Monoclonal Mouse Anti-Human Podoplanin Clone D2-40

Monoclonal Mouse
Anti-Human Podoplanin
1
Clone D2-40
Referência M3619
Finalidade
Para utilização em diagnóstico In Vitro
O Monoclonal Mouse Anti-Human Podoplanin, Clone D2-40, destina-se à utilização em imuno-histoquímica. Este anticorpo marca o
marcador de endotélio linfático, podoplanina, em tecidos normais e neoplásicos. O anticorpo pode ser útil na identificação da invasão
linfática de uma diversidade de cancros (1, 2). A interpretação clínica de qualquer coloração ou da sua ausência deve ser complementada
com estudos morfológicos utilizando controlos adequados e deve ser avaliada dentro do contexto do historial clínico do doente e através de
outros testes de diagnóstico por um patologista qualificado.
Resumo e explicação
Podoplanina é uma sialoglicoproteína transmembrana ligada a O de ~38 kDa que é expressa no endotélio dos capilares linfáticos, mas não
nos vasos sanguíneos (3). Para além da expressão no endotélio linfático, a podoplanina também está presente em vários tecidos, incluindo
células mesoteliais, células reticulares, células dendríticas foliculares, células do ovário e germinais do testículo (4). Demonstrou-se
igualmente que o anti-Podoplanin reage com o endotélio linfático e não é reactivo com o endotélio vascular (1, 2). Em tecido neoplásico,
demonstrou-se que a imuno-coloração do endotélio linfático pelo anti-Podoplanin foi útil na identificação da invasão linfática de tumores
primários (1, 2). A utilização conjunta de marcadores para calretinina e podoplanina mostrou melhorar a diferenciação do mesotelioma
versus o adenocarcinoma metastásico (5). Podoplanina também mostrou ser um marcador útil para a identificação diferencial de
seminomas e tumores de células dendríticas foliculares (6).
Consultar as Instruções Gerais para Coloração Imuno-histoquímica da Dako ou as instruções do sistema de detecção quanto aos
procedimentos de IHC para obter informação sobre: 1) Princípio do procedimento, 2) Materiais necessários, mas não fornecidos,
3) Conservação, 4) Preparação das amostras, 5) Procedimento de coloração, 6) Controlo de qualidade, 7) Resolução de problemas,
8) Interpretação da coloração, 9) Limitações gerais.
Reagentes fornecidos
Anticorpo monoclonal de ratinho fornecido na forma líquida como sobrenadante da cultura de tecidos em 0,05 mol/L de Tris/HCl, pH 7,2 e
0,015 mol/L de azida de sódio. Este produto contém proteína estabilizadora.
Clone: D2-40(7)
Isotipo: IgG1, kappa
Concentração de lgG do ratinho mg/L: Consultar a etiqueta do frasco.
Pode usar-se M3619 numa diluição de 1:100-1:200 quando se realizar IHC utilizando o sistema de detecção EnVision+™. Estas indicações
servem apenas de orientação. As concentrações ideais de anticorpos poderão variar dependendo das amostras e do método de
preparação, devendo ser determinadas individualmente em cada laboratório.
Imunogénio
Tecido de disgerminoma (7)
Especificidade
O clone D2-40 foi testado através da análise “Western Blot” de lisados celulares de uma variedade de linhas celulares de tumores. O D2-40
identificou uma banda de 40 kD em imuno-manchas de células de carcinomas epiteliais dos ovários HEY e uma forma de peso molecular
ligeiramente superior em manchas de células MGH-U3. Observou-se igualmente imunoreactividade do D2-40 em análises “Western Blot” de
células de carcinomas epiteliais dos ovários SK-OV-3 e Caov-3, células de teratocarcinomas dos ovários PA-1PA-1, células de
teratocarcinomas dos testículos Tera-1 e Tera-2, 833 células de carcinomas embrionários, células de carcinomas transitórias da bexiga RT4 e células de osteosarcomas U-2 OS. Não se observou qualquer reactividade em análises “Western Blot” de outras linhas celulares de
tumores derivadas de uma variedade de cancros.(7)
O efeito da digestão enzimática na imunoreactividade do D2-40 foi testado utilizando antigénio purificado por afinidade de células HEY e
células HEY intactas. A imunoreactividade do D2-40 em análises “Western Blot” de antigénio purificado e com células através de citometria
de fluxo não foi afectada pela remoção de resíduos de ácido siálico através de tratamento de neuraminidase das células ou proteína. O
tratamento de proteínas ou células com O-sialoglicoprotease destruiu a imunoreactividade do D2-40 tanto em análises “Western Blot”, como
na citometria de fluxo, demonstrando que o antigénio reconhecido pelo D2-40 é uma glicoproteína com ligação O.(7)
Materiais necessários, mas não fornecidos
Consultar as Instruções Gerais para Coloração Imuno-histoquímica da Dako e/ou as instruções do sistema de detecção. Diluente sugerido
para os procedimentos IHC:
Antibody Diluent (diluente de anticorpo) (referência S0809)
Recomenda-se o seguinte controlo negativo para procedimentos de IHC.
Mouse IgG1 (IgG1 do ratinho) (referência X0931)
Precauções
1. Para utilizadores profissionais.
2. Este produto contém azida de sódio (NaN3), um produto químico altamente tóxico na forma pura. Em situações de concentração do
produto, embora não sendo classificadas como perigosas, a NaN3 pode reagir com as canalizações de chumbo e de cobre, formando
(109259-004)
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3.
4.
5.
acumulações altamente explosivas de azidas metálicas. Ao eliminar o produto, adicionar água abundante para evitar a acumulação de
azidas metálicas na canalização.
Tal como acontece com qualquer produto de origem biológica, deverão utilizar-se procedimentos de manuseamento adequados.
Usar equipamento de protecção pessoal adequado para evitar o contacto com a pele e os olhos.
Os reagentes não utilizados deverão ser eliminados em conformidade com as regulamentações federais, estatais e locais.
Conservação
Conservar entre 2 e 8 °C. Não utilizar após o fim d o prazo de validade impresso no frasco. Se os reagentes forem conservados em
condições diferentes das especificadas, o utilizador deverá verificar essas mesmas condições. Não existem sinais óbvios que indiquem a
instabilidade deste produto. Por isso, devem processar-se controlos positivos e negativos simultaneamente com as amostras do doente.
Caso se observe uma coloração inesperada que não possa ser explicada pela variação nos procedimentos laboratoriais e se suspeite da
existência de um problema com o anticorpo, contactar a Assistência Técnica da Dako.
Preparação das amostras
Secções de parafina
Pode utilizar-se anti-Podoplanin em secções de tecido fixado em formol e impregnado em parafina. Não se recomenda o pré-tratamento do
tecido com enzimas proteolíticas.
As secções de tecido desparafinado deverão ser sujeitas a tratamento térmico antes do procedimento de coloração IHC. A recuperação do
epítopo induzida por calor (HIER) envolve a imersão das secções de tecido numa solução tampão pré-aquecida e a manutenção do calor
em banho-maria ou vaporizador (95–99 °C). Utilizar um protocolo de aquecimento de 20 minutos para o processo HIER realizado a
95–99 °C; após o tratamento térmico, deixar arrefec er o frasco com solução tampão e as lâminas durante 20 minutos à temperatura
ambiente. Lavar bem com solução tampão ou água desionizada após HIER. Para uma maior aderência das secções de tecido às lâminas
de vidro, recomenda-se a utilização de Silanized Slides (lâminas silanizadas) (referência S3003). Recomenda-se a utilização de Target
Retrieval Solution (solução de recuperação do alvo) (referência S1700) ou 10x Concentrate (concentrado 10x) (referência S1699).
Secções de criostato e esfregaços de células
Pode utilizar-se anti-Podoplanin para rotular secções de criostato fixadas em acetona ou esfregaços de células fixadas.
Procedimento de coloração
Seguir o procedimento recomendado para o sistema de detecção seleccionado.
Interpretação da coloração
O padrão de coloração celular para Anti-Podoplanin é citoplásmico e por vezes membranoso.
Características técnicas
Tecidos Normais (8)
O Anti-Podoplanin provoca uma forte imuno-coloração do endotélio linfático, das células de gânglios nervosos e dos nervos em muitos tipos
de tecidos normais. As células do endotélio vascular apresentaram resultados negativos em todos os tecidos.(8)
Tipo de tecido (nº testados)
Supra-renal (3)
Medula óssea (3)
Encéfalo, cerebelo (3)
Encéfalo, cérebro (3)
Mama (3)
Colo uterino (3)
Cólon (3)
Esófago (3)
Coração (3)
Rim (3)
Fígado (3)
Pulmão (3)
Células mesoteliais (3)
Ovários (3)
Pâncreas (3)
Paratiróide (3)
Nervos periféricos (3)
Hipófise (3)
Próstata (3)
Glândula salivar (3)
Músculo-esquelético (3)
Pele (3)
Intestino delgado (3)
Baço (3)
Estômago (3)
Testículos (3/3)
Timo (3)
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Elementos de tecidos com coloração positiva
2/3 citoplasma de fibroblastos capsulares; 1/3 citoplasma de fibroblastos intersticiais; 1/3 citoplasma de
linfócitos pericapsulares
3/3 negativo
3/3 citoplasma de neurópilos
3/3 núcleos de astrócitos raros
3/3 citoplasma de células mioepiteliais
3/3 membrana e/ou citoplasma de células epiteliais basilares, 3/3 citoplasma de fibroblastos
estromais
2/3 linfócitos
1/3 citoplasma de células de gânglio nervosos no músculo; 1/3 citoplasma de epitélio basilar
2/3 citoplasma de miócitos
1/3 citoplasma de fibroblastos pericapsulares
3/3 negativo
2/3 citoplasma de células epiteliais dos brônquios, 3/3 orla citoplásmica de células alveolares
1/3 citoplasma de células mesoteliais
3/3 citoplasma de células estromais dos ovários; 1/3 citoplasma de epitélio de superfície de
quistos de inclusão
2/3 citoplasma de fibroblastos periductais; 1/3 citoplasma de células mioepiteliais dos ductos
3/3 negativo
2/3 citoplasma de perineurio
1/3 citoplasma de fibroblastos pericapsulares na neurohipófise; 1/3 citoplasma de neurópilos na
neurohipófise
3/3 citoplasma de células basais dos ductos; 3/3 citoplasma de fibroblastos estromais
3/3 citoplasma de células mioepiteliais acinosas e dos ductos
3/3 citoplasma de perimísio
3/3 citoplasma de células mioepiteliais de estruturas supra-anexos
3/3 citoplasma do plexo mientérico
3/3 negativo
3/3 citoplasma de fibroblastos periglandulares; 1/3 citoplasma do plexo mientérico; 1/3
citoplasma e membrana de linfócitos do centro germinal
3/3 citoplasma de fibroblastos peritubulares
3/3 citoplasma e membrana de linfócitos medulares
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Tiróide (3)
Amígdalas (3)
Útero (3)
Tecidos anormais 2,7
Tipo de tecido (nº testados)
Sarcoma de Kaposi (24):
Fase nodular, placa e mancha
Linfangioma (10)
Angiosarcoma (7)
Leiomiosarcoma (10)
Dermatofibroma (6)
Histiocitoma fibroso maligno (2)
Hemangioma (10)
Tumor glómico (3)
Angiolipoma (2)
Granuloma piogénico (2)
Má-formação vascular (2)
Hemangiopericitoma (1)
Hemangioendotelioma (1)
Dermatofibrossarcoma protuberans (4)
Neurofibromas (6)
Tumores de células germinais puras
Seminomas (35)
Carcinomas embrionários (5)
Teratoma imaturo e maduro (1)
Tumores de células germinais mistas
Seminomas (12)
Carcinomas embrionários (21)
Teratoma imaturo e maduro (16)
Tumor do saco vitelino (4)
Coriocarcinoma (2)
3/3 negativo
3/3 citoplasma e membrana de células epiteliais basilares e linfócitos do centro germinal
3/3 citoplasma do miométrio; 1/3 citoplasma de glândulas do endométrio
Tecido com coloração positiva
24/24
10/10 endotélio revestindo os espaços sinusoidais
3/7
3/10
2/6
1/2
0/10
0/3
0/2
0/2
0/2
0/1
0/1
0/4
0/6
34/35
1/5
0/1
12/12
17/21
5/16
1/4
0/2
Bibliografia
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
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subset of angiosarcomas. Mod Pathol 2002; 15:434-40.
Breiteneder-Geleff S, Soleiman A, Kowalski H, Horvat R, Amann G, Kriehuber E, et al. Angiosarcomas express mixed endothelial
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Kalof AN and Cooper K. D2-40 Immunohistochemistry – So Far! Adv Anat Pathol 2009; 16:62-4.
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Yu H, Gibson JA, Pinkus GS, Hornick JL. Podoplanin (D2-40) is a novel marker for follicular dendritic cell tumors. Am J Clin Pathol
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Edition 07/12
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