação de anti-HCV utilizando o ensaio BIO-FLASH anti-HCV é interpretada como segue:



As amostras com resultado < 0,90 S/CO são consideradas não reativas (negativas).
As amostras com resultado ≥ 0,90 e < 1,00 S/CO são consideradas indeterminadas (zona cinza).
As amostras com resultado ≥ 1,00 S/CO são consideradas reativas (positivas).
Amostras com resultado inicialmente reativo ou indeterminado devem ser re-analisadas por duplicado. Se na
repetição ambos os valores são inferiores a 0,90 a interpretação final do ensaio é de resultado negativo para
anticorpos anti-HCV. Se algum dos resultados é positivo ou indeterminado, a amostra deve ser investigada com
um teste suplementar para confirmar o resultado. Um resultado repetidamente positivo é indicativo de infecção
pelo HCV.
Limitações
O resultado de uma única amostra não é suficiente para diagnosticar uma infecção por HCV. Portanto, os
resultados de BIO-FLASH anti-HCV devem ser utilizados em conjunção com outros dados como, por exemplo, a
sintomatologia, a historia clínica, os resultados de outras provas, e toda a informação adicional relevante. Um
resultado negativo não exclui a possibilidade de exposição ou infecção por HCV. Como em todos os ensaios
imunológicos sensíveis, existe a possibilidade de obter resultados positivos que não se repitam.
Resultados esperados
5
A incidência do HCV em escala global não é bem conhecida, porque a infecção aguda é geralmente assintomática.
Entre 2 e 4 milhões de pessoas podem estar cronicamente infectadas nos Estados Unidos, 5 a 10 milhões na Europa
e cerca de 12 milhões na Índia e não sabem que estão infectadas. Cerca de 150.000 novos casos ocorrem
anualmente nos EUA e na Europa Ocidental e cerca de 350.000 no Japão. Destes, aproximadamente 25% são
sintomáticos, mas 60-80% pode evoluir para doença hepática crônica, dos quais 20% desenvolvem cirrose. Cerca de
1, 2
5% a 7% dos pacientes podem vir a morrer das conseqüências da infecção.
1
A maioria dos países europeus registra uma prevalência do HCV na população geral entre 0,5 e 2%.
A OMS estima que cerca de 3% da população mundial tenha sido infectada com o HCV e que existem mais de
3
170 milhões de portadores crônicos que estão em risco de desenvolver cirrose hepática e / ou câncer de fígado.
Índices muito altos de presença de anticorpos HCV (> 70%) foram descritos em usuários de drogas injetáveis e
1
hemofílicos. Prevalências médias de 20 a 30% tem sido observadas em pacientes que recebem hemodiálise. A
incidência vem declinando desde que a transmissão através de produtos derivados de sangue foi reduzida a
3
quase zero e que precauções universais são seguidas em contextos médicos.
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Características funcionais
NOTA: os seguintes dados são representativos; os resultados em experimentos isolados podem variar respeito a
estes dados.
Especificidade
A avaliação de especificidade foi baseada em testar amostras de soro de doadores de sangue não selecionados,
incluindo doadores de primeira vez e de pacientes internados. Foram testadas em total 5022 amostras frescas de
soro, não selecionadas, provenientes de dois bancos de sangue, 3509 das quais eram do Banc de Sang i de
Teixits de Catalunya (Espanha), e 1513 do Centro EFS Atlantique de Tours (França). Além disso, 250 amostras
não selecionadas de soro de pacientes internados no Hospital de la Santa Creu i Sant Pau (Espanha) foram
também avaliadas.
As amostras "repetidamente reativas" foram re-analisadas usando um teste suplementar. A especificidade foi
então calculada, com os resultados mostrados na tabela seguinte:
Amostras
testadas
Doadores de sangue
Pacientes hospitalizados
n
5022
250
Inicialmente Repetidamente
RR
RR
reativas
reativas
positivas
Especificidade
indeterminadas
(IR)
(RR)
confirmadas
%
n
n
n
n
25
20
4
0
99,7
13
13
0
13
100
Sensibilidade
A sensibilidade foi avaliada testando amostras comprovadamente positivas anti-HCV. A sensibilidade foi calculada
para cada grupo de amostras, obtendo-se os resultados mostrados na tabela seguinte:
Amostras
testadas
n
Amostras
reativas
n
197
197
100
≤1 dia depois da coleta
37
37
100
genotipo 1
genotipo 2
genotipo 3
genotipo 4 (não-c, não-d)
genotipo 4c/4d
genotipo 5
genotipo 6
Total de amostras genotipadas
91
24
55
37
13
14
1
235
91
24
55
37
13
14
1
235
100
100
100
100
100
100
100
100
Não genotipado
Sensibilidade
%
Sensibilidade para soroconversão
Foram realizados estudos adicionais de sensibilidade pela análise de espécimes de 30 painéis comerciais de
soroconversão para HCV. Os resultados foram comparados com os de outros métodos comerciais autorizados.
Com nove (9) painéis a reatividade observada foi precoce, com vinte (20) painéis a reatividade foi equivalente e
com apenas um (1) painel de soroconversão o BIO FLASH anti-HCV apresentou reatividade mais tarde.
Precisão
A precisão intra-ensaio e a total (ensaio a ensaio e dia a dia) foram avaliadas em múltiplos ensaios, conforme as
diretrizes CLSI EP05-A2. Os resultados estão resumidos na tabela seguinte:
Controle negativo
Controle positivo
Cerca do valor de corte
Média (S/CO)
0,26
3,16
0,94
CV% (intra-ensaio)
7,1
4,3
4,6
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
CV% (Total)
12,3
9,2
8,1
3000-8572 R02 07.2012 por.doc
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Reprodutibilidade
A repetibilidade entre réplicas, entre lotes e entre instrumentos foi avaliada utilizando 50 amostras. Os resultados
estão resumidos na tabela seguinte:
Réplica 2 vs. Réplica 1
Lote 2 vs. Lote 1
Instrumento 2 vs. Instrumento 1
n
50
50
50
Co-negatividade
100%
100%
100%
Co-positividade
100%
100%
100%
Interferências
Estudos segundo as diretrizes CLSI EP7-A demonstraram que as seguintes substâncias potencialmente
interferentes não alteram os resultados de BIO-FLASH anti-HCV:
Substância potencialmente interferente
Hemoglobina
Bilirrubina indireta
Bilirrubina direta
Triglicérides
Fator reumatóide
HAMA (anticorpo humano anti-murino)
Concentração
500 mg/dL
18 mg/dL
18 mg/dL
1300 mg/dL
800 UI/mL
1 µg/mL
% Interferência
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
Reatividade cruzada
Foram analisadas com o ensaio BIO-FLASH anti-HCV 134 amostras positivas para condições que potencialmente
poderiam produzir reação cruzada, incluindo de mulheres grávidas. Considera-se que ocorre uma reação cruzada
quando o diagnóstico muda de positivo a negativo ou vice-versa. As amostras reativas foram comparadas com um
ensaio de referência para o qual não foi observada reação cruzada com as substâncias potencialmente
interferentes. Os resultados estão resumidos na tabela seguinte:
Reação cruzada potencial
anti-toxoplasma
anti-CMV (citomegalovírus)
anti-Rubéola
anti-HDV IgG (vírus da hepatite delta)
IgG elevada
Mononucleose
RF (fator reumatóide)
ANA (anticorpos anti-nucleares)
anti-HBs
anti-HBc
anti-VZV (vírus da varicela zoster)
RPR (reagina plasmática rápida)
Grávidas
Grávidas (multíparas)
anti-EBV (vírus Epstein-Barr)
IgM elevada
anti-HEV (vírus da hepatite E)
HBsAg
HAV-IgG (vírus da hepatite A)
HAV-IgM (vírus da hepatite A)
anti-HIV (vírus da imunodeficiência humana)
anti-HSV 1 (vírus herpes simplex tipo 1)
anti-E. coli
Concordância
6/6
6/6
6/6
8/8
4/4
5/5
5/5
5/5
6/6
5/5
5/5
5/5
7/7
5/5
4/4
6/6
5/5
6/6
6/6
5/5
3/3
6/6
15/15
Limite de detecção
O limite de detecção (LD), determinado segundo as diretrizes CLSI EP17-A, se situa em 0,08 S/CO.
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3000-8572 R02 07.2012 por.doc
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