Genética Bacteriana e Clonagem Universidade de Santo Amaro Faculdade de Biomedicina Microbiologia Básica e Clínica I Siga-me no twitter: @professor_leo DNA Ácido Desoxirribonucleico É responsável pelo armazenamento e transmissão da informação biológica T A 5` T 3` A DNA C A G 3` G Estrutura Primária T C 5` CROMOSSOMO Dupla fita circular Tamanho varia de acordo com o tipo de bactéria Escherichia coli – 4,6 milhões de bases (850 x maior que a célula) Difuso na região nucleóide Genes para o metabolismo e ciclo vital Constituído por partes codificantes Ausência de Introns O cromossomo dos procariontes é circular Localização do DNA Eucariotos x Procariotos Meio com glicose (lacL) gene repressor (lacP) gene promotor (lacO) gene operador (lacZ) β-galactosidase •(lacY)lactose-permease •(lacA) tiogalactosídeo-transacetilase Sem glicose e com lactose Clonagem Molecular A Bactéria como ferramenta Siga-me no twitter: @professor_leo Estrutura básica de um plasmídeovetor Clonagem Molecular Tecido RNA AAAA AAAA AACT GGCA TCGT RT ds cDNA cDNA AACT ds cDNA GGCA TCGT VETORES ORI DNA RECOMBINANTE ORI Ampr PLASMÍDIO Ampr cDNA Seleção das bactérias transformadas Bactérias que não receberam o DNA (inserto) crescem formando colônias azuis (presença do gene LacZ) enquanto aquelas que foram transformadas crescem incolores.