O receptor de melatonina Mel1a e a formação do cálice

Título: O receptor de melatonina Mel1a e a formação do cálice óptico
Nome do Bolsista: Renato Corrêa Nogueira
Orientadora: Lucia de Fatima Sobral Sampaio
Resumo:
Melatonina modula a diferenciação de células da retina em embriões de
galinha, além de estar relacionado à formação do cálice óptico e do coração
nestes embriões, fato importante para a consideração da melatonina e seus
análogos como drogas candidatas para terapia em doenças oriundas de falha
no processo de organogênese. A melatonina sinaliza através de seus
receptores de membrana Mel1a/MT1 e Mel1b/MT2, além de ser inibidora de
calmodulina, uma proteína ligante de cálcio, essencial para a formação do
cálice óptico. Em nossos estudos farmacológicos prévios a melatonina
apresentou atuação no desenvolvimento do cálice óptico pelo Mel1a e do
coração por Mel1b. Como não há ligantes seletivos para o receptor MT1/Mel1a,
no presente estudo a distribuição do receptor Mel1a em embriões inteiros de
galinha nos estágios HH12 e HH18 foi investigada por imunoensaios.
Ovos embrionados foram estagiados de acordo com Hamburger &
Hamilton (1951), alocados em uma chocadeira úmida à 37,78ºC, até atingirem
os estágios HH12 (48 h) e HH18 (66 h) quando então, os embriões foram
excisados e dissecados inteiros em CMF (4 ºC; pH 7.4), lavados 2 vezes com
PBS (4 ºC; pH 7.4), e fixados com PFA 4% durante 30 minutos. Fez-se então a
emulsificação e bloqueio durante 30 minutos, utilizando Tween 20 (1:400) e
Soro normal de galinha (1:200) em PBS, totalizando 3 mL. Os embriões foram
lavados 2 vezes com PBS por 10 minutos cada lavagem, depois incubados
com anticorpo primário Anti Mel1a (1:100) durante 3 noites em câmara úmida,
e então foram lavados 3 vezes por 10 minutos com PBS. Após isso, foram
incubados com anticorpo secundário Texas Red (1:400) por 2h, lavados 3
vezes com PBS, sob agitação (40 rpm). No dia da visualização, as lâminas
foram montadas, e os embriões foram analisados por microscopia de
fluorescência (Nikon Fluorescence microscope).
Em embriões HH12, ainda não iniciou o processo de invaginação da
vesícula óptica e o receptor Mel1a está presente apenas no coração
rudimentar, arco aórtico e vasos embrionários. Em embriões HH18, o receptor
apresentou-se em grande quantidade e maior distribuição, principalmente na
área vasculosa, áreas de limitação do embrião, no cálice óptico e no coração. A
distribuição de Mel1a no cálice óptico é semelhante à localização da
calmodulina apresentada por Brady e Hilfer (1982). No coração, o Mel1a pode
agir em consonância com Mel1b por possuírem respostas vasoconstritoras e
vasodilatadoras, respectivamente. Infere-se então, que a melatonina está
agindo via receptor Mel1a na formação do cálice óptico, e está contribuindo
para a morfogênese do coração através da manutenção de equilíbrio da
pressão nos vasos sanguíneos extraembrionários e embrionários.