BB. Identificação de sequências-alvo no genoma do vírus da Zika

ISSN 1808-4532
e-ISSN: 2179-443X
Rev Ciên Farm Básica Apl., Araraquara, v. 37 Supl. 1, Agosto 2016
BB. Identificação de sequências-alvo no genoma do vírus da Zika para desenvolvimento de
Ribossensores
Gabriela Barbosa de Paiva1, Vitória Fernanda Bertolazzi Zocca1, Graciely Gomes Corrêa1, Milca Rachel da
Costa Ribeiro Lins1, Danielle Biscaro Pedrolli1.
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Departamento de Bioprocessos e Biotecnologia, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, UNESP.
Introdução: O vírus Zika é um flavovírus, majoritariamente transmitido pelo mosquito Aedes aegypti, que
apresenta duas linhagens, a Africana e a Asiática. Esta última é a responsável pelos casos da doença no Brasil,
país mais afetado em 2015. O diagnóstico da Zika ainda é um desafio. A identificação dos anticorpos anti-Zika
vírus (IgG e IgM) não apresenta alto nível de especificidade e, uma vez que um paciente já tenha sido infectado
com o vírus da dengue, este pode gerar um resultado falso-positivo para Zika. O método de diagnóstico para
Zika mais utilizado é baseado em reação de RT-PCR, que consiste na transcrição reversa seguida pela reação
em cadeia da polimerase. Entretanto, este método requer uma estrutura que poucos laboratórios de diagnóstico
apresentam. Além disso, os primers utilizados na RT-PCR podem gerar falso-positivos, pois o conhecimento
da variabilidade genética do vírus ainda é limitado. Objetivo: Criação de um circuito sintético de expressão
gênica in vitro para identificar RNA viral de Zika. Metodologia: Serão desenvolvidos sensores de RNA para
a identificação do vírus Zika com base em um sistema de regulação da expressão de um gene repórter
(codificador da cromoproteína vermelha RFP). O sistema de regulação será composto por um riboregulador
denominado Toehold switch. Este é composto por duas fitas de RNA: switch (interruptor) e trigger (gatilho).
Para tanto, o primeiro passo é identificar sequências-alvo (trigger) no genoma do vírus Zika e projetar a
sequência do RNA switch. Resultados e Discussão: As sequências-alvo foram escolhidas por meio do
alinhamento dos genomas dos vírus Zika, Dengue e Chikungunya. Para garantir a especificidade do teste, estas
devem ser únicas no genoma do vírus Zika, ou seja, não devem alinhar com nenhuma sequência do genoma
dos demais vírus. Em seguida, o RNA switch foi desenhado, com o auxílio do software NUPACK, de forma
que apresente, em sua extremidade 5’-UTR, uma sequência que se encontra na forma de hairpin. Esta
sequência sequestra o sítio de ligação do ribossomo (RBS) e o códon inicial, reprimindo a expressão do gene
repórter. A estrutura é seguida por uma sequência codificadora de aminoácidos de baixa massa molar e formada
por 21 nucleotídeos, sendo que essa sequência conectora está ligada à extremidade N-terminal do gene repórter.
As sequências-alvo, assim como o RNA switch, foram sintetizadas na forma de DNA, como oligonucleotídeos.
Os trabalhos de clonagem já foram iniciados. Conclusão: De acordo com os parâmetros definidos, foi possível
identificar sequências-alvo promissoras para o desenvolvimento do sistema.
Palavras-chave: Zika, Diagnóstico Viral, Sensores de RNA.
Apoio financeiro: FAPESP.