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Genômica funcional de fungos de
importância médica, ambiental e
biotecnológica
Nalu T. A. Peres
Laboratório de Genética e Biologia Molecular de Fungos
Profa. Dra. Nilce M. Martinez Rossi
Departamento de Genética – FMRP-USP
Fungos
• Organismos eucariotos, uni ou pluricelulares,
apresentam parede celular (quitina);
• Morfologicamente diversos (macro e microscópicos);
• Cogumelos, leveduras e filamentosos (bolores);
• Heterotróficos - nutrição por absorção secreção de uma ampla variedade de enzimas
digestivas que clivam macromoléculas;
• Saprófitos - absorvem os nutrientes da matéria morta;
• Mutualistas - associação benéfica com outros organismos;
• Patógenos - absorvem os nutrientes do tecido hospedeiro (infecções em plantas
e animais).
Fungos – importância biológica
Ambiental: decomposição de matéria orgânica.
Alimentação:
Cogumelos
Leveduras
Saúde pública: aumento na incidência de infecções
fúngicas, devido ao elevado número de individuos
imunocomprometidos.
Economia: fitopatógenos
Filamentosos:
Penicillium roqueforti
Interesse biotecnológico
Descoberta da penicilina (Alexander Flemim, 1928)
Leveduras
• Produção de antibióticos, enzimas, biocombustíveis;
• Excelentes hospedeiros para expressão heteróloga de proteínas (interesse
farmacêutico, industrial, ambiental);
• Organismos modelo para estudo de biologia celular, regulação de expressão
gênica, etc.
Pichia pastoris
Saccharomyces cerevisiae
• Patógenos humanos, em pacientes
imunocomprometidos e saudáveis –
infecções de cutâneas, subcutâneas,
disseminadas e invasivas (candidíases,
meningite criptococócica).
Candida albicans
Cryptococcus
neoformans
Fungos filamentosos
Aspergillus
Penicillium
Fungos Dimórficos
Paracoccidioides brasiliensis
Histoplasma capsulatum
Morfologia dos fungos filamentosos
• Micélio – composto por filamentos
tubulares individuais, denominados hifas.
• Hifas septadas ou cenocíticas. A presença
de poros nos septos permite a circulação
de organelas citosólicas e moléculas entre
as células.
•Algumas espécies produzem esporos sexuais, e
o micélio é então organizado em uma estrutura
denominada corpo de frutificação.
Fungos – estruturas e formas de reprodução
Esporangióforo
Conidióforo
Asco
Reprodução – fungo modelo Aspergillus nidulans
Experimentos de genética
clássica em A. nidulans
Cruzamento de linhagens
complementares
Grupos de ligação: linhagem Master
apresenta marcadores genéticos
cromossomo-específicos
(auxotrofias e resistência a drogas).
Identificação de genes de resistência em A. nidulans
O fungo patogênico Trichophyton rubrum
• Genes envolvidos na patogenicidade,
• Resistência e resposta a agentes antifúngicos,
• Adaptação ao ambiente – mudanças no pH.
Fungo imperfeito (deuteromiceto): ciclo sexual não descrito.
Genômica funcional – Knock out gênico
Papel do gene TruMDR2 (transportador ABC) na suscetibilidade a drogas (Fachin et. al.,
2006, J. Med. Microbiol. 55:1093) e na patogenicidade de T. rubrum (Maranhão et. al.,
2009, J. Med. Microbiol. 58:163).
WT
TruMDR2
Genômica funcional – Knock out gênico
PacC
WT
SGA
WT
SGA + Higromicina
Ensaio de patogenicidade in vitro: Infecção ex vivo de unha
WT
PacC
PacC
Genômica funcional – análise da expressão gênica
Bibliotecas de subtração
Ligação de adaptadores
ao cDNA teste
Hibridação
PCR com oligos específicos
para os adaptadores
Genômica funcional – análise da expressão gênica
Genes expressos em pH ácido
Modulação do pH
ambiente
Genômica funcional – análise da expressão gênica
Genes expressos em pH alcalino
Genômica funcional – análise da expressão gênica
Genômica funcional – análise da expressão gênica
BMC Microbiology (in press)
Genômica funcional – análise da expressão gênica
Identificação de genes envolvidos na infecção ex vivo de pele humana
Subtilisina protease 5
Nosso grupo!
Laboratório de Genética e Biologia
Molecular de Fungos (FMRP):
Profa. Dra. Nilce M. Martinez Rossi
Jeny Cursino Santos
Fernando Segato
Fernanda Maranhão
Fernanda Paião
Henrique Silveira
Juliana Falcão
Luciene Coelho
Rodrigo Cazzaniga
Tiago
Gabriela Felix
Mendelson Mazucato
Roseli de A. Ferreira
Pablo R. Sanches
Marcos
Obrigada!
Laboratório de Bioquímica e Biologia
Molecular de Fungos (FMRP):
Prof. Dr. Antonio Rossi Filho
Diana Gras
Emiliana Silva
Ernna Oliveira
Janaina F. Silva
Juliana Leal
Vivian Cipriano
Niege
Glauce
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