Métodos de estudo em microscopia de luz e eletrônica
Propaganda
Vera Andrade http://histologiavvargas.wordpress.com/ Microscópio O microscópio é um instrumento que permite observar objetos não visíveis a olho nu Isto só é possível por meio de um sistema óptico composto por lentes de cristal que aumentam a imagem do objeto Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz Os primeiros óculos, ano 1280, Itália Galileu Galilei inventou o telescópio no século XVI (duas lentes num tubo) Zacharias Jansen (holandês) inventou o primeiro microscópio, em 1595 Século XVI, formado por três tubos encaixados Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz Microscópio de Leeuwenhoek Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz Robert Hooke, 1670 Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz Microscópio óptico, Microscópio composto ou Microscópio de Campo claro Constituído de parte mecânica e parte óptica Parte Mecânica Tubo ou cabeçote Coluna ou braço Revólver Parafuso do Condensador Platina ou mesa Parafuso Macrométrico Luz Parafuso Micrométrico Base ou pé Botão de liga e desliga Botão aumenta a intensidade de luz Parte Mecânica Base ou pé suporte Coluna ou braço apoio paras as estruturas Tubo peça de ligação entre a ocular e o revólver Revólver peça giratória que contém as lentes objetivas Platina suporta a preparação Parafuso Macrométrico, de passo largo, é para movimento de grande amplitude Parafuso Micrométrico, de pequeno passo, é destinado a focar o material Parte Óptica Lentes oculares Lentes objetivas Condensador (lente) Diafragma Parte Óptica Condensador, concentra os raios luminosos objeto possui um diafragma de diâmetro modificável, proporciona uma maior ou menor intensidade luminosa Lentes objetivas, próximas do objeto, projetam a imagem ampliada do objeto em direção a ocular Lente ocular, funciona como uma lupa, amplia a imagem fornecida pela objetiva Parte Óptica CONDENSADOR – geralmente negligenciado não interfere no aumento da imagem, mas ele influencia em sua nitidez e riqueza de detalhes Age no LIMITE DA RESOLUÇÃO do sistema óptico, embora esta propriedade dependa principalmente das lentes objetivas LIMITE DE RESOLUÇÃO LR de um microscópio é a capacidade de: Separar detalhes Produzir imagens separadas de partículas muito próximas É a menor distância que deve existir entre dois pontos para que eles apareçam separado Limite de Resolução LR = K . AN K é uma constante 0,612 é o comprimento de onda luz branca (verdeamarelo) = 0,55 m AN é a abertura numérica da lente objetiva O limite e resolução é diretamente proporcional ao comprimento de onda e inversamente proporcional a abertura numérica (vem gravada na lente) As objetivas trazem outras informações 160 ou 170, indica em milímetro o comprimento do tubo do microscópio, onde devem ser usadas as objetivas para que dêem melhores resultados. 0,17, distância de trabalho, que significa o tamanho da lamínula, para a qual as aberrações são corrigidas. Códigos de cores das lentes objetivas Aumento Cores 4X ou 5X 10X 40 ou 50X 100X Imersão – óleo Vermelho Amarelo Azul claro Branco Imagem real ampliada e invertida "Microscope compound diagram" por Fountains of Bryn Mawr - Obra do próprio (Based on this and this work and distributed under the same license).. Licenciado sob CC BY-SA 3.0, via Wikimedia Commons http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Microscope_compound_diagram.png#mediaviewer/File:Microscope_compound_diagram.png Outros tipos de microscópios Microscópios Ópticos – MO Microscópio de Contraste de Fase Microscópio de Campo Escuro Microscópio de Fluorescência Microscópio de Polarização Microscópio Eletrônico – ME Microscópio de contraste de fase – células vivas Usa as propriedades da refração da luz Refração é a passagem da luz de um meio para outro Microscópio de contraste de fase transforma diferentes fases luminosas, para as quais o olho não é sensível, em diferentes intensidade luminosa perceptíveis Microscopia de luz convencional Microscopia de contraste de fase Microscópio de campo escuro Objetiva LUZ Condensador é substituído por um condensador de fundo escuro A preparação é iluminada por raios oblíquos A célula fica com aparência brilhante e o fundo escuro CONDENSADOR Microscopia de campo escuro - células de sangue. Microscópio de Polarização 2 raios de luz = Raios polarizados Quando um raio de luz atravessa certas substâncias do nosso corpo que são birrefringentes acontece uma dupla refração Substâncias como dentes, ossos, fibras de colágeno e outras possuem um estado cristalino, arranjo molecular interno Possui dois prismas um prisma utiliza as propriedades de um único raio eliminando o outro Microscópio de luz polarizada: da dentina (dente). Microscópio de luz polarizada: Fibras de colágeno exibem birrefringência (brilhantes ou amarelas). Microscópio de Fluorescência Emite uma luz ultravioleta Espelho Vários filtros Permite detectar proteínas ou estruturas marcadas com compostos fluorescentes Similar ao MO, exceto pela luz empregada Luz ultravioleta e pelos 2 conjuntos de filtros que desviam os raios do olho do observador. Cultivo de astrócitos. Imunofluorescência verde contra GFAP (proteína de filamentos intermediários) e azul (união com DNA) Alberts et al. Biología Molecular de la célula. (1996) p. 856. Microscopia Eletrônica Ernest Ruska e Max Knoll, na Alemanha, em 1932 Utiliza feixe de elétrons, comprimento de onda muito pequeno, limite de resolução 1.000X menor que microscópio de luz Microscopia Eletrônica Microscopia eletrônica, músculo estriado cardíaco. Medidas Medidas Unidade de medida Símbolo Valor Micrômetro m 0,001 mm Nanômetro nm 0,000001 mm (10-6 mm) ou 10-3 m
