ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE EXTRATO ALCOÓLICO DE FOLHAS E CAULE DE ARAÇAÚNA, FRENTE A BACTÉRIAS PATOGÊNICAS ISOLADAS DO PESCADO FRANÇA, O.E.B. ¹; FARIAS, T.C. ¹; LEITE, Y.C. ¹; GAIGHER, M.L.S. ¹; MENEGARDO, S.B. ¹; MINOZZO, M.G. ¹; RIBEIRO, M.L. ¹; ROSA, C.A. 2; SPAGO, F.R. *1 ¹ Instituto Federal do Espírito Santo, Rua Augusto Costa de Oliveira, 660, Piúma/ES. Tel.: (028) 3520-0600; *e-mail: [email protected]. 2 Instituto Federal do Pará, BR 316, Km 61, Castanhal/PA. Tel.:(091) 3412-1600. RESUMO Bactérias dos gêneros Salmonella e Staphylococcus estão frequentemente relacionadas a casos de intoxicação alimentar, sendo responsáveis por inúmeros casos de internações, podendo levar à morte do indivíduo além de causar sérios danos financeiros para o sistema de saúde do país. O objetivo desse trabalho foi testar extratos alcoólicos de folhas e caule de Araçaúna (Psidium eugeniaefolia) no controle de bactérias contaminantes do pescado. As plantas foram coletadas na região de Anchieta, ES, e levadas ao laboratório de microbiologia do Ifes, Campus Piúma. Folhas e caules foram pesados, desinfetados com solução de hipoclorito de sódio 2%, lavadas com água destilada estéril e secas em estufa a 60 °C por 48 horas. 10 g da amostra seca foram pesados e macerados em 80 mL de álcool etílico absoluto, agitados por 20 minutos e filtrados. Após evaporação do solvente o extrato testado no controle das bactérias utilizando-se a técnica de difusão em disco. Os resultados mostraram que ambos os extratos inibem o crescimento de Staphylococcus e Salmonella em condições in vitro, sendo o extrato das folhas o que apresentou melhores resultados no controle dos micro-organismos citados, quando comparados aos extratos de caule. Com isso, espera-se oferecer ao mercado mais uma alternativa de controle da contaminação bacteriana em pescado. Palavra-chave: Psidium eugeniaefolia, metabólitos vegetais, micro-organismos patogênicos, controle microbiológico. ABSTRACT Salmonella and Staphylococcus are commonly related to cases of food poisoning, numerous cases of hospitalization, could lead the individual to death, in addition to causing serious financial damage to the health system of the country. The aim of this study was to test 1 alcoholic extracts of leaves and stem from Aracaúna (Psidium eugeniaefolia) in the control of fish contaminating bacteria. The plants were collected in the Anchieta region, ES, and taken to the microbiology laboratory of IFES, Campus Piúma. Leaves and stems were weighed, disinfected with 2% sodium hypochlorite solution, rinsed with sterile distilled water and dried at 60 ° C for 48 hours. 10 g of dry sample were weighed and macerated in 80 ml of absolute ethanol, stirred for 20 minutes and filtered. The solvent was evaporated and the extracts were tested in the control of bacteria by disk diffusion technique. The results showed that both extracts inhibit the growth of Salmonella and Staphylococcus in in vitro conditions, being the leave’s extract most efficient in the control of these microrganisms, when compared to the stalk. These extracts could be an alternative to control bacterias in fish products, offering to the market an alternative method. Key-words: Psidium eugeniaefolia, plant metabolites, pathogens, microbiological control. INTRODUÇÃO Diversas razões justificam a necessidade urgente por novos agentes antimicrobianos: doenças infecciosas são a segunda maior causa de mortalidade do mundo; altas taxas de resistência microbiana, especialmente em ambientes hospitalares; o decréscimo constante observado no número total de novos agentes antimicrobianos aprovados pelo FDA (Food and Drug Administration) (LUZHETSKYY, 2007) e a necessidade de agentes que atuem por mecanismos de ação diferentes aos fármacos em uso. As doenças transmitidas por alimentos constituem um grande problema de saúde pública, tanto no Brasil como nos demais países, sendo responsáveis por elevados custos econômicos e sociais (WELKER et al., 2010; SACCOL et al., 2012; ALMEIDA et al., 2015; BEZERRA et al., 2015). Bactérias como Salmonella sp. e Staphylococcus aureus constituem as principais causas de contaminações de alimentos provocando sérios problemas para a saúde, inclusive a intoxicação alimentar, por meio da produção de toxinas que causam transtornos gastrointestinais, e muitos outros casos severos de hospitalização, ou até mesmo a morte (CAPALONGA et al., 2014; PIERI et al., 2014; RITTER & TONDO, 2014; ALMEIDA et al,. 2015). Substâncias isoladas de plantas podem contribuir na descoberta de novos produtos, podendo conter metabólitos com ação antimicrobiana, que possam ser utilizados pela 2 indústria na conservação do pescado. Gibbons (2004) cita vários exemplos de metabólitos isolados de plantas, frente à Staphylococcus sp. Este pesquisador também enfatiza que produtos naturais vegetais têm sido apontados como inibidores de bombas de efluxo, conhecidas como “bombas de resistência a múltiplos fármacos”, um novo alvo na busca de antibióticos. Neste contexto faz-se necessário a investigação de espécies vegetais pouco estudadas, como a Araçaúna (Psidium eugeniaefolia), também conhecida como araçá preto, pertencente à família Myrtaceae. O objetivo desse trabalho foi avaliar extratos alcoólicos de caule e folhas de araçaúna e sua atividade antimicrobiana no controle de Salmonella e Staphylococcus coagulase positiva, isolados de pescados. MATERIAL E MÉTODOS A coleta do material botânico (Psidium eugeniaefolia) foi realizada em fragmentos de Mata Atlântica na cidade de Anchieta, Espírito Santo. Os órgãos vegetativos foram transportados para o Laboratório de Microbiologia do Instituto Federal do Espírito Santo – campus Piúma, onde foram pesados e higienizados com solução de hipoclorito de sódio a 2%, durante 10 minutos, e lavados em água destilada estéril. As plantas foram secas em estufa a 60 °C por 48 horas e 10g de caule ou folhas, macerados em 80 mL de álcool etílico absoluto, onde permaneceram durante 72 horas. O extrato foi filtrado em papel filtro, o solvente foi rotaevaporado a 50 °C e a fração obtida foi pesada. O extrato obtido foi diluído em álcool etílico absoluto nas concentrações de 250 e 500 μg/disco, para cada tipo de amostra, em triplicata. Para o teste de inibição in vitro, cada bactéria foi inoculada, utilizando swab, em placas de Petri contento o meio de cultura Mueller Hinton, na concentração de 108 ufc/mL. Discos contendo os extratos foram colocados sobre o inóculo e as placas incubadas a 35°C por 24 horas, período após o qual os halos de inibição foram medidos. RESULTADOS E DISCUSSÃO A Araçaúna é uma planta comumente encontrada em região de Mata Atlântica sendo utilizada atualmente na indústria de sorvetes e na fabricação de produtos artesanais como licores e geleias, podendo também ser consumida in natura. Pouco se sabe sobre suas propriedades farmacológicas antimicrobianas. 3 Os resultados mostraram que tanto o caule quanto a folha da araçaúna possuem metabólitos com capacidade de inibir o crescimento de bactérias dos gêneros Salmonella e Staphylococcus. A tabela mostra o diâmetro dos halos de inibição. Tabela 1. Média do diâmetro dos halos obtidos nos testes de inibição em discos contra as bactérias Salmonella e Staphylococcus. Bactéria inibida Extrato alcoólico Caule 250 g Folha 500 g 250 g 500 g Salmonella sp. 8 mm 12 mm 10 mm 14 mm Staplylococcus coagulase- 12 mm 15 mm 12 mm 18 mm positiva Observou-se que a bactéria Staphylococcus aureus é mais sensível, quando comparada à Salmonella sp., para ambos os extratos obtidos. O extrato alcoólico obtido de folhas de Araçaúna possui maior atividade antimicrobiana contra as duas bactérias testadas. Esses metabólitos possuem potencial para serem utilizados na indústria de pescado, como conservantes naturais, por possuírem atividade antimicrobiana. Mostram-se uma alternativa aos conservantes químicos comumente utilizados em produtos à base de pescado. Porém, esse estudo é o passo inicial para a obtenção de um novo composto com capacidade de controlar o crescimento bacteriano em pescado. Outros estudos devem ser feitos para comprovar a segurança em relação a parâmetros citotóxicos, genotóxicos e mutagênicos. CONCLUSÕES Extratos alcoólicos de Araçaúna apresentaram atividade antimicrobiana contra bactérias dos gêneros Salmonella e Staphylococcus coagulase-positiva previamente isoladas de pescado. Os extratos alcoólicos obtidos das folhas da planta mostraram melhores resultados, quando comparados aos extratos de caule, sendo que a bactéria Staphylococcus aureus foi a mais sensível. Assim, essas substâncias mostram-se como potenciais produtos para serem 4 oferecidos às indústrias de pescado, para serem utilizados como novos agentes antimicrobianos para conservação desses alimentos. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ALMEIDA, I. A. Z. C.; PERESI, T. M. P.; ALVES, E. C.; MARQUES, D. F.; TEIXEIRA, I. S. C.; SILVA, S. I. L.; PIGONB, S. R. F.; TIBAC, M. R.; FERNANDES, S. A. (2015) Salmonella Alachua: causative agent of a foodborne disease outbreak. The Brazilian Journal of Infectious Diseases, S1413-8670(15)00028-8. BEZERRA, A. V.; DOS REIS, E. M.; RODRIGUES, R. O.; CENCI, A.; CERVA, C.; MAYER, F. Q. (2015) Detection of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium Complexes by Real-Time PCR in Bovine Milk from Brazilian Dairy Farms. Journal of Food protection, 78(5): 1037-42. CAPALONGA, R.; RAMOS, R. C.; BOTH, J. M. C.; SOEIRO, M. L. T.; LONGARAY, S. M.; HAAS, S.; TONDO, E. C. (2014) Salmonella serotypes, resistance patterns, and food vehicles of salmonellosis in southern Brazil between 2007 and 2012. Journal of Infection in Developing Countries, 8(7): 811-7. GIBBONS, S.; (2004) Anti-staphylococcal plant natural products. Natural Products Report, 21: 263-277. LUZHETSKYY, A.; PELZER, S.; BECHTHOLD, A. (2007) The future of natural products as a source of new antibiotics. Current Opinion in Investiging Drugs, 8(8): 608-13. PIERI, F. A.; COLOMBO, M.; MERHI, C. M.; JULIATI, V. A.; FERREIRA, M. S.; NERO, M. A.;NERO, L. A. (2014) Risky Consumption Habits and Safety of Fluid Milk Available in Retail Sales Outlets in Viçosa, Minas Gerais State, Brazil. Foodborne Pathogens and Disease, 11(6): 490-6. RITTER, A. C. & TONDO, E. C. (2014) Foodborne illnesses in Brazil: control measures for 2014 FIFA World Cup travellers. Journal of Infection in Developing Countries, 8(3): 254-7. SACCOL, A. L. F.; SERAFIM, A. L.; HECKTHEUER, L. H.; MEDEIROS, L. B.; JÚNIOR, E. A. S. (2012) Food safety in feeding services: A requirement in Brazil. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 5 WELKER, C. A. D.; BOTH, J. M. C.; LONGARAY, S. M.;HAAS, S.; SOEIRO, M. L. T.; RAMOS, R. C. (2010) Análise microbiológica dos alimentos envolvidos em surtos de doenças transmitidas por alimentos (DTA) ocorridos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil.Revista Brasileira de Biociências, 8(1). 6