Projeto - (LTC) de NUTES

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Ca 2+ ATPase:”Thus, heat would be derived from the
continuous synthesis and hydrolysis of ATP in the mitochondria
matrix.”
de Meis, L et al., 2006. JBC

UCP: uncoupler protein. Presente em diversos eucariotos.
Cannon, B., and Nedergaard, J. (2004) Physiol. Rev.

Mecanismo de produção de calor pela UCP: “These types of
suggested mechanisms… consequently to stimulation of
substrate oxidation/oxygen consumption in the mitochondria
(i.e., thermogenesis).”
Cannon, B., and Nedergaard, J. (2004) Physiol. Rev.

Comprovar o mecanismo de produção de calor da UCP por
aumento de oxidação de substratos e consumo de oxigênio
e comparar com outros ativadores do aumento de
metabolismo.

Isolamento mitocondrial de BAT , tubérculos de batata e
cérebro de camundongos: centrifugação diferencial em
gradiente de percoll .

Consumo de oxigênio: oxigrafia de alta resolução (oroboros)
1- Mitocôndrias na presença de diferentes concentrações
de ácido graxo ( ex: ác. linolênico), ativadas por diferentes
substratos da CTE ( succinato, piruvato malato). (estado
desacoplado)
2- Mitocôndrias na presença de 1mg/mLBSA faf ( quelante de
ácidos graxos) e 2mM GDP. (estado acoplado)

Calorimetria: calorímetro do prof Leopoldo.
1- Mitocôndrias na presença de diferentes concentrações de ácido
graxo ( ex: ác. linolênico), ativadas por diferentes substratos da CTE (
succinato,piruvato malato). (estado desacoplado)
2- Mitocôndrias na presença de 1mg/mLBSA faf ( quelante de ácidos
graxos) e 2mM GDP. (estado acoplado)
Comparação do calor gerado com diferentes substratos da
cadeia transportadora de elétrons
Investigar o calor gerado pelo aumento do metabolismo

Investigar o calor gerado pelo aumento do metabolismo
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Hexokinase mitocondrial:
da- Silva, WS et al, 2004. JBC
Camacho-Pereira et al, 2009. Plant. Phisiol

Se a UCP produz calor por aumentar a oxidação de
substratos e o consumo de oxigênio, a hexokinase
mitocondrial que também aumenta o consumo de oxigênio
nos mesmos níveis da UCP, seria um potencial gerador de
calor.

Investigar a produção de calor por atividade de hexokinase
mitocondrial em mitocondrias isoladas de tubérculos de
batata e cérebro de ratos.

Calorimetria: calorímetro do prof Leopoldo.
1- Mitocôndrias na presença de diferentes concentrações
de glicose (batatas) e 2-DOG (para cérebro) na presença
de BSA fatty acid free e GDP.
2- Testar o número 1 com diferentes substratos da cadeia
transportadora de elétrons.
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Ainda não foi verificado a presença de atividade de
hexokinase em mitocôndrias isoladas de BAT.
Qualquer sistema que aumente o metabolismo,
principalmente o consumo de oxigênio, seria capaz de
produzir calor e participaria do processo de termogênese.
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