Aula 3-2012 - Setor de Virologia UFSM
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PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA DEPTO DE MEDICINA VETERINÁRIA PREVENTIVA BIOLOGIA MOLECULAR Aula 3 – topologia e propriedades do DNA As moléculas de DNA são muito longas Algumas moléculas de DNA são circulares DNA circular ou linear com extremidades restritas é superenrolado (supercoiled) Relaxado Supercoiled Significado Biológico do SUPERCOILING Propriedades físicas: ABSORVÂNCIA (UV) ABSORVÂNCIA (UV) -NTPs > oligonucleotídeos > ssDNA/RNA > dsDNA 1OD260: 50 ug/ml ds DNA 1OD260: 38-40 ug/ml ssDNA ou RNA 1OD260: 33 ug/ml oligonucleotídeos A cadeia dupla de DNA pode ser “melted” reversivelmente ATCGCCTTAAGCGTAGC '''''''''''''''''''''' TAGCGGAATTCGCATCG Aumenta temperatura Reduz temperatura ATCGCCTTAAGCGTAGC TAGCGGAATTCGCATCG Absorbância: ssDNA > dsDNA 1.4 1.3 1.2 1.1 1 Temperatura (°C) 1.4 TATCGCCGTG 1.3 1.2 Tm ATCGGG TACCCC 1.1 ATAGCGGCAC 1 Temperatura (°C) Tm: - Definição - Fatores que afetam Melting in vivo -Significado -Executado por enzimas O DNA é replicado por polimerases que tomam instruções na cadeia-molde Cada cadeia complementar serve de molde para a outra na replicação Separação A replicação do DNA é semiconservativa ORGANIZAÇÃO/COMPACTAÇÃO DO DNA Bactérias: DNA geralmente circular, conjugado com proteínas, compactado (nucleoide) Nucleoide ocupa a região central da bactéria Bactérias frequentemente possuem moléculas acessórias de DNA – plasmídios EUCARIOTAS DNA conjugado com proteínas – cromatina Nível de compactação varia muito nas fases do ciclo celular - Interfase Mitose Compactação: até 7.000 vezes maior ORGANIZAÇÃO DA CROMATINA Composição: DNA + proteínas (1:2) - Histonas (50%) Não histonas (50%) RNA: < 10% (DNA) Eucromatina e heterocromatina EMPACOTAMENTO DO DNA Núcleo celular: 6μm de diâmetro DNA cromossômico humano (6 x 106kb) : 1.8m de extensão Três níveis de compactação - NUCLEOSSOMA (6x) - FIBRA DE 30 nm (40x) -FIBRA/SCAFFOLD (1000-10.000) Total: >10.000 -100.000 O NUCLEOSSOMA HISTONAS Digestão parcial Com micrococcal nuclease Digestão total com micrococcal nuclease: NUCLEOSSOMAS - Unidades básicas da cromatina -Octâmero histonas + ~200bp DNA + H1 -146bp (invariável) + linker (8-114bp) -90% do DNA está organizado dessa forma - CORE contém duas voltas de DNA - FIBRA de 10nm FIBRA de 30nm -CHROMOSOME SCAFFOLD - Fibras de 30nm - Cada alça: 30- 90kb - “Ancoradas” na matriz protéica Extremidades do DNA cromossômico: TELÔMEROS (5 – 10kb) Telômeros são replicados TELOMERASES TELOMERASES possuem atividade RT Adiciona oligonucleotídeos TTAGGG a cada replicação – Impede o encurtamento do DNA Inativada com a idade – senescência PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA DEPTO DE MEDICINA VETERINÁRIA PREVENTIVA BIOLOGIA MOLECULAR Aula 3 – topologia e propriedades do DNA
