microscópio ótico

NOÇÕES GERAIS DE CITOLOGIA
Prof. Narcizo A. Tonet
NOÇÕES GERAIS DE CITOLOGIA
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A célula
Método de coloração das células
Imunocitoquímica
Microscópio ótico
A CÉLULA
A CÉLULA
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A descoberta da célula
Há 400 anos descoberta do mundo microscópico.
A CÉLULA
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A descoberta da célula
Invenção do microscópio
Microscópio – 1591, Zacharias Janssen e seu pai.
Antonie van Leeuwenhoek (1632- 1723)- Microscópio simples.
Robert Hooke, 1663- microscópio composto. Cortiça. Livro
Células (cells) – deriva do latim cellula, diminutivo de cella,
pequeno compartimento.
Mathias Schleiden e Theodor Schwann – Teoria celular.
A CÉLULA
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A descoberta da célula
A CÉLULA
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A descoberta da célula
A CÉLULA
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Partes fundamentais
Citoplasma
Membrana plasmática
Núcleo
A CÉLULA
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A MEMBRANA CELULAR
Reveste o citoplasma
Barreira semi-permeável
Microvilosidades
Cílios
Flagelos
A CÉLULA
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O CITOPLASMA
Mitocôndrias
Retículo endoplasmático
Ribossomos
Aparelho de Golgi
Vesículas
Inclusões celulares
Citosol
Citoesqueleto
A CÉLULA
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O NÚCLEO
Carioteca
Cromatina (heterocromatina, eucromatina, corpúsculo
de Barr, nucléolos)
A CÉLULA
Fábrica
Método de coloração das células
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Técnicas para observação ao M.O.
Observação vital- exame a fresco.
Fixação e coloração
fixação- formol, ácido acético, álcool.
corantes
Método de coloração das células
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Coloração de Giemsa
Coloração de May-Grunwald Giemsa
Coloração de Leishman
Coloração de Papanicolau
IMUNOCITOQUÍMICA
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Anticorpos específicos contra pt
Citoquímica e histoquímica
Queratina (célula epiteliais), desmina e
vimentina (sarcomas)
MICROSCÓPIO ÓTICO
MICROSCÓPIO ÓTICO
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A descoberta do microscópio ótico
Slide 5
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Componentes
Características óticas de um microscópio
Ajuste para o uso
Cuidados e manutenção
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Componentes Mecânicos
Base
Estativa ou corpo
Tubo de observação ou cabeçote
Revólver ou Porta objetivas
Mesa ou Platina
Charriot
Suporte do condensador de campo e filtros
Parafusos de centralização e regulagem vertical do condensador
de campo
Comandos de focalização
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Componentes óticos
Oculares
Prismas
Objetivas
Condensador
Condensador de base
Filtros
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Base
Estabilidade
Sistema elétrico (lâmpada, transformador)
Lente coletora de raios
Condensador de base e diafragma íris
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Estativa ou corpo
Apoio para transporte
Interruptor de voltagem
Controle de intensidade de iluminação
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Tubo de observação ou cabeçote
Acoplada as objetivas e jogo de prismas
Rotação de 360 graus
Saída para 1, 2 ou 3 oculares
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Revólver ou porta objetivas
Disco serrilhado
Fixação e permuta das objetivas
3 a 5 objetivas
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Mesa ou platina
Plataforma para apoio da lâmina de vidro
Escala Vernier
Charriot
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Charriot
Movimento da lâmina
Marcação da posição – coordenadas escala Vernier
Fixa (platina)
Móvel (charriot)
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Suporte do condensador de campo e filtros
Encaixe para fixação do condensador
Parafuso de fixação
Condensador de campo claro, campo escuro ou
contraste de fase
Suporte para filtros fixado ao condensador
MICROSCÓPIO ÓTICO

Parafusos de centralização e regulagem
vertical do condensador de campo
Pinhão – movimenta verticalmente. Concentra os raios
na posição correta.
Parafusos laterais – centralizar o feixe de luz (princípio
de Koehler)
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Comandos de focalização
Coaxiais
Macrométrico
Amplitude +/- 40 mm por rotação
Micrométrico
Pequena amplitude +/- 0,2 mm por rotação
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Oculares
Cilindro metálico com duas lentes
Poder ampliação 5X, 7X, 8X,10X ...
Tipos
Wide Field (WF)- de campo amplo, óculos, 20,5 mm
Miller – com tela quadriculada
Com ponteiro
MICROSCÓPIO ÓTICO
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PRISMAS
Interior do cabeçote
Alterações ou aberrações discretas
Duplica a imagem
Microscópios simples usam espelhos
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Prismas
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Objetivas
Componentes cilíndricos com lentes no interior
Poder de resolução
Ampliação 5X, 10X, 40X, 100X
Vidro, cristal e material orgânico
Distorções ou aberrações
Tipos de objetivas
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Objetivas
Aberração cromática
Aberração esférica
Curvatura de campo
Coma
Distorção
MICROSCÓPIO ÓTICO

Objetivas
Tipos de objetivas
Acromática (mais simples e mais barata)
Fluorita (correção cromática e melhor resolução)
Planacromática (correção cromática e curvatura de campo)
Apocromática (alta qualidade, apresenta aberração de curvatura
de campo)
Planapocromática (mais aperfeiçoada, associa qualidade das
duas anteriores)
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Nomenclatura das objetivas
Faixa colorida
5X vermelho
10X laranja
40X amarelo verde
100X azul claro
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Nomenclatura das objetivas
Inscrições
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Condensador
Conjunto de lentes de grande abertura
Condensar feixes luminosos
Alinhamento
Diafragma (abertura crítica para cada objetiva)
Tipos
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Condensador de base
Lente coletora de raios
Pode ter um diafragma íris (ajuste da iluminação de
Koehler)
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Filtros
Mudar a cor (filtros cromáticos)
Mudar a intensidade (cinza-neutros)
Mudar a capacidade térmica (catatérmicos)
Luz do dia - azul - transforma luz amarela em branca
MICROSCÓPIO ÓTICO
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Características óticas de um microscópio
Magnificação total
Comprimento do tubo mecânico
Distância de trabalho (WD)
Número de campo
Campo de visão real
Profundidade de campo
Poder de resolução
Abertura numérica
MICROSCÓPIO ÓTICO

Magnificação total
É o poder de ampliação da objetiva multiplicado pelo
poder de ampliação da ocular.
Objetiva 40X e Ocular 10X  Mag. Total= 400X
MICROSCÓPIO ÓTICO

Número de campo
É o diâmetro, em mm, do campo de visão observado
através da ocular.
Está gravado na mesma.
10X / 18
Ampliação 10X
Número de campo 18 mm
MICROSCÓPIO ÓTICO

Campo de visão real
É o diâmetro, em mm, da área circular de um espécime
efetivamente sob o foco do microscópio.
Ocular 10x / 18 e Objetiva 10x
Cvr= número de campo / aumento da objetiva
Cvr= 18 / 10 = 1,8 mm
MICROSCÓPIO ÓTICO

Abertura numérica
É característica da objetiva e expressa uma relação
matemática entre o poder de resolução da objetiva e
a sua capacidade de captar luz.
A.N.= n . sen A / 2
n= índice de refração do meio que a luz atravessa
A= ângulo de abertura da objetiva
MICROSCÓPIO ÓTICO

Poder de resolução
Capacidade da objetiva de produzir imagem nítida.
Objetiva será tanto melhor quanto maior o seu poder
de resolução.
Limite de resolução= menor distância que deve existir
entre dois pontos para que pareçam individualizados
L.R.= K. ( Y / AN)
K= 0,61
Y= comprimento de onda verde-amarela (550 nm)
MICROSCÓPIO ÓTICO

Exercícios
1)
Calcule o limite de resolução de um microscópio
que utiliza objetiva com AN de 1,25
Calcule para os conjuntos de lentes abaixo=
magnificação total, LR e indique qual conjunto
produz melhor qualidade de imagens
Objetiva  10 / 0,15 Ocular  20x
Objetiva  40 / 0,65 Ocular  5x
2)
a)
b)
MICROSCÓPIO ÓTICO

Ajuste do microscópio para uso
Ajuste da distância interpupilar
Ajuste da dioptria
Iluminação de Koehler
Ajuste do diafgrama íris do condensador de base
Ajuste da focalização
MICROSCÓPIO ÓTICO

Ajuste da distância interpupilar
Observe um espécime
Ajuste as oculares à posição dos olhos, deslocando-as
lateralmente até ter um único campo de visão
Observe a escala e anote o índice
MICROSCÓPIO ÓTICO

Ajuste de dioptria
Focalize a amostra apenas com a ocular direita
Ajuste o foco, olhando apenas com a ocular esquerda
e utilizando o anel de ajustamento de dioptria (no
próprio corpo da ocular)
MICROSCÓPIO ÓTICO

Iluminação de Koehler
Método de iluminação que proporciona melhor
rendimento.
MICROSCÓPIO ÓTICO

Ajuste da focalização – regras práticas
1)
Posicione a objetiva de menor aumento, condensador
abaixado e diafragma fechado.
Coloque a lâmina sobre a platina e localize o material a ser
examinado.
Focalize a amostra com auxílio do macro e micrométrico.
Verifique a iluminação segundo Koehler e ajuste a dioptria.
Nos exames de preparações a fresco use sempre lamínula.
Para trocar de objetiva, gire o revólver pela parte serrilhada.
Não salte nenhuma objetiva.
2)
3)
4)
5)
MICROSCÓPIO ÓTICO

Ajuste da focalização – regras práticas
1)
Use lamínula de espessura correta quando usar objetiva de
40x.
Ajuste o condensador e diafragma para cada objetiva.
Para trocar de lâmina ou terminar o trabalho não abaixe a
platina, coloque a objetiva de menor aumento.
Para interromper o exame momentaneamente, diminua a
luminosidade sem desliga-la.
2)
3)
4)
MICROSCÓPIO ÓTICO

Cuidados e manutenção
1)
Remova poeira das oculares, filtros e condensadores com pincel de cerdas
macias ou pano macio que não libere fios. Não friccione as lentes para não
arranhar.
Não toque as lentes das oculares ou do condensador para não deixar
gordura.
Remover gordura ou óleo de imersão com papel higiênico suave, lenço de
papel ou pano macio levemente umedecido com éter/álcool (7/3) ou xilol
(excesso dissolve o adesivo das lentes).
Microscópio de uso coletivo, limpar previamente as oculares com éter/álcool.
Para limpeza do sistema mecânico usar pano umedecido em água e um
pano seco. Pode-se polir com cera de automóvel a cada 6 meses. Pode-se
limpar partes cromadas com solução de amoníaco.
2)
3)
4)
5)
MICROSCÓPIO ÓTICO

Cuidados na instalação
1)
Evite proximidade de pias, produtos químicos, área de
intensa movimentação, bordas de bancadas, centrífugas e
agitadores.
Evite luz frontal (janelas, portas). A luz deve vir das costas ou
de cima.
Para evitar vibrações utilize sobre a bancada placas de
cortiça de 10 mm cobertas de borracha.
Adequar a altura do assento das cadeiras à altura da
bancada.
A cada hora de trabalho fazer repouso ocular de 5 min.
2)
3)
4)
5)