anais 2016 - XXI ENGENE

ENGENE
2016
XXI Encontro de Genética do Nordeste
ANAIS 2016
Presidência: Dra. Ana Maria Benko-Iseppon
Vice-presidência: Dr. Reginaldo de Carvalho
Coordenação científica: Dra. Neide Santos
Vice-coordenação científica: Dr. Tercílio Calsa-Jr.
Universidade Federal de Pernambuco
Recife-PE, 29/11 a 02/12/2016
Promoção e Realização
UNIVERSIDADE
DE PERNAMBUCO
Apoio
Biogene
SÍNTESE
BIOTECNOLOGIA
FIOCRUZ
PERNAMBUCO
Sumário
Área de Tematica
Página inicial Página Final
Ensino de Genética e Biologia Molecular
3
30
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
31
46
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Evolução
47
51
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
52
90
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
91
141
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
142
176
Genética Humana e Médica
177
257
Genética de Microrganismos
258
307
Mutagênese e Farmacogenômica
308
352
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
353
417
Genética Forense
418
420
1
Coordenação Cientifica por área
Nome
Função
Área
Instituição
Marise Bezerra Sobreira
Coordenadora
Ensino de Genética e Biologia Molecular
UPE/Genética
Marília de França Rocha
Vice-Coordenadora
Ensino de Genética e Biologia Molecular
UPE/Genética
Ederson Akio Kido
Coordenador
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas
UFPE/Genética
José Ribamar Ferreira Neto
Vice-Coordenador
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas
UFPE/Genética
Rodrigo Augusto Torres
Coordenador
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
UFPE/Zoologia
Rita de Cássia de Moura
Vice-Coordenadora
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
UPE/Genética
Paula Sandrin Garcia
Coordenadora
Genética Humana e Médica
UFPE/Genética
Jaqueline de Azevedo Silva
Vice-Coordenadora
Genética Humana e Médica
UFPE/Genética
Will Barros Pita
Coordenador
Genética de Microrganismos
UFPE/Antibióticos
Anna Carolina Soares Almeida
Vice-Coordenadora
Genética de Microrganismos
UFRPE/Genética
Ana Christina Brasileiro Vidal
Coordenadora
Mutagênese e Farmacogenômica
UFPE/Genética
Silvany Araújo
Vice-Coordenadora
Mutagênese e Farmacogenômica
UFRPE
Ana Maria Benko Iseppon
Coordenadora
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
UFPE/Genética
Antonio Mauro Rezende
Vice-Coordenador
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
CPqAMFIOCRUZ
Valdir de Queiroz Balbino
Coordenador
Genética Forense
UFPE/Genética
Marília de França Rocha
Coordenadora
Genética na Praça
UPE/Genética
Vilma Loreto da Silva
Vice-Coordenadora
Genética na Praça
UFPE/Genética
2
Ensino de Genética e Biologia Molecular
"PERFIL GÊNICO": UMA FORMA LÚDICA DE APRENDER GENÉTICA HUMANA
Patricia de Souza Cavalcante Carnaval1; Arthur Rodrigues da Silva1; Iully Karla Neves Gusmão1; Pedro
Henrique do Bomfim Nascimento1; Igor Vieira de Melo Alves1; Rildo Ney Tavares da Silva1; Daniele Rodrigues
de Amorim1; Elizangela Zuleide de Melo Santos1; Anny Cibelly Campelo Barbosa1; Isliria Stephany Correia do
Nascimento1; Vilma Loreto2.
E-mail: [email protected]
(1)
Discente do Curso de Ciências Biológicas Licenciatura - Centro de Biociências - UFPE; (2)Laboratório de
Genética e Citogenética Animal e Humana - Departamento de Genética - Centro de Biociências - UFPE
RESUMO
No ensino básico, a Biologia sofre com a falta de percepção dos alunos, que não veem validade no que estudam,
além de professores despreparados, que cooperam com este cenário. Este problema cresce ainda mais em relação
aos conteúdos de genética, que solicitam muito da imaginação dos alunos. Estes, por sua vez, deparam-se com o
ensino de genética estagnado, com pouco envolvimento, e a classificam como difícil, mal sabendo definir "gene".
Para evitar que alunos concluam o Ensino Médio achando que as Leis de Mendel são "letras", este trabalho propõe
o uso do Lúdico como meio relevante no ensino de genética, sobretudo a genética humana. Um importante aliado
são os jogos didáticos, que trazem vantagens pedagógicas, tais como cognição, afeição, socialização e criatividade.
O objetivo do presente trabalho foi desenvolver um jogo estimulador do processo de ensino/aprendizagem da
herança de cromossomos sexuais humanos de maneira mais lúdica e menos abstrata. Galgou-se também contribuir
para práticas inovadoras de ensino, como o Ensino por Investigação, despertando assim novas práticas avaliativas
docentes e explorar e melhorar as relações interpessoais dos alunos, de modo a criar um ambiente de troca de
saberes. Assim, surge o "Perfil Gênico", um jogo de tabuleiro, com cartas de dicas acerca da temática "genética" e
regras definidas, que tem como público alvo alunos do Ensino Médio e graduandos de Ciências Biológicas. Nesse
material constam pontos abordados em aula teórica de cromossomos sexuais de humanos, como a definição da
herança dos cromossomos, doenças ligadas ao sexo. Para a sua construção foi necessário papelão e papel ofício
para elaboração das cartas que contém as dicas; papel A3 para impressão do tabuleiro; cola de isopor, tesoura,
tintas de tecido e tampas de garrafa PET para as peças do tabuleiro. Foi desenvolvida uma linguagem simples e
direta, para tornar a atividade um momento de muito aprendizado e divertimento, onde os alunos puderam
estimular seus conhecimentos prévios de forma lúdica. Por ser uma proposta de prática de ensino, espera-se que o
sucesso deste jogo venha em forma de ganho de conhecimentos de genética, desenvolvimento cognitivo e
interpessoal e fomento de novas práticas pedagógicas. Portanto, o "Perfil Gênico" é uma forma de envolver o
lúdico com a atividade investigativa, tornando-se um aliado para o ensino, quebrando a barreira do ensino
tradicional.
3
Ensino de Genética e Biologia Molecular
DO ENSINO À PRATICA: A GENÉTICA SOB O OLHAR DOS DISCENTES DA ÁREA DA SAÚDE DA
UNIVERSIDADE ESTADUAL DA PARAÍBA
Dulceria Costa da Silva1; Renaly da Costa Rodrigues2; Bruno Luiz Fonseca Schamber Reis3.
E-mail: [email protected]
(1)
Discente do curso de Ciências Biológicas da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB); (2)Discente do curso de
Fisioterapia da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB); (3)Faculdade de Ciências Médicas de Campina Grande
(FCM-CG)
RESUMO
A genética é ao mesmo tempo uma ciência básica e uma especialidade nas ciências da saúde e se faz necessária
nos currículos dos cursos da saúde com abordagens diferenciadas, direcionadas para as áreas de atuação de cada
profissional. O trabalho objetivou analisar a percepção dos acadêmicos dos cursos da saúde da UEPB a respeito do
ensino de genética e suas vivências práticas durante os atendimentos. Para tanto, foram aplicados questionários
semi-estruturados a discentes de enfermagem, odontologia e fisioterapia da UEPB campus I que já tivessem
cursado a disciplina de genética e que já possuíssem alguma experiência prática de atendimento. Obteve-se 99
respostas: 39 referentes a enfermagem, 29 a fisioterapia e 31 a odontologia. A grande maioria dos discentes
classificam a genética como muito importante para sua formação e 68% afirmam que seu conhecimento teórico da
disciplina seja regular. Quanto à carga horária oferecida (30 horas), foi considerada insuficiente pela maioria dos
discentes de enfermagem (67%) e fisioterapia (68%) e suficiente para odontologia (87%). Quando perguntados se
o conteúdo abordado condizia com as necessidades do curso, houve um equilíbrio entre as respostas positivas e
negativas em todos os cursos. Também a maioria dos discentes (80%) considera necessário que haja abordagem
prática da disciplina. A maioria dos alunos de enfermagem (54%) e odontologia (74%) afirma nunca ter atendido
pacientes com indício de doença genética, enquanto em fisioterapia 72% afirmaram já ter atendido. 82% de
fisioterapia, 80% de enfermagem e 74% de odontologia dizem não ter orientação acadêmica de como proceder
quanto a pacientes com doenças genéticas. Dentre as sugestões para melhoria no rendimento da disciplina, relatouse aumento da carga horária, realização de atividades práticas e modificações na metodologia e maior
direcionamento do conteúdo para o curso (as duas últimas bastante significativas em enfermagem e odontologia,
respectivamente). É perceptível que há um déficit no processo de ensino-aprendizagem de genética, necessitando
de intervenções que tornem a disciplina mais proveitosa, dentre as quais boas opções seriam as atividades práticas
direcionadas e o aumento na carga horária.
4
Ensino de Genética e Biologia Molecular
A TEMÁTICA DA CONSANGUINIDADE E SUA POUCA ABORDAGEM EM SALA DE AULA: UM
PROBLEMA CONSTATADO EM ALUNOS DA 2ª SÉRIE DO ENSINO MÉDIO DO CENTRO DE
ENSINO MODERNO INTEGRADO - CEMTI DA CIDADE DE SÃO RAIMUNDO NONATO - PI.
André Santos Landim1; Fernando Raimundo de Sousa2; Goldemberg Alves Duarte2; Marcos Ricelle de Carvalho2;
Taylane Fernandes da Rocha2; Fernanda Paes dos Santos2; Raimunda Ferreira da Silva2; Kleber de Oliveira
Macêdo2; Fabiana Sousa Carvalho2; Maria do Socorro Nunes Cavalcante3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual do Piauí; (2)Universidade Estadual do Piauí - UESPI; (3)Faculdade Afonso Mafrense FAM
RESUMO
O livro didático de Biologia utilizado no Ensino Médio tem resumido bastante seus conteúdos na finalidade que
possam ser completamente trabalhados para os alunos prestarem seleção do Exame Nacional do Ensino Médio ENEM, entre outras seleções de ingresso para o Ensino Superior. Todavia, tal redução de conteúdos tem deixado
importantes temas de fora das discussões em sala de aula como a problemática da consanguinidade que tem
perdido seu espaço em conteúdos da área da Genética. A consanguinidade pode elevar o risco de homozigozidade
recessiva, possibilitando a união de genes deletérios que venham provocar algum tipo de deficiência na prole do
casal, ou, até levar o indivíduo a óbito. Partindo desse pressuposto, este trabalho teve como objetivo verificar se o
conteúdo de consanguinidade foi trabalhado e observar se houve aprendizado efetivo nos alunos da 2ª Série do
Ensino Médio do Centro de Ensino Moderno Integrado - CEMTI na cidade de São Raimundo Nonato - PI.
Primeiramente foi entregue aos alunos um questionário objetivo sobre consanguinidade na finalidade de
diagnosticar se estes já tinham conhecimento acerca do tema. Na sequência, aconteceu uma explanação através de
slides criados em forma de mapas conceituais na plataforma Prezi e, por último, foi aplicado outro questionário no
qual os participantes puderam qualificar a apresentação. Ao todo participaram da pesquisa 74 alunos, sendo
divididos em 3 turmas denominadas de "A", "B" e "C". Dos 74 alunos, 40 (54,05%) afirmaram ter conhecimento
sobre o tema e 34 (45,95%) afirmaram não conhecer, sendo que 82,5% dos que conhecem o assunto reconheceram
ter aprendido em sala de aula. Após a apresentação, 100% dos alunos admitiram ter assimilado o conteúdo, onde,
60,8% classificaram a apresentação como Ótima, 32,4% como Boa e 6,8%, como Razoável. Além disso, 60,8%
alegaram ter ao menos um casal de primos consanguíneos em sua família e 39,2% alegaram não conhecer ou não
recordar sobre. Portanto, nota-se uma carência de discussão sobre o tema em tal escola, pois nas respostas dos
alunos a cidade tende a possuir um elevado índice de casamentos consanguíneos e que faltam informações sobre o
tema, sendo essencial destacar a importância do aconselhamento genético para estes casais de primos onde é
possível verificar a probabilidade de se ter filhos com alguma deficiência. Tais problemas seriam amenizados com
um tópico mais relevante sobre consanguinidade dentre os conteúdos de Genética do livro didático de Biologia.
5
Ensino de Genética e Biologia Molecular
A UTILIZAÇÃO DE JOGOS DIDÁTICOS NO ENSINO DE GENÉTICA
Jéssica Maria Alexandre Soares1; Bruna Alves Martins1; Tiago Silva de Lima1; José Elinaldo da Silva Oliveira1;
Laianne de Souza Guilherme1; Merilane da Silva Calixto1.
E-mail: [email protected]
(1)
Unidade Acadêmica de Ciências Biológicas/Centro de Saúde e Tecnologia Rural/UFCG - Patos/PB
RESUMO
A Genética mesmo sendo de grande importância para o ensino de Biologia ainda é uma das áreas biológicas em
que os alunos do Ensino Médio têm encontrado dificuldade na aprendizagem, pois não fazem associação dos
conteúdos com o cotidiano pelo caráter abstrato e de difícil visualização que a temática aborda, o que resulta em
certa resistência aos conteúdos, cabendo ao professor buscar metodologias inovadoras de caráter motivador que
despertem interesse nos estudantes, facilitando a aprendizagem. Assim, a introdução de ferramentas lúdicas como
os jogos didáticos funcionam como instrumentos de apoio possibilitando a assimilação e reforçando conteúdos já
vistos. Este trabalho visa apresentar a importância da utilização dos jogos no processo de ensino-aprendizagem na
área de Genética, agindo como instrumentos motivadores de intenso potencial na sala de aula. A pesquisa teve
uma abordagem quantitativa, sendo realizada em três escolas da Rede Estadual de Ensino de dois municípios da
Paraíba, sendo a Escola Francisco Romano da Silveira, localizada em Mãe D´água e as Escolas Professor José
Gomes Alves e Auzanir Lacerda, em Patos. Foram utilizados dois jogos didáticos intitulados como O Bingo das
Ervilhas (1ª Lei de Mendel) e Construindo Heredogramas, sendo aplicados a 76 alunos matriculados na terceira
série do Ensino Médio, que responderam a um mesmo questionário antes e depois de cada jogo para fins
comparativos, ressaltando que os testes foram semiestruturados na abordagem de assuntos que já haviam sido
trabalhados pelos docentes. Com a aplicação do jogo do Bingo, o percentual de acertos foi de 36,05% para
62,37%, notando-se aumento nas respostas corretas. Para o segundo jogo trabalhado os resultados apontam que
houve aumento acentuado de 40,49% no percentual de acertos, e uma redução em cerca de 29% das questões nas
quais os alunos não quiseram ou não souberam responder. Os resultados mostram que nos dois jogos trabalhados
houve um aumento significativo de acertos e ainda uma diminuição na taxa de erros, sugerindo a eficiência da
introdução do jogo como ferramenta lúdica no auxílio do ensino de Genética. Dessa forma, é perceptível a
influência positiva do lúdico como facilitador no processo de ensino-aprendizagem, fazendo com que os
estudantes assimilem os conteúdos e construam conhecimentos de conceitos que até então eram considerados
difíceis e de complexa associação, sendo ainda uma alternativa viável e de fácil aplicação.
6
Ensino de Genética e Biologia Molecular
A UTILIZAÇÃO DE MODELOS TÁTEIS NO ENSINO DE GENÉTICA PARA DEFICIENTES VISUAIS
Samara de Brito Vieira1; Thalyta Tâmara Moura dos Reis2; Thales Eduardo Galdino Andrade3; Claudiana da
Silva Pereira4; Lúcia da Silva Fontes5; Tony César de Sousa Oliveira6; Antônio Carlos dos Reis Filhos7.
E-mail: [email protected]
(1)
Discente do Curso de Graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí-UFPI; (2)Graduada
em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí-UFPI; (3)Mestrando do Programa de Pós-Graduação
em Genética e melhoramento vegetal da Universidade Federal do Piauí-UFPI; (4)Mestranda do Programa de PósGraduação em Genética e melhoramento vegetal da Universidade Federal do Piauí-UFPI; (5)Professora do
Departamento de Biologia da Universidade Federal do Piauí-UFPI; (6)Mestrando do Programa Desenvolvimento e
Meio Ambiente da Universidade Federal do Piauí-UFPI; (7)Graduado em Ciências Biológicas da Universidade
Federal do Piauí-UFPI
RESUMO
A aprendizagem de Biologia é um desafio para grande parte dos alunos pela necessidade de abstração dos assuntos
abordados (FERRACIOLI et al., 2012). Isso é ainda mais difícil ao se tratar de alunos deficientes visuais, pois
segundo Andrade (2016), a genética é a maior dificuldade para professores e alunos nesse âmbito da educação
especial.Para auxiliar no ensino-aprendizagem, faz-se necessária criatividade levando em consideração a diversas
texturas que existem na natureza a fim de aprimorar as aulas para alunos videntes e não-videntes (BECKERS,
PEREIRA e TROGELLO, 2014).Com base nisso, este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia da utilização
de modelos táteis nas aulas de Biologia, enfatizando o conteúdo sobre o Ciclo Celular para alunos deficientes
visuais da Associação de Cegos do Piauí (ACEP). A pesquisa foi aplicada a 17 alunos, uma amostra de 65,38%
dos discentes da disciplina de Biologia. Para confecção dos modelos táteis utilizou-se: bolas de isopor nº 16, EVA
nas cores azul e verde, tinta-relevo nas cores: amarela, azul, roxa e vermelha, biscuit na cor rosa para construção
dos cromossomos, estilete, tesoura, cola para isopor/EVA, cola branca e lã vermelha. Para avaliação da
aprendizagem foi utilizado pré-teste e pós-teste com 8 questões objetivas, tendo sido previamente aplicado o
Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE).Na avaliação do pré-teste, após aula expositiva do assunto e
antes de se utilizar os modelos táteis, os alunos obtiveram uma média de acertos de 42,25%. No pós-teste, após
apresentação dos materiais didáticos táteis, houve uma média de acertos de 85,29%, havendo melhoria de 43,04%
na assimilação do conteúdo, corroborando com outros trabalhos já desenvolvidos na área de ensino para
deficientes visuais (ANDRADE, 2016; DE SOUZA e PRADO, 2014; LOPES, ALMEIDA e AMADO, 2014), e
demonstrando que é possível obter melhorias no ensino através de modelos táteis, ajudando a incluir os alunos
deficientes visuais em um processo de aprendizagem significativo, fazendo uso de diversos materiais com
diferentes texturas.A partir do trabalho desenvolvido podemos concluir que os modelos táteis propostos para uso
no ensino de genética para deficientes visuais são eficazes em facilitar a aprendizagem.
7
Ensino de Genética e Biologia Molecular
ALÉM DA APARÊNCIA: A INTERAÇÃO GENÓTIPO-FENÓTIPO
Elis Aragão Magalhães1; Marília de França Rocha2.
E-mail: [email protected]
(1)
Faculdade de Ciencias Médicas- Universidade de Pernambuco; (2)Instituto de Ciências Biológicas -Universidade
de Pernambuco
RESUMO
O estudo da Genética na Medicina não deve abordar apenas o paciente, e sim sua família e contexto. Nessa
perspectiva, este trabalho visou analisar a formação de conceitos em Genética, com base no Modelo das Múltiplas
Perspectivas (MoMuP-PE), tendo por motivação um caso no tema Hipercolesterolemia Familiar (HF). Essa
doença autossômica dominante, comum na população geral, caracteriza-se por níveis plasmáticos muito elevados
do colesterol da lipoproteína de baixa densidade, reduzindo a expectativa de vida. Foi analisada a produção de 16
estudantes de uma turma de 1º período do Curso de Medicina de uma universidade pública em Recife-PE. Os
participantes foram selecionados voluntariamente e organizados em grupos de 4 integrantes. O caso foi
contextualizado com base no grupo musical Fat Family, para facilitar o entendimento sobre a relação genótipofenótipo e padrão de herança. Foram obtidos 8 mapas conceituais em cartolina, sendo 4 prévios (E1) e 4
posteriores (E2) ao estudo, respectivamente. A análise consistia em ler trechos áudio gravados e relacionar
categorias a partir dos mapas para organizar os dados. Os estudantes se limitavam à ideia de que havia uma
predisposição genética associada a algum defeito na degradação de colesterol ou em sua entrada na célula. Os E1 e
E2 facilitaram o processo de aprendizagem, levando-os a desconstrução e a utilização de diferentes comentários
temáticos (livros, vídeos, outros) para solucionar dúvidas e (re)construir esquemas. Esse ir e vir na busca de
respostas caracteriza a travessia temática e auxiliou na construção de significados. No MoMuP-PE a reflexão
orientada levou a reconstrução dos saberes, dessa forma os alunos compreenderam que a obesidade do Fat
Family não era condição suficiente para desencadear as complicações de saúde descritas no caso. O fato do pai dos
integrantes do grupo ser magro, esportista e ter feito um transplante cardíaco despertou nos estudantes curiosidade
sobre a real causa para as condições de saúde da família, promovendo a reflexão genótipo/fenótipo. Por sua vez,
foi feita a diferenciação da HF de outras, principalmente da hipercolesterolemia comum ou poligênica, pois o
indivíduo com HF está exposto a elevados níveis de colesterol plasmático desde o nascimento. Esse trabalho deixa
clara a importância de trabalhar o pensamento complexo interconectando conceitos para que os alunos tenham a
capacidade de empregar o conhecimento em diferentes situações como preconiza a flexibilidade cognitiva.
APOIO
PIBIC-AF/UPE/CNPq.
8
Ensino de Genética e Biologia Molecular
ATIVIDADES LÚDICAS E O GOSTO PELA GENÉTICA NO ENSINO MÉDIO: UMA ABORDAGEM
DIDÁTICA NA UNIDADE ESCOLAR LETÍCIA MACEDO - PI.
Kleber de Oliveira Macedo1; Iara Lima Paes Landim2; Eronilde de Santana Lima2; André Santos Landim3;
Daniela Santos Landim Silva3; Fernando Raimundo de Sousa3; Goldemberg Alves Duarte3; Marcos Ricelle de
Carvalho3; Maria do Socorro Nunes Cavalcante4; Taylane Fernandes da Rocha3; Hellen Cristina de Oliveira
Alves5.
E-mail: [email protected]
(1)
Unidade Escolar Letícia Macêdo; (2)EFFO; (3)Universidade Estadual do Piauí - UESPI; (4)Faculdade Afonso
Mafrense - FAM; (5)Instituto Federal do Piauí - IFPI
RESUMO
A genética sempre foi considerada uma das áreas da Biologia em que os alunos possuem grande dificuldade de
assimilação dos conteúdos, seja devido ao uso de vários conceitos específicos, seja por causa de questões
complexas. Mesmo sendo uma subdivisão da biologia considerada complexa, ainda assim, possibilita a utilização
de uma vasta variedade de dinâmicas e metodologias de ensino. A maneira tradicional de ensinar os conteúdos de
forma expositiva, muitas vezes, não explora a curiosidade e prazer dos alunos em buscar respostas e
conhecimentos. Assim, se torna necessário o uso de práticas que facilite esse processo e que estimule alunos a ter
gosto pela área. É nesse contexto que as atividades lúdicas se tornam grandes aliados no processo de ensinoaprendizagem de genética, pois, possibilitam o ensino da disciplina de maneira mais divertida e prazerosa. O
objetivo deste trabalho é facilitar o processo de ensino-aprendizagem de genética no ensino médio, buscando
despertar a motivação e o interesse dos alunos pela área. A execução do trabalho ocorreu durante os 5 meses finais
do ano letivo de 2014 na Unidade Escolar Letícia Macedo, Anísio de Abreu-PI, abrangendo 2 turmas da 3ª série
do Ensino Médio, designadas como turmas "A" e "B", respectivamente, no turno matutino e vespertino,
compreendendo 75 alunos no total, com faixa etária entre 16 a 28 anos de idade. Primeiramente, foi feito um
levantamento e análise sobre as possíveis atividades lúdicas a serem utilizadas, dominó de genética, modelos
representativos, entre outras, e em quais conteúdos cada atividade se encaixava melhor. O uso das atividades
lúdicas iniciaram-se no final do primeiro semestre letivo. No início da aula, explicava-se as regras e realizava-se os
sorteios ou seleção dos grupos para execução das atividades. No início do ano, notava-se grande falta de interesse
e dificuldade de compreensão pelos alunos. Após a inserção das atividades lúdicas, notou-se mais motivação,
interesse, assimilação e prazer dos alunos. O interesse perdurou-se nas outras áreas da biologia, sendo que
aproximadamente 90% dos alunos tiveram melhorias no desempenho qualitativo e quantitativo. As relações,
aluno-aluno e professor-aluno em sala de aula, também tiveram grandes melhorias. Com isso, conclui-se que as
atividades lúdicas promovem a melhoria do ensino, reduzindo drasticamente o "pavor" que muitos possuem ao
estudar genética, e, assim, ampliando a motivação, a compreensão e o interesse destes pela genética.
9
Ensino de Genética e Biologia Molecular
AVALIAÇÃO DO CONHECIMENTO DOS ALUNOS DO ENSINO MÉDIO PÚBLICO SOBRE O TEMA
BIOÉTICA E REPRODUÇÃO HUMANA IN VITRO COMO ABORDAGEM NO ENSINO DE
GENÉTICA
Luís Eduardo Oliveira Alves1; Leomá Albuquerque Matos1; Maria dos Remédios Mendes de Brito1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Piauí / Universidade Aberta do Brasil, Polo de Apoio Presencial de Buriti dos Lopes
RESUMO
Tendo em vista que muitos casais não conseguem ter seus filhos pelo meio natural, para combater a esterilidade e
a infertilidade tanto masculina quanto feminina, a biotecnologia trouxe várias soluções nesta área. Entre essas
soluções encontramos a técnica de reprodução humana assistida a fertilização in vitro, mais comumente conhecida
como bebê de proveta. No presente trabalho, procura-se trazer um breve histórico da técnica, bem como, os
problemas gerados em face da FIV destacando-se o destino dos embriões excedentes criopreservados em
laboratório e a suposta ausência de legislação para sua proteção jurídica. A polêmica que envolve o tema está
concentrada ao início da vida, de quando esta se inicia, se desde sua concepção ou conforme as fases de seu
desenvolvimento. Existem correntes doutrinárias que discorrem sobre o assunto dentre elas encontra-se a
conceptiva e a desenvolvimentista. Pretende-se trazer os conceitos e argumentos de autores que apresentam
opinião favorável e daqueles que se manifestam contra a utilização de embriões humanos. Por fim, buscar-se-á na
Constituição de 1988, com base no fundamento do Estado Democrático de Direito elencado no art. 1º, III, a
dignidade da pessoa humana; no princípio de prevalência dos direitos humanos que rege as relações internacionais
da República Federativa do Brasil, art. 4º, II e no direito à vida, direito e garantia fundamental, art. 5º, caput, da
carta magna o subsídio pronto e suficiente para proteção do embrião humano. O trabalho irá analisar o
desenvolvimento de alunos da 3º série do ensino médio público sobre o ensino da genética em sala de aula.
Abordamos as questões relacionadas ao casal, ao embrião e ao nascituro, considerando também o ensino da
genética no século XXI no ensino médio público na cidade de Magalhães de Almeida no estado do Maranhão.
10
Ensino de Genética e Biologia Molecular
AVALIANDO RISCOS PARA O CÂNCER DE MAMA: OFICINA SOBRE ACONSELHAMENTO
GENÉTICO NO ENSINO MÉDIO
Maria Izabel Pereira e Silva1; Iêda Ferreira de Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Biologia/Universidade Federal Rural de Pernambuco
RESUMO
O Ensino de Genética é apontado como uma necessidade na formação de jovens conscientes e capazes de tomar
decisões com relação à sociedade em que vivem e à sua própria vida. Porém, nem sempre as instituições de ensino
estão preparadas para transmitir seus conhecimentos, devido à velocidade com que são produzidos. Com o
objetivo de difundir e popularizar conceitos relacionados à Genética do Câncer e Aconselhamento Genético, foi
desenvolvida a oficina denominada "Avaliando riscos para o câncer de mama", destinada a estudantes do Ensino
Médio de uma escola pública do Recife. Ela abordou de modo integrado os conteúdos: dogma da Biologia
Molecular, mutações, genética do câncer, sequenciamento de DNA e aconselhamento genético. Inicialmente, foi
exibido aos estudantes um vídeo sobre câncer de mama envolvendo a atriz Angelina Jolie, a fim de sensibilizá-los.
Depois, foram mostrados aspectos gerais dessa doença e explicados os principais mecanismos moleculares
envolvidos, mencionando alguns genes importantes. A seguir, esses conteúdos foram relacionados com o
aconselhamento genético. Para isso, o assunto do vídeo foi resgatado e os estudantes foram convidados a refletir
sobre os motivos que levaram à decisão "radical" da atriz. Na ocasião, foram discutidos preceitos do
aconselhamento genético, culminando na apresentação dos principais métodos de diagnóstico genético do câncer
de mama. Pela exibição de um segundo vídeo, foi mostrada a técnica Sanger de sequenciamento de DNA,
empregada por esses métodos. Posteriormente, foram distribuídas fichas, simulando resultados de exames
laboratoriais, para que cada participante fizesse suas análises genéticas e descrevesse o aconselhamento que
dispensaria ao paciente fictício. Por fim, todos os "diagnósticos" foram coletivamente discutidos. A atividade teve
boa aceitação pelos estudantes, os quais mostraram muito interesse, curiosidade, autonomia e trabalho
cooperativo. Verificaram-se algumas dificuldades conceituais (por exemplo: gene, alelo e polimorfismo) pelos
estudantes, que, no decorrer da atividade, foram explicadas. Como conclusão, a oficina aqui descrita foi um
instrumento didático facilitador da aprendizagem eficaz na contextualização dos conteúdos envolvendo a tríade
Genética, Câncer e Aconselhamento Genético. Espera-se que ela contribua na formação mais integral dos sujeitos
envolvidos para esses temas e outros relacionados.
APOIO
Pró Reitoria de Extensão/UFRPE
11
Ensino de Genética e Biologia Molecular
BIOLOGIA E RELIGIÃO: VISÃO DE ALUNOS DO ENSINO MÉDIO DE ESCOLAS PUBLICAS
Marcos Antonio Nobrega de Sousa1; Mayara Ramalho de Andrade Pereira1; Mônica da Costa Lima1; Adrielly de
Lira Moreira1; Ronaldo Leite da Silva Filho Neto1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Campina Grande - UFCG
RESUMO
O Neodarwinismo uniu informações de Mendel da transmissão de caracteres com as ideias de Charles Darwin
sobre à origem das espécies. No entanto, mesmo a Evolução Biológica estando corroborada por evidências
científicas, é de difícil aprendizagem aos alunos pelo conflito com aspectos religiosos. Foi investigada a influência
das convicções religiosas no aprendizado de evolução em alunos do ensino médio. Foram aplicados questionários
a alunos do 3º ano do ensino médio de quatro escolas públicas diferentes em Itapetim (PE), Teixeira, Passagem e
Patos (PB) para obtenção da idade, escolaridade, sexo, denominação e frequência religiosa. Além de três questões
sobre a influência religiosa no aspecto científico (1-3 escala Likert) e uma de múltipla escolha (a-e); e cinco sobre
a evolução com alternativas (a-e). Foram amostrados 168 alunos de oito turmas diferentes. A maioria deles na
faixa de 16-19 anos e do sexo feminino (52,9%). O estado da Paraíba teve 63,69% dos entrevistados. Pelas
respostas válidas, a maioria, 43,9% são católicos, 14,3% são evangélicos, 4,5% cristãos, 3% protestantes, 3%
ateus, 1,8% agnósticos e 23,8% não responderam. Dos católicos, 22,2% vão a igreja eventualmente e entre os
evangélicos, a maioria vai frequentemente e eventualmente. A análise das questões foi agrupada por assunto: as
que versam sobre a influência religiosa (1-4) e evolução (5-9). A escola de Itapetim apresentou uma maior
tendência nas convicções religiosas, com maior frequência 10,7% de alunos que consideram que o que eles creem
está acima de qualquer coisa. E na Paraíba a maioria considera a bíblia uma verdade sem erros e que foram
ensinados pelos pais a acreditar em Deus. A questão 5 apresentou o menor número de acertos (1,8%) e a 6 o maior
(32,8%) em todas as escolas. A escola com menor índice de acertos foi a PE e maior foi uma da PB (Dionísio da
Costa). As diferenças foram estatisticamente significativas entre as escolas (α=0,05). A escola de PE obteve os
maiores índices religiosos e as menores médias de questões certas sobre evolução, mas todas as escolas tiveram
uma pontuação baixa. Observa-se que não houveram diferenças significativas, nem correlação entre as
denominações religiosas e o nível de acerto sobre conceitos evolutivos. Embora a alta taxa de erro / em branco
(>80%) indique que que as convicções religiosas afetem o ensino-aprendizagem de evolução; os resultados obtidos
diferem dos observados em outros trabalhos e novas investigações devem ser realizadas.
12
Ensino de Genética e Biologia Molecular
BIOTECNOLOGIA E VACINA DE DNA RECOMBINANTE: APLICAÇÃO DE RECURSOS
DIDÁTICOS NO ENSINO MÉDIO
Débora Eveny Santana Silva1; Cássia Kellen Lopes Fonseca1; Suzana Oliveira Santos1; Nara Suzy Aguiar de
Freitas1.
E-mail: [email protected]
(1)
Maria de Fátima de Santana
RESUMO
O desenvolvimento de vacinas de DNA está em constante avanço. Apresentar aos alunos as diferentes etapas do
processo biotecnológico envolvidos é sempre um desafio para os professores de Biologia. Os Parâmetros
Curriculares Nacionais para o Ensino Médio (PCNEM), na área de ciências da natureza, matemática e suas
tecnologias, pontuam a temática no contexto Tecnologia e Sociedade. No presente trabalho foi realizada uma
intervenção pedagógica, na escola de Referência em Ensino Médio Conde Pereira Carneiro, situada na cidade de
São Lourenço da Mata - PE. Com o objetivo de contextualizar a importância da vacina, foi utilizado como
exemplo a atual epidemia pelo Zika vírus, assim como as vacinas de DNA em desenvolvimento para Tuberculose
e Melanoma. A primeira fase do estudo consistiu em uma avaliação diagnóstica, que utilizou como instrumento
um questionário semiestruturado para avaliar os conhecimentos prévios dos alunos da turma de 3° ano do ensino
médio. Após a análise da avaliação diagnóstica, foi realizada uma aula expositiva dialogada. No segundo
momento, foi realizada uma dramatização sobre o experimento pioneiro do DNA recombinante, dos americanos
Herbert Boyer e Stanley. Na sequência, foi realizada uma oficina, na qual os discentes foram divididos em seis
grupos e cada grupo recebeu um envelope com um texto base, um roteiro e moldes, para a confecção ilustrativa
das diferentes etapas necessárias para produção da vacina de DNA. No final, as equipes debateram sobre o eixo
temático e responderam o mesmo questionário da fase inicial. A avaliação diagnóstica inicial revelou que os
alunos conheciam pouco sobre biotecnologia e vacina de DNA, porém no final, a maioria distinguiu com precisão
as diferentes enzimas utilizadas no processo, bem como os benefícios históricos da imunização para as sociedades.
Apesar dos resultados positivos, se faz necessário que o eixo temático seja continuamente trabalhado nas escolas
para aproximar os alunos de outras aplicações da tecnologia do DNA recombinante e seus impactos sociais.
13
Ensino de Genética e Biologia Molecular
CONCEITOS EVOLUTIVOS DE FUTUROS PROFESSORES DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Marcos Antonio Nobrega de Sousa1; Cecília Ruth Fernandes da Silva1; Idineide Lidiane Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Campina Grande - UFCG
RESUMO
A Evolução Biológica é um tema polêmico no ensino de genética e evolução em todos os níveis acadêmicos, que
embora corroborada por evidências científicas, ainda causa problemas aos futuros professores. Foi buscado
analisar o grau de aprendizagem de alunos de licenciatura em Biologia em aulas de evolução. Foi analisado o
conhecimento em evolução de graduandos de dois turnos de Licenciatura em Ciências Biológicas (diurno e
noturno) da UFCG. Foi utilizado um questionário com seis questões sobre conceitos básicos da teoria evolutiva,
com as mesmas perguntas aplicadas antes e depois da disciplina Evolução. No segundo momento foi adicionada
uma pergunta sobre à contribuição da disciplina ao conhecimento dos alunos. Foram entrevistados 72% dos alunos
de cada turma. Pelas respostas válidas foram amostrados 59,5% alunos do sexo masculino e 40,5% do feminino,
com média de idade de 20,2 anos; e cerca de 67,5% estudaram o ensino médio só em escola pública. No turno
diurno houve 100% de aumento no número de alunos com acertos depois da aula, e no noturno 48%. Em ambos os
turnos, houve 62,9% de aumento. A média de acertos do número de questões antes e depois, respectivamente
foram, no diurno (2,2 e 4,3) e no noturno (2,3 e 3,5); e de modo geral (2 e 4), Estas diferenças foram
estatisticamente significativas (α=0,05). Apenas a questão sobre evolução e origem da vida apresentou maior
dificuldade, com os menores índices de acertos nos dois turnos. Todas as demais tiveram maior índice de acerto
após a disciplina. Foi observado que os alunos, mesmo após a disciplina apresentaram muitas dúvidas sobre
evolução e seus conceitos, tendo em vista o baixo número de acertos depois. Mas foi observado que o número de
acertos dobrou após a disciplina, que o turno diurno teve um desempenho melhor do que o noturno e que 87,5%
dos alunos afirmaram que a disciplina contribuiu para aumentar o seu conhecimento sobre evolução. Dificuldades
no entendimento sobre evolução também foi observada por licenciados em Biologia em outras instituições de
ensino. Destaca-se que a evolução biológica deve ser tratada com mais intensidade nos cursos superiores de
Biologia, principalmente nas Licenciaturas, pois apenas aulas expositivas não são suficientes para que os alunos
superem suas dificuldades, sugere-se mais aulas práticas / integrativas, transdisciplinariedade e maior atenção a
evolução biológica ao longo da formação do licenciando e na sua formação continuada depois de formado como
professor.
14
Ensino de Genética e Biologia Molecular
CONSTRUÇÃO DO CONHECIMENTO ATRAVÉS DO DOMINÓ GENÉTICO: UM JOGO LÚDICO NO
ENSINO MÉDIO
Wilson Dias de Oliveira1; Marina Ferreira Kitazono Antunes1; Thais Kelly Ferreira da Silva1; Amanda Fagundes
Ximenes1; Vilma Loreto da Silva2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Depto. de Genética, UFPE.; (2)Laboratório de Genética e
Citogenética Animal e Humana, Depto. de Genética, UFPE.
RESUMO
Atualmente a utilização de jogos lúdicos auxilia no desenvolvimento dos estudantes, pois tal recurso permite a
vivência nas áreas cognitiva e psicomotora. Além disso, sabe-se que o jogo constitui uma ferramenta pedagógica
que também promove o desempenho social do aluno e proporciona uma metodologia inovadora que o atrai para o
conhecimento através de uma forma mais prazerosa e interessante, visto que recentemente a falta de motivação é a
principal causa do desinteresse dos alunos. A genética é a ciência dos genes, que estuda a forma como são
transmitidas as características biológicas de uma geração a outra, sendo frequentemente de difícil fixação para os
alunos, devido a sua alta complexibilidade. Pelo exposto, o presente trabalho teve como objetivo auxiliar a
aprendizagem dos termos de genética mendeliana, empregando um jogo lúdico. Para isto, foi utilizado um Dominó
Genético o qual é composto por vinte peças, sendo essas formadas por duas partes, uma correspondente a termos
presente na genética mendeliana, e outra composta por imagens, estas figuras apresentam-se como importantes
estimuladores visuais, como também representa parte do pensamento, da linguagem e da historia vivenciada. A
associação da imagem e termo foi o foco do jogo, o qual tem como função a consolidação do conhecimento. O
vencedor foi aquele que primeiro associou todas as suas peças do dominó. Esta dinâmica foi realizada com 185
alunos, referentes as turmas de 3º ano do ensino médio na Semana Nacional de Ciência e Tecnologia realizada na
Universidade Federal de Pernambuco em 2015. Após a aplicação dessa estratégia lúdica, pode-se observar que
62,2% dos estudantes não tiveram dificuldades para associar os termos às imagens, enquanto 37,8% tiveram, esta
parcela justificada pela dificuldade na materialização do conhecimento e limitação dos saberes. Observou-se que a
maior dificuldade encontrada foi a relação do termo albinismo, pois esse estava representado por um animal.
Diante disso, ressalta-se a importância da utilização de jogos lúdicos nos aspectos da dinamização dos conteúdos,
da interação social entre os alunos e do ensino-aprendizagem por meio de brincadeiras, despertando o interesse dos
estudantes.
APOIO
(CNPq, CAPES e FACEPE)
15
Ensino de Genética e Biologia Molecular
DERIVA GÊNICA: UMA FORMA LÚDICA DE ENSINAR
Patricia de Souza Cavalcante Carnaval1; Rildo Ney Tavares da Silva1; Daniele Rodrigues de Amorim1;
Elizangela Zuleide de Melo Santos1; Anny Cibelly Campelo Barbosa1; Isliria Stephany Correia do Nascimento1;
Arthur Rodrigues da Silva1; Iully Karla Neves Gusmão1; Pedro Henrique do Bomfim Nascimento1; Igor Vieira de
Melo Alves1; Vilma Loreto2.
E-mail: [email protected]
(1)
Discente do Curso de Ciências Biológicas Licenciatura - Centro de Biociências - UFPE; (2)Laboratório de
Genética e Citogenética Animal e Humana - Departamento de Genética - Centro de Biociências - UFPE
RESUMO
Os conteúdos programáticos de genética nos livros didáticos de ensino médio de biologia são, por diversas vezes,
de difícil materialização para o alunado, afastando-os de sua concepção real. Esse parâmetro deve obedecer a uma
sequência lógica de atividades que atendam os objetivos preestabelecidos no processo de ensino e aprendizagem.
Estudos nos mostram que numa ação educativa esse processo deve ser dinâmico e que o agente multiplicador
quanto o aprendente, o completem de forma eficaz tanto para uma formação escolar quanto para a aplicação em
sua vida social. A introdução de jogos didáticos em aulas práticas no ambiente escolar nos permite utilizar o
lúdico, aproximando os alunos dos conteúdos que requerem deles um alto grau de abstração. Sendo assim,
percebemos a utilização desses recursos pedagógicos como uma complementação durante o processo de ensinoaprendizagem. Após uma aula expositiva dialogada sobre deriva gênica, propomos a parte prática com uma
aplicação de um jogo didático sobre o tema, mostrando de forma lúdica como a deriva pode, de maneira
totalmente ao acaso, alterar as frequências dos alelos de um determinado gene, ao longo das gerações. O recurso
consistiu em uma versão, análoga a um jogo de bingo tradicional, já conhecido pelos alunos e que funciona através
de cartelas para marcar à medida que os sorteios vão acontecendo. Para confecção do material foram usados
papelão, cola branca, papel ofício impresso (para as cartelas) e emborrachados coloridos cortados em formato de
borboleta, lápis e borracha para marcação e construção de um gráfico usado como resultado final da conclusão do
jogo na própria cartela. Durante a realização da prática didática, os alunos passaram a perceber como acontecem as
combinações dos alelos dentro de uma população, através dos cruzamentos que acontecem de forma totalmente
aleatória. Além disso, atentaram também para aspectos de funcionamento do efeito gargalo, efeito fundador e
mudanças na frequência dos alelos resultantes ao longo do tempo. Após a aplicação, verificou-se que a ideia de
implementação de jogos didáticos e outros recursos pedagógicos, aplicados a uma metodologia bem elaborada em
sala de aula, além de terem baixo custo, facilitou a compreensão dos mecanismos de ação da deriva genética e de
suas consequências evolutivas, um tópico disciplinar obrigatório dentro da biologia que só com o auxílio da aula
teórica não levaria o alunado e os docentes a completarem o processo de ensino e aprendizagem.
16
Ensino de Genética e Biologia Molecular
DIVERSIDADE CARIOTÍPICA EM ESPÉCIES ANIMAIS E VEGETAIS CONTRIBUINDO PARA O
ENSINO TEÓRICO-PRÁTICO DA CITOGENÉTICA
Araúna Sara Silva Reis1; Ingrid Giovanna Vieira Santos1; Palloma Lima de Oliveira1; Elianderson Gomes de Sá1;
Ebenézer Bernardes Correia Silva2; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Vale do São Francisco; (2)Instituto Federal de Alagoas
RESUMO
O ensino da Citogenética ressalta a morfologia, função, organização, variação e evolução cromossômica,
integrando o conteúdo teórico e prático, mediante a exemplificação da diversidade cariotípica. Neste trabalho, um
laminário foi construído com preparações citológicas de oito espécies, quatro animais [Mus musculus Linnaeus,
1758 (camundongo), Rattus novergicus Berkenhout, 1769 (ratazana), Gracilinanus agilis Burmeister, 1854 (cuíca)
e Tropidurus hispidus Spix, 1825 (lagartixa)] e quatro vegetais [Allium cepa L. (cebola), Capsicum annuum L.
(pimentão), Lactuca sativa L. (alface) e Solanum lycopersicum L. (tomate)], com o intuito de utilizá-lo em aulas
práticas, facilitando a difusão do conhecimento científico entre o corpo discente em duas Instituições Federais de
Ensino Superior (UNIVASF - Petrolina/PE e IFAL - Maceió/AL). Para as espécies animais, indivíduos
provenientes da Caatinga e mantidos no Centro de Conservação e Manejo de Fauna da Caatinga (UNIVASF),
foram obtidas preparações cromossômicas mitóticas a partir da extração de células da medula óssea. Por sua vez,
para as espécies vegetais, pontas de raízes recém-germinadas foram pré-tratadas com 8-HQ, fixadas em Carnoy e
utilizadas para preparação das lâminas. Em ambos os casos, as lâminas foram coradas com Giemsa 10%. O
laminário foi explorado mediante duas abordagens; nas aulas práticas de Citogenética, ofertada pelo curso
Ciências Biológicas/UNIVASF, a partir das análises das lâminas, os discentes identificaram números (haploides e
diploides) e morfologias cromossômicas (metacêntrica/submetacêntrica/acrocêntrica), diferenciaram cromossomos
autossomos e sexuais quando possível e classificaram o cariótipo quanto à simetria
(simétrico/assimétrico/gradativo/bimodal). Em paralelo, foram confeccionadas pranchas plastificadas, permitindo
escrever sobre as mesmas com lápis, contendo a imagem da espécie, nomes científico e vulgar, cariograma
montado a partir de metáfases fotografadas e questionamentos envolvendo as características cariotípicas acima
citadas. Tais pranchas têm sido utilizadas nas aulas práticas de Genética geral, ofertada pelo curso de Ciências
Biológicas (IFAL). Ambas as abordagens suscitaram a curiosidade pelo tema, a qual foi notória pela participação
ativa dos discentes nas aulas. Assim, o laminário constituiu-se como uma ferramenta para a transposição didática,
facilitando a transformação do conhecimento científico em saber escolar, contribuindo para o processo ensinoaprendizagem.
APOIO
Ministério da Integração Nacional; UNIVASF
17
Ensino de Genética e Biologia Molecular
EXPRESSÃO DO GENE PGC-1? EM MÚSCULO GASTROCNÊMIO DE RATOS APÓS SESSÃO
ÚNICA DE EXERCÍCIO EXAUSTIVO
José William Girão Dias1; Isabele da Silva Pereira1; Luiz Henrique Pontes dos Santos1; Sávio Victor Diógenes
Mendes1; Jonathan Elias Rodrigues Martins1; Karla Camila Lima de Souza1; Francisco Sérgio Lopes
Vasconcelos Filho1; Christina Pacheco1; Thiany Vieira do Nascimento2; Anderson Gomes Agostinho2; Juliana
Osório Alves1; Vânia Marilande Ceccatto1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual do Ceará; (2)Faculdade Maurício de Nassau
RESUMO
O exercício físico é uma terapêutica não-farmacológica que promove entre outras modificações moleculares
benéficas à saúde, o aumento da biogênese mitocondrial. Um dos principais genes relacionado a este processo é o
Co-ativador-1α do receptor ativado de proliferador de Peroxissoma -γ (PGC-1α) pois interage e co-ativa uma
variedade de fatores e receptores nucleares envolvidos na indução de diversos outros genes ligados ao exercício.
Porém ainda não se conhece o comportamento de expressão deste importante fator após algumas horas de uma
sessão de exercício experimental exaustivo. Buscou-se desta forma analisar a expressão do gene PGC-1? na
porção vermelha do músculo gastrocnêmio de ratos, submetidos a uma sessão de exercício exaustivo. Este
trabalho foi aprovado pelo CEUA/UECE, nº 3145789/2014. Trinta e seis ratos machos, com peso de 220-250
gramas com alimentação ad libitum e ambiente com temperatura controlada em 20-22 oC foram distribuídos em
seis grupos experimentais: Controle sedentário (C) e Pós-exercício com eutanásia do animal nos horários: (0h), 6h,
12h, 24h e 48h após o teste exaustivo. Os animais foram adaptados à esteira ergométrica em velocidade mínima
(cinco dias por semana, 1a semana 0,4 km/h por 5 minutos, 2a semana: 0,4 km/h por 10 minutos) por duas
semanas, após o que, ocorreu o teste. Este teste consistiu de a uma sessão única de exercício exaustivo, em etapas
de 3 minutos de corrida em carga constante, com incrementos de 0,2 km/h entre etapas subsequentes até a
exaustão do animal. Nos horários previstos, os animais foram anestesiados e decapitados. Amostras do músculo
gastrocnêmio foram dissecadas, pesadas e congeladas em -80 ?C. A análise da expressão gênica foi realizada
através da técnica de qPCR, sistema Biorad CFX 96. Os resultados foram avaliados pela análise de variância
(ANOVA - One way) e pós teste de Tukey (p<0,05). Os dados encontrados demonstraram um aumento
significativo do gene PGC-1? no grupo 6h após exercício (2,23±0,25) quando comparado com o grupo controle
(1,12 ± 0,27). Os outros grupos não mostraram diferença significativa entre si e com o controle, apresentando
assim um pico de expressão deste gene após o exercício exaustivo e agudo, regredindo aos níveis basais
posteriormente. Este pico de expressão provavelmente está ligado, portanto, à necessidade celular de energia na
forma de ATP por indução de biogênese mitocondrial e ativação geral metabólica.
APOIO
FUNCAP
18
Ensino de Genética e Biologia Molecular
INTOLERÂNCIA À LACTOSE: EXPLORANDO A COEVOLUÇÃO ENTRE GENES E CULTURA
HUMANA
Felipe Pessoa da Silva1; Iêda Ferreira de Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Departamento de Biologia, Recife, PE
RESUMO
Todos os mamíferos recém-nascidos dependem do leite como fonte exclusiva de nutrição, sendo a lactose seu
carboidrato principal. Na sua decomposição em glicose e galactose, monossacarídeos absorvíveis pelo intestino, a
ação da enzima lactase é fundamental. Porém, observa-se que a habilidade de digerir a lactose pode diminuir ao
longo da vida, sobretudo em humanos. Hoje, sabe-se que a persistência ou não à lactase possui causa genética,
cuja herança é autossômica dominante. Indivíduos persistentes possuem mutações em seu DNA que mantêm o
gene lactase (LCT) funcional na vida adulta e, portanto, são capazes de digerir a lactose. Evidências também
sugerem que tais alterações são evolutivamente recentes, surgiram independentemente e aumentaram sua
frequência devido à seleção natural em algumas populações humanas. O objetivo desse trabalho é apresentar uma
oficina pedagógica, voltada para estudantes do Ensino Médio, que explora aspectos genéticos, moleculares e
evolutivos da intolerância à lactose. Inicialmente, exibe-se um vídeo sobre o tema, a fim de sensibilizar e resgatar
os conhecimentos prévios dos participantes. A seguir, são explicados os principais mecanismos moleculares
responsáveis pelos diferentes fenótipos observados (persistente ou não à lactase). Depois, algumas sequências de
DNA do gene LCT de diferentes populações são exploradas, com o emprego do programa MEGA. Nele, os
participantes realizam o alinhamento de sequências e a construção da árvore evolutiva. Fichas também são
distribuídas, para que cada participante faça anotações, sistematize as informações e resolva uma situaçãoproblema contextualizada à oficina. Por fim, os resultados são coletivamente discutidos. A oficina foi inicialmente
testada por um grupo de voluntários, estudantes de graduação. Atualmente, ela vem sendo aplicada em escolas de
Ensino Médio. Em geral, a oficina foi positivamente aceita pelos participantes. Eles demonstraram interesse, fácil
entendimento, participação ativa e colaborativa, além de curiosidade sobre o assunto. Entretanto, algumas
dificuldades conceituais foram observadas, como: alelo, promotor, polimorfismo e filogenia, uma vez que esses
conteúdos raramente são abordados na Educação Básica. Essa oficina tem contribuído na popularização científica,
utilizando o tema cotidiano intolerância à lactose como modelo. Além disso, ela constitui recurso didático
alternativo ao Ensino de Genética, em que é possível explorar a coevolução entre genes e cultura humana.
19
Ensino de Genética e Biologia Molecular
JOGO LÚDICO COMO: FERRAMENTA FACILITADORA DA APRENDIZAGEM DE ALUNOS DE
ESCOLA PÚBLICA DO ENSINO MÉDIO
Eduardo Junior da Conceição1; Higor Maciel Pontes da Silva1; Daniela Martins dos Santos1; Bruna Cláudia dos
Santos1; Luiz Vital F. C. da Cunha1; José Henrique Santoro Filho1; Dilene Minervino de Souza1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Católica de Pernambuco-UNICAP
RESUMO
O ensino de Biologia não deve permanecer centrado na metodologia baseada na transmissão e recepção de
informações através de aulas meramente expositivas, é necessário que o professor faça uso de estratégias que
possibilitem a atuação do estudante na construção do conhecimento. O trabalho teve como objetivo incentivar e
despertar o desenvolvimento da aprendizagem de forma interdisciplinar, dinâmica e contextualizada através do
jogo lúdico, tendo em vista que este, além de ser incentivado pelos PCNs como mediadores, quando planejados e
usados de forma a unirem o lúdico com o ensino, proporcionam extremamente para o processo de ensinoaprendizagem desenvolvendo o cognitivo a fim de facilitar a construção do conhecimento em torno do tema
Código Genético. Para isso foi proposto e avaliado um (Jogo do DNA), que abordam alguns dos conteúdos
programáticos da Biologia para o Ensino Médio, e aplicado com alunos de escola estadual do Recife. O método
utilizado para a avaliação foram palestras e questionários em seguida, durante e depois da realização de cada jogo,
resultando em um maior interesse proveniente dos alunos no empenho em estudar os conteúdos de biologia e um
esforço maior para relacionarem o conteúdo com a aula teórica e assim poderem aproveitar bem o jogo. Após
aplicação do jogo, os comentários feitos pelos alunos demonstraram que o jogo serviu para uma melhor
compreensão da estrutura da molécula de DNA, colaborando para a eficácia do aspecto lúdico associado ao
cognitivo como importante estratégia de ensino. Além disso, é observado que a diversão e competitividade oriunda
do jogo estimula o aprendizado e que também proporcionam interação e ajuda mútua entre os jogadores para que
todos permaneçam jogando. E também pode possibilitar a conscientização se o jogo for elaborado para tal
propósito.
APOIO
CAPES
20
Ensino de Genética e Biologia Molecular
O ACONSELHAMENTO GENÉTICO SOB O OLHAR DO DISCENTE: ENFOQUE NA ATUAÇÃO
PROFISSIONAL
Dulceria Costa da Silva1; Renaly da Costa Rodrigues2; Bruno Luiz Fonseca Schamber Reis3.
E-mail: [email protected]
(1)
Discente do curso de Ciências Biológicas da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB); (2)Discente do curso de
Fisioterapia da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB); (3)Faculdade de Ciências Médicas de Campina Grande
(FCM-CG)
RESUMO
INTRODUÇÃO O aconselhamento genético (AG) é o processo de comunicação sobre a possibilidade de
ocorrência ou recorrência familiar de doenças genéticas, envolvendo diagnóstico e informações sobre a doença em
questão, terapias e/ou profilaxias e suporte psicoterápico. Nos últimos anos, modificações na regulamentação
sobre a determinação dos profissionais habilitados a atuar no AG, têm levado a sérias discussões sobre o tema
OBJETIVO Analisar a compreensão dos discentes de cursos de ciências biológicas e da saúde a respeito do AG
METODOLOGIA Foram aplicados questionários semi-estruturados para alunos dos cursos de biologia,
enfermagem, odontologia e fisioterapia da UEPB campus I que já cursaram a disciplina de genética. Obteve-se
133 respostas, sendo 39 de enfermagem, 34 de biologia, 31 de odontologia e 29 de fisioterapia RESULTADOS
Quando perguntados se já ouviram falar em AG, em biologia 50% já ouviram falar mas não definiram, 35%
definiram e 15% nunca ouviram falar, sendo este o critério de exclusão das questões subsequentes. Em
odontologia 52% nunca ouviram falar, 42% não são capazes de definir e 6% definiram. Em enfermagem 54%
nunca ouviram falar e os 46% restantes já ouviram falar mas não são capazes definir. Em fisioterapia, 32% nunca
ouviram falar, 41% já ouviram mas não são capazes de definir e 27% definiram. Quando perguntados se sabem de
alguma regulamentação sobre profissionais que podem atuar no AG, 84% de odontologia, 80% de fisioterapia,
79% de enfermagem e 59% de biologia afirmaram que não. Em biologia 83% sabem ou acreditam que são
habilitados para realizar AG. Em enfermagem, odontologia e fisioterapia 79%, 87% e 72% respectivamente,
responderam não saber ou acreditarem que sejam. Quando perguntados se seu curso oferece conhecimentos
suficientes para atuar no AG após formados 100% dos discentes de enfermagem, 87% de odontologia e 86% de
biologia e 84% de fisioterapia afirmaram que não. 80% dos discentes de enfermagem e de fisioterapia e 75% de
odontologia afirmaram que nunca houve discussão sobre a habilitação da profissão para atuar no AG, enquanto em
biologia o percentual cai para 59%. Dentre os profissionais mais relatados para atuar, citou-se médicos
geneticistas, médicos de um modo geral, seguidos por biólogos geneticistas. CONCLUSÃO Embora todos os
cursos analisados apresentem um déficit considerável no conhecimento e discussão sobre AG, o curso de biologia
mostrou os resultados mais satisfatórios.
21
Ensino de Genética e Biologia Molecular
O DESAFIO DE ENSINAR E APRENDER GENÉTICA EM UMA ESCOLA PÚBLICA DE ENSINO
FUNDAMENTAL
Patrícia Valéria Castelo Branco Araújo1; Meydson Benjamim Carvalho Correa1; Muryllo Santos Castro1; Vera
Lucia Maciel Silva2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Maranhão; (2)Universidade Estadual do Maranhão
RESUMO
Atualmente muito se tem ouvido falar sobre o grande desinteresse por parte de muitos alunos por qualquer
atividade escolar. No entanto, a escola também tem suas falhas nesse processo quando não oferece condições
oportunas para o bom aprendizado. Nas aulas de Ciências, uma das principais dificuldades dos estudantes está
relacionada à compreensão de conceitos. Visando a melhoria desse quadro, professores devem buscar aulas
alternativas para melhorar o interesse dos alunos pelas atividades escolares, motivando-os a participarem e se
envolverem no processo. Essas atividades são importantes principalmente em conteúdos que envolvam conceitos
de difícil entendimento para os alunos, como a genética, inserida dentro da disciplina de ciências no Ensino
Fundamental. Assim, este trabalho pretendeu avaliar, através de questionários, o grau de aprendizado de alunos do
9º ano do Ensino Fundamental de uma Escola Pública do Município de São José de Ribamar - MA, no conteúdo
de Genética, antes e após atividades práticas, com o objetivo de verificar se essas atividades melhoraram o
interesse e o aprendizado dos alunos, em relação às aulas teóricas. O questionário era semelhante nos dois
momentos, sendo utilizado o teste pareado de McNemar para análise dos dados. Todos os alunos do 9º ano da
escola (63 alunos) responderam aos questionários. Contudo, somente participaram desta pesquisa aqueles que os
responderam nos dois momentos (34 alunos). As atividades práticas eram relacionadas ao conteúdo ministrado na
teoria, onde foram confeccionados modelos didáticos, como a estrutura do DNA; montagem de cariótipos, com
diferentes casos de aneuploidias; experimentos, com a extração de DNA de cebola; e, exposição de cartazes e
produtos para o tema transgênicos. Os resultados mostraram que, de forma geral, os alunos tiveram um bom
entendimento da disciplina somente com as aulas teóricas. As atividades práticas motivaram a participação de boa
parte dos alunos, mas não melhoraram significativamente o aprendizado (p > 0,05) na maioria das perguntas do
questionário. Também foi observado instigante senso crítico dos alunos quanto aos assuntos mais polêmicos, como
os transgênicos. Com isso, concluímos que somente as atividades práticas não são suficientes para o aprendizado
do conteúdo de genética. Elas têm mais relevância quando o aluno tem uma boa base teórica, adquirida,
principalmente, através de aulas que despertem o seu interesse no aprendizado.
22
Ensino de Genética e Biologia Molecular
O ENSINO DE GENÉTICA E A IMPLICAÇÃO DO SUJEITO NO ATO DE CONHECER
Jair Moisés de Sousa1; Maria da Conceição Xavier de Almeida2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Campina Grande; (2)Universidade Federal do Rio Grande do Norte
RESUMO
Texto: Os conteúdos de genética do ensino médio, contidos nos livros didáticos, apresentam a ciência genética
como sendo uma atividade praticada por sujeitos neutros sem qualquer influência de aspectos pessoais? O
objetivo desse trabalho é discutir a implicação do sujeito na ciência por meio de uma matriz epistemológica das
Ciências da Complexidade, bem como a forma como os livros de biologia do ensino médio abordam a importância
de aspectos humanísticos na construção de explicações científicas na área de genética. A ciência aqui será
concebida, como um aspecto da cultura humana e suas explicações, hipóteses e teorias como uma construção dos
sujeitos imersos em seus temores, desejos, crenças, fantasias e tempo histórico que marcaram suas existências.
Para tal, foram escolhidos cinco livros de biologia utilizados em escolas brasileiras e indicados no PNLD Ensino
médio de 2015. Após as escolha dos livros, foram seleciondos conteúdos de genética alusivos a uma história da
ciência, e seguidamente, identificados e analisadas as ideias que faziam referência a uma cultura humanística.
Após análise das obras escolhidas, percebeu-se que: todas as obras apresentaram uma abordagem histórica, apenas
de fatos exitosos, não discutindo aspectos culturais, disputa por status, comuns ao fazer da ciência. Os fatos
históricos, aparecem na maioria das vezes nos finais dos capítulos, passando assim uma visão de desvalorização
das relações sociais e as contribuições da genética são apresentadas como "descobertas científicas", ou seja,
verdades existentes que apenas foram reveladas pelos trabalhos experimentais. Os conflitos pessoais dos sujeitos
não aparecem nos discursos dos autores e a ciência genética, por omissão, é apresentada de forma asséptica de
humanidade. Conseqüentemente, os cientistas são vistos, como mitos, quase deuses, desprovidos de falhas e
incongruências de seus pensamentos. Diante disso, é necessário que os livros didáticos apresentem a construção
das ideias cientificas levando em consideração aspectos mais pessoais dos cientistas para que os alunos percebam
que o trabalho da ciência, como toda atividade humana, é marcada por erros, acertos, incertezas e sucessos.
23
Ensino de Genética e Biologia Molecular
O JOGO DA ENDOGAMIA, UMA ABORDAGEM CONSTRUTIVISTA NO ENSINO DE GENÉTICA.
Rafaella Nadja Soares da Silva1; Mayara Sousa da Silva1; Gustavo Farias1; Vilma Loreto1.
E-mail: [email protected]
(1)
ivanise maria da silva
RESUMO
O ato de se relacionar com pessoas da mesma família ou com algum grau de parentesco envolve não só um
contexto histórico e cultural, mas também genético. A detecção de casamentos consanguíneos é importante como
forma de identificar o aumento de doenças genéticas recessivas nas populações, sobretudo no nordeste brasileiro
onde essa prática é comum. A utilização de jogos didáticos tem sido uma prática educacional muito útil para uma
melhor contextualização de conceitos na área biológica, principalmente no campo da genética onde algumas
dúvidas conceituais e dificuldade de compreensão são um dos maiores paradigmas do ensino. Para a realização
deste trabalho foi criado um jogo de tabuleiro, que consistiu em demonstrar as consequências causadas pelo
casamento cosanguíneo. O jogo foi construído numa perspectiva sustentável, onde 90% do material utilizado foi
reciclado, desta forma estamos transmitindo para os educandos não apenas os aspectos de herança genética mas
também sensibilizando-os a cerca da educação ambiental. Para a construção do tabuleiro foi utilizado isopor que
foi encapado com papel e realizado marcações e para a confecção do dado utilizamos papelão, para dar sua forma
utilizamos um modelo encontrado na internet. O jogo consiste em jogar o dado e seguir no tabuleiro o número de
casas definido pelo mesmo. Ao longo do tabuleiro algumas casas possuem instruções, como por exemplo, estourar
um balão que será utilizado na dinâmica e dentro dele terá informações como: case-se ou divorcie-se,
especificando também o nível do grau de parentesco que esse relacionamento pode ter. Cada casamento trará um
risco e isso será dito ao decorrer do jogo. Por fim, a dupla que tiver o menor número de casamentos entre parentes
será a vencedora. Nosso intuito foi de trazer o tema endogamiaque é pouco conhecido pelos alunos de uma forma
mais didática e divertida. Desta forma, foi comprovado a partir deste trabalho que o lúdico auxiliou na
aprendizagem deste tema de uma forma muito eficaz e duradoura.
APOIO
Não houve apoio financeiro. Todos os gastos foram bancados pelos autores do trabalho.
24
Ensino de Genética e Biologia Molecular
O LÚDICO COMO FACILITADOR DO ENSINO-APRENDIZAGEM DE GENÉTICA NA ESCOLA
FRANCISCO ROMANO DA SILVEIRA, MÃE D'ÁGUA- PARAÍBA.
José Elinaldo da Silva Oliveira1; Jéssica Maria Alexandre Soares1; Glícia Joama Alves da Costa1; Hachiley
Louyse de Azevedo Oliveira1; Áquila Priscila Ferraz Silva1; Merilane da Silva Calixto1.
E-mail: [email protected]
(1)
Unidade Acadêmica de Ciências Biológicas/Centro de Saúde e Tecnologia Rural/UFCG - Patos/PB
RESUMO
Materiais didáticos são ferramentas fundamentais no processo de ensino-aprendizagem, sendo o jogo didático uma
importante alternativa por favorecer a construção do conhecimento do aluno. Assim, o objetivo do trabalho foi
aplicar jogos lúdicos, em sala de aula, como estratégia facilitadora do ensino-aprendizagem de Genética,
apresentando o conteúdo da aula de forma dinâmica e prática, para evitar uma aula tradicional, exaustiva e
monótona, devido o conteúdo de Genética ser considerado difícil. O trabalho foi desenvolvido na Escola Estadual
Francisco Romano da Silveira, no Município de Mãe D´água, Paraíba. A amostra utilizada foi de 32 alunos do
terceiro ano do Ensino Médio, que responderam um mesmo questionário antes e depois de cada jogo utilizado,
explorando os conceitos já vistos em sala pelos professores, para uma análise comparativa dos dados através de
abordagem quantitativa. Foi realizada uma oficina "Genética na Escola", onde foram aplicados dois jogos: "Bingo
das Ervilhas", abrangendo o conteúdo da 1ª Lei de Mendel, e "Construindo Heredogramas", com peças para
interpretar situações-problema e montar o heredograma de três doenças: Surdez, Polidactlia e Albinismo. Nos
resultados da aplicação do Bingo das ervilhas, percebeu-se um aumento significado no número de acertos, de
27,8% para 82,8%, com índice bastante elevado no declínio da taxa de erros (55%). Na aplicação do jogo
construindo heredogramas, os resultados também mostraram um elevado percentual de acertos ao comparar o pré e
pós-testes, aumentando de 18,8% para 91,4%, com uma diminuição no número de erros de 12,5%, além de haver
um declínio bastante significativo nos questionários sem respostas antes do jogo, de 43,8% para 0% após o jogo.
Após a aplicação dos jogos houve um elevado aumento percentual de acertos e consequente redução de erros,
indicando uma melhoria na fixação dos conteúdos e um melhor aprendizado dos alunos com a aplicação destes
jogos didáticos, comparando os percentuais obtidos nos pré e pós-testes. Dessa forma, é notório que metodologias
alternativas, como jogos lúdicos, são facilitadores no processo ensino-aprendizagem, permitindo aos alunos o
alcance do conhecimento de forma efetiva, prazerosa e eficaz, potencializando a aprendizagem e gerando
condições que ampliam a construção de conhecimentos. Além de ter um caráter motivacional, o lúdico pode ser
utilizado até mesmo em escolas que não possuam uma infraestrutura completa, sem laboratórios e/ou baixo
recurso financeiro.
25
Ensino de Genética e Biologia Molecular
O USO DE ESTRATÉGIAS DIDÁTICAS PARA O ENSINO DE GENÉTICA PARA ALUNOS DO
ENSINO MÉDIO DE UMA ESCOLA PÚBLICA DE PERNAMBUCO
Hortência Farias de Andrade1; Elys Karine Carvalho da Silva1; Cícero José Luíz dos Ramos Almeida1; Márcia
Vanusa da Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFPE
RESUMO
A educação é o principal instrumento para a formação humana, uma vez que a mesma é formadora de cidadãos
atuantes na sociedade em que estão inseridos. Nas escolas publicas, observamos que são raras as atividades lúdicas
em sala de aula. E por isso se faz necessário um maior empenho para trazer novas atividades aos alunos do ensino
médio envolvendo a genética. Os conteúdos da genética chegam ao terceiro ano do ensino médio como um tabu,
algo extremamente novo e intocável e o resultado da formação inadequada nas áreas de genética e biologia
molecular aparecem de forma distanciada entre ensino escolar e a assimilação de conceitos informais, não
sistematizados. Segundo Krasilchick a formação exclusivamente teórica, resulta na dificuldade em estabelecer
relações entre o cotidiano e o conhecimento adquirido, distanciando a realidade dos alunos dos acontecimentos do
mundo a sua volta. Por isso, o uso de atividades interativas e lúdicas contribui para a aprendizagem de assuntos no
campo da genética, servindo como facilitador no processo de ensino e aprendizagem. O presente trabalho teve
como objetivo verificar, por meio de questionário, a opinião dos alunos do ensino médio sobre as aulas lúdicas
envolvendo os temas da genética. Inicialmente foi feito uma explicação do trabalho em questão, para o
entendimento dos alunos. Os dados foram obtidos através de aplicação de questionário e as variáveis analisadas
foram: Frequência das aulas práticas formuladas pelo pelos professores, quais os recursos utilizados na aula, qual a
contribuição que esse material traz para as aulas e por fim a compreensão deles frente a essas aulas. A
participação dos alunos foi extremamente intensa e proveitosa, permitindo o surgimento e esclarecimento de
dúvidas, fazendo com que os mesmos sejam disseminadores de conceitos importantes para seu meio. Diante dos
resultados, percebeu-se a necessidade de continuar com as atividades lúdicas e incentivar todos os professores da
escola a trazer alguns conceitos ligados a atividades nessa perspectiva, para que os mesmos sejam melhor
internalizados.
26
Ensino de Genética e Biologia Molecular
OS JOGOS LÚDICOS COMO FERRAMENTA METODOLÓGICA DE ENSINO-APRENDIZAGEM EM
GENÉTICA
Eduardo Junior da Conceição1; Pollyana Souto da Silva1; Wallace Nazario de Araújo1; Welison Paulo Lopes
Pessoa1; Renato Barros Morais2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Católica de Pernambuco-UNICAP; (2)Laboratório de Biofísica, Fisiologia e Farmacologia, Centro
de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS), Universidade Católica de Pernambuco-UNICAP
RESUMO
Os conceitos abordados no ensino da genética são geralmente de difícil compreensão, sendo necessária a busca por
novas metodologias que auxiliem no aprendizado do aluno e que estimulem o interesse pelo tema, tornando o
processo de ensino e aprendizagem mais significativo. Nesse contexto os jogos lúdicos se enquadram como
mecanismo facilitador desse processo, ocorrendo dessa forma uma interação entre a teoria e a prática, o que acaba
por despertar a curiosidade dos alunos tornando-os mais ativos, aspecto muito importante nas aulas de genética.
Segundo o PCN, os jogos lúdicos constituem uma forma de propor atividades favorecendo a criatividade e a
simulação de situações-problema e que exercem soluções e estimulam o planejamento de ações. Pensando neste
constante desafio no ensino da genética, o presente trabalho teve como objetivo utilizar o jogo lúdico como
ferramenta metodológica de ensino e aprendizagem. Sendo aplicado pelos licenciandos do Curso de Licenciatura
em Biologia da UNICAP em um colégio público do Recife, Almirante Soares Dutra, em duas turmas do terceiro
ano do ensino médio, cada com uma média de 45 alunos, o jogo foi verificado em alunos de 15 a 17 anos, que
executaram um pré-teste antes de jogar, sendo selecionadas em torno de 80 questões de genética com os assuntos
em que os alunos tinham maiores dificuldades, tais como: DNA, replicação, transcrição, termos genéticos e
tradução. O questionário de pré-teste fora aplicado nas duas turmas, demonstrando uma média em torno de 45%.
Já o resultado do pós-teste, com o jogo lúdico, - um jogo de tabuleiro tematizado sobre genética com cartas que
apresentavam problemas usando os mesmos assuntos do questionário - foi significativamente superior quando
comparados aos do pré-teste, a média de acertos superou a margem dos 75%. A análise dos resultados demonstra
que o jogo lúdico é uma eficiente ferramenta auxiliar na aprendizagem dos conteúdos relacionados à temática
abordada, este jogo também possibilitou a interligação da teoria à prática com uma nova metodologia, sugerindo
ser uma estratégia insubstituível no estímulo da construção do conhecimento e na progressão das diferentes
habilidades.
27
Ensino de Genética e Biologia Molecular
PERCEPÇÃO SOBRE GENÉTICA MENDELIANA EM TURMAS DA 3ª SÉRIE DO ENSINO MÉDIO
DA UNIDADE ESCOLAR EDITH NOBRE DE CASTRO EM SÃO RAIMUNDO NONATO-PI.
Fernando Raimundo de Sousa1; Goldemberg Alves Duarte1; Marcos Ricelle de Carvalho1; Taylane Fernandes da
Rocha1; André Santos Landim1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual do Piauí - UESPI
RESUMO
Atualmente o ensino de genética vem sendo considerado como algo abstrato, longe da realidade dos alunos, pois
os professores tem dificuldade de trabalhar seu conteúdo por se tratar de uma disciplina de difícil assimilação,
dessa forma se limitam apenas a aulas teóricas e os alunos não conseguem compreender e aprender o que foi
ensinado saindo do Ensino Médio sem o conhecimento básico da disciplina como, por exemplo, sobre as leis de
Mendelianas, fato que prejudica o aluno que decide dar continuidade aos estudos em Ciências Naturais no Ensino
Superior. Esse trabalho teve como objetivo facilitar o conhecimento sobre a Primeira e Segunda Lei de Mendel,
bem como investigar quanto os alunos sabem sobre o tema. A intervenção foi realizada em duas turmas da 3ª Série
do Ensino Médio, designadas de B e C, na Unidade Escolar Edith Nobre de Castro em São Raimundo Nonato,
Piauí, onde foi aplicado um questionário referente às Leis de Mendel, em seguida foi feita uma abordagem teórica
do conteúdo e aplicação de um jogo didático denominado de "Dominó genético" com informações de genética
mendeliana. O mesmo questionário foi respondido pelos alunos ao final da intervenção. Participaram da pesquisa
53 alunos no total, sendo 23 na 3ª Série B e 20 na 3ª Série C. As perguntas respondidas no início do trabalho pela
turma B contabilizaram 32,2% de acertos e no final esse índice chegou a 38,3%, enquanto que na turma C, 30%
dos alunos acertaram as questões no início e após a atividade esse número subiu para 44,5%. Portanto, com a
pesquisa, constatou-se a necessidade de se trabalhar de forma lúdica em disciplinas nas quais os alunos
consideram como "difíceis de assimilar". Pois tais metodologias chamam a atenção dos alunos e fazem com que
eles participem ativamente do aprendizado, tornando o processo de fixação do conteúdo mais eficiente que por
meio de aula expositiva, onde os alunos apenas recebem as informações oriundas do professor.
28
Ensino de Genética e Biologia Molecular
RELATO DE EXPERIÊNCIA: DESMISTIFICANDO MITOS E PRECONCEITOS SOBRE O
PORTADOR DE SÍNDROME DE DOWN
Renata de Barros Oliveira1; Rayane Santana da Silva1; Rafaela Alves de Oliveira1; Janaína dos Santos2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Escola Estadual Professora Amélia Coelho
RESUMO
No século XIX surgiram os primeiros trabalhos científicos envolvendo a síndrome de Down (SD). A mesma foi
descrita por John Langdon Down, em 1866, e identificada em 1959 por Jerome Lejeune. A SD, também conhecida
por Trissomia do 21, é uma alteração genética que ocorre durante a divisão celular, mais precisamente no processo
de formação dos gametas ou do embrião, resultando na existência de três cromossomos no par 21. Seguindo os
preceitos constitucionais de que toda criança tem direito inalienável à educação, a política na área da educação
pública no Brasil nos últimos anos tem sido a inclusão dos estudantes com síndrome de Down e outros tipos de
deficiência na rede regular de ensino, com um crescimento significativo do número de matrículas nos últimos
anos. No entanto, nem sempre esta inclusão se dá de maneira satisfatória: geralmente faltam recursos humanos e
pedagógicos para atender às necessidades educacionais especiais dos alunos. O presente trabalho relata a
experiência obtida por uma das equipes do subprojeto PIBID Biologia do Centro Acadêmico de Vitória de Santo
Antão. A atividade desenvolvida abordou um dos diversos assuntos de genética: as Aneuploidias Autossômicas
com ênfase na Síndrome de Down, sendo realizada a partir de uma exposição/debate com duas turmas do terceiro
ano do ensino médio da Escola Estadual Professora Amélia Coelho, localizada na mesma cidade. Foram 65 alunos
envolvidos, se fez necessário a utilização de diversos recursos para a compreensão da relevância do conteúdo
abordado, culminando em um pequeno evento na Escola. Desta forma, o assunto foi explanado com o auxílio de
cordéis, realização de dinâmicas e da formação de uma mesa redonda contendo uma assistente social e a irmã de
uma portadora da síndrome. Essa atividade teve como objetivo aprimorar e demonstrar que conceitos éticos e
críticos que podem ser abordados no ensino biologia, e sua importância com instrumento de inclusão na sala de
aula. Os resultados obtidos através dessa intervenção foram surpreendentes, os alunos participaram ativamente da
atividade, desde a organização até a produção dos materiais didáticos, a mesa redonda foi considerada altamente
proveitosa por aproximar os alunos da vida de um portador da síndrome. A escola pública brasileira tem que
melhorar muito no aspecto inclusivo, e acreditamos que esse tipo de prática pode contribuir para alcançarmos uma
escola de qualidade para todos.
29
Ensino de Genética e Biologia Molecular
REPRESENTAÇÕES MENTAIS SOBRE A MOLÉCULA DE DNA: A IMPORTÂNCIA DAS OFICINAS
PEDAGÓGICO-CIENTÍFICAS NO ENSINO MÉDIO
Maria Izabel Pereira e Silva1; Lisângela Barbosa de Medeiros1; Iêda Ferreira de Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Biologia/Universidade Federal Rural de Pernambuco
RESUMO
O DNA é a molécula responsável pelo armazenamento e transmissão das informações genéticas dos seres vivos.
Desde a elucidação de sua estrutura, em 1953, seguiu-se intenso desenvolvimento nos campos da Genética e
Biotecnologia, com desdobramentos econômicos e éticos jamais vistos pela sociedade. Lamentavelmente, as
escolas não têm conseguido acompanhar esses avanços, dada a complexidade e o volume de informações
produzidas. Quando bem planejadas, propostas de divulgação científica são valiosas ferramentas de acesso ao
saber, pois transpõem a linguagem científica para um formato mais acessível a uma vasta audiência. O objetivo
desse trabalho foi analisar o impacto de uma intervenção pedagógica sobre as representações mentais de
estudantes do Ensino Médio de duas escolas do Recife quanto à molécula de DNA. Para isso, foi realizada a
oficina científica "Introdução à molécula de DNA", que consistiu num conjunto de atividades coordenadas, cuja
finalidade foi demonstrar a presença do DNA nos seres vivos, seus níveis de organização e compactação, além de
sua importância no cotidiano. As representações dos estudantes sobre o DNA foram exteriorizadas pela elaboração
de desenhos, antes da intervenção (AI) e depois (DI). Na Escola A, a análise dos desenhos indicou a ocorrência
das categorias: proposicional (AI=67%; DI=56%), imagística (AI=25%; DI=43%) e híbrida (AI=8%; DI=1%). Na
Escola B, 100% das representações foram imagísticas AI, enquanto DI, 17% foram proposicionais e 83%
imagísticas. Anteriormente à oficina, a maioria das representações exibiu muita similaridade com as ilustrações
presentes em livros didáticos (predominantemente a dupla-hélice). Os desenhos mostraram ou não elementos
essenciais a esse modelo. Quando presentes, as representações não foram, necessariamente, cientificamente
corretas. Sobre o impacto da intervenção, constatou-se a aquisição de novos conhecimentos pelos estudantes,
evidenciada pelo acréscimo de termos explicativos mais adequados aos desenhos ou outras formas de
representação do DNA (por exemplo, cromossomos ou aglomerados visualizados após o experimento de
extração). Esses resultados evidenciam a contextualização do conhecimento e a aprendizagem significativa dos
conteúdos trabalhados. Como a divulgação científica busca assegurar a presença da Ciência na cultura geral das
pessoas, conclui-se que, após essa vivência, os sujeitos serão capazes de melhor compreender e refletir sobre os
impactos das descobertas científicas no dia-a-dia.
30
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
VARIABILITY IN DNA SITES REVEALS A NEW SYNAPOMORPHY KARYOTYPE FOR
NORTHEASTERN LINEAGE OF GENUS POINCIANELLA BRITTON & ROSE (CAESALPINOIDEAE,
LEGUMINOSAE)
Brena Van Lume1; Edeline Gagnon2; Gustavo Souza1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Institut de Recherche em Biologie Végétale, Quebec Canada
RESUMO
The Poincianella-Erythrostemon (P-E) group sensu Lewis (1998) consists of about 35 species distributed in the
neotropical region, from Central America, the Andes across Peru, Bolivia, Argentina, and northeastern Brazil.
Molecular phylogenetic analyses have revealed that the genus is non-monophyletic, and may actually consist of
three to four separate lineages. However, more strongly resolved and well-sampled phylogenies are still needed to
clarify the taxonomy of this genus, part of the larger Caesalpinia group, which is in need of taxonomic
reorganizations. Karyotypically, this group presents numeric stability with 2n = 24 chromosomes, with a great
diversity of heterochromatic bands. This study aims to verify whether northeastern Brazilian P-E species can be
differentiated karyotypically from the other species of the genus, as well as the other genera of the Caesalpinia
group. For this, we used fluorescentin situ hybridization (FISH) with 45S and 5S ribosomal DNA. Four species of
P-E were analyzed in the Northeast of Brazil (P. bracteosa (Tul.) L.P. Queiroz, P. microphylla (Mart. ex G. Don)
L.P. Queiroz, P. pluviosa (DC.) L.P. Queiroz and P. pyramidalis (Tul.) L.P. Queiroz), as well as nine species of
Caesalpinia group. For the phylogenetic analysis, plastid sequences matK, rps16, trnDT, trnL an dycf6 and nuclear
ITS of 20 species were analyzed. The molecular phylogeny revealed that northeastern Brazilian P-E species form a
well-supported group. All of them exhibited synteny between the sites of 5S rDNA and 45S in the proximal region
of a pair of acrocentric chromosomes. Also, synteny was observed in rDNA of Arquita mimosifolia and
Caesalpinia pulcherrima, but in different positions of the chromosome. Furthermore, they showed 45S rDNA sites
on the short arm of three other acrocentric pairs. Moreover, other species of the Caesalpinia group showed sites of
5S and 45S rDNA on different chromosomes, with 5S located in the interstitial region of a metacentric pair. The
rDNA sites synteny present in the northeastern Brazilian species of Poincianella at first seem to represent a
synapomorphy for this group, but our results show that the character seems to have also have arisen de novo in two
other species belonging to different genera. These results support the separation of P-E in two independent
lineages, suggesting that the representatives of northeastern Brazil can be circumscribed in a different genus.
APOIO
CNPq
31
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
BANDEAMENTO CROMOSSÔMICO E FISH EM ESPÉCIES DE CRINUM L. (AMARYLLIDACEAE
JAUME ST.-HIL.).
Emmanuelly Calina Xavier Rodrigues dos Santos1; Leonardo Pessoa Felix2; Reginaldo de Carvalho3.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Ciências Agrárias, Universidade Estadual da Paraíba, Catolé do Rocha, Brasil; (2)Departamento
de Fitotecnia, Universidade Federal da Paraíba, Areia, Brasil ; (3)Departamento de Biologia/Genética,
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife, Brasil
RESUMO
O gênero Crinum L. com cerca de 130 espécies, é o único membro pantropical da família Amaryllidaceae,
ocorrendo na Ásia, América do sul e norte e Austrália. Possui grande estabilidade cariotípica, semelhança na
morfologia cromossômica, baixa frequência de poliploidia, número básico x = 11, e seu monofiletismo é bem
suportado por estudos moleculares. Com o objetivo caracterizar o cariótipo de três espécies de Crinum (C.
americanum L., C. asiaticum L. e C. ornatum (Aiton) Herb.) e investigar a distribuição da heterocromatina, foram
utilizadas técnicas como o bandeamento C, fluorocromos CMA3 e DAPI e hibridização in situ fluorescente (FISH)
com sondas de DNA ribossomal 5S e 45S. Como resultados deste trabalho, as bandas C e CMA+ apresentaram
colocalização com o DNAr 45S no braço longo de um par submetacêntrico. Crinum americanum e C. asiaticum
apresentaram dois pares de sítios de DNAr 5S um na região subterminal de um par metacêntrico maior e outro na
região proximal de um par metacêntrico menor. Em C. ornatum foi detectado um par de sítios de DNAr 5S no
braço longo do mesmo par submetacêntrico em que ocorre o sítio de DNAr 45S. Adicionalmente, em C. ornatum
o bandeamento CMA/DAPI/C revelou bandas heterocromáticas CMA-/DAPI+ na região pericentromérica de todos
os cromossomos do complemento. Os dados citogenéticos corroboram com as semelhanças morfológicas
vegetativas e a distribuição geográfica, uma vez que C. americanum e C. asiaticum, com mesmo número de
bandas C/CMA+ e de sítios de DNAr 5S e 45S, apresentam flores em forma de estrela e ocorrem no Sul e Leste da
África, Madagascar e Austrália, enquanto C. ornatum, com bandas DAPI+ e um único sítio de DNAr 5S no mesmo
cromossomo que o DNAr 45S, possui flores em forma de sino e ocorre na África Ocidental. Este trabalho mostra a
importância da citogenética para auxiliar estudos de grupos com relações filogenéticas intragenéricas ainda não
bem resolvidas como é o caso do gênero Crinum.
APOIO
CAPES, FACEPE
32
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
CHROMOSOME NUMBER AND GENOME SIZE IN THE PALEOPOLYPLOID SUBFAMILY
BOMBACOIDEAE (MALVACEAE)
Lucas Alexandre de Souza Costa1; Álex Oliveira1; Jefferson Guedes Carvalho Sobrinho2; Gustavo Souza1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Universidade Federal do Vale do São Francisco
RESUMO
The subfamily Bombacoideae (Malvaceae) is composed of about 250 predominantly arboreal species distributed
mainly in the Neotropical region. The subfamily represents a paleopolyploid lineage characterized by small and
numerous chromosomes ranging from 2n = 86 to 2n = 276. In the present work we analyzed the evolution of
chromosome number and genome size (1C) in Bombacoideae. Data were obtained from cytological preparations
and flow cytometry and complemented by literature data. Diploids were found in Ochroma (2n = 84),
Cavanillesia, Pochota, Pseudobombax (2n = 88), Bombax, Eriotheca gracilipes and Pachira (2n = 92). We found
polyploids in Adansonia digitata (2n = 160) and Eriotheca (2n = ca. 194 and 276). Genome size ranged from 1C =
1.13 pg in Pochota fendleri to 1C = 4.77 pg in Eriotheca macrophylla. The linear increase of genome size in
Eriotheca polyploids (2x, 4x, and 6x) suggests that they are neopolyploids. Mean genome size in Bombacoideae is
similar to that of diploids in Malvoideae. Within Bombacoideae, chromosome number and genome size showed a
weak phylogenetic signal (l = 0.626 and l = 0.409, respectively). In spite of that, our analyses reveal smaller
genomes and lower chromosome numbers in the Striated bark Clade (represented in our study by Pochota +
Pseudobombax + Ceiba) than in its sister clade (i.e., the Pachira s.l. Clade), which was cytogenetically more
variable. Given the geographic distribution and species richness patterns of Bombacoideae, our data do not support
the idea that areas of long-term climatic stability such as seasonally dry tropical forests (SDTF) would have higher
genetic diversity. In contrast, the occupation of historically stable areas may have played an important role in the
observed patterns of stable low chromosome number and small genome size of Bombacoideae lineages inhabiting
SDTF areas.
APOIO
CAPES
33
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
CITOGENÉTICA, ORIGEM E EVOLUÇÃO DE CUSCUTA VEATCHII BRANDEGEE
(CONVOLVULACEAE)
Amalia Ibiapino1; Maria Eduarda Ferraz1; Miguel García2; Mihai Costea3; Sa?a Stefanovic2; Marcelo Guerra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Pernambuco; (2)University of Toronto-Mississauga; (3)Wilfrid Laurier University
RESUMO
O gênero Cuscuta está representado por cerca de 200 espécies, divididas em 4 subgêneros
(Cuscuta, Grammica, Monogynella, Pachystigma), de distribuição cosmopolita e hábito holoparasita. As sementes
das espécies prejudiciais para a agricultura podem ser distribuídas junto com as sementes de seus hospedeiros.
Sendo proibida, em alguns países a entrada de material contaminado. O grupo apresenta pouca variação
morfológica, porém alta variabilidade cariotípica, com números cromossômicos diploides entre 2n = 8 e 2n = 30 e
alguns tetraploides. O subgênero neotropical Grammica, inclui a maioria das espécies (mais de 150), divididas em
18 seções, sendo uma delas, Denticulata, formada por apenas três espécies que se distribuem por toda a América
do Norte: duas com 2n = 30 (C. nevadensis I. M. Johnst. e C. denticulata Engelm.) e uma tetraploide com 2n = 60
(C. veatchii Brandegee). Neste trabalho foi investigada a relação desse tetraploide com os seus possíveis parentais
diploides, por meio da coloração CMA/DAPI e distribuição de sítios de DNAr 5S e 45S. Cuscuta
denticulata apresentou um cariótipo estável, com cromossomos pequenos, com uma região DAPI+ na região do
centrômero, poucos cromocentros e sítios de DNAr 5S e 45S localizados em um mesmo par de cromossomos. As
outras duas espécies apresentaram 3 pares de sítios de DNAr 5S e um número variável (2 a 5 pares) de sítios de
45S. Nestas duas últimas, os sítios variaram intra- e interespecificamente em número, tamanho e posição,
apresentando um ou dois pares de sítios de DNAr 45S ligados a sítios de DNAr 5S. Além disso, C.
nevadensis possui cromossomos maiores, sem bandas DAPI+ e com muitos cromocentros enquanto C.
veatchii apresentou características cariotípicas intermediárias entre C. nevadensis e C. denticulata. Esses dados
sugerem que: 1) C. veatchii pode ser um alopoliploide formado por esses dois diploides e 2) que a instabilidade
dos sítios de DNAr de C. nevadensis foi transmitida a C. veatchii. Contudo, a possibilidade de que C.
veatchii tenha se formado por repetidos eventos de hibridização deve ser também considerada.
APOIO
CAPES, CNPq
34
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
CITOGENÉTICA, ORIGEM E EVOLUÇÃO DE STYLOSANTHES SCABRA E ESPÉCIES AFINS DO
COMPLEXO DE S.SCABRA
Lívia de Moraes Pereira1; Gustavo Souza1; André Marques2; Natoniel Melo3; Marcelo Simon4.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratory of Plant Cytogenetics and Evolution, Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil;
Laboratory of Genetic Resources, Campus Arapiraca, Federal University of Alagoas, Arapiraca, Brazil;
(3)
Embrapa Semiárido, Laboratory of Biotechnology, Petrolina, PE, Brazil; (4)Embrapa Recursos Genéticos e
Biotecnologia, Brasília, Distrito Federal, Brazil
(2)
RESUMO
O gênero Stylosanthes Sw. compreende 42 espécies, com uma distribuição pantropical, apresentando uma rica
diversidade no Brasil. O gênero possui cariótipo x=10 com diploides, tetraploies e hexaploides e morfologia
cromossômica similar (~2µm). Stylosanthes scabra apresenta um cariótipo incomum das demais espécies,
apresentando variação no número cromossômico e uma distinta distribuição de bandas CMA/DAPI. Para tentar
entender a origem do cariótipo de S.scabra, o presente estudo teve como objetivo analisar, citogeneticamente,
diversos acessos de S.scabra, para verificar a variação do número cromossômico, a morfologia, distribuição de
CMA/DAPI e FISH (DNAr 5S e 45S). Além disso, foi investigado a origem do alotetraploide S.scabra pela
técnica de GISH,a partir dos genomas oriundos de S.hamata (2n=20) e S.viscosa (2n=20). Todas as espécies e
seções estudadas apresentaram dois pares de bandas CMA+/DAPI-; uma terminal, no braço curto de um par
submetacêntrico (colocalizada com os sítios de 45S) e outra intersticial no braço longo de um metacêntrico
(colocalizadas com os sítios de 5S). No entanto, o acesso 2254, 2n=20, apresentou apenas um par de bandas
CMA+/DAPI- no braço longo de um metacêntrico e o acesso 2262, 2n=20, apresentou um par de bandas
CMA+/DAPI- na regiao terminal do braço curto de um par submetacêntrico.Todos os cromossomos apresentaram
bandas DAPI+ centroméricas. Os acessos de S.scabra 4382, 1489, 1500 e 2253 apresentaram citótipos tetraploides
com 2n=40, sendo observado um sítio adiconal de DNAr 5s. A análise por GISH confirmou a origem
alopoliplóide de S.scabra, revelando S.hamata e S.viscosa como suas espécies parentais, onde as bandas de DAPI+
de S.scabra são provavelmente oriundas do genoma de S.hamata. Conclui-se que a citogenética molecular possui
grande potencial para desvendar a origem e as relações filogenéticas entre as espécies do gênero Stylosanthes.
APOIO
FACEPE
35
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
DISTRIBUIÇÃO DOS SÍTIOS DE DNA RIBOSSOMAL 5S E 45S EM PASSIFLORA WATSONIANA
MAST. (PASSIFLORACEAE)
Yhanndra Karine Dias Silva1; Mariela Analía Sader1; Andrea Pedrosa Harand1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Citogenética e Evolução Vegetal, Departamento de Botânica, Centro de Biociências,
Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil
RESUMO
Passiflora L. pertence à família Passifloraceae e tem importância econômica especialmente por seu uso para
alimentação, medicamentos e ornamentação. O gênero possui cerca de 500 espécies e tem como centro de origem
a região neotropical. A espécie Passiflora watsoniana ocorre apenas no Brasil, sendo endêmica da região
Nordeste. Em estudos filogenéticos anteriores, P. watsoniana está incluída dentro do subgênero Passiflora, que
apresenta mais de 200 espécies, em sua maioria com 2n = 18. No entanto, apenas 51 espécies apresentam
contagem cromossômica até o momento, e para as espécies analisadas quanto aos sítios de DNA ribossomal
(DNAr), houve variação tanto para o 5S quanto para o 45S. Neste trabalho, analisamos a distribuição dos sítios de
DNAr 5S e 45S no cariótipo de P. watsoniana. Raízes jovens foram obtidas de vaso, pré-tratadas com 8hidroxiquinolina (8-HQ) e fixadas com Carnoy 3:1. As raízes foram digeridas em 2% celulase e 20% pectinase e
esmagadas em ácido acético 45%. A hibridização in situ utilizou sondas de DNAr 5S e 45S, marcadas por nick
translation. Passiflora watsoniana apresentou 2n = 18, com cromossomos meta e submetacêntricos. A espécie
apresentou três pares de sítios de DNAr 45S terminais e um par de sítios de DNAr 5S subterminal. Os resultados
obtidos no presente trabalho confirmam o posicionamento filogenético desta espécie no mesmo subclado do
subgênero Passiflora que outras espécies que apresentam três pares de sítios de DNAr 45S. Este par extra de
DNAr 45S surgiu possivelmente por amplificação ou duplicação no ancestral comum desse clado.
APOIO
CAPES, FACEPE e CNPq.
36
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
DNA REPETITIVO NA EVOLUÇÃO CARIOTÍPICA ENTRE ESPÉCIES DE PHILODENDRON
(ARACEAE)
Emanuelle Vasconcelos1; Santelmo Vasconcelos2; Ana Maria Benko Iseppon1; Ana Christina Brasileiro Vidal1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE; (2)Instituto Tecnológico Vale, Belém, PA
RESUMO
As espécies de Philodendron são consideradas elementos importantes das florestas neotropicais, que apresentam
consideráveis variações no tamanho dos genomas. Contudo, o fato de até o momento não ter sido reportado
nenhum caso de poliploidia no gênero indica fortemente que o DNA repetitivo é um importante componente para
a dinâmica da evolução cariotípica em Philodendron. Desta forma, o estudo citogenético de sequências repetitivas
por hibridização in situ fluorescente (FISH) em 30 espécies, com sondas de DNAr e DNA telomérico, visou
auxiliar no entendimento da organização genômica, permitindo a construção de mapas comparativos e auxiliando
no entendimento da evolução cariotípica do gênero. Foram realizadas 19 contagens cromossômicas inéditas, as
quais variaram de 2n = 30 a 2n = 36 cromossomos. Devido a essa variação em uma provável série disploide, foi
realizada uma FISH com sonda de DNA telomérico em três espécies de Philodendron com o menor número
cromossômico observado, a fim de identificar possíveis sítios de DNA telomérico intercalares, como indicativo de
eventos de disploidia recente dentro do gênero. Contudo, estes sinais intercalares não foram observados sendo
sugerido a eliminação de sequências teloméricas após eventos de fusão. Embora P. callosum (2n = 28) não tenha
apresentado marcações terminais, foram observadas marcações proximais em quase todos os cromossomos da
espécie, sugerindo a presença de DNA satélite com sequência telomérica intercalar. Os dados de FISH para 30
espécies revelaram uma estabilidade no número de sítios de DNAr 5S (um par) e uma grande variação para a
quantidade de sítios de DNAr 45S (um a oito pares). Adicionalmente, foram observados heteromorfismos,
destacando-se os relacionados ao DNAr 5S em P. bipennifolium (com três sinais), P. glaziovii (sinais em
cromossomos com tamanhos diferentes) e P. pedatum (um sinal). Nossos dados mostram o uso das sequências dos
genes ribossomais como marcadores cromossômicos informativos para estudos de evolução cariotípica, indicando
a ocorrência de rearranjos cromossômicos ao longo da evolução do gênero pela evidência de heteromorfismos e
variações numéricas nos sítios de DNAr.
APOIO
Capes
37
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
EVIDÊNCIAS CARIOMORFOMÉTRICAS NA EVOLUÇÃO CROMOSSÔMICA DA TRIBO
HIPPEASTREAE SWEET (AMARYLLIDACEAE JAUME ST.-HIL.)
Emmanuelly Calina Xavier Rodrigues dos Santos1; Leonardo Pessoa Felix2; Reginaldo de Carvalho3.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Ciências Agrárias, Universidade Estadual da Paraíba, Catolé do Rocha, Brasil; (2)Departamento
de Fitotecnia, Universidade Federal da Paraíba, Areia, Brasil; (3)Departamento de Biologia/Genética, Universidade
Federal Rural de Pernambuco, Recife, Brasil
RESUMO
Alterações cromossômicas geralmente estão envolvidas no processo de diversificação e especiação das espécies
vegetais, e podem promover modificações no número, tamanho e na estrutura dos cromossomos. O presente
trabalho objetivou apontar evidências sobre eventos de evolução cariotípica na tribo Hippeastreae, por meio da
contagem cromossômica e análise cariomorfométrica. As medidas cromossômicas foram obtidas utilizando o
software Image Tools® 0.8.1 a partir de cinco metáfases completas de 10 espécies dos gêneros Habranthus Herb.
(H. brachyandrus, H. sylvaticus), Hippeastrum Herb. (H. glaucescens, H. puniceum, H. striatum, H. stylosum e
Hippeastrum sp1) e Zephyranthes Herb. (Z. flavissima, Z. mesochloa e Z. aff. stellaris), e os cariótipos
caracterizados de acordo com o número fundamental, fórmula cariotípica, variação no tamanho cromossômico,
comprimento cromossômico total do complemento haploide, média do comprimento cromossômico, razão entre o
cromossomo maior e o menor do complemento, razão média da relação entre os braços cromossômicos, e o índice
de assimetria intracromossômica (A1) e intercromossômica (A2). Os números cromossômicos variaram de 2n = 12
em H. brachyandrus e H. sylvaticus a 2n = 26 em Z. mesochloa. Todas as espécies apresentaram cariótipos
assimétricos, com cromossomos metacêntricos, submetacêntricos a acrocêntricos. O índice de assimetria
intracromossômica (A1) variou de 0,33 a 0,52 e o tamanho cromossômico médio variou de 5,15 μm a 9,65 μm
com assimetria intercromossômica (A2) variando de 0,13 a 0,28. Os cariótipos em Habranthus e Zephyranthes são
mais assimétricos em relação aos representantes do gênero Hippeastrum. Zephyranthes mesochloa que apresentou
o maior número cromossômico na presente amostragem (2n = 26), possivelmente é resultado de um evento de
poliploidia seguido de disploidia ascendente. Apesar de não terem sido visualizados cromossomos acrocêntricos
em Z. mesochloa, o cariótipo exibe um par de cromossomos menores (3,06 µm), que correspondem a metade do
maior par cromossômico (7,67 µm), indicando a ocorrência de disploidia ascendente partindo de um cariótipo com
2n = 24 para 2n = 26. Aqui sugerimos a disploidia e a poliploidia como principais eventos evolutivos ocorrentes
em Hippeastreae. Adicionalmente, a utilização de outras técnicas, assim como o uso dos fluorocromos CMA3 e
DAPI e a FISH, contribuirá ainda mais para elucidar os eventos evolutivos ocorridos ao longo da história da tribo
Hippeastreae.
APOIO
CAPES, FACEPE
38
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
LOW-COVERAGE GENOME SEQUENCING TO IDENTIFY 45S RDNA AND CHROMOSOMAL
LOCALIZATION IN PASSIFLORA EDULIS SIMS.
Gonçalo Santos Silva1; Margarete Magalhães Souza1; Vanessa de Carvalho Cayres Pamponet1; Cláusio Antônio
Ferreira de Melo1; Saráh Gomes de Oliveira2; Fabienne Micheli1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Ciências Biológicas, Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC), Ilhéus, BA, Brasil;
Departamento de Botânica, Instituto de Biociências, Universidade de São Paulo (USP), São Paulo, SP, Brasil
(2)
RESUMO
Repetitive DNAs (transposable elements and tandem repeats) are the major components of the plant genome.
Genes for rDNA 45S and 5S sites, that are tandem repeated, can be characteristic for a given species or genus, and
can be used for comparative and evolutionary analysis. This study aimed to identify the 45S rDNA gene by
sequencing data for later chromosomal mapping in Passiflora. The low coverage sequencing in P. alata, P.
cincinnata and P. edulis was performed at Illumina Miseq. The 45S rDNA was identified by Repeat Explorer.
Clusters (CL) of 45S rDNA were used to construct a phylogenetic tree using the MEGA7. Contigs with greater
similarity were aligned by Clustal Omega and the sequence region with 100% similarity between the three species
were used to design the primers. The amplified fragments were labeled by Nick Translation and mapped by FISH.
Nine CL 45S rDNA were identified. Two CL in P. alata (CL 108 and CL 116), three CL in P. cincinnata (CL70,
CL71 and CL130) and four CL in P. edulis (CL108, CL116, CL117 and CL119). The phylogenetic tree showed
that CL116 (P. alata), CL71 (P. cincinnata) and CL116 (P. edulis) have high similarity between the three species,
also observed through the alignment. In the database of DNA these three clusters were similar to the 26S rDNA of
Populus tremuloides, Salix indoor and Averrhoa carambola (98% of identity). The primers designed for the 26S
rDNA gene generated a fragment of about 1.3 kb was transformed in probe and mapped in P. edulis. Four 26S
rDNA sites were detected, confirming the number of sites reported for this species. Until then in Passiflora, just
the pTa71 probe has been used to map the sites of 45S rDNA. Thus, the amplification of the 26S rDNA gene by
PCR provides another method for mapping this gene. In addition, amplification by PCR is more advantageous
when compared with use of pTa71 probe, that needs to be maintained in the plasmid in Escherichia coli, which
makes this methodology laborious and costly. The use of bioinformatics tools associated with cytogenetic has
generated significant advances in plant cytogenomics, because it has been possible to select sequences of interest
and map them, principally for repetitive DNA, such as satellite DNA, rDNA and retrotransposons.
APOIO
CAPES; FAPESB; UESC.
39
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
O PAPEL DA POLIPLOIDIA, DISPLOIDIA ASCENDENTE E POLIMORFISMOS DE DNAR NA
DIVERSIFICAÇÃO CARIOTÍPICA DO GÊNERO CHAMAECRISTA (CAESALPINOIDEAE,
LEGUMINOSAE)
Brena Van Lume1; Guilherme Tomaz Braz2; Giovana Augusta Torres2; Ludmila Cristina Oliveira2; Gustavo
Souza1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Universidade Federal de Lavras
RESUMO
O gênero Chamaecrista apresenta cerca de 330 espécies, divididas em seis seções, com distribuição Pantropical e
maior diversidade na região Neotropical com 266 espécies. O gênero possui uma elevada diversidade cariotípica
com diferentes números cromossômicos, variando de 2n = 14 a 2n = 48. Análises citológicas, quando interpretadas
num contexto filogenético, permitem avaliar o histórico de alterações de diferentes caracteres, permitindo inferir
os principais eventos envolvidos nas mudanças cromossômicas e o número cromossômico básico (x) de grupos
cariotipicamente diversificados. O objetivo desse estudo foi investigar a evolução cariotípica de Chamaecrista
com base na análise de número e morfologia cromossômica, distribuição de sítios de DNAr e tamanho do genoma.
Esses dados foram plotados numa filogenia molecular baseada em sequências plastidiais trnL-trnF e nucleares
ITS1-5.8S-ITS2. Os números cromossômicos observados em Chamaecrista foram 2n = 16 (12 spp.), 2n = 14 (2
spp.) e 2n = 28 (17 spp.). O número de sítios de DNAr 5S e 45S variou de um a três pares por cariótipo,
distribuídos em cromossomos distintos ou em sintenia. A análise filogenética revelou que o gênero Chamaecrista
é monofilético e dividido em quatro clados. A comparação com grupos externos dos gêneros Caesalpinia, Cassia e
Senna permitiu inferir x = 6 como estado plesiomórfico, que por disploidia ascendente originou x = 7 e
posteriormente x = 8 em Chamaecrista. Dessa forma, o cariótipo 2n = 28, presente na maioria das espécies do
gênero, tem origem tetraploide. Os valores de conteúdo de DNA suportam essa hipótese, com genomas em média
maiores (1C = ~ 0,77 pg) nas espécies com 2n = 28 (tetraploides) do que naquelas com 2n = 16 (diploides) (1C = ~
0,51 pg). Assim, disploidias ascendentes, poliploidia e amplificação/desamplificação dos sítios de DNAr, seguido
por microrrearranjos que alteram a posição desses sítios nos cromossomos, constituem os principais eventos
envolvidos na diversificação cariotípica de Chamaecrista.
APOIO
CNPq, FAPEMIG
40
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
POLIMORFISMO NO PADRÃO DE BANDAS GC POSITIVAS EM QUATRO ESPÉCIES DE
CONVOLVULACEAE OCORRENTES NO ESTADO DO PIAUÍ.
Antônio de Pádua de Oliveira Paula1; Genialdo Ramos dos Santos1; Reginaldo de Carvalho2; Maria Teresa
Aureliano Buril Vital3.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluno de Doutorado em Botânica - PPGB/UFRPE; (2)Prof. Dr. do Programa de Pós-graduação em Botânica UFRPE; (3)Profª. Drª. do Programa de Pós-graduação em Botânica - UFRPE
RESUMO
A família Convolvulaceae apresenta sua maior distribuição em regiões tropicais e subtropicais com 55 gêneros e
1.930 espécies. Nesta família, o gênero Ipomoea L. se destaca por apresentar cerca de 600 espécies, sendo o mais
numeroso. Já o gênero Merremia Dennst. apresenta 60 espécies, com ocorrência para a maioria dos estados
pertencentes a região nordeste brasileira. O número cromossômico básico de x=15 e diploide de 2n= 30 são
comumente encontrados nas espécies do gênero Ipomoea, entretanto já foi observado para este a ocorrência de
aneuploidia e poliploidia. Para as espécies do gênero Merremia, há a ocorrência do mesmo número diploide
(2n=30), com a presença de cromossomos simétricos meta e submetacêntricos. A similaridade numérica e
morformétrica entre espécies de diferentes gêneros na família Convolvulaceae favorece a busca por padrões de
diferenciação cariotípicos capazes de diagnosticar o processo de diferenciação e evolução destes. No presente
trabalho foram analisadas quatro espécies da família Convolvulaceae pertencentes a dois gêneros, Ipomoea
bahiensis Willd. ex Roem. & Schult, I. hederifolia L., Merremia aegyptia (L.) Urb. e M. cissoides (Lam.) Hallier
f., todas ocorrentes no estado do Piauí. A análise das regiões heterocromáticas ricas em guanina e citosina e do
número cromossômico foi feita por meio da técnica de CMA/DAPI. Quanto ao número cromossômico, todas as
espécies apresentaram 2n=30 cromossomos, variando de metacêntricos a submetacêntricos. O padrão de bandas
heterocromáticas reveladas pela cromomicina (CMA) mostrou para M. aegyptia, quatro grandes bandas CMA
positivas (CMA+) nos cromossomos satelitados, envolvendo parte do cromossomo, a RON e todo o satélite,
diferente da espécie M. cissoides que apresentou um par de cromossomos com marcação na constrição secundária
no terminal do braço curto, além de algumas bandas centroméricas menos visíveis em outros pares
cromossômicos. Ipomoea bahiensis apresentou dois pares cromossômicos com bandas CMA+ na região do
satélite, enquanto que a I. hederifolia apresentou seis pares de cromossomos com bandas CMA+ na região
terminal. Nenhuma região heterocromática rica em adenina/timina foi revelada pelo DAPI. A utilização da técnica
CMA/DAPI demonstrou ser promissora no estudo comparativo para a detecção de polimorfismos cariotípicos
entre espécies proximamente relacionadas. Assim, tais observações permitem um melhor entendimento dos
mecanismos de especiação cromossômica das espécies.
APOIO
Universidade Federal Rural de Pernambuco - UFRPE Laboratório de Citogenética Vegetal - LCV
41
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
TRANSLOCAÇÕES NOS CROMOSSOMOS PV1 E PV2 DE PHASEOLUS MACVAUGHII DELGADO
REVELADAS POR BAC-FISH
Maria Eduarda Ferraz Vasconcelos1; Artur Fonseca1; Andrea Pedrosa Harand1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFPE
RESUMO
O gênero Phaseolus L. é conhecido mundialmente por sua importância econômica e estabilidade estrutural e de
número cromossômico (2n = 22). Apesar disso, um pequeno grupo monofilético de três espécies, o grupo
Leptostachyus, apresenta o cariótipo disploide com 2n = 20 e um par cromossômico evidentemente maior. Muitos
rearranjos, incluindo translocações, inversões e uma inserção cêntrica, foram observados na espécie mais derivada
do grupo, Phaseolus leptostachyus Benth, revelando uma alta taxa de evolução cromossômica nessa linhagem. Até
o momento, a análise da espécie mais basal, P. macvaughii, revelou que a inserção cêntrica é um caráter
compartilhado que levou à disploidia. Assim, esse estudo teve como objetivo verificar se P. macvaughii
compartilha com P. leptostachyus os mesmos rearranjos envolvendo os cromossomos Pv1 e Pv2 e entender a
evolução cariotípica do grupo. Para isso, foram realizadas hibridizações in situ fluorescente (FISH) em lâminas
mitóticas de P. macvaughii, usando sondas de 6 cromossomos artificiais de bactérias (BACs) previamente
mapeados nos cromossomos de P. leptostachyus. As sequências selecionadas para o cromossomo 1 de P. vulgaris
hibridizaram colinearmente em P. macvaughii, contrastando com o observado para P. leptostachyus. No entanto,
uma translocação adicional de parte de outro cromossomo para o braço curto do cromossomo 1 parece ter ocorrido
em P. macvaughii, o que alterou a razão de braços em relação a P. vulgaris. O cromossomo 2 de P. macvaughii,
assim como em P. leptostachyus, apresentou perda de sintenia devido a uma translocação. A perda de parte do
braço longo do cromossomo 2 também levou a uma inversão do tamanho dos braços desse cromossomo em P.
macvaughii. Embora a translocação observada para o Pv2, assim como a inserção cêntrica, sejam sinapomorfias do
grupo Leptostachyus, diferentes rearranjos envolvendo o cromossomo Pv1 foram observados nas duas espécies,
indicando a evolução independente desse cromossomo após disploidia.
APOIO
PIBIC, CNPq e UFPE
42
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
VARIABILIDADE CARIOTÍPICA EM NOTHOSCORDUM OSTENII (AMARYLLIDACEAE)
Paz A1; Báez M1; Crosa O2; Souza G1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Citogenética e Evolução Vegetal, Departamento de Botânica, Universidade Federal de
Pernambuco, Brasil.; (2)Laboratório de Genética, Departamento de Biologia Vegetal, Faculdade de Agronomia,
Universidade da República, Uruguai
RESUMO
O gênero Nothoscurdum é formado por ~25 espécies distribuídas no Uruguai, Argentina e sul do Brasil. As
espécies do gênero possuem cromossomos grandes (~20 µm), número básico x = 5 e número cromossômico
monoplóide m = 4, com espécies diploides e poliploides. Entre essas espécies, N. ostenii caracterizam-se por
apresentar flores amarelas, inflorescência em umbela e distribuição geográfica restrita. Assim, o presente trabalho
investigou a variabilidade cariotípica desta espécie por meio da análise de número e morfologia cromossômica e
do número e distribuição de sítios de DNA ribossomal (DNAr) 5S e 45S. Dos nove acessos de N. ostenii
analisados, oito foram diploides apresentando 2n = 10 e um apresentou 2n = 16. Dentre as amostras com 2n = 10
quatro acessos apresentaram fórmula cariotípica 6M+1SM +3A e os demais 6M+4A. O acesso com 2n = 16, é
uma amostra coletada em Maldonado, Uruguai, apresentou dois cromossomos B. A distribuição de sítios de DNAr
foi altamente polimórfica, com sítios de DNAr 5S intersticiais em um par ou dois pares cromossômicos e sítios de
DNAr 45S nos braços curtos dos acrocêntricos, nos acessos com 2n = 10, e/ou na região terminal dos
metacêntricos. Ambos os sítios de DNAr podem ocorrer em cromossomos diferentes ou colocalizados em um
mesmo cromossomo. Essa diversidade permitiu reconhecer individualmente o cariótipo de cada acesso analisado.
Em conjunto, estes dados mostraram a alta variabilidade cariotípica em N. ostenii, gerada possivelmente por
eventos de poliploidia, inversões pericêntricas, amplificação/desamplificação de sítios de DNAr e a presença de
cromossomos B. Esta variação corrobora a diversidade filogenética relatada para essa espécie e sugere a
ocorrência táxons crípticos
APOIO
PROAES-UFPE, FACEPE
43
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
VARIABILIDADE DE HETEROCROMATINA E SÍTIOS DE DNAR EM ZEPHYRANTHES
BRACHYANDRA (BAKER) BACKER (AMARYLLIDACEAE)
Raquel Gonçalves1; Mariana Báez1; Sandra Mendes1; Guillermo Seijo2; Marcelo Guerra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Faculdade de Ciências Exatas e Naturais Agrimensura
RESUMO
O gênero Zephyranthes Herb. compreende ~65 espécies de distribuição Neotropical, a maioria delas ocorrendo no
Brasil. Essas espécies apresentam cromossomos relativamente grandes, geralmente com 2n = 12 ou 24 e com
diferentes tipos de variabilidade cariotípica intraespecífica, inclusive na quantidade de heterocromatina. A maior
quantidade de heterocromatina foi encontrada em Z. brachyandra, uma espécie de reprodução assexuada por
bulbilhos e grande potencial ornamental. Um estudo anterior dessa espécie mostrou 12 bandas DAPI terminais
maiores e muitas bandas menores, além de bandas CMA em 10 cromossomos acrocêntricos do conjunto normal (2
terminais e 8 subterminais) e em um cromossomo B (Felix et al., 2011, Plant Syst Evol, 292: 215). Considerando
que, a maioria das bandas heterocromáticas não parece ter valor adaptativo e não estaria sobre o controle da
seleção natural, espera-se que ao menos algumas dessas bandas apresentem polimorfismo intra-específico.
Visando verificar se esse polimorfismo realmente ocorre, analisamos três indivíduos dessa espécie, coletados no
nordeste da Argentina (Misiones), mesma localidade que o estudo anterior. Os três indivíduos apresentaram 2n =
24, aparentemente sem cromossomos B. As bandas CMA foram restritas a seis ou sete, havendo quatro ou cinco
terminais em cromossomos acrocêntricos e dois intersticiais em um par metacêntrico. Curiosamente, a maioria
dessas não coincidiu com o cariótipo reportado anteriormente. As bandas DAPI foram de dois tipos: ~12 bandas
DAPI maiores, localizadas na região terminal de seis pares metacêntricos, e ~30 banda DAPI menores, localizadas
nas regiões terminais e subterminais em ambos tipos cromossômicos, coincidindo de maneira geral com o
cariótipo já estudado. Diferenças de tamanho da banda são mais difíceis de investigar por conta da condensação
desigual dos cromossomos. Os sítios de DNAr 45S corresponderam às seis ou sete bandas CMA, enquanto os
sítios de DNAr 5S foram numerosos (de 12 a 16) e distribuídos nos metacêntricos, alguns desses com dois pares
de sítios. Sítios de DNAr 5S e 45S foram encontrados colocalizados apenas no par metacêntrico com um sítio de
DNAr 45S intersticial. Esses dados revelam uma variabilidade cariotípica excepcionalmente alta nessa espécie,
sendo necessário um estudo populacional mais extenso para entender os mecanismos responsáveis por essa
diversidade.
APOIO
CNPq
44
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
VARIAÇÃO NO PADRÃO DE BANDAS HETEROCROMÁTICAS POR MEIO DA TÉCNICA
CMA/DAPI EM ESPÉCIES DO GÊNERO CALLIANDRA BENTH. (FABACEAE-MIMOSOIDEAE)
OCORRENTES NO ESTADO DO PIAUÍ.
Antônio de Pádua de Oliveira Paula1; Genialdo Ramos dos Santos1; Reginaldo de Carvalho2.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluno de Doutorado em Botânica - PPGB/UFRPE; (2)Prof. Dr. do Programa de Pós-graduação em Botânica da
UFRPE
RESUMO
O gênero Calliandra Benth. é neotropical possuindo 132 espécies e distribuído em três principais regiões do
continente americano. Uma destas regiões é o nordeste brasileiro, considerada um centro de diversidade, com 56
espécies, dentre estas 20 são encontradas no estado do Piauí. O número básico proposto para o gênero é x=8, com
ocorrência de variação cariotípica entre espécies, atribuída ao evento da disploidia. Neste trabalho, foi realizada
uma análise citogenética comparativa de três espécies e duas variedades de Calliandra ocorrentes no estado do
Piauí por meio da técnica de bandeamento cromossômico com fluorocromos cromomicina A3 (CMA), para
regiões cromossômicas ricas em pares de base guanina e citosina e o 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI), para
localização das regiões ricas em pares de base adenina e timina. As espécies estudadas foram de Calliandra
fernandesii Barneby, C. leptopoda Benth, C. macrocalyx Harms var. aucta Barneby e C. macrocalyx Harms var.
macrocalyx. Como resultados, o número cromossômico foi 2n = 16 para C. leptopoda (14M + 2SM), C.
macrocalyx var. aucta (10M + 6SM) e C. macrocalyx var. macrocalyx (10M + 2SM + 4A). Já para a espécie C.
fernandesii, foi verificada a ocorrência do número tetraploide de 2n = 32 (30M + 2SM), relatada pela primeira vez
no presente trabalho. Em relação ao tamanho dos cromossomos metafásicos, foi observada para C. leptopoda e C.
fernandesii uma média de 2,371 µm e 2,958 µm, respectivamente. Calliandra macrocalyx var. aucta e C.
macrocalyx var. macrocalyx apresentam tamanhos médios de 7,112 µm e 6,734 µm em prometáfases. Com a
utilização do CMA, foram observados polimorfismos interespecíficos de bandas heterocromáticas, com a
ocorrência de bandas em ambos os terminais de dois pares de cromossomos para C. leptopoda, três pares para C.
macrocalyx var. aucta e de quatro pares cromossômicos para C. macrocalyx var. macrocalyx e C. fernandesii.
Tanto a morfometria como a técnica de CMA/DAPI mostraram-se promissoras para a detecção de polimorfismos
cariotípicos entre as espécies estudadas de Calliandra, apontando a citogenética como ferramenta para o
entendimento do componente estrutural cromossômico e dos processos de especiação deste gênero.
45
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética
VIABILIDADE POLÍNICA EM ESPÉCIES SILVESTRES E HÍBRIDOS DE MANIHOT
Ariana Silva Santos1; Genialdo Ramos dos Santos2; Reginaldo de Carvalho3; Marcio Lacerda Lopes Martins4;
Carlos Alberto da Silva Ledo5.
E-mail: [email protected]
(1)
Doutoranda em Genética e Biologia Molecular da Universidade Estadual de Santa Cruz; (2)Doutorando do
Programa de Pós-graduação em Botânica, Universidade federal Rural de Pernambuco; (3)Programa de Pósgraduação em Botânica, Universidade federal Rural de Pernambuco; (4)Universidade Federal do Recôncavo da
Bahia; (5)Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical
RESUMO
O gênero Manihot possui fracas barreiras de isolamento reprodutivo entre suas espécies, facilitando assim a
ocorrência de hibridação interespecífica, podendo ser natural ou artificial. Essas fracas barreiras estão relacionadas
à constituição cariotípica, indicando que um grande número de taxa pode ter surgido a partir de cruzamentos
interespecíficos. No semiárido brasileiro, na Caatinga, existem alguns híbridos naturais, devido à adjeção do
período de floração das populações nessa região. Sendo assim, a partir do endemismo ocorrentes no Nordeste
como para M. reniformis Pohl e Manihot sp. nov., este estudo objetivou avaliar a viabilidade polínica dessas
espécies silvestres, juntamente com um híbrido natural, possivelmente oriundo do cruzamento das espécies
supracitadas. Foram coletados botões florais no Parque Municipal Natural de Mucugê (PMNM)-Projeto Sempre
Viva, localizado na cidade de Mucugê, Chapada Diamantina, Bahia, Brasil. Os botões florais foram fixados em
Carnoy (metanol: ácido acético (3:1)) e as lâminas preparadas pelo método convencional e os grãos de pólen
corados com o corante de Alexander. Foram contabilizados e considerados viáveis os grãos de pólen que
apresentaram coloração avermelhada e inviáveis os de coloração azulada. Analisou-se um total de 60 lâminas,
contendo uma antera por lâmina, sendo 20 lâminas por espécie e para o possível híbrido natural. Foram
observados em média, 5.000 polens por genótipo. Os resultados mostraram os percentuais de polens inviáveis
foram de 5,3% para M. reniformis, 2,3% para Manihot sp. nov e 3,2% nos prováveis híbridos. Como formato das
flores, a época de floração e os polinizadores são semelhantes nas espécies de Manihot, estes resultados ajudam a
compreender o fluxo gênico e hibridizações entre as espécies do gênero confirmando a fraca barreira reprodutiva
entre as espécies.
APOIO
CAPES, FACEPE, CNPq, EMBRAPA
46
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Evolução
SPONDIAS TUBEROSA AND S. BAHIENSIS PLASTOMES AND PHYLOGENETIC ANALYSIS IN
SAPINDALES
Vanessa Emanuelle Pereira Santos1; Cícero Carlos de Souza Almeida1; Karla Emanuella Souza dos Santos1;
Flávia de França Santos1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Alagoas (UFAL)
RESUMO
The aim of this study was to sequence the chloroplast genomes of Spondias tuberosa and S. bahienses using NGS
data and to construct a phylogeny using complete plastid genomes for order Sapindales. Four million Illumina
100nt single end reads were used and mapper using Sapindus mukorossi plastome as a reference for obtaining the
genomes of S. tuberosa and S. bahiensis. For phylogenetic analysis, the complete genomes of Spondias and other
genomes of Sapindales available at NCBI were used to obtain the phylogeny for order. The genomes of S.
tuberosa and S. bahiensis showed 162,036 and 162,218 bp, respectively; 137 genes, 31-30 tRNAs and five rRNA.
The results showed high similarity between S. tuberosa and S. bahiensis genomes and phylogenetic analysis using
complete chloroplast genomes showed similar topology with prior phylogenies for the Sapindales order. In
summary, we have presented here the first complete chloroplast genomes sequence for the Spondias genus, and
that the use of Illumina single end reads is efficient to sequence chloroplast genomes and the phylogenies using
complete chloroplast genomes shows a robust topology for the Sapindales order.
APOIO
CNPq
47
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Evolução
SYAGRUS CORONATA PLASTOMES AND PHYLOGENETIC ANALYSIS IN ARECOIDEAE
(ARECACEAE)
Vanessa Emanuelle Pereira Santos1; Renato Áquila1; Jurema Silva1; Cícero Carlos de Souza Almeida1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Alagoas (UFAL)
RESUMO
The objective of this study was to sequence the plastid genomes of Syagrus coronata using NGS data and to
construct a phylogeny using complete chloroplast genomes for the Arecoideae subfamily. Seventy seven million
Illumina 100nt single end reads were used and mapped using the Cocos nucifera genome as a reference for
obtaining the genome of S. coronata. The complete genome of S. coronata and other genomes of Arecoideae
available at NCBI were used to obtain the phylogeny of Arecoideae. The genome of S. coronata showed 155,053
bp, with IRA having 26,476 bp, IRB 26,647 bp, LSC with 84,410 bp and SSC with 17,520 bp. Ninety genes were
identified, 8 rRNAs, 39 tRNAs and 30 repetitive regions. The results showed Cocos nucifera as the closest relative
and Chamaedorea seifrziii as the most divergent and that phylogenetic analysis using plastid genomes
corroborates prior phylogenies for the Arecoideae subfamily. It follows that the use of Illumina single end reads is
efficient to sequence chloroplast genomes and that phylogenies using complete chloroplast genomes shows a
similar topology when compared with phylogenies using small plastid regions and nuclear genes.
APOIO
CAPES
48
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Evolução
DIVERSIFICAÇÃO RECENTE DO GÊNERO STYLOSANTHES (AUBL.) SW. (LEGUMINOSAE) ESTÁ
RELACIONADA COM FORMAÇÃO DE COMPLEXOS ALOPOLIPLOIDES
Amanda Figueredo1; Gustavo Souza1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Stylosanthes é um gênero pantropical formado por 48 espécies herbáceas, subarbustivas ou arbustivas,
pertencendo na subfamília Papilionoideae (Leguminosae). O gênero apresenta uma taxonomia complexa devido à
similaridade morfológica da maioria das espécies, porém recentemente análises moleculares vem ajudando a
elucidar a sistemática do grupo. Com base em caracteres morfológicos o gênero foi dividido nas seções
Stylosanthes e Styposanthes, cujas relações evolutivas são pouco conhecidas. O número cromossômico básico do
gênero é x = 10, com diploides e alopoliploides naturais, que se relacionam em complexos de difícil delimitação.
O presente trabalho teve como objetivo fazer uma análise filogenética do gênero Stylosanthes baseado em
sequencias plastidiais (trnL-trnF, íntron trnL e matK) e nuclear ITS1-5.8S-ITS2, seguida por uma datação
molecular assumindo um relógio lognormal relaxado. Foram analisadas 126 amostras de 42 espécies abrangendo
as duas seções do gênero e visando discutir o relacionamento nos complexos Scabra, Erecta, Guianensis e
Capitata. A árvore filogenética revelou que o gênero é monofilético, dividido em quatro clados bem suportados,
porém as seções Stylosanthes e Styposanthes não emergiram como grupos monofiléticos. Distintas amostras de S.
hamata e S. mexicana foram posicionadas nos clados 1 e 4, o que pode indicar entidades crípticas possivelmente
relacionadas com a distribuição disjunta dessas espécies. O gênero apresenta origem recente, com as linhagens
mais basais (clados 1 e 4) se diversificando no Mioceno (~ 10 Ma) e os clados mais recentes (2 e 3) com
diversificação no Pleistoceno (~ 5 Ma). Ramos curtos e politomias estariam relacionados à diversificação recente
que pode estar relacionada também com a estabilidade cariotípica do gênero, com a maioria das espécies
apresentando 2n = 20. Essa origem recente é corroborada ainda pelo posicionamento dos representantes dos
complexos S. scabra e S. capitata em diferentes clados, sugerindo que o cruzamento entre espécies de clados
distintos é viável. O padrão de distribuição geográfica das espécies de Stylosanthes não é correlacionado com os
agrupamentos filogenéticos, sugerindo um predomínio de dispersões à longa distância na região Neotropical. Não
foi observada uma relação entre amplitude geográfica e nível de ploidia, com espécies diploides e poliploides
podendo apresentar ampla distribuição.
APOIO
CAPES
49
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Evolução
FLUXO GÊNICO E ESTRUTURA GENÉTICA ESPACIAL EM POPULAÇÕES DE VIROLA
OFFICINALIS NO CORREDOR CENTRAL DA MATA ATLÂNTICA.
Matheus Palma Rocha1; Flora Bittencourt1; Fernanda Gaiotto1; Eduardo Mariano Neto1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual de Santa Cruz
RESUMO
Os fragmentos florestais no sul da Bahia, região inserida no Corredor Central da Mata Atlântica, são "ilhas"
imersas em matriz variegada composta por pasto, monocultura, cabruca, seringal e coqueiral. Informações sobre
fluxo gênico e estrutura genética de espécies arbóreas presentes nestes fragmentos podem ser utilizadas para
prever a viabilidade de estratégias de conservação, uma vez que as consequências do desmatamento para a
variabilidade de populações podem ser irreversíveis. Virola officinalis, uma espécie arbórea endêmica da Mata
Atlântica, foi utilizada como objeto de estudo para avaliar a influência exercida pela quantidade de habitat na
manutenção do fluxo gênico entre populações. Também conhecida como bicuíba, a espécie desenvolve-se em
locais com muita luminosidade e tem sido utilizada em sistemas agroflorestais (SAF). A caracterização da
distribuição espacial dos genótipos dentro das populações foi realizada em 6 populações a partir de 16 locos
microssatélites. A coleta ocorreu de acordo com as categorias de porcentagem de cobertura: 0-20%, 1 população,
41-60%, 3 populações, 61-80%, 1 população e 81-100%, 1 população. Os sítios de coleta foram selecionados em
função da presença da espécie de estudo, acessibilidade e pela porcentagem de cobertura florestal. Através da
utilização de marcadores moleculares co-dominantes (microssatélites) foi possível genotipar as populações
coletadas pelo método de Sanger. As estimativas dos coeficientes de coancestria recente para a detecção da
estrutura genética espacial (EGE) foram baseadas em Louiselle et al (1995). Observou-se que na área com 92% de
cobertura vegetal os indivíduos dentro classe de distância de 100 M apresentaram EGE positiva e significativa, o
que contraria a expectativa de haverem agentes dispersores agindo com maior eficiência em função da maior
complexidade ambiental. Já nas populações inseridas em habitats com 50% de cobertura florestal na paisagem a
classe de distância de 30 M apresentou indivíduos mais aparentados. Pode-se observar que as estimativas
populacionais não refletiram o histórico de degradação da área amostrada. Entretanto, sabe-se que mesmo em
áreas florestadas pode haver a perda (ou a redução da atividade) do agente dispersor o que pode estar
influenciando diretamente na distância de fluxo gênico desta espécie na região.
APOIO
CAPES, UESC
50
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Evolução
INFERÊNCIA FILOGENÉTICA DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO MYB EM PLANTAS
SUPERIORES
Mitalle Karen da Silva Matos1; Danubia Rita de Sá Leal1; Carolline de Jesús Pires1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Os fatores de transcrição (FTs) regulam a expressão espaço-temporal de milhares de genes, garantindo o
desenvolvimento e funcionamento do organismo. A família MYB compreende uma das maiores famílias de FT,
com a prevalência do domínio R2R3-MYB em plantas. Tomados em conjunto, inúmeros trabalhos já identificaram
e caracterizaram essa família em vegetais, porém não houve uma investigação da sua história evolutiva no
contexto filogenético do grupo. Com isso, objetivamos avaliar a relação evolutiva de sequencias MYB em
angiospermas, comparativamente com a sistemática das espécies analisadas. Para isso, foi selecionada uma
proteína MYB do transcriptoma do feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] e utilizada como sonda para a
prospecção de ortólogos na base de dados do NCBI (National Center for Biotechnology Information) por meio de
um BLASTp utilizando o algoritmo PSI-BLAST. Foram selecionadas 32 sequências [nucleotídicas (nt) e proteicas
(aa)] de diferentes espécies com base nos melhores valores de e-value (variando de 0 a 8-143) e score (entre 592 e
412). Tais sequências foram alinhadas utilizando a ferramenta Clustal Ômega e ajustadas manualmente no
programa MEGA 6. As árvores filogenéticas foram construídas usando o método de máxima verossimilhança no
programa RAxML. O alinhamento das proteínas permitiu a identificação de aa característicos do domínio MYB
(triptofano, espaçados em posições regulares), os quais se apresentam como um estado de caráter plesiomórfico
dentro do conjunto de organismos em estudo. Comparando-se a topologia das filogenias geradas, observou-se que
as mesmas não divergiram significativamente para os dois grupos de sequências analisadas (aa e nt), formando
agrupamentos que apontam a história evolutiva dos TFs MYB dentro dos grupos. Os grupamentos refletiam as
relações taxonômicas em níveis de ordens, famílias e/ou gêneros (Fabales, Rosaceae, Asteridae, Malpighiales etc.)
com altos valores de bootstrap. Quando comparadas ambas as filogenias (nt e aa) verificou-se que os valores de
suporte dos nós eram mais fortes quando utilizadas sequências nucleotídicas, possivelmente devido ao maior nível
de polimorfismos presentes. Apesar dos nossos resultados terem sido mais significativos estatisticamente com
sequências nucleotídicas, verificou-se que, mesmo tendo utilizado uma região gênica (a qual é passível de pressão
seletiva) esta família também se mostrou representativa e altamente consistente com os resultados da filogenia das
espécies.
APOIO
Capes, CNPq.
51
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
ACCELERATED GROWTH RATE AND INCREASED DROUGHT STRESS RESILIENCE OF THE
RED RICE COLONIZED BY GLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS PAL5
Nathálya Carvalho Farias1; Bruna Regina dos Santos Silva1; Renata Priscila de Almeida Silva1; Bruna
Cavalcante dos Santos2; Carlos Henrique Salvino Gadêlha Meneses1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual da Paraíba/Programa de Pós-Graduação Ciências Agrárias - UEPB, CEP 58.429-500,
Campina Grande-PB. Brasil; (2)Universidade Estadual da Paraíba/CCBS/Departamento de Biologia - UEPB, CEP
58.429-500, Campina Grande-PB. Brasil
RESUMO
Plant growth-promoting bacteria (PGB) induce positive effects in plants, for instance, increased growth and
reduced abiotic stresses susceptibility. The mechanisms by which these bacteria impact the host plant are
numerous, diverse and often specific. Here, we studied the agronomical, molecular and biochemical effects of the
endophytic PGB Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5 on the full life cycle of red rice (Oryza sativa L.). We
evaluated growth variables (leaf area and biomass), biochemical variables (photosynthetic pigments, proline and
MDA) and production variables (dry matter of 1000 grains and total mass production). Inoculation of red
rice with G. diazotrophicus PAL5 increased root and shoot weights, accelerated growth rate and seed yield as
compared to control plants. G. diazotrophicus PAL5 efficiently colonized the plant and was recovered from roots,
stems and blades, indicating that the bacterium is able to migrate, spread systemically inside the plant, establish
itself in the aerial plant tissues and organs. Inoculation red rice seedlings and mature plants exposed to acute and
chronic drought stress minimized the phenotypic effect of drought compared to plants not harbouring the
bacterium. Protection from the inhibitory effects of drought by the bacterium was linked to up regulation of the
drought-response gene, DREB2B-like. Additionally, total soluble sugars contents increased in stressed inoculated
plants, a biochemical indication of drought tolerance. In conclusion, we show a single inoculation of red rice with
a PGB affected the whole growth cycle of the plant, accelerating its growth rates, shortening its vegetative period,
and alleviating drought stress effects.
APOIO
CNPq Universal - MCTI n°483547/2013-1 and UEPB
52
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
AMPLIFICAÇÃO DE DEFENSINAS EM CNIDOSCULOS QUERCIFOLIUS POHL A PARTIR DA
TRANSFERIBILIDADE DE PRIMERS DE OUTRAS EUFORBIÁCEAS
Gisela Formiga Queiroz Nóbrega1; João Pacífico Bezerra Neto2; Valesca Pandolfi2; José Ribamar Costa
Ferreira Neto2; Rodrigo César Gonçalves Oliveira2; Ederson Akio Kido2; Ana Maria Benko Iseppon2; Carlos
Eduardo Alves Soares3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Campina Grande (UFCG), Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Programa de Pós
Graduação em Ciências Florestais, Patos, PB; (2)Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Centro de Ciências
Biológicas, Departamento de Genética, Recife, PE.; (3)Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA),
Departamento de Ciências Animais (DCAN), Mossoró, RN.
RESUMO
Defensinas vegetais são pequenos peptídeos antimicrobianos ricos em cisteínas que exercem um papel
fundamental na imunidade inata das plantas, agindo na proteção contra agentes patogênicos. Além disso, a
produção de defensinas também é induzida em resposta a estresses abióticos, tais como seca. Apresentam assim,
potencial biotecnológico para produção de transgênicos com maior resistência a doenças fúngicas, podendo ainda
ser utilizados na obtenção de novos fármacos. A faveleira (Cnidoscolus quercifolius Pohl) é uma euforbiácea
nativa, bastante explorada devido ao uso de seus tecidos para fins medicinais, apresentando bom potencial
antibacteriano contra Staphylococcus. Dada a importância das defensinas vegetais, bem como a existência de
componentes químicos ativos de atividade antimicrobiana em faveleira, esse trabalho teve como objetivo
identificar e isolar genes codificantes para defensinas no genoma da faveleira a partir de primers desenhados para
espécies relacionadas. Os primers utilizados para realização da PCR foram desenhados com base em sequencias
existentes no genoma de Jatropha curcas, Manihot esculenta e Ricinus communis. Os mesmos foram testados em
suas espécies de origem e obtiveram maior especificidade de amplificação entre 60ºC a 62ºC. Os primers foram
testados no genoma de C. quercifolius, porém não obtiveram resultados nas temperaturas sugeridas, sendo
necessária a realização de PCR gradiente para definir a temperatura de amplificação de cada par de primer para as
reações com o DNA de faveleira. Além das temperaturas, outras adaptações como diminuição da concentração de
primers e adição de BSA na reação foram realizadas para otimização da reação. Dos 12 primers testados (4 de J.
curcas, 5 de M. esculenta e 3 R. communis), seis apresentaram resultados de amplificação (1 de J. curcas, 1 de M.
esculenta e 3 R. communis), obtendo produtos entre 600 e 1.100 pb, muito próximos do esperado. A
transferabilidade foi eficiente para a obtenção de defensinas no genoma da faveleira, o que corrobora com o nível
de conservação predito para estes peptídeos. Mesmo se tratando de espécies de gêneros distintos, estes foram
agrupados filogeneticamente em nível de família. Os resultados alcançados neste estudo são de grande
importância, já que a espécie estudada não possui qualquer informação disponível em bancos de dados públicos a
cerca de seu genoma
APOIO
CAPES, CNPq, FACEPE
53
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
AMPLIFICAÇÃO HETERÓLOGA DE PRIMERS MICROSSATÉLITES NUCLEARES PARA O
COMPLEXO HOHENBERGIA RIDLEYI (BAKER) MEZ (BROMELIACEAE)
Jéssica Figueredo Campos de Jesus1; Rodrigo César Gonçalves de Oliveira2; Ana Maria Benko Iseppon2.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós Graduação em Ciências Biológicas, Centro de Biociências, Universidade Federal de
Pernambuco (UFPE), Recife, PE, Brasil.; (2)Centro de Ciências Biológicas, Laboratório de Genética e
Biotecnologia Vegetal, Departamento de Genética, UFPE, Recife, PE, Brasil.
RESUMO
O complexo Hohenbergia ridleyi, composto por morfologias H. ramageana e H. ridleyi, apresenta distribuição
longitudinal na Floresta Atlântica e coocorrência na região tipo das espécies no estado de Pernambuco, onde estão
presentes tanto em brejos de altitude como em Floresta Atlântica costeira. Avaliar a estrutura genética de
populações espacialmente isoladas possibilita ampliar o entendimento acerca do padrão de distribuição das
espécies e dos processos microevolutivos que moldaram essas populações, o que auxilia em atitudes de manejo
para conservação dos ambientes naturais. Para tais tipos de estudos, marcadores microssatélites têm sido utilizados
com sucesso e seu custo de aplicação bastante reduzido quando é realizada a amplificação heteróloga de
marcadores desenvolvidos para espécies próximas. O presente trabalho teve como objetivo testar a amplificação
heteróloga de dez primers de natureza nuclear desenvolvidos para as espécies de Bromeliaceae, Ananas comosus e
Orthophytum ophiuroides, em populações do complexo H. ridleyi. Do total de primers, cinco foram previamente
desenvolvidos para Ananas comosus (Acom12.12, Acom22.22, Acom64.22, Acom71.3, Acom91.2) e cinco para
Orthophytum ophiuroides (OP17, OP28, OP69, OP93, OP30). Os testes foram realizados através da amplificação
por PCRs em oito populações do complexo. A visualização dos resultados foi realizada a partir de géis de
poliacrilamida 6% com coloração por nitrato de prata. Dos dez primers testados, cinco mostraram um produto e
apenas quatro revelaram polimorfismos, todos de A. comosus (Acom22.22, Acom64.22, Acom71.3). As
amplificações geraram em média quatro alelos por primer, sendo eficientes para estudos populacionais. Os
primers de O. ophiuroides não foram transferíveis. Esses resultados mostram o grande potencial da aplicação
desses marcadores codominantes para estudos evolutivos com o complexo H. ridleyi que podem auxiliar no
desenvolvimento de ações de conservação para as espécies no futuro.
APOIO
FACEPE, CNPq
54
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
ANÁLISE IN SÍLICO DA HOMOLOGIA DO GENE SERK EM GOSSYPIUM HIRSUTUM L. E
ESPÉCIES CORRELATAS
Taiza da Cunha Soares1; Liziane Maria de Lima2; Carliane Rebeca Coelho da Silva1; Igor Luiz Vieira de Lima
Santos3; Julita Maria Frota Chagas Carvalho2; Péricles de Albuquerque Melo Filho4; Roseane Cavalcanti dos
Santos2.
E-mail: [email protected]
(1)
RENORBIO/ UFRPE; (2)Embrapa Algodão; (3)UFCG; (4)UFRPE
RESUMO
As técnicas de transgenia tem oferecido grande versatilidade ao melhoramento do algodoeiro em função da
possibilidade de introduzir transgenes exógenos, mantendo as propriedades agronômicas das cultivares geradas.
Entretanto, dependendo do método de transformação utilizado, a limitação desse processo reside na necessidade
do uso de protocolos de regeneração in vitro via embriogênese somática, uma vez que algumas espécies vegetais
são altamente recalcitrantes, como é o caso do algodoeiro, o que dificulta o progresso da seleção e o tempo de
identificação do transgene. Estudos prévios tem demonstrado que o gene SERK (Somatic Embryogenesis Receptor
Kinase) está relacionado com a aquisição de competência embriogênica, porém há limitação de informações sobre
sua atuação e conservação entre diferentes espécies. Pesquisas relacionadas ao conhecimento desse gene podem
contribuir para identificar acessos livre de recalcitrância, de modo a favorecer as práticas de regeneração. Nesse
trabalho procedeu-se a uma análise in silico buscando homologia do SERK entre acessos de G. hirsutum L. e
outras espécies relacionadas, com sequências depositadas em banco de genes (www.ncbi.nlm.nih.gov). As
espécies selecionadas foram: G. hirsutum, Theobroma cacao, Citrus sinensis, Vitis vinifera, Glycine max e
Phaseolus vulgaris. Sequências completas do gene (mRNA) foram alinhadas por meio do programa ClustalX
(http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2) para estimativa da similaridade gênica. A seguir, procedeu-se análise
da proteína codificante pela ferramenta Blastx, do NCBI. Verificou-se que o gene SERK1 possui poucas regiões
conservadas entre as espécies, contudo, foi observada homologia entre as sequências de G. hirsutum e Theobroma
cacao com maior identidade na ordem de 86% e bit-score 681. Essa mesma relação (93%) foi observada entre as
sequências de Phaseolus vulgaris e Glycine max com bit-score no valor de 1036, o que é esperado por se tratar de
duas leguminosas, hermafroditas e cleistogâmicas. A espécie mais distante evolutivamente entre as demais foi a
Vitis vinífera. Baseando-se na análise dos aminoácidos, verificou-se alto grau de conservação dos principais
domínios catalíticos. A proteína SERK possui domínio catalítico da serina/ treonina-kinase e pertence a uma
subfamília envolvida em várias vias de sinalização, entre elas a restrição de proliferação de células em início de
diferenciação.
APOIO
Embrapa Algodão, Capes.
55
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
ANÁLISE DE EST-SSR DE SACCHARUM SPP. E TRANSFERIBILIDADE DE MARCADORES PARA
PENNISETUM PURPUREUM SCHUM
Rahisa Helena da Silva1; Manassés Daniel da Silva2; Kássia Regina da Silva Carneiro3; Jorge Luís Bandeira da
Silva Filho4; Éderson Akio Kido5.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluna de Graduação em Bacharelado em Ciências Biológicas. [email protected]; (2)Aluno de Doutorado
do PPGG - UFPE; (3)Aluna de Graduação em Bacharelado em Ciências Biológicas.; (4)Aluno de Graduação em
Bacharelado em Ciências Biológicas.; (5)Profº. UFPE. Departamento de Genética - CCB - UFPE - Laboratório de
Genética Molecular. [email protected]
RESUMO
Marcadores moleculares são utilizados para estimar variabilidade genética. Dentre os marcadores moleculares, os
denominados SSR [(microssatélites, constituídos de pequenos motivos (1 a 6 nucleotídeos)], em tandem, são os
mais utilizados devido sua natureza codominante e ampla distribuição nos genomas. A cana-de-açúcar (Saccharum
spp.), família Poaceae, é uma cultura de grande importância econômica, enquanto que o capim-elefante
(Pennisetum purpureum Schum), de mesma família, possui potencial forrageiro, porém, quase não dispõe de
informação na base de dados do NCBI, diferente de Saccharum spp., possuindo grande quantidade, especialmente
ESTs (Expressed Sequence Tag). Assim, o presente trabalho objetivou avaliar a disposição de motivos SSR em
ESTs de Saccharum spp. e verificar a transferibilidade destes marcadores entre estas espécies. Para tanto, as ESTs
foram submetidas ao software (TRA) para detecção dos motivos SSR perfeitos de di tri, tetra, penta e
hexaméricos, com número mínimo de repetições de 9, 6, 5, 5 e 4, respectivamente. A análise in silico de 285.216
ESTs de Saccharum spp detectou 8.703 motivos SSRs em 8.337 ESTs, representando 2,9% das ESTs. Uma
abundância de motivos de triméricos foi observada, estando presentes em 5.512 ESTs (63,3% das ESTs com
motivos SSR), seguidos dos motivos diméricos presentes em 1.199 ESTs (13,8%) e dos hexaméricos, presentes
em 1.086 ESTs (12,5%). Por outro lado, os motivos tetra e pentaméricos foram os menos representados, com 496
(5,7%) e 397 ESTs (4,6%), respectivamente. A abundância de motivos tri e diméricos em ESTs de Saccharum spp.
já foi documentada na literatura. Posteriormente, foram propostos 120 pares de primers através da ferramenta
Primer3, destes, 18 foram sintetizados e testados via PCR com DNAs genômicos, extraídos de folhas dos acessos
das duas culturas. As reações ocorreram em volume total de 20 μL [20 ng de DNA genômico, 1x PCR buffer, 1,5
mM de MgCl2, 100 μM de dNTPs, 0,15 μM de cada primer e 0,5 U de Taq DNA polimerase]. Ao final das
reações, os fragmentos amplificados foram separados em gel de agarose 1,5% (p/v), em eletroforese. Dentre os 18
primers testados, 17 amplificaram bandas sendo um específico para cana-de-açúcar e 16 transferíveis para capimelefante, sendo 13 polimórficos. O sucesso da transferibilidade é fruto da sintenia entre os genomas das espécies, e
pelo fato de serem SSRs baseados em ESTs, amostrando regiões transcritas, sendo esperada maior taxa de
conservação no genoma
APOIO
CAPES e CNPq
56
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
AVALIAÇÃO DA PLASTICIDADE FENOTÍPICA DE LEMNA AEQUINOCTIALIS (L.) PARA
FITORREMEDIAÇÃO E PRODUÇÃO DE BIOENERGIA
Adauto Gomes Barbosa Neto1; Marciana Bizerra de Morais1; Tercilio Calsa Junior1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, CB, Universidade Federal de
Pernambuco, Recife-PE
RESUMO
Lemna aequinoctialis é membro da família botânica Lemnaceae, composta por macrófitas aquáticas, são
consideradas as menores angiospermas do mundo. Popularmente conhecidas como lentilhas-d'água ou duckweed,
em inglês, têm despertado interesse biotecnológico no tratamento de efluentes e para bioenergia. Sua diversidade
genética pode influenciar potenciais aplicações. Neste contexto, nove clones de Lemna aequinoctialis foram
fenotipicamente caracterizados in vitro usando meio de cultura SH 1X e 0,5X, a 25±2°C, 16/8 h luz/escuro e
intensidade luminosa de 50 µmol.m-2.s-1. A taxa de crescimento, rendimento em biomassa, teor de amido,
pigmentos fotossintetizantes e a atividade das enzimas antioxidativas SOD, APX e CAT dos clones foram
avaliadas para cada um dos meios de cultivo. Os dados foram obtidos a partir de triplicatas e estatisticamente
analisados por ANOVA e teste de Tukey a 5% de probabilidade, e posteriormente por análise de componente
principal (PCA). Foram selecionados três clones para bioensaio de fitorremediação de efluente de estação de
tratamento de esgoto. Previamente identificados pela região intergênica plastidial atpF-atpH, os clones de Lemna
aequinoctialis apresentaram baixa diversidade genética. Contudo, o estímulo ambiental promovido pelo cultivo em
SH 0.5X comparado ao SH 1X induziu diferenciação fenotípica dos clones, sendo agrupados distintamente da
análise de Neighbor-Joining baseada na distância genética de sequências atpF-atpH. Os clones M2, RC e DI
apresentaram maior resposta para taxa de crescimento, produção de biomassa e acúmulo de amido. No efluente,
estes clones foram capazes de reduzir a DQO de 85,5% para 94,8%, de remover entre 36,3% e 39,3% do
nitrogênio total, e entre 37,8% e 57,1% do fósforo total, produzindo elevada quantidade de biomassa. Os
resultados mostraram que a plasticidade fenotípica de Lemnaceae cultivadas in vitro pode contribuir para seleção
de genótipos candidatos para utilização em aplicações biotecnológicas de tratamento complementar de efluente e
produção de biomassa e bioenergia.
APOIO
CAPES, CNPq, INCT Bioetanol, FACEPE, Lógica Ambiental
57
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
AVALIAÇÃO DAS CONDIÇÕES DE PRESERVAÇÃO DE GOSSYPIUM MUSTELINUM QUANTO À
EFICIÊNCIA DE ISOLAMENTO DE DNA
Ana Kelly dos Santos Maia1; Allison Vieira da Silva1; Danielson Ramos Ribeiro1; Iêda Ferreira de Oliveira1;
Edson Ferreira da Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Agronomia/UFRPE
RESUMO
Gossypium mustelinum é uma espécie silvestre, endêmica da região Nordeste do Brasil, que apresenta potencial
exploração de seus recursos genéticos, voltados ao melhoramento do algodão cultivado. A determinação das
melhores condições de coleta e de preservação de materiais vegetais é fundamental para o sucesso da extração de
seu DNA. Usualmente, obtém-se DNA de melhor qualidade quando esse método utiliza amostras de tecido fresco.
Porém, para a maioria das espécies silvestres, essa condição torna-se inviável, pois a coleta é realizada in situ, em
locais de difícil acesso. O objetivo desse trabalho foi avaliar três diferentes métodos de conservação
(congelamento a -20ºC, desidratação em sílica e imersão em solução saturada de NaCl/CTAB) de amostras de G.
mustelinum quanto à sua eficiência no isolamento de DNA. Para isso, folhas jovens e sadias de dois diferentes
acessos dessa espécie, provenientes de um banco de germoplasma localizado no Departamento de Agronomia, da
Universidade Federal Rural de Pernambuco, foram coletadas e armazenadas sob as condições descritas acima. A
metodologia de extração de DNA que utiliza o detergente CTAB 2% foi adotada, e cada amostra foi processada
em duplicata. O tratamento comparativo consistiu no emprego de amostras frescas, maceradas diretamente no
tampão de extração. Amostras processadas em nitrogênio líquido também foram testadas. A eletroforese em gel de
agarose revelou a presença de bandas nítidas e íntegras, com rendimentos entre 200-700 ng DNA / g folha, além
da ausência de bandas para alguns tratamentos. Os melhores resultados foram observados nas amostras congeladas
ou conservadas em sílica, sendo, portanto, os métodos recomendados para obtenção de material genético a ser
usado em estudos moleculares de G. mustelinum. As amostras frescas não mostraram reprodutibilidade para o
método de extração utilizado. G. mustelinum é uma espécie rica em compostos fenólicos, que mostra fácil
oxidação. É possível que os tratamentos por congelamento ou desidratação tenham provocado a inativação das
suas oxidases. O presente estudo corrobora a importância de avaliar diferentes métodos de conservação de tecidos
vegetais antes de proceder com a coleta dos materiais para fins moleculares.
APOIO
CNPq
58
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
AVALIAÇÃO DE DIFERENTES MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE RNA TOTAL EM FOLHAS DE VITIS
VINIFERA INFECTADAS POR XANTHOMONAS CAMPESTRIS
Jéssica Barboza da Silva1; Roberta Lane de Oliveira Silva1; José Ribamar Costa Ferreira Neto1; Flávia Tadeu de
Araújo1; Valesca Pandolfi1; Andreia Cristiny Cezarino de Araújo1; Ayug Bezerra Lemos1; Mireli de Santana
Rêgo1; Marianne Firmino de Oliveira1; Natoniel Franklin de Melo2; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Laboratório de Genética e Biotecnologia
Vegetal, Recife, PE; (2)Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária - Embrapa Semiárido, Laboratório de
Biotecnologia e Citogenética Vegetal, Petrolina, PE
RESUMO
A Vitis vinifera L. é uma trepadeira lenhosa e de porte arbustivo, sendo a principal representante da família
Vitaceae. Essa espécie possui grande importância econômica no Brasil, principalmente nas regiões Sul, Sudeste e
Nordeste, uma vez que seus frutos servem como matéria prima para fabricação de sucos, vinhos e consumo in
natura, entre outros. Porém, a cultura da videira vem apresentando perdas em sua produtividade desencadeadas
pela ação de patógenos como a bactéria Xanthomonas campestres pv. viticola, causadora do cancro bacteriano.
Diante do exposto, este trabalho objetivou testar diferentes protocolos de extração de RNA para tecidos foliares de
videira infectadas por X. campestres e identificar o mais eficiente para o tecido avaliado. Para isso, clones das
cultivares IAC-572 e Redglobe (consideradas resistente e susceptível à X. campestres pv. viticola,
respectivamente), foram cultivadas em telado sob condições controladas. Após 30 dias de cultivo as plantas foram
inoculadas injetando a suspensão bacteriana de dois isolados distintos quanto à agressividade da infecção
desencadeada. Após 24 e 48 horas de inoculação, as amostras foram coletadas e armazenadas em freezer -80º C. A
extração de RNA total foi realizada utilizando aproximadamente 100 mg de tecido foliar a partir de seis métodos
distintos: CTAB-Acetato de Amônio (1), CTAB-LiCl (2), Trizol (3), Trizol-Fenol (4), SV Total RNA Isolation
System - Promega (5) e RNeasy Plant Mini kit - Qiagen (6). Para todos os protocolos testados foram realizadas
pequenas modificações, exceto para o protocolo 3 que seguiu as recomendações do fabricante. A integridade das
amostras foi verificada em gel de agarose (1,5 %). Observou-se que os métodos 1, 2 e 5 foram os mais eficientes,
sendo possível visualizar as duas bandas de RNA ribossomal (28S e 18S). No entanto, no método 2 foi verificado
um rastro no gel, sugerindo uma possível degradação das amostras provavelmente ocasionada pela ação de
RNAses durante o processo de extração. Nos demais protocolos não foram visualizadas bandas, indicando que
nenhum RNA foi extraído. Esse resultado pode estar associado ao fato do tecido foliar de videira apresentar altos
níveis de compostos fenólicos, conferindo uma maior dificuldade para obtenção de amostras de RNA de boa
qualidade. Portanto, conclui-se que a seleção de um método de extração de RNA adequado é um passo
fundamental para garantir sucesso em estudos de expressão gênica via PCR em tempo real.
APOIO
CNPq; CAPES; Facepe.
59
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
AVALIAÇÃO DE PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE DNA EM ACESSOS DE PEQUI DO PARQUE
NACIONAL DE SETE CIDADES-PI
Samara de Brito Vieira1; Giovana Sarah Sales Batista2; Sérgio Emílio dos Santos Valente3; Jarbson Henrique
Oliveira Silva1; Davi Alvarenga Lima1; Jailson do Nascimento Silva1; Bárbara Leitão Braga1; Gisele Holanda de
Sá4; Paulo Sarmanho da Costa Lima5.
E-mail: [email protected]
(1)
Discente do Curso de Graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí-UFPI;
Licenciada do Curso de Graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí-UFPI;
(3)
Professor Associado II do Depertamento de Biologia da Universidade Federal do Piauí-UFPI; (4)Mestranda do
Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento Vegetal da UFPI; (5)Pesquisador da Empresa Brasileira
de Pesquisa Agropecuária ( Embrapa Meio- Norte)
(2)
RESUMO
Introdução Uma das espécies de maior distribuição no cerrado é o pequi (Caryocar brasiliense), uma planta
utilizada na indústria artesanal e na culinária regional, além de apresentar potencial para a produção de
combustíveis e lubrificantes. Devido a sua importância, se torna necessário o estudo da diversidade genética que
pode auxiliar na preservação da espécie. Uma importante ferramenta no estudo da diversidade genética é a
utilização de marcadores moleculares e o primeiro passo seria a obtenção de um DNA puro e em quantidade
suficiente para análise. O presente trabalho teve por objetivo avaliar protocolos de extração de DNA em pequi
utilizando marcadores moleculares do tipo RAPD ("Random Amplified Polymorphic DNA") para comprovar a
eficiência de cada protocolo testado. Materiais e métodos Foram coletadas amostras de quatro indivíduos de
planta de pequi do Parque Nacional de Sete Cidades ( PNSC). As amostras foram conservadas em solução de
CTAB e NaCl segundo o protocolo de Rogstad (1992). Para a extração de DNA, ultilizou-se três protocolos :
Khanuja et al.(1999), Clarck et al. (1989) e Doyle & Doyle (1987) modificado por Faleiro et al. (2002). O
DNA extraído foi quantificado com auxilio de um NanoDrop® 2000. Na eletroforese em gel de agarose,
verificou-se a qualidade do DNA extraído e selecionou-se as melhores amostras a serem utilizadas em reações
RAPD. Utilizou-se 04 primers de RAPD desenvolvidos pela Operon Technologies ( OPD-01, OPD-03, OPD-08 e
OPE-14). Resultados e Discussões Após a quantificação em Nanodrop, utilizou-se seis amostras que
apresentavam os valores mais próximos do padrão de pureza (razões A260/280 e A260/230). Com a amplificação
por meio do primer OPE-14 foram geradas bandas de boa resolução nas amostras obtidas por meio do protocolo
de Romano & Brasileiro (1999), indicando que a quantidade e a qualidade do DNA extraído foram adequadas para
amplificar o DNA por meio da PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). No entanto, os demais primers não
amplificaram o DNA, o que pode ser explicado por não possuirem uma sequência de DNA complementar às
amostras de DNA utilizadas. Conclusão Com os resultados obtidos, foi possível determinar que o protocolo de
Khanuja et al.(1999) foi o mais eficiente, sendo passível de utilização para futuros estudos molecular com plantas
de pequi.
APOIO
Pibic/ CNPq
60
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE FABACEAE DE INTERESSE MEDICINAL POR MÉTODO
DE PCR-RFLP DO GENE TRNK
Alice Conceição Moraes Florêncio1; Rodrigo Juan Martins Cardozo1; Bruna Corina Silva de Lima1; Lívia Maria
Vilabela2; Ana Maria Benko Iseppon2; Cláudia Sampaio de Andrade Lima1; Ricardo Yara3; Ricardo Yara1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biofísica Química - Departamento de Biofísica - UFPE; (2)Laboratório de Genética e
Biotecnologia Vegetal - UFPE; (3)Laboratório de Engenharia Biomédica - Departamento de Engenharia Biomédica
- UFPE
RESUMO
A família Fabaceae é considerada a terceira maior entre as famílias botânicas e apresenta uma importância social e
econômica. É utilizada com diversas finalidades, desde alimentação humana e animal à utilização
etnofarmacológica. Um dos maiores desafios para prescrição médica dos fitoterápicos é a ausência de controle de
qualidade que assegure a identidade das espécies presentes no fitomedicamento. Essa identificação pode ser
realizada através de ferramentas moleculares, que garantem a presença da espécie botânica no fitoterápico. Este
trabalho teve como objetivo identificar e analisar o perfil eletroforético de plantas pertencentes à família Fabaceae
com utilização medicinal através do método PCR-RFLP. Foram escolhidas quatro espécies de leguminosas Amburana (Amburana cearensis), com atividade ansiolítica e anti-inflamatória; Angico (Anadenanthera
colubrina), anti-inflamatório; Carrapicho (Desmodium incanum), adstringente e antibacteriano; Mulungu
(Erythrina mulungu), ansiolítico e analgésico - de folhas e cascas de áreas onde ocorre a coleta para a produção de
fitoterápicos. Na etapa inicial do processo, as plantas foram pesadas e trituradas para a extração do DNA, seguindo
o protocolo de Doyle & Doyle (1987). A presença de DNA foi confirmada por meio de eletroforese. Em seguida,
foi realizada a amplificação do gene trnK por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), utilizando os
iniciadores específicos para a família, o trnK-685F e trnK-2R. O produto da PCR foi verificado e clivado com as
enzimas de restrição TaqI e HaeIII e analisados em gel de agarose a 1%. As enzimas TaqI e HaeIII apresentaram
perfis diferentes para as quatro espécies. Para a enzima TaqI, as quatro plantas obtiveram padrões diferentes. Com
a clivagem pela enzima HaeIII, foi possível obter padrões únicos para A. colubrina e D. incanum. Por outro
lado, A. cearenses e E. mulungu não apresentaram sítio de clivagem para essa enzima, não se diferenciando. Este
estudo preliminar indica que apenas a utilização da enzima TaqI em produtos de PCR do gene trnK é suficiente
para diferenciar as quatro espécies analisadas.
APOIO
SUDENE
61
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
DESENHO E VALIDAÇÃO DE PRIMERS PARA AMPLIFICAÇÃO DE DEFENSINAS EM
CUCURBITACEAE
Roberta Lane de Oliveira Silva1; José Diogo Cavalcanti Ferreira1; Luís Carlos Belarmino1; Ana Maria Benko
Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Laboratório de Genética e Biotecnologia
Vegetal, Recife, PE.
RESUMO
As defensinas vegetais são peptídeos antimicrobianos caracterizados por possuírem 45 a 54 aminoácidos, oito
resíduos de cisteína que formam quatro pontes dissulfídicas e originam o domínio gama-tionina. Estes peptídeos
estão relacionados com a defesa vegetal, tendo elevado potencial antifúngico, antibacteriano e inseticida. Com a
utilização em larga escala de defensivos agrícolas visando reduzir o ataque de patógenos, ocorre a seleção de
organismos resistentes, determinando o uso de uma quantidade maior de agrotóxicos para obter tais efeitos. Diante
desta situação, a obtenção de novas armas de defesa, como as defensinas, torna-se fundamental para o
desenvolvimento de compostos antimicrobianos para aplicações biotecnológicas. O presente estudo objetivou
desenhar e validar primers que amplifiquem genes codificantes de defensinas em Cucumis melo L. O gene que
codifica a provável defensina foi selecionado a partir de sequências do transcriptoma da semente do melão-de-sãocaetano (Momordica charantia) depositadas no banco de dados Sequence Read Archive (SRA). As defensinas
foram mineradas no programa HMMer a partir do cDNA de M. charantia, sendo obtidas cinco sequências
contendo domínio completo e peptídeo sinal. Os primers foram desenhados no programa Primer3 de acordo com
parâmetros default, com algumas modificações. Em seguida, foram alinhados contra o genoma de C. melo para
confirmar a anotação in silico. As amplificações foram realizadas conforme descrito na literatura, com temperatura
de anelamento (TA) entre 58° e 62° C, utilizando o DNA genômico do melão. Dos 25 pares de primers
desenvolvidos, 13 (52 %) amplificaram em fragmentos de tamanho esperado, sendo sete com fragmentos únicos
cujos tamanhos foram idênticos aos obtidos pela análise in silico (todos com TA de 62° C) e seis apresentando
várias bandas sobrepostas além da banda de interesse. Com relação aos demais (12), oito pares não exibiram
amplificação e quatro amplificaram fragmentos inespecíficos de diferentes tamanhos. A utilização de defensinas
em processos de transformação genética envolvendo resistência a fitopatógenos já têm sido relatada na literatura
em diversas culturas, no entanto, não foi encontrada nenhuma defensina relatada em curcubitáceas para essa
finalidade. Portanto, os resultados obtidos podem contribuir para a compreensão dos mecanismos de defesa dos
vegetais, assim como para a identificação de defensinas em C. melo e confirmação da sua conservação em
curcubitáceas.
APOIO
CNPq; Capes; Facepe.
62
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
DEVELOPMENT OF MICROSATELLITE MARKERS FOR GENETIC DIVERSITY ANALYSIS OF
CAMPOMANESIA ADAMANTIUM (CAMBESS) O. BERG (MYRTACEAE)
Bruno do Amaral Crispim1; Thamiris Gatti Déo2; Adrielle Ayumi de Devasconcelos2; Juliana dos Santos
Fernandes2; Thiago de Oliveira Carnevali2; Maria do Carmo Vieira3; Alexeia Barufatti Grisolia2.
E-mail: [email protected]
(1)
Faculdade de Ciências Exatas e Tecnologias - Universidade Federal da Grande Dourados/Dourados-MS;
Faculdade de Ciências Biológicas e Ambientais - Universidade Federal da Grande Dourados/Dourados-MS;
(3)
Faculdade de Ciências Agrárias - Universidade Federal da Grande Dourados/Dourados-MS
(2)
RESUMO
Campomanesia adamantium O. Berg (Myrtaceae), known as guavira or gabiroba, is an endemic plant of the
Cerrado biome. This species has significant economic potential due to the use of its fruits in the culinary and its
medicinal properties. Population structure of this plant still has not been studied due to the lack of hypervariable
molecular markers. Therefore, we constructed a microsatellite-enriched genomic library and designed 41 primer
pairs for single sequence repeats loci (SSR), of which 36 were successfully amplified and polymorphic. The
number of alleles ranged from two to eight, with an average of 4.73 alleles per locus. The observed (Ho) and
expected heterozygosities (He) values ranged from 0.09 to 1.00 and 0.09 to 0.85 respectively. The polymorphic
information content (PIC) values ranged from 0.08 to 0.78, with an average of 0.56 showing high levels of
polymorphism. All loci showed no significant deviation from HWE. In conclusion, we developed the first set of
microsatellite markers for C. adamantium that will be useful to estimate genetic diversity parameters and
population structure. In addition, these markers can be a valuable tool for efficient management strategies in
natural environments, mapping studies and breeding programs.
APOIO
We thank Fundação de Apoio ao Desenvolvimento do Ensino, Ciência e Tecnologia do Estado de Mato Grosso do
Sul (FUNDECT), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), and Coordenação de
Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) for the financial support.
63
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
DIVERGÊNCIA GENÉTICA ENTRE ACESSOS DE J.CURCAS CONTRASTANTES AO ESTRESSE
SALINO
Jorge Luís Bandeira da Silva Filho1; Rahisa Helena da Silva1; George André de Lima Cabral2; Marislane
Carvalho Paz de Souza3; Ederson Akio Kido4.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluno de Graduação em Bacharelado em Ciências Biológicas. [email protected]; (2)Doutorando - Rede
Nordeste de Biotecnologia - Renorbio. [email protected]; (3)Doutoranda - Rede Nordeste de Biotecnologia Renorbio. [email protected]; (4)Profº. UFPE. Departamento de Genética - CCB - UFPE - Laboratório
de Genética Molecular. [email protected]
RESUMO
Jatropha curcas é uma espécie da família das euforbiáceas. É uma planta oleaginosa perene, promissora para
produção de biodiesel. O estudo da variabilidade genética de diferentes acessos pode auxiliar os programas de
melhoramento a explorar essa variabilidade de maneira adequada. A variabilidade genética pode ser estimada a
partir de marcadores moleculares. Aqueles do tipo SSR (Simple Sequence Repeats) são bem informativos, por
serem multialélicos e de ampla distribuição. Tais marcadores são desenvolvidos a partir de motivos repetidos em
tandem. Este estudo objetivou verificar a variabilidade genética de nove acessos, sendo sete do banco de
germoplasma da EMBRAPA (dentre os vinte mais produtivos) e dois considerados contrastantes [tolerante 183
(Jaíba, MG) e sensível 171 (Alagoas)] ao estresse salino (150 mM de NaCl), e que foram selecionados para estudo
de transcriptômica (RNA-seq), visando identificar genes tolerantes. ESTs de J. curcas contendo motivos perfeitos
SSR (diméricos até hexaméricos) foram detectados e serviram para desenho de primers. Cerca de 120 pares de
primers foram propostos e dez pares sintetizados, dos quais oito evidenciaram 16 alelos em segregação,
amplificando DNAs dos acessos, em reações de PCR [de volume total de 20 µL (contendo 1 µL de DNA
genômico (10 ng. µL-1), 1x tampão de PCR, 1,5 Mm de MgCl2, 0,3 µM de primers, 0,5 U de Taq DNA
Polimerase, 0,1 Mm de dNTPs), com ciclagem de desnaturação inicial em 5 mim à 95°C, seguida de 30 ciclos de
60s a 95ºC, 60 s a 52ºC - 55°C (conforme o par de primers), 60 s a 72ºC e extensão final de 10 minutos a 72ºC].
Após amplificação, fragmentos foram corados e separados em gel de agarose (2%, p/v), sendo os polimorfismos
evidenciados com a leitura das bandas no gel. Com ajuda do software PopGen32 gerou-se dendrograma, com base
no índice de identidade genética de Nei (método UPGMA, procedimento Neighbor Joining modificado), que
estabeleceu a relação genética entre os acessos em estudo. O dendrograma, considerando 1.000 amostragens
(método de Bootstrap), mostrou que o acesso tolerante 183 foi o mais divergente geneticamente, ficando isolado
dos demais, que formaram um grupo a parte, incluindo o acesso sensível 171. Essa divergência amplia a
possibilidade de desenvolvimento de marcadores moleculares outros, além de EST-SSR (ex: SNP), a partir dos
dados de transcriptômica em desenvolvimento, com potencial para marcadores funcionais associados a tolerância
ao estresse em questão.
APOIO
CAPES e CNPq
64
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
EFFICIENCY OF GLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS IN INCREASING THE AQUAPORIN
GENE EXPRESSION IN RED RICE GROWN UNDER WATER STRESS
Nathálya Carvalho Farias1; Renata Priscila de Almeida Silva1; Bruna Regina dos Santos Silva1; Bruna
Cavalcante dos Santos2; Carlos Henrique Salvino Gadêlha Meneses3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual da Paraíba/Programa de Pós-Graduação Ciências Agrárias - UEPB, CEP 58.429-500,
Campina Grande-PB. Brasil; (2)Universidade Estadual da Paraíba/CCBS/Departamento de Biologia - UEPB, CEP
58.429-500, Campina Grande-PB. Brasil; (3)Universidade Estadual da Paraíba/Programa de Pós-Graduação
Ciências Agrárias - UEPB, CEP 58.429-500, Campina Grande-PB. Brasil -- Universidade Estadual da
Paraíba/CCBS/Departamento de Biologia - UEPB, CEP 58.429-500, Campina Grande-PB. Brasil
RESUMO
Plant growth promoting endophytic bacteria such as Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5, can directly
interfere with the plant metabolism by triggering a phenomenon known as induced systemic tolerance that may
increase water stress tolerance. Due to the importance the red rice (Oryza sativa L.) plays an important economic
and social role in the Brazilian semi-arid region and therefore it is necessary to study the possibility of increasing
tolerance of the plant to drought stress. In this way, inoculation of rice with G. diazotrophicus PAL5 may
contribute to alleviate the stress and consequently increase the nutritional efficiency of the plants. In this work we
evaluated the expression patterns of the aquaporin gene (OsPIP2) of red rice plants during the interaction with G.
diazotrophicus PAL5. Red rice plants (405 Embrapa Meio Norte genotype ), inoculated and non-inoculated with
the bacteria were submitted to four soil water stress conditions: 30%, 50%, 70% and 100% of field capacity. The
aquaporin gene expression was measured by quantitative PCR (qRT-PCR) 15 days after submitting the plant to
water regime. The aquaporin gene was induced in all soil moisture conditions, and the expression profiles were
dependent on the treatments. The highest levels of expression were observed in plants grown at 50% of moisture
in presence of the G. diazotrophicus PAL5 and of the OsPIP2 gene was down-regulated by and the absence of the
bacterium. Marked up- or down-regulation in PIP expression was observed by increased water availability and the
absence of the bacterium. Based on the relative expression of aquaporin gene, the results suggest that G.
diazotrophicus PAL5 increase the tolerance of red rice plants to drought stress.
APOIO
CNPq Universal- MCTI n°483547/2013-1 and UEPB
65
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
ENVOLVIMENTO DO GENE ARP (AUXIN REPRESSED PROTEIN) NA DORMÊNCIA DE
SEMENTES DE AMENDOIM
Maria de Fátima Caetano da Silva1; Taiza da Cunha Soares2; Rosa Maria Mendes Freire3; Liziane Maria Lima3;
Carliane Rebeca Coelho da Silva4; Roseane Cavalcanti dos Santos3.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Ciências Agrárias; (2)Renorbio UFRPE; (3)Embrapa Algodão; (4)UFPB/Embrapa
Algodão
RESUMO
O amendoim (Arachis hypogaea) é uma importante oleaginosa para o setor alimentício devido ao elevado valor
nutricional e ao óleo. A lavoura é conduzida com genótipos eretos e rasteiros que atendem ao mercado. Os
genótipos rasteiros são de elevada produtividade, porém as sementes possuem elevado nível de dormência que
limita sua aceitação por alguns produtores. O processo de dormência é desencadeado devido a alguns passos
metabólicos que impedem a síntese de proteínas e transporte de reservas para o embrião. A regulação envolve
vários genes que atuam ativando ou reprimindo a ação de hormônios endógenos, como os genes da família ARP
(auxin repressor protein) que estão diretamente envolvidos com regulação da auxina em algumas espécies. Ele
regular a auxina, que é um fito-hormônio responsável pelo desenvolvimento e crescimento das células vegetais.
Com intuito de identificar a expressão desse gene em genótipos eretos e rasteiros de amendoim, realizou-se o
presente trabalho, adotando-se a ferramenta de RT-qPCR. RNAs de embriões e cotilédones de quatro genótipos de
amendoim (LGoPE-06, IAC Caiapó, L7 Bege e BR1) foram extraídos e as reações de RT-qPCR foram realizadas
com o kit Syber Green Rox Plus Master Mix 2X (LGC). Os primers ARP-1F e ARP-1R foram desenhados a partir
da sequência do gene depositada no NCBI (NC_003071.7). Três genes endógenos de amendoim foram usados nas
reações (β-actina, ubiquitina e PP2A). As reações de RT-qPCR foram realizadas no termociclador do Real-Time
System Eco™ PCR (Illumina), em triplicata experimental e biológica. As análises de expressão gênica foram
realizadas utilizando o programa qBASEPlus. Os gráficos, Cq e curva de dissociação foram gerados
automaticamente, com base no método de normalização com um gene de referência, ΔΔCq. Verificou-se que o
LGoPE-06 revelou uma expressão do ARP em embrião de 10 mil vezes em relação ao genótipo L7 Bege (nãodormente) e em cotilédones 8 mil vezes que o L7 Bege, o que corrobora com o que se ve em campo, onde esse
genótipo leva entre 10-17 dias para emergir. A cv. IAC Caiapó possui alta dormência em campo, revelou
expressão apenas em cotilédones (0,5 mil vezes que o L7 Bege). É possivel que a expressão desse gene também se
encontre nos embriões dessa cultivar, contudo, devido ao alto valor encontrado na LGoPE-06, não foi possivel
atestar tal suposição. Esses achados são relevantes contribuindo na identificação de genótipos dormentes e
posterior uso em trabalhos de melhoramento.
APOIO
CAPES, UEPB e Embrapa Algodão
66
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
ESTRUTURA GENÉTICA DE MELOCACTUS CONOIDEUS BUINING & BREDEROO (CACTACEAE),
ESPÉCIE CRITICAMENTE AMEAÇADA DE EXTINÇÃO, A PARTIR DE MARCADORES
MOLECULARES.
Tarcísio dos Santos Cardoso1; Thalana Souza Santos Silva1; Cibelle Santos Dias1; Elisa Suzilene Lisboua dos
Santos2; Carlos Bernard Moreno Cerqueira Silva2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genética Molecular Aplicada (LGMA), Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia - UESB,
Itapetinga, BA, Brasil; (2)Departamento de Ciências Exatas e Naturais, Universidade Estadual do Sudoeste da
Bahia, Itapetinga, Bahia, 45700-000
RESUMO
O gênero Melocactus possui diversas espécies que são utilizadas como recursos naturais especialmente para fins
ornamentais, a exemplo da espécie M. conoideus. Popularmente conhecida como 'cabeça-de-frade', essa espécie
apresenta distribuição restrita na região da Serra do Periperi no município de Vitória da Conquista, Bahia. M.
conoideus está atualmente listada na categoria criticamente em perigo de extinção, tendo em vista a intensa
pressão antrópica nas áreas de sua ocorrência, o que evidencia a necessidade de ações de pesquisa que contribuam
para a sua conservação. No âmbito das ações de conservação torna-se fundamental o conhecimento da composição
genética de uma espécie e de como ela está distribuída em suas populações. Diante do exposto, objetivou-se
caracterizar a estrutura genética de 58 espécimes obtidos a partir da população natural de M. conoideus.
previamente obtidas. As estimativas de estrutura genética foram realizadas com base na análise do perfil de
amplificação de 10 primers ISSR (Inter Simple Sequence Repeat) previamente selecionados. Os padrões de bandas
foram utilizados para a construção de uma tabela de dados binários, onde zero (0) foi atribuído para ausência, um
(1) para a presença de bandas e nove (9) para dados inconclusivos. Para M. conoideus, um total de 67 marcas foi
gerado a partir das reações de amplificação em 58 indivíduos obtidos na reserva ambiental do Melocactus
conoideus. Apenas uma pequena parte destas marcas foi polimórfica (16,4%), com um número médio de 6,7
marcas por primer. Análise Bayesiana foi realizada a partir do programa STRUCTURE e a estimativa do número
de pools gênicos relativos a distribuição da diversidade foi obtida com o uso da ferramenta online STRUCTURE
Harvester. Baseado nos valores de Delta K observou-se uma estruturação principal em dois pools gênicos (Delta K
= 2) como a composição mais provável para os 58 indivíduos de M. conoideus presentes na Serra do Periperi. A
estruturação genética observada para a espécie pode ser justificada, ao menos em parte, pelo baixo fluxo gênico
decorrente das estratégias de polinização por aves com comportamento territorialista e pela dispersão de sementes
por pequenas distâncias pelos lagartos e formigas. Estes dados preliminares contribuem para as primeiras
informações genético-moleculares disponibilizadas para M. conoideus, sendo portanto, importantes para o manejo
consciente da espécie.
APOIO
CNPq, FAPESB
67
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
EXPRESSÃO DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO DOF (DNA-BINDING WITH ONE FINGER) EM
GENÓTIPOS SELECIONADOS DE FEIJÃO-CAUPI SOB ESTRESSES BIÓTICOS E ABIÓTICOS
Mitalle Karen da Silva Matos1; João Pacífico Bezerra Neto1; José Ribamar Costa Ferreira Neto1; Ederson Akio
Kido1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Em condições naturais, a produtividade de espécies cultivadas pode ser afetada negativamente por estresses
bióticos e abióticos. O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] apresenta uma plasticidade fenotípica que
permite sua adaptação às condições adversas, tornando-o um excelente sistema para investigar a base genética da
tolerância/resistência a estresses. Regulando as respostas moleculares específicas, os fatores de transcrição (FTs)
atuam como chaves centrais no controle da expressão gênica. Neste sentido, objetivou-se avaliar a expressão dos
FTs da família DOF (DNA-binding with one finger) em acessos selecionados do feijão-caupi submetidos a estresse
biótico (vírus), salino e hídrico. Para isso, tags correspondentes à FTs DOF foram selecionadas em bibliotecas de
SuperSAGE oriundas de folhas [inoculadas com CABMV (Cowpea Aphid-Borne Mosaic Virus) ou CMV
(Cowpea Mosaic Virus)] e raízes (submetidas à desidratação radicular ou estresse salino) de diferentes genótipos
do feijão-caupi. O software DiscoverySpace 4.0 foi utilizado para determinar a expressão diferencial das tags,
considerando as significâncias estatísticas das variações nas frequências das tags entre cada biblioteca (tratamento
versus controle). O programa Venny 2.0.2 foi utilizado para analisar a distribuição e o comportamento
das tags nos diferentes experimentos. Foram identificadas 90 tags correspondentes aos FTs DOF nas quatro
bibliotecas analisadas. Nos experimentos de infecção viral, 21 e 20 tags foram expressas sob inoculação do
CABMV e CMV, respectivamente. Destes, três transcritos foram comuns em ambos os ensaios, porém com
regulação transcricional distinta (down-regulated e ns), em consonância com o fato de que ambos os genótipos
apresentam diferentes respostas aos patógenos estudados. Já na resposta à salinidade e à desidratação radicular, 25
e 24 potenciais FTs DOF foram expressos, respectivamente. Respostas cruzadas (crosstalk) entre os estresses
avaliados foram observadas na referida família de FT, assim como resposta específica para a natureza do estresse
(biótica ou abiótica). Proteínas multifuncionais são significativamente importantes para a sobrevivência das
plantas, uma vez que tais organismos estão sujeitos a estresses múltiplos simultaneamente. Assim, este estudo
permitiu a identificação de transcritos da família DOF que atuam na regulação da resposta do feijão-caupi em
condições desfavoráveis, indicando candidatos para estudos que visem o melhoramento da cultura.
APOIO
CAPES, FACEPE, CNPq.
68
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
GENES CANDIDATOS À AQUAPORINAS EXPRESSAS EM STYLOSANTHES SCABRA VOGEL
(FABACEAE)
Flávia Tadeu de Araújo1; João Pacífico Bezerra Neto1; Rômulo Fonseca dos Santos1; Roberta Lane de Oliveira
Silva1; Valesca Pandolfi1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal - Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Stylosanthes scabra Vogel destaca-se entre as leguminosas forrageiras tropicais por apresentar tolerância à seca,
adaptação a solos ácidos e de baixa fertilidade, sendo frequentemente utilizada na recuperação de áreas
degradadas. Diante do exposto, aliado à sua alta variabilidade genética, S. scabra apresenta-se como um excelente
material de grande potencial em programas de melhoramento genético. Entre os genes de interesse no
melhoramento genético, estão as aquaporinas (AQPs) - proteínas de membrana, que funcionam como canais de
água - que são de grande relevância, uma vez que atuam como componentes centrais nas relações hídricas das
plantas. Esse estudo teve como objetivo identificar membros da família de AQPs no transcriptoma de S. scabra a
partir de primers desenhados para feijão-caupi (Vigna unguiculata). O RNA total de S. scabra foi extraído com o
protocolo de acetato de amônio e utilizado para síntese de cDNA (kit GOScript - Promega). As reações de PCR
foram realizadas em um volume final de 20 µL [sendo: 1 µL de cDNA, 10 mM de dNTP-mix, 50 mM de MgCl2,
5 µM de cada primer (direto e reverso) e 5 U de DNA polimerase], com a seguinte programação: 94ºC por 5 min
(desnaturação inicial) seguido por 35 ciclos de 94ºC por 1 min e por 58 ºC por 1 min e 72 ºC por 1 min
(anelamento e extensão) e uma extensão final de 72ºC por 10 min. Dos 15 pares de primers analisados, 9 pares
amplificaram nas regiões codificantes do genoma de S. scabra, com amplicons únicos no tamanho esperado,
demonstrando 60% de transferibilidade entre as duas leguminosas analisadas (V. unguiculata e S. scabra),
indicando um alto nível de conservação dessa superfamília gênica. A família de maior representatividade foi a PIP,
com 5 membros identificados, seguida pelas famílias NIP, TIP, SIP, com 2, 1 e 1, respectivamente. Corroborando
com essa análise, estudos têm relatado PIP como a maior família dentre as AQPs. Tal resultado reforça o fato de
S. scabra ser uma espécie que apresenta características de tolerância à seca, visto que os membros de PIP atuam
mais exclusivamente no transporte de água na planta, enquanto que os membros das outras famílias de AQPs estão
relacionados ao transporte não só de água, mas de outros solutos. As AQPs identificadas neste estudo representam
importantes papéis em plantas tolerantes à seca, além do valioso recurso genético a ser explorado em programas de
melhoramento genético, visando uma maior tolerância ao déficit hídrico.
APOIO
CAPES, CNPq.
69
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
GENETIC DIVERSITY AND GENE FLOW IN A FRAGMENTED POPULATION OF PAYPAYROLA
BLANCHETIANA TUL. (VIOLACEAE), AN UNDERSTORY TREE ENDEMIC TO THE BRAZILIAN
ATLANTIC FOREST
Marcus Braun1; Tiago Esposito1; Bruno Huettel2; Andrea Pedrosa Harand1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Citogenética e Evolução Vegetal, Departamento de Botânica, Centro de Biociências - UFPE,
Recife, PE, Brazil; (2)Max Planck Genome Centre, Cologne, Germany
RESUMO
Paypayrola blanchetiana is a small insect-pollinated tree with short-range seed dispersal, endemic to the Atlantic
Forest of East Brazil. A previous study showed that the species presented low fruit set and high fruit abortion rates
in forest fragments of different sizes within a matrix of sugarcane cultivation. Fruit set was also lowest in the
smaller fragments. The present study has two main goals: (1) to develop the first set of nuclear microsatellite
markers useful for population genetic work in the genus Paypayrola, and (2) to test the hypothesis that gene flow
is low and inbreeding is high among seven subpopulations of P. blanchetiana scattered across five forest
fragments. Furthermore, genetic diversity should be lowest in the smallest fragments. For microsatellite
development, 331,000 reads of 250 bp were obtained from Illumina MiSeq sequencing. Microsatellites (minimum
length 20 bp) were detected using Phobos and primer pairs were designed using Primer3Plus and OligoAnalyzer
3.1 softwares. Twenty-five of 37 primer pairs amplified specific products ranging in size from 123 to 198 bp. Of
these, seventeen were polymorphic. They were genotyped on an ABI 3500 sequencer (Applied Biosystems®),
using forward primers indirectly labeled with the fluorochromes 6-FAM, VIC, NED and PET via an "M13"
adapter. Ten nuclear loci generated sufficiently high and clear peaks for genotyping 280 plant individuals.
Preliminary results revealed an excess of homozygotes in six loci and a mean heterozygosity (HE) of 0.49 (ranging
from 0.2 to 0.74 across loci). Mean number of alleles per locus (A) was 2.9, being significantly smaller in small
versus large fragments. However, heterozygosity was not significantly different (large fragments:HE=0.45; small
fragments: HE=0.46). Inbreeding was high (FIS= 0.16) and genetic differentiation was moderate (FST=0.12) across
all loci. Pairwise FST and STRUCTURE analysis revealed the presence of three distinct populations,
geographically separated by distances between five and twelve km. This genetic structuring points to a noticeable
restriction of gene flow over short geographical distances in this fragmented landscape. Further studies are
desirable to test if near-dispersed forest trees are generally vulnerable to these effects following habitat
fragmentation.
APOIO
CNPq no. 350605/2013-0 and 300532/2016-4; FACEPE DCR-0018-2.03/13
70
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
IDENTIFICAÇÃO IN SILICO E CARACTERIZAÇÃO DE MICROSSATÉLITES NO GENOMA DO
FEIJÃO-CAUPI
Wilson Dias de Oliveira1; Thialisson Caaci do Vale Amorim2; Flávia Tadeu de Araújo2; Mitalle Karen da Silva
Matos2; João Pacifico Bezerra Neto2; Ana Maria Benko Iseppon2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco; (2)Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Elementos de DNA repetitivo são encontrados em todos os organismos, podendo constituir uma fração
considerável do genoma. Tais elementos podem ser classificados em (I) repetições dispersas (ex. transposons) ou
(II) in tandem, como é o caso dos microssatélites. Os SSRs (Repetições de Sequência Simples) são frequentes no
genoma de eucariotos e distribuem-se de forma aleatória nos cromossomos, além de possuírem níveis
consideráveis de polimorfismos e serem codominantes. Tais características os tornam excelentes marcadores para
estudos de variabilidade genética e identificação de genótipos superiores, entre outras aplicações. Dessa forma, o
presente estudo objetivou identificar e caracterizar os SSRs no transcriptoma do feijão-caupi [Vigna unguiculata
(L.) Walp]. Para este propósito, foi utilizado o programa MISA (MIcro SAtellite identification tool), um script
escrito em perl, contra as sequências genômicas do feijão-caupi depositados no GenBank do NCBI (National
Center for Biotechnology Information). Foram mineradas 21841 sequências do transcriptoma de V. unguiculata,
resultando em um total de 30496 microssatélites. Deste total, os motivos di- e trinucleotídeos foram os mais
abundantes com 15712 (51,5%) e 6711 (22%) respectivamente, enquanto os tetra, penta e hexanucleotídeos foram
os menos frequentes nas sequências analisadas. Também foram consideradas as repetições compostas, que
perfizeram um total de 7097 (23,3%) SSRs. Em um estudo realizado com Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.
também foi relatada a predominância de sequências dinucleotídicas, (71%) nas 1.236 ESTs (Expressed Sequence
Tags) analisadas. Em uma pesquisa realizada com leguminosas, foram comparadas as regiões codificantes e nãocodificantes quanto à presença dos microssatélites, observando-se que as frequências de tri e dinucleotídeos
tendem a se duplicar nas regiões codificantes, possivelmente como resultado de pressão de seleção. No presente
estudo, os motivos dinucleotídicos foram os que apresentaram a maior quantidade de repetições, variando de 9 a
61 nucleotídeos. Para o desenho de marcadores, esta informação é de grande valia, pois quanto maior a variação de
repetições, maior será o potencial polimórfico. A análise in silico permitiu a identificação dos motivos SSRs no
transcriptoma de feijão-caupi, possibilitando o desenvolvimento de marcadores moleculares visando sua aplicação
em estudos de diversidade e mapeamento genético.
APOIO
(CAPES, CNPq e FACEPE)
71
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
IDENTIFICAÇÃO DE MICROSSATÉLITES PLASTIDIAIS POLIMÓRFICOS PARA ANÁLISES
GENÉTICAS DE CENOSTIGMA MICROPHYLLA GAGNON (LEGUMINOSAE) EM ÁREAS DA
CAATINGA
Paulo Aecyo1; Tiago Esposito1; Marcus Braun1; Elâine Ribeiro2; Inara Leal2; Andrea Pedrosa Harand1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Citogenética e Evolução Vegetal, Departamento de Botânica, Centro de Biociências - UFPE,
Recife, Pernambuco, Brasil.; (2)Laboratório de Interação Planta-Animal, Departamento de Botânica, Centro de
Biociências - UFPE, Recife, Pernambuco, Brasil.
RESUMO
Cenostigma microphylla [= Poincianella microphylla (Mart. ex G. Don) L. P. Queiroz], conhecida como
catingueira falsa ou catingueira da folha miúda, possui hábito arbóreo, sendo polinizada especialmente por insetos
e dispersa balisticamente. É uma espécie endêmica da Caatinga, e amplamente distribuída em toda a região
semiárida, apesar das condições adversas, como alta temperatura, baixa umidade relativa, alta evapotranspiração
potencial e baixa precipitação (i.e. 240 mm a 900 mm ao ano), e das frequentes perturbações antrópicas como o
corte e queima da vegetação, criação extensiva de animais domésticos e coleta de madeira. Este trabalho objetiva
testar a amplificação e o polimorfismo de microssatélites plastidiais (cpSSR) universais, de modo a estabelecer
marcadores para análises genéticas futuras, como a influência das perturbações antrópicas na diversidade genética
deste bioma. Para tanto, foram utilizadas folhas jovens de nove indivíduos de C. microphylla coletados em
diferentes áreas do Parque Nacional do Catimbau, localizado no interior do estado de Pernambuco, Brasil. O DNA
vegetal foi extraído utilizando CTAB (brometo de cetil-trimetilamônio) e amplificado com oito pares de primers
plastidiais universais previamente desenvolvidos (ccmp2 - 7, ccmp10 e EMCRC74), com temperaturas de
anelamento variando entre 52°C e 58ºC. Os produtos da PCR marcados diretamente foram genotipados utilizando
o ABI 3500 GeneticAnalyzer (Life). Todos os primers testados amplificaram regiões de tamanho esperado,
variando entre 89 pb a 410 pb. Dentre eles, quatro foram polimórficos (ccmp2, ccmp5, ccmp10 e EMCRC74),
com dois a seis alelos por loco. Estes locos terão grande utilidade em análises futuras que visam testar os efeitos
do aumento das perturbações antrópicas e da aridização (duas ameaças comuns à biota da Caatinga e atualmente
em investigação pelo grupo) sobre a variabilidade e estruturação genética de Cenostigma microphylla.
APOIO
FACEPE, CAPES e CNPq.
72
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
IDENTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS CLOROPLASTIDIAIS DE CANA-DE-AÇÚCAR (SACCHARUM
SP.) SOB DÉFICIT HÍDRICO EM GEL SDS-PAGE
Elton Pedro Nunes Pena1; Melquisedec de Sousa Oliveira1; Amanda Emanuella Rocha de Souza1; Fabiana
Aparecida Cavalcante Silva1; Tercilio Calsa Junior1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, Centro de Biociências,
Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE
RESUMO
Cana-de-açúcar é uma Poaceae que possui relevância na economia brasileira devido à produção de açúcar e
bioetanol. Contudo, fatores ambientais, como a seca, comprometem a fisiologia e desenvolvimento normal da
planta, diminuindo a produtividade. Os cloroplastos são organelas semiautonômas responsáveis primariamente
pela fotossíntese, que participam de reações de biossíntese vitais a planta, sendo consideradas importantes em
respostas de tolerância a estresses abióticos. Portanto, torna-se relevante o estudo dos mecanismos de expressão
gênica do cloroplasto relacionados à tolerância ao déficit hídrico. A proteômica consiste em um conjunto de
técnicas utilizadas na determinação de proteínas diferencialmente expressas, em situações biológicas contrastantes,
como em estresses abióticos. No entanto, não há informações sobre efeito do déficit hídrico no proteoma
cloroplastidial em cana-de-açúcar. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi identificar proteínas cloroplastidiais
diferencialmente expressas em cana-de-açúcar sob déficit hídrico. Plantas da variedade RB92579 (considerada
tolerante ao déficit hídrico), com 90 dias de idade, foram submetidas ou não (controle irrigado) ao estresse hídrico,
durante sete dias, e ao fim do experimento, folhas foram coletadas e os cloroplastos isolados por centrifugação
diferencial. Após o isolamento, as proteínas foram extraídas pelo método fenólico, e separadas em gel SDSPAGE. Bandas de proteínas com mais de 50 % de inibição ou superexpressão (razão estresse/controle GelAnalyser 2010a) foram excisadas e digeridas com tripsina para análise em espectrômetro de massas
(AUTOFLEX III MALDI-TOF/TOF). Os espectros obtidos foram anotados utilizando o software Mascot contra
bancos de dados de Saccharum (Uniprot e NCBI). Na condição controle, foram identificadas cinco proteínas
diferencialmente expressas, categorizadas nas seguintes classes: fotossíntese (proteína Ycf4 do fotossistema 1
e subunidades α e β da ATP sintase); ubiquitinação (proteína CHIP e HSP90). Em plantas estressadas, cinco
proteínas foram identificadas: fotossíntese (citocromo f e proteína de ligação à clorofila a-b tipo 2); resposta a
estresse (HOP); síntese de isoprenóides (HMG-CoA sintase); recombinação meiótica cloroplastidial (proteína
At1g65010 da família WEB). Conclui-se que as proteínas identificadas são possíveis candidatas de resposta ao
déficit hídrico, sendo necessárias análises complementares para corroborar com tal hipótese.
APOIO
CAPES, LGPP e CETENE
73
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
IDENTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS ENVOLVIDAS NA INTERAÇÃO COWPEA APHID BORNE
MOSAIC VIRUS (CABMV) - VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP. POR ESI LC-MS/MS.
Cláudia Juliana Tabosa Lopes de Crasto1; Antonio Felix da Costa2; Wagner Fontes3; Marcia Vanusa da Silva4;
Angela Mehta5; Maria Tereza Santos Correia6.
E-mail: [email protected]
(1)
Crasto, C.J.T.L.; (2)Costa, A.F.; (3)Fontes, W.; (4)Silva, M.V.; (5)Mehta, A.; (6)Correia, M.T.S.
RESUMO
O feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.) é uma leguminosa originária do continente africano com ampla
distribuição em regiões tropicais e subtropicais, constituindo um dos principais componentes da dieta alimentar,
especialmente na zona rural das regiões Nordeste e Norte do Brasil. Essa cultura tem sido constantemente atacada
por vírus, causando grandes perdas na produção. Diante do exposto, o presente trabalho objetivou identificar
proteínas diferencialmente abundantes durante a interação Cowpea aphid borne mosaic virus (CABMV) - Vigna
unguiculata (L.) Walp. Foram utilizadas neste estudo as variedades Sempre Verde Luís Eduardo Magalhães suscetível, e TVU 966 - tolerante ao vírus CABMV. As plantas foram borrifadas com carborundo e inoculadas
com água (controle) e com CABMV e, posteriormente, coletadas em triplicatas biológicas nos tempos 72 e 168
horas após a inoculação. Proteínas totais foram extraídas com fenol, precipitadas com acetato de amônio em
metanol e, em seguida, digeridas com tripsina. As proteínas digeridas foram injetadas no equipamento ESI- LCMS/MS (Thermo Scientific). A análise de dados foi realizada por meio do software Progenesis® QI for proteomics
(Non linear Dynamics) e a identificação das proteínas, por meio do software Peaks® (Bioinformatics Solutions).
Este estudo revelou um total de 2.900 proteínas, sendo 296 proteínas diferencialmente abundantes onde 185
pertencem a variedade TVU 966 e 111 a Sempre Verde Luiz Eduardo Magalhães. Com a análise dos resultados foi
possível observar diversas proteínas relacionadas com o metabolismo energético; a fotossíntese; o estresse e
resposta a defesa da planta; a sinalização entre outras baseadas na anotação do Gene Ontology . Como exemplos a
ribulose bifosfato carboxilase de cadeia longa; rubisco de subunidade longa e ligação da subunidade beta;proteína
de choque térmico 90; actina 97 dentre outras. Essas proteínas já têm sido reportadas em outros estudos de
interação planta-patógeno, mostrando que genes envolvidos na resposta a outros vírus também foram observados,
fornecendo pistas para elucidar os mecanismos moleculares e fisiológicos subjacentes à resistência e / ou
suscetibilidade.
APOIO
FACEPE, IPA e EMBRAPA.
74
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
IDENTIFICAÇÃO DO DNA SATÉLITE NO GENOMA DE PASSIFLORA EDULIS SIMS POR
SEQUENCIAMENTO DE ÚLTIMA GERAÇÃO
Vanessa de Carvalho Cayres Pamponét1; Margarete Magalhães Souza1; Gonçalo Santos Silva1; Cláusio Antônio
Ferreira de Melo1; Saráh Gomes de Oliveira2; Fabienne Micheli1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Ciências Biológicas, Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC), Ilhéus, BA, Brasil;
Departamento de Botânica, Instituto de Biociências, Universidade de São Paulo (USP), São Paulo, SP, Brasil
(2)
RESUMO
Espécies vegetais têm o genoma constituído majoritariamente de sequências repetitivas, encontradas dispersas no
genoma (elementos transponíveis) ou em tandem (DNA satélite). DNAs satélites são geralmente encontrados em
genes de DNA ribossomal, nos telômeros, subtelômeros, centrômeros e em áreas pericentroméricas.
Conhecimentos sobre funções moleculares e citológicas do DNA repetitivo são recentes, como por exemplo, nos
processos de replicação do DNA, recombinação, expressão gênica e evolução cromossômica. Assim, este trabalho
teve como objetivo utilizar o sequenciamento de nova geração (NGS) para identificar e caracterizar o DNA satélite
do genoma de Passiflora edulis, para produção de marcadores cromossômicos em genótipos de interesse ao
melhoramento genético e estudos evolutivos do maracujazeiro. O DNA genômico foi sequenciado na Plataforma
Illumina Miseq, utilizando o kit V3 que fornece sequências paired-end de até 301 ciclos. A bioinformática foi
realizada com o programa Repeat Explorer, que gera gráficos baseados na análise de agrupamento de sequências
com semelhanças, a fim de, identificar elementos repetitivos. Foi utilizada uma nova ferramenta do programa, o
TAREAN - Tandem Repeat Analyzer que permite a identificação automática de agrupamentos derivados de
repetições em tandem e reconstrução dos monômeros consensos. Foram gerados um total de 351 clusters (CL), dos
quais apenas o CL 118 apresentou um monômero consenso com 145 pares de base (pb), com Satellite probability
de 0.985 e Loop Index de 1.0 apresentando gráfico com layout circular, que caracteriza alta confiabilidade para
DNA repetitivo em tandem. Outros dois clusters foram caracterizados com baixa confiabilidade, o CL 88 e o 315,
com monômeros de 342 e 99 pb, índices de Satellite probability 0.034 e 0.011 e Loop Index 0.727 e 0.954,
respectivamente. Este resultado revela uma frequência muito baixa de DNA satélite em P. edulis. A proporção do
DNA satélite no genoma é muito variável e é desconhecida qualquer relação com o tamanho do genoma, mesmo
sabendo que há uma relação proporcional da frequência de DNA repetitivo em genomas maiores. Algumas
espécies vegetais, como Musa acuminata e Silene latifólia, também apresentam uma proporção muito baixa de
DNA satélite. Em estudos genômicos pelo sequenciamento de bibliotecas BAC-end em P. edulis também foi
encontrado um número muito baixo de DNA satélite, e num total de 4.774 elementos repetitivos apenas um foi
caracterizado como satélite.
APOIO
CAPES; FAPESB; UESC
75
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
INITIAL ASSESSMENT OF GM COTTON RESISTANT TO COTTON BOLL WEEVIL BASED ON
FEEDING BIOASSAYS AND ELISA
Roseane Cavalcanti dos Santos1; Marília de Macêdo Freire Duarte2; Maria de Fátima Caetano da Silva2; Luana
Camilla Cordeiro Braz3; Carliane Rebeca Coelho da Silva4; José Jaime Vasconcelos Cavalcanti1; Liziane Maria
de Lima1; Érica Soares Martins5; Rose Monnerat5.
E-mail: [email protected]
(1)
Embrapa Algodão; (2)UEPB; (3)UFCG; (4)Renorbio, UFRPE; (5)Embrapa Cenargen
RESUMO
The boll weevil (Anthonomus grandis) is the main pest of cotton crop due to cause serious damages to
reproductive structures, affecting directly the yield. The effective control is done through chemical insecticides,
which substantially increase management costs. Control via transgenesis is a promising strategy and less harmful
to the environment, especially by using Cry proteins, derived from endophytic Bt bacteria. In 2015, the biotech
team from Embrapa introduced a cry 10-construction into cotton plants, isolated from a Bt strain that showed low
DL50 in boll weevil feeding bioassays (7.12 mg/mL). In order to test the toxicity of Cry proteins were conducted in
laboratory bioassays feeding with boll weevil and ELISA assays. Three hundred and sixty plants T0 were grown in
green house and further were evaluated in feeding bioassays and ELISA tests, carried out in Entomology and
Biotech Labs, at Embrapa Algodão (Campina Grande, PB). Antibody used in ELISA tests was provided by
Biological Control team, at Embrapa Cenargen (Brasilia, DF). Seven events were selected, among them five
showed mortality rate ranging from 60% to 72%, and Abs-reading ELISA from 0.600 to 2.00 nm. Eighty-one
seeds T1 derivate from these events (T0) were grown in rows in a greenhouse. From 65 d, plants were infested
with two couples of adult insects under restraint environment. Shedding buds were daily recorded during 10 d and
evaluated as natural shedding (NS, no boll weevil symptom), feeding (FB) and oviposition (OBO). Based on total
of plant evaluated, 44% from T1-346, 50% from T1-371, 46% from T1-336 and 13% from T1-357 did not show
bool weevil symptom. The average natural shedding in control plants was 30% and 19% in T1 plants. The
averages of insect perforations in selected plants was 10%, including feeding and oviposition, while the control
was 35%. In ELISA assays carried out in selected T1 events, twenty two showed twice the value of control plants
(Abs-reading), indicating that they are promising for further molecular assays in order to identify events resistant
to boll weevil. These results are quite relevant to Brazilian cotton belt because, up to now, no commercial GM
cotton has resistance to bool weevil. So, this study represents an expressive oportunity for control this pest by
molecular tools.
APOIO
Embrapa Algodão, CNPq, CAPES.
76
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
ISOLAMENTO DE PROTEOMA SOLÚVEL DE PALMA FORRAGEIRA (OPUNTIA STRICTA) PARA
ANÁLISE DE EXPRESSÃO DIFERENCIAL EM RESPOSTA À SECA E INFESTAÇÃO POR
COCHONILHA-DE-ESCAMAS (DIASPIS EHINOCACTI)
Mara Danielle Silva do Carmo Santana1; Elton Pedro Nunes Pena2; Fabiana Aparecida Cavalcante Silva1;
Amaro de Castro Lira Neto3; Tercilio Calsa Junior1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, Centro de Biociências,
Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE; (2)Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas,
Departamento de Genética, Centro de Biociências, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE e Instituto de
Ciências Biológicas, Universidade de Pernambuco, UPE, Recife, PE; (3)Instituto Agronômico de Pernambuco,
IPA, Recife, PE
RESUMO
A palma forrageira, cultura relevante para a região semi-árida do Nordeste brasileiro por atender à nutrição animal
em períodos de estiagem, tem sofrido redução na produção por ataque de cochonilha-de-escamas (Diaspis
ehinocacti). Pouco se conhece sobre os processos moleculares envolvidos na relação praga-hospedeiro entre estas
espécies. A análise proteômica pode auxiliar pela identificação de proteínas associadas às respostas em condições
diferenciais. O trabalho objetivou selecionar método de extração de proteínas solúveis de O. stricta e verificar
acúmulo diferencial de proteínas em resposta à seca e/ou à infestação por cochonilha-de-escamas. Clones de O.
stricta var. IPA200016 de 1 ano de idade foram submetidos aos tratamentos: I-irrigado e sem infestação; IIirrigado e com infestação; III-supressão de irrigação e sem infestação; IV-supressão de irrigação e com infestação.
A infestação se deu a partir do contato por 7 dias com palma infestada. Após infestação as plantas foram
submetidas a estresse de seca por 30 dias. Foi macerado 1 g de amostra do cladódio primário e utilizado para os
métodos: (a). Fenol: adição de tampão (EDTA 0,05 M, Tris-HCl 0,5 M pH 7,5; sacarose 0,7 M; β-mercaptoetanol
2%, PMSF 0,002 M, KCl 0,1 M), extração com fenol saturado, precipitação com metanol contendo acetato de
amônio 0,1 M e lavagens com acetona 80%. (b). Fenol/SDS: método (a) seguido de limpeza com tampão SDS
denso (sacarose 30%, SDS 2%, Tris-HCl 0,1 M pH 8,0, β-mercaptoetanol 5%), extração com fenol saturado,
precipitação com metanol contendo acetato de amônio 0,1 M e lavagens com acetona 80%. (c). TCA: precipitação
com TCA/acetona 10% e lavagens com acetona 80%. (d). Método (c) seguido pela limpeza do método (b). As
amostras foram solubilizadas em uréia 7M: tiouréia 2M, quantificadas pelo método Bradford e separadas em SDSPAGE 1D. A visualização das amostras revelou que o método d apresentou menor degradação, apesar de não
possuir maior rendimento de proteínas totais. A análise da intensidade de bandas entre tratamentos permitiu
identificar diferenças quali-quantitativas que podem refletir variações na produção de proteínas. Foram
selecionadas três bandas diferenciais, excisadas e identificadas por espectrometria de massas, cuja anotação
presumível permitiu associá-las às respostas da planta aos estresses aplicados. Os resultados poderão ser úteis para
seleção de biomarcadores associados à tolerância aos estresses em estudo.
APOIO
UFPE, RENORBIO, IPA, UESPI.
77
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
MAPEAMENTO IN SILICO DE GENES DE JATROPHA CURCAS ENVOLVIDOS COM A BIOSSÍTESE
DE ÓLEOS, EM GENOMA DE MANIHOT ESCULENTA
Marislane Carvalho Paz de Souza1; George André Lima Cabral1; Jorge Luís Bandeira Silva Filho1; Éderson Akio
Kido1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética
RESUMO
Jatropha curcas é uma oleaginosa conhecida como pinhão-manso. É planta perene, rústica e adaptada a ambientes
tropicais. As sementes de J. curcas são ricas em óleo (30-40%), com potencial para produção de biodiesel. O
cultivo, entretanto, é limitado devido à falta de materiais recomendados pelo melhoramento. Embora existam
dados genômicos de J. curcas, o genoma não está totalmente resolvido, e pouco se conhece sobre a distribuição
dos genes relacionados com a biossíntese de óleos na espécie. Este estudo teve por objetivo mapear genes de
J.curcas relacionados com a biossíntese de ácidos graxos, em genoma já disponível, da mesma família
(Euphorbiaceae), no caso, Manihot esculenta (mandioca), a fim de analisar a distribuição nos cromossomos. Para
tanto, sequências proteicas de J. curcas, da base de dados NCBI, relacionadas com genes de Arabidopsis do
metabolismo de lipídeos (http://aralip.plantbiology.msu.edu/pathways/pathways), foram identificadas e alinhadas
via BLASTp (e-value < e-20) com sequências proteicas de M. esculenta, para as quais há anotações (de gene e/ou
função gênica) e localização cromossômica prevista (base de dados Phytozome). Considerando o melhor hit para
cada uma das 70 proteínas de J. curcas em estudo, foram associadas, no total, 62 proteínas de M. esculenta (evalue máximo observado de e-51 e score mínimo de 65 emáximo de 4.288), representando 61 locos em 18
cromossomos previstos. Em dois cromossomos (5, 10) somente um locus foi identificado; em quatro cromossomos
(3, 4, 6, 17), foram dois; em outros quatro cromossomos (7, 12, 16, 18), foram três locos; em outros quatro (8, 9,
13, 15), quatro locos; em outros três (2, 11, 14), cinco, e em um cromossomo (1), oito locos foram mapeados. Os
locos identificados foram associados quanto à função gênica atuando: a) na conversão de ácidos graxos em
lipídeos estocados no retículo endoplasmático (Gr. I); b) na biossíntese de novo de ácidos graxos em plastídios
(Gr. II); c) no citosol (Gr. III), d) como proteínas regulatórias (Gr. IV). Relativos ao Gr. I foram identificados 19
locos (em 11 cromossomos); ao Gr. II, 28 locos (16 cromossomos); ao Gr. III, 2 locos (2 cromossomos) e ao Gr.
IV, 12 locos (11 cromossomos). Apesar de separadas evolutivamente, este mapeamento abre a possibilidade de se
esperar marcadores ligados, relacionados com a biossíntese de ácidos graxos, em decorrência da sintenia entre as
espécies citadas, e que possam ser aproveitados no melhoramento vegetal de J. curcas.
APOIO
FACEPE
78
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
MECANISMOS DE RESISTÊNCIA ESTRUTURAIS E ATIVIDADE DE ENZIMAS OXIDATIVAS E
SUA INFLUÊNCIA NO ESTABELECIMENTO DO PROCESSO INFECCIOSO DE MONILIOPHTHORA
PERNICIOSA EM FRUTOS DE CACAUEIRO.
Ivanna Michelle Meraz Pérez1; Karina Peres Gramacho1; Virginia Fontes Soares2; Kaleandra Sena1; Yaska
Janaina Bastos Soares1; Mariana Rocha de Carvalho1; Renato S. Gonzaga Santos3; Uilson Vanderlei Lopes1;
Carlos Priminho Pirovani2.
E-mail: [email protected]
(1)
CEPLAC/CEPEC/SEFIT, Rodovia Ilhéus- Itabuna, km22, cx. Postal 07, Ilhéus-BA,45600-970, Brasi;
UESC/CBG, Rodovia Ilhéus- Itabuna, km16, Ilhéus-BA,45662-000, Brasil ; (3) FTC, Praça José Bastos, 55 Osvaldo Cruz, Itabuna - BA, 45600-080, Brasil. E-mail
(2)
RESUMO
A vassoura-de-bruxa do cacaueiro (VBC) causada pelo fungo Moniliophthora perniciosa é uma das principais
doenças da cacauicultura afetando grandemente tecidos em desenvolvimento tais como os frutos, principal produto
comercial. Entre os métodos disponíveis para seu controle destaca-se o uso de genótipos resistentes a doenças.
Diversos fatores inerentes à planta, bem como ativados após infecção podem influenciar no estabelecimento da
interação sendo considerados mecanismos de resistência constitutiva e/ou induzida a doenças. Diante disso o
objetivo deste trabalho foi avaliar estruturas presentes na superfície de frutos de cacaueiro, bem como a atividade
enzimática de genótipos contrastantes a VBC e estudar a influência destas variáveis no estabelecimento do
processo infeccioso de M. perniciosa. Frutos dos genótipos TSH1188 (R) e Catongo (S) foram pulverizados com
uma solução de basidiósporos do fungo na concentração de 2x105. Amostras foram coletadas nos tempos 3, 5, 6, 8
e 12 horas após inoculação (hai) e processadas para microscopia eletrônica de varredura (FIOCRUZ, BA), bem
como às 0, 3, 6, 12, 24, 48 hai para realização de ensaios enzimáticos. Tricomas estrelares e glandulares, com
predominância destes últimos foram observados em ambos os genótipos, mediante analise de variância (p<0,05) a
densidade de tricomas foi maior no TSH1188. Estômatos amonocíticos foram apresentados por ambos os
genótipos, porém com diferença na localização no filoplano dos frutos, encontrando-se em criptas estomáticas no
Catongo. O processo infeccioso de M. perniciosa foi mais rápido no Catongo onde a adesão e germinação dos
basidiósporos iniciou-se ás 3hai e no TSH1188 ás 8hai. Penetrações fúngicas foram observadas no Catongo às
5hai, e no TSH1188 às 8hai, apresentando maior ocorrência no Catongo em relação ao TSH1188 (p<0,05). A
atividade enzimática das peroxidases (guaiacol e ascorbato) em frutos de cacaueiro revelou diferenças entre os
genótipos avaliados. De maneira geral observou-se que a atividade de ambas as enzimas foram significativamente
(p<0.05) maiores no TSH1188, além de apresentar um aumento importante nos estágios iniciais da infecção. Os
resultados mostraram que estruturas na superfície dos frutos influenciam o estabelecimento de M. perniciosa neste
patossistema e sugere-se que as enzimas avaliadas estão relacionadas com respostas rápidas de defesa na interação
planta-patógeno.
APOIO
CONACYT, GOVERNO DO MÉXICO, CAPES, FAPEBS, FIOCRUZ
79
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
MEMBROS DAS SUBFAMÍLIAS DE AQUAPORINAS EM FAVELEIRA (CNIDOSCULOS
QUERCIFOLIUS POHL)
Gisela Formiga Queiroz Nóbrega1; Valesca Pandolfi2; João Pacífico Bezerra Neto2; Marx Oliveira Lima2; Heidei
Lacerda Alves da Cruz3; Carlos Eduardo Alves Soares4; Ana Maria Benko Iseppon2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Campina Grande (UFCG), Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Programa de Pós
Graduação em Ciências Florestais, Patos, PB.; (2)Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Centro de
Ciências Biológicas, Departamento de Genética, Recife, PE.; (3)Universidade Federal de Pernambuco (UFPE),
Centro de Ciências Biológicas, Plataforma de Sequenciamento de DNA do Laboratório de Bioinformática e
Biologia Evolutiva (LABBE/CB); (4)Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA), Departamento de
Ciências Animais (DCAN), Mossoró, RN.
RESUMO
A faveleira (Cnidoscolus quercifolius Pohl) é uma euforbiácea arbórea, nativa e endêmica do Brasil, com domínio
fitogeográfico na caatinga. Sua multiplicidade de uso (como fonte de proteína, óleo, fibras, madeira), aliada à
capacidade de crescimento em solos pedregosos e com baixo teor de umidade, fazem da faveleira uma espécie
alternativa na identificação genes de tolerância ao déficit hídrico. Tendo em vista a correlação existente das
aquaporinas - AQPs (proteínas intrínsecas de membrana responsáveis pelo transporte de água e outros solutos)
com os mecanismos de tolerância à seca, esse trabalho teve como objetivo identificar e testar um conjunto de
genes de aquaporinas no genoma da faveleira. As sequências de AQPs de Arabidopsis thaliana foram usadas
como sondas em alinhamentos (tBLASTn, e-value de 1e-10) de homólogos nos genomas de Manihot esculenta e
de Ricinus communis, disponíveis no banco Phytozome. Com o auxílio da ferramenta Primer3 foram obtidos 16
pares de primers, cuja distribuição entre as espécies e subfamílias de aquaporinas foi de: 10 pares de primers de
M. esculena (3 MePIP; 4 MeTIP; 2 MeNIP e 1 MeXIP) e 6 pares de primers de R. communis (1 RcPIP; 3 RcTIP, 1
RcNIP e 1 RcXIP). As PCR foram conduzidas em termociclador de gradiente de temperatura, sendo otimizadas
para cada par de primer testado. Das quatro subfamílias de AQPs analisadas, apenas uma não foi eficientemente
amplificada na faveleira. Os primers que apresentaram resultado de amplificação foram MePIP2.2 à 55ºC,
MeTIP2.1 à 56ºC e MeNIP2.1 e RcTIP1.1 à 58ºC , cujos produtos amplificados apresentaram tamanhos entre 500
a 1.500 pb, ou seja, muito próximos do esperado. Esses resultados mostram que, embora todos os primers tenham
sido inicialmente testados com as temperaturas indicadas pelo software de desenho do primer, estas não foram
eficiente na especificidade nas reações de amplificações, havendo necessidade de otimização via PCR de
gradiente. Por se tratar de uma espécie em que ainda não existe qualquer informação de sequências disponível em
bancos de dados públicos, os resultados obtidos neste estudo são de grande valia, uma vez que o índice de
transferabilidade (75%) foi satisfatório e eficiente para a obtenção das principais subfamílias de AQPs no genoma
da faveleira, revelando o elevado nível de conservação entre essas importantes euforbiáceas.
APOIO
CAPES, CNPq, FACEPE
80
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
MUDANÇAS FENOTÍPICAS IMPOSTAS EM PLANTAS TRANSGÊNICAS DE NICOTIANA TABACUM
EXPRESSANDO GENE ANTI-SENSO DA PR4 ISOLADO DE THEOBROMA CACAO
Laiane Nascimento Ferreira1; Jacimara Rodrigues2; Sarah Pereira Menezes3; Fabienne Micheli4; Marcio
Gilberto Cardoso Costa5; Carlos Priminho Pirovani5; Fátima Cerqueira Alvim6.
E-mail: [email protected]
(1)
Bolsista IC Fapesb Universidade Estadual de Santa Cruz; (2)Bolsista DTI, Universidade Estadual de Santa Cruz;
Pos doutoranda Universidade Estadual de Santa Cruz; (4)Pesquisadora CIRAD; (5)Professor Titular Universidade
Estadual de Santa Cruz; (6)Professor Adjunto Universidade Estadual de Santa Cruz
(3)
RESUMO
A cacauicultura é uma das principais atividades agrícolas do sul da Bahia. Contudo, nas últimas décadas, essa
atividade agrícola foi afetada devido ao fungo Moniliophthora perniciosa, causador da doença conhecida
vulgarmente como vassoura de bruxa. Identificar genes potencialmente relacionados com a resistência das plantas
ao M. perniciosa é fundamental para desvendar as bases moleculares da interação cacau: M. perniciosa e para
desenvolver novas estratégias de controle da doença. Dentre os genes selecionados para o estudo encontram-se os
que codificam para proteínas de resposta à patogenicidade (PR). O aumento no nível das PRs geralmente
relaciona-se de maneira direta a tolerância da planta frente à estresses bióticos e/ou abiótico. O trabalho teve como
objetivo analisar as modificações impostas em plantas transgênicas de Nicotiana tabacum frente a expressão, no
sentido anti-senso, de um gene que codifica para PR4 de cacau. Analises conduzidas in vitro com TcPR4
identificaram que esta proteína possui atividade de RNase, DNase mas não de quitinase. Esta é uma estratégia
inovadora onde se pretende aumentar a expressão das demais PRs da planta induzindo o silenciamento de uma
única PR. As plantas de tabaco foram transformadas, via Agrobacterium tumefaciens, os regenerantes tiveram o
DNA genômico extraído e a confirmação da integração do transgene foi feito via reação de PCR. Transformantes
independentes foram transferidos para a casa de vegetação juntamente com plantas não transformadas de fumo
(controle experimental). Foi observado que todas as plantas transgênicas apresentaram uma menor taxa de
crescimento e floração antecipada quando comparadas com as plantas controle. Em outras espécies o nível de PRs
já foi relacionado com mudanças no período de floração e no crescimento vegetal. As sementes das plantas
transgênicas foram germinadas in vitro. As linhagens T2 permitirão análises moleculares e fisiológicas mais
detalhadas visando estabelecer se mudanças no nível da PR aumenta a resistência das plantas ao M .perniciosa.
APOIO
FINEP, MAPA, FAPESB, UESC
81
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
O PAPEL DO TAMANHO DO GENOMA E TIPOS DE NÚCLEO INTERFÁSICO DOS PADRÕES
INTERNOS NA CITOMETRIA DE FLUXO
Lucas Alexandre de Souza Costa1; Sandra Mendes1; Gustavo Souza1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
A citometria de fluxo é uma ferramenta importante para a determinação do conteúdo de DNA (valor 1C) em
plantas. Essa técnica baseia-se na fluorescência relativa emitida por núcleos corados, sendo os valores dessa,
interpretados a partir de comparações com padrões internos (PI) com valor 1C conhecido. Tradicionalmente, o
valor 1C destes PIs não deve ultrapassar três vezes o tamanho do genoma da amostra a ser quantificada. Tal
conclusão é baseada em observações matemáticas, não havendo dados experimentais que identifiquem a
interferência dos tipos de núcleo interfásico ou organização da cromatina na determinação do valor 1C. Este
trabalho teve como objetivo testar a relação entre determinação do valor 1C e o tamanho do genoma/tipos de
núcleo interfásico de diferentes PIs. Para isso, foi utilizada como modelo Oxalis psoraleoides (Oxalidaceae) e
feitas estimativas utilizando PIs com núcleos arreticulados/semi-reticulados (Raphanus sativus cv. saxa [1C = 0,55
PG], Solanum lycopersicum cv. stupicke [1C = 0,98 pg] e Zea mays cv. CE-777 [1C = 2,72 pg]) e núcleos
reticulados (Pisum sativum cv. Ctirad [1C = 4,55 pg], Vicia faba ssp. faba var. equina [1C = 13,45 pg] e
Nothoscordum pulchellum [1C = 26 pg]). As amostras foram coradas com iodeto de propídeo, corante mais
indicado para estimativas de valor 1C. Os valores para O. psoraleoides variaram desde 1C = 20,29 pg (PI = V.
faba) a 1C = 16,95 pg (PI = R. sativus), mostrando uma relação inversamente proporcional entre a distância
PI/amostra e valor 1C estimado (R2 = -0,5). Estimativas de O. psoraleoides utilizando PIs com núcleos
arreticulados/semi-reticulados revelaram tamanhos genômicos parecidos entre si(1C ?17 pg), assim como
medições com PIs de núcleos reticulados (1C ?19pg), sugerindo que não é a distância PI/amostra que determina
desvios nos valores 1C, mas sim o tipo de núcleo interfásico do PI. Logo, a sugestão de utilizar controles com no
máximo três vezes o tamanho do genoma da amostra é arbitrária e precisa ser melhor investigada
experimentalmente. Isso sugere que as estimativas de tamanho do genoma por citometria de fluxo devem ser
complementadas por uma caracterização cariotípica, a fim de determinar a forma de organização da cromatina no
núcleo interfásico. Essa organização pode alterar a granulosidade das partículas, enviesando os valores calculados.
Assim, a escolha de PIs com organização da cromatina interfásica similar à espécie de interesse pode garantir
estimativas de valor 1C mais acuradas.
APOIO
CAPES, CNPq, FACEPE
82
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
PERFIL PROTEÔMICO DE LEMNA AEQUINOCTIALIS (L.) CULTIVADA EM MEIO SH E
EFLUENTE DE ESTAÇÃO DE TRATAMENTO DE ESGOTO
Adauto Gomes Barbosa Neto1; Marciana Bizerra de Morais1; Tercilio Calsa Junior1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, CB, Universidade Federal de
Pernambuco, Recife-PE
RESUMO
As plantas aquáticas da família Lemnaceae, consideradas as menores angiospermas conhecidas, são naturalmente
capazes de se adaptar e colonizar água residual antropogênica, reciclando poluentes emergentes e gerando
biomassa em taxas superiores às de plantas terrestres. Lemna aequinoctialis é uma das 37 espécies que compõe
esta família, que tem se destacado na biologia e biotecnologia vegetal. Visando contribuir para elucidação de
mecanismos fisiológicos e metabólicos associados ao potencial biotecnológico destas plantas, este trabalho
objetivou a análise perfil proteômico por eletroforese bidimensional (2D-PAGE) de lentilha-d'água associada à
produção de biomassa e bioenergia. O clone M1 de Lemna aequinoctialis foi cultivado em câmara de crescimento
com temperatura, umidade e luminosidade controladas, por 28 dias em meio de cultura SH 0,5X (SH); em mistura
(1:1) de meio 1X e efluente (SH:SW); e em efluente não suplementado (SW). O crescimento e o teor de amido
foram monitorados. Proteínas foram extraídas de amostras coletadas no 6º dia de cultivo. Em seguida os extratos
foram quantificados pelo método de Bradford e a integridade foi avaliada em gel SDS-PAGE. Para os géis 2DPAGE foram utilizados 250 µg de proteínas, focalizadas em tiras de pH imobilizado de 3-10, 13 cm (GE
Healthcare). Após coloração com azul de Coomassie G-250, os géis 2D-PAGE foram digitalizados e, em seguida,
analisados no programa ImageMaster 2D Platinum para obtenção de dados quantitativos. No total, foram
detectados 2.088 spots: 649 de SH (216 spots/gel); 656 de SH:SW (219 spots/gel); e 783 de SW (261 spots/gel).
Os perfis proteômicos tiveram coeficiente de correlação maior que 0,90. A distribuição dos spots por pI mostrou
que 74,2% estão na faixa de 4 a 7; quanto ao peso molecular, 79,1% dos spots possui massa até 30 kDa. Foram
detectados apenas 181 spots comuns em pelo menos 2 das 3 condições avaliadas, que permitiram a detecção de
nove potenciais marcadores proteômicos (p < 0.05, t-test), utilizando SH como referência: 5 para SH:SW; e 4 para
SW. A identificação destes marcadores poderá contribuir com o desenvolvimento de estratégias de melhoramento
genético de Lemnaceae para aplicações biotecnológicas.
APOIO
CAPES, CNPq, INCT Bioetanol, FACEPE, Lógica Ambiental.
83
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
PROSPECÇÃO DE DEFENSINAS EM ESPÉCIES MEDICINAIS
Stephani Soares Rodrigues dos Santos1; Valesca Pandolfi1; Rebeca Rivas2; Marx Oliveira de Lima1; Luis Carlos
Belarmino1; José Ribamar Costa Ferreira Neto1; Manassés Daniel da Silva1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Centro de Ciências Biológicas, Departamento de Genética,
Recife, PE.; (2)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Botânica, Laboratório de Fisiologia
Vegetal, Recife, PE
RESUMO
As defensinas fazem parte de uma classe de peptídeos antimicrobianos com reconhecido papel na defesa vegetal
contra vários patógenos. Devido a sua capacidade antimicrobiana, esses peptídeos tornam-se excelentes candidatos
no desenvolvimento de novos compostos potencialmente úteis na indústria farmacêutica e no melhoramento
vegetal. O objetivo deste estudo foi identificar genes homólogos a defensinas vegetais em espécies representantes
de diferentes famílias tradicionalmente usadas por sua capacidade antimicrobiana e anti-infecciosa. Foram
selecionadas seis espécies vegetais com base na literatura com ação antimicrobiana e/ou anti-infectiva claramente
demonstrada, incluindo Amburana cearenses, Bauhinia chicanta, Bidens pilosa, Calotropis procera, Croton sp
e Euphorbia hyssopifolia. Para as reações de PCR foram desenhados 12 pares de primers para defensinas baseados
em sequencias de diferentes famílias em bancos de dados públicos. No total foram obtidos 58 produtos, sendo: 15
em A. cearenses (150 a 800 pb), 14 em B. chicanta (150 -800 pb); 10 em E. hyssopifolia (150-900pb), 9 em B.
pilosa (200-900pb); 5 em C. procera (100-450 pb) e 5 em Croton sp (100-700pb). A busca por similaridade
(Blastx, e-value ≤ e-10), demonstrou que apenas a sequência de E. hyssopifolia (529 pb) apresentava homologia
com uma defensina de Vigna unguiculata. A busca por sequências homológas no banco de
dados Phytozome evidenciou um alinhamento (Score variando entre 122 a 164; e e-value entre 3e-13 a 9e-08) com
um gene de defensina de Phaseolus vulgaris (2 éxons e 1 íntron, característicos de defensinas). A predição da
região codificante, através do programa FGENESH, indicou que a sequência equivalia apenas ao segundo éxon do
gene precursor de defensina da espécie V. unguiculata. A análise das características proteicas e mudanças póstraducionais apontou a presença do domínio gamma thionin completo, bem como a formação de quatro pontes de
dissulfeto entre oito cisteínas comumente presentes em defensinas. Contudo, não houve a presença de um peptídeo
sinal, visto que este é codificado em parte pelo primeiro éxon. Os resultados indicam que a sequência obtida se
trata da região do peptídeo maduro de uma defensina de E. hyssopifolia com grande similaridade àquela de
defensinas de leguminosas de importância agrícola. Estes dados fornecem subsídio para o isolamento do gene
completo visando estudos funcionais e de aplicação biotecnológica.
APOIO
CAPES, CNPq, FACEPE.
84
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
PROTEÍNAS EXPRESSAS DURANTE A REDIFERENCIAÇÃO IN VITRO DE GENÓTIPOS DE
ALGODOEIRO RECALCITRANTES E NÃO RECALCITRANTES
Taiza da Cunha Soares1; Antônio Silvio do Egito Vasconceos2; Liziane Maria de Lima3; Carliane Rebeca Coelho
da Silva1; Julita Maria Frota Chagas Carvalho3; José Jaime Vasconcelos Cavalcanti3; Roseane Cavalcanti dos
Santos3.
E-mail: [email protected]
(1)
RENORBIO/ UFRPE; (2)Embrapa Caprinos e Ovinos; (3)Embrapa Algodão
RESUMO
A embriogênese somática (ES) é uma pratica amplamente utilizada para regeneração de plantas nos métodos de
transformação genética. Apesar de já estabelecido, os procedimentos envolvem mecanismos de desdiferenciação
celular e, por conseguinte, aquisição de competência embriogênica, os quais limitam a eficiência desta via em
algumas culturas, especialmente as recalcitrantes, como o algodoeiro. A rota biossintética da ES envolve a
expressão diferencial de vários genes que codificam proteínas com habilidade embriogênica, embora algumas
estejam ausentes ou inativas em espécies recalcitrantes. Visando aumentar a base de conhecimento sobre essas
proteínas realizou-se o presente estudo que teve por objetivo proceder uma análise previa sobre o perfil das
proteínas totais, expressas durante a fase de rediferenciação celular, usando como referencia genótipos
recalcitrantes (GR) e não recalcitrantes (GNR) de algodão. Seis genótipos foram utilizados no estudo, sendo 3
GNR (Coker 312, BRS Rubi e BRS Seridó) e 3 GR (BRS Topázio, CNPA Precoce 1 e BRS 201). Proteínas totais
foram extraídas dos genótipos utilizando-se calos liofilizados (0,04 g), dissolvidos em tampão Tris-HCl (1200 μL),
pH 6,8, na presença de SDS (0,1% ) e β-mercaptoetanol (5%) e homogeneizado em almofariz por 20 min. Após
homogeneização, as amostras foram transferidas para tubos (1,5 mL), acrescentado 300 μL de glicerol (10%), e
azul de bromofenol (0,01%), agitadas por 1 h a 25 ºC e centrifugadas (10000xg/10 min/25 ºC). Os sobrenadantes
recuperados foram aquecidos a 100 °C por 3min e volumes de 10µl de amostras foram depositados em mini gel
para análise eletroforética. A SDS-PAGE foi realizada mediante géis de poliacrilamida com concentração de 4,9%
em 125mM de tampão Tris-HCl, pH 6,8 e com géis de separação com 15,4% de poliacrilamida em 380mM de
tampão Tris-HCl, pH 8,8, contendo 0,1% de SDS. Após a corrida as proteínas foram reveladas com nitrato e os
géis escaneados para análise. Perfis eletroforéticos distintos foram observados entre as cultivares selecionadas
como GR e GNR, destacando-se a presença de uma proteína a 6,5 kDa apenas no grupo GNR mostrando esta
proteína potencial para ser utilizada como marcadora do GNR. Os resultados se mostram bastante promissores
pois abrem perspectiva para identificação de proteínas e ou peptídios relacionados com a recalcitrância dos
genótipos, podendo posteriormente serem utilizados como sondas para facilitar os trabalhos de transformação
genética de algodão.
APOIO
Embrapa Algodão, Capes
85
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
PROTEÔMICA DE CANA-DE-AÇÚCAR SUBMETIDA A ESTRESSE FOTOOXIDATIVO E SECA VIA
2D-PAGE/MS
Fabiana Aparecida Cavalcante Silva1; Amanda Emanuella Rocha de Souza1; Elton Pedro Nunes Pena2; Tercilio
Calsa Junior1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, UFPE; (2)Laboratório de
Genômica e Proteômica de Plantas (UFPE); Mestrando do Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e
Molecular Aplicada (UPE)
RESUMO
A cana de açúcar (Saccharum spp.) é uma cultura de importância econômica mundial. Seca e alta incidência de
radiação UVA/UVB (280-320 nm) são fatores limitantes da produção vegetal, ocasionando grandes perdas de
produtividade de culturas economicamente importantes. Quando associados estes fatores causam inibição da
fotossíntese, danos ao material genético e alterações morfológicas e fenológicas, interferindo no acúmulo de
biomassa e, consequentemente, na produção de etanol. Este estudo tem como objetivo identificar proteínas
diferencialmente expressas em folhas de cana-de-açúcar (acesso RB92579), sob déficit hídrico, com níveis
elevados (Tratamento A) ou baixos (Tratamento B) de radiação UVA/UVB. Proteínas totais de cada tratamento
foram extraídas em triplicata através do método ADP (Pirovani et al., 2008), baseado em ácido tricloacético, em
associação com o método de limpeza SDS-fenol (Wang et al., 2003) e, em seguida, as amostras foram
quantificadas utilizando o Kit Quant-2D (GE Life Sciences). As amostras foram submetidas a eletroforese
bidimensional em gel SDS-PAGE 12,5%. A digitalização dos géis foi realizada em scanner de transparência
Image Scanner III, e as imagens foram analisadas nos programas LabScan e Image Master 2D Platinum v.7.05
(GE Life Sciences) possibilitando a identificação de proteínas diferencialmente expressas (DEPs). As DEPs foram
excisadas dos géis, submetidos a uma digestão tríptica e enviados para espectrometria de massas para identificação
presumível em analisador AutoFlex III ToF/ToF (Bruker Daltonics, Bremen, Alemanha), baseado na ionização por
dessorção a laser assistida por matriz (MALDI/ToF). Foram identificados uma média de 300 peptídeos por gel dos
quais 48 diferencialmente expressos sendo 20 exclusivos no tratamento alta UVB e 28 encontrados no tratamento
baixa UVB. Foram identificados peptídeos envolvidos no metabolismo de carboidratos/proteínas, proteínas
relacionadas com o crescimento e defesa/proteção. A identificação de marcadores proteômicos na cana-de-açúcar
fornece informações ao nível molecular e é uma ferramenta poderosa no melhoramento genético da cultura
canavieira.
APOIO
CNPq
86
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
RELATIVE EXPRESSION OF CRY10 IN GM COTTON LINES RESISTANT TO BOLL WEEVIL
Roseane Cavalcanti dos Santos1; Carliane Rebeca Coelho da Silva2; Taiza da Cunha Soares2; Jose Jaime
Vasconcelos Cavalcanti1; Liziane Maria de Lima1; Érica Soares Martins3; Rose Monnerat3.
E-mail: [email protected]
(1)
Embrapa Algodão; (2)Renorbio, UFRPE; (3)Embrapa Cenargen
RESUMO
Boll weevil (Anthonomus grandis) is a serious pest of cotton crop in several parts of world. The control is done by
synthetic pesticides that increase the management costs. Embrapa coordinates an important research involving
development of GM cotton resistant to boll weevil, by genetic transformation. Seven line (T0-8H) containing a Btcry 10 have been identified by feeding bioassays and ELISA, which showed reasonable toxicity against adult boll
weevils. In this work, these lines were used in order to estimate the presence and relative expression of cry 10 by
PCR and RT-qPCR, respectively, from young buds of 50d-plants. RT-qPCR assays were performed, by using
Syber Green Rox Plus Master Mix 2X (LGC). Three endogenous cotton gene (GhACT, GhUBQ14 and GhPP2A)
were used as a standard control. At first, 95°C/15 min and 40 cycles of 95°C/ 20 sec, 60°C/ 20 sec and 72°C/ 20
sec. Then, a curve of denaturation (melting curve) was performed after conclusion of amplification, at 95°C/15
sec, 60°C/15 sec, rising 2°/min until reaching 95°C. All reactions were carried out with experimental and
biological replications. The threshold cycle (Ct) and PCR efficiency was estimated by Real-time PCR Miner
program. The analyses were performed by using qBASEPlus program. Graphics, Cqs and Melt curve were
automatically generated, based on the normalization method with a reference gene, ΔΔCq. Varied levels of
expression were found in GM lines, too low in 8H-269 and 8H-357, mid in 8H-282 and 8H-346 and high in 8H336 (14x). These data agreed with previous results obtained by ELISA assays. Eleven lines derivate from 8H-336
(T1) were analyzed by PCR assays with genomic DNA, using 2 primer combinations. More than 50% showed
amplicons confirming the presence of gene in selected lines. Taking in account that a reasonable level of resistance
should overcoming 2 ug of protein/g tissue, we suggested that 8H-366 is the best genotype for control the cotton
boll weevil. This material will be further advanced for entomological assays with larvae and adults of boll weevil.
APOIO
Embrapa, CNPq, CAPES.
87
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
SELEÇÃO DE PRIMERS DE ISSR PARA A CARACTERIZAÇÃO DA DIVERSIDADE GENÉTICA DE
ACESSOS DE FEIJÃO-CAUPI [VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP.]
Karla Pereira da Silva1; Katiane da Rosa Gomes da Silva2; Amaro de Castro Lira Neto2; Antonio Félix da Costa2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco - URPPE, Recife, PE; (2)Instituto Agronômico de Pernambuco IPA, Recife, PE
RESUMO
O feijão-caupi possui grande importância socioeconômica, pois ajuda a suprir as necessidades nutricionais das
populações mais pobres. No Brasil, este feijão é cultivado principalmente nas regiões Norte e Nordeste, devido às
suas adaptações ao clima tropical. No entanto o seu cultivo ainda é caracterizado pelo emprego de baixa tecnologia
e a utilização de sementes de qualidade inferior, refletindo, desta forma, numa menor produtividade. Este fato
pode estar relacionado com o pequeno número de cultivares melhoradas, quando comparado com outras culturas
anuais no país. Assim, é clara a necessidade do fortalecimento de programas de melhoramento genético que
possibilitem ao agricultor familiar o acesso a cultivares produtivas, adaptáveis e estáveis para o cultivo. Os
marcadores moleculares contribuem para acelerar os estudos de diversidade genética e na obtenção de novas
cultivares, funcionando como ferramenta indispensável ao melhoramento genético vegetal. A extração de DNA
genômico foi conduzida mediante a aplicação do protocolo de CTAB 2%. A seleção dos melhores iniciadores foi
realizada com sete primers de ISSR (Inter Simple Sequence Repeats). Para os testes, foram utilizados dez
indivíduos representantes de dez acessos distintos: Arcoverde 1, Arcoverde 2, Arcoverde 4, Arcoverde 5,
Arcoverde 6, Arcoverde 7, Arcoverde 8, Canapu Verdadeiro, Canapu PE, Canapuzinho. A eficácia dos iniciadores
ISSR na estimativa da variabilidade genética foi avaliada pelos índices de informatividade (Conteúdo de
Informação Polimórfica-PIC; Índice do Marcador-MI; Poder de Resolução-RP) e diversidade genética (DG).
Também foram levados em consideração o número e a distribuição dos loci. O sistema representado por sete
primers gerou um total de 663 fragmentos com uma média de 63,3 por acesso. O número total de loci foi 79, com
média de 11,286 por primer, dos quais 60,76% foram polimórficos. Pode-se observar moderados a elevados
valores de diversidade genética com variação que vai de 30,77% (UBC881) até 82,35% (UBC890). Os menores
valores foram encontrados para o primer UBC881 (DG, PIC, e MI). Este resultado está relacionado com a baixa
diversidade genética encontrada neste marcador (UBC881). No entanto, o UBC836 foi o que apresentou o menor
RP, devido à quantidade reduzida de fragmentos gerados. Para todos os índices de informatividade o iniciador com
os maiores valores foi o UBC890. Pode-se relacionar este resultado ao número de bandas totais e ao número de
bandas polimórficas.
APOIO
Facepe-CNPq
88
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
SELEÇÃO DE CANDIDATOS A GENES REFERÊNCIA PARA ESTUDOS DE EXPRESSÃO GÊNICA
EM STYLOSANTHES SCABRA
Flávia Tadeu de Araújo1; Valesca Pandolfi1; José Ribamar Costa Ferreira Neto1; Rômulo Fonseca dos Santos1;
Carolina Vianna Morgante2; Natoniel Franklin de Melo2; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal - Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE; (2)Embrapa
Semiárido, BR-428, Km 152, Petrolina, PE
RESUMO
Stylosanthes scabra é uma importante leguminosa amplamente empregada como forrageira. Por apresentar
características de tolerância à seca e adaptação a solos com baixa fertilidade, destaca-se como uma espécie de
grande interesse em análises de expressão de genes responsivos ao déficit hídrico. Nesse contexto, a PCR
quantitativa em tempo real (RT-qPCR) tem mostrado ser uma eficiente técnica para validação da expressão de
genes diferencialmente expressos sob determinadas condições fisiológicas, tecido-específicos ou relacionados ao
tempo cronológico após o estresse. Esse trabalho teve como objetivo selecionar e testar um conjunto de genes com
potencial uso como candidatos a genes de referencia (responsáveis pela normalização das populações de
transcritos nas distintas situações estudadas) a serem utilizados para a validação da expressão via RT-qPCR de
experimentos de RNA-Seq de S. scabra mediante déficit hídrico. Seis pares de primers (que ancoram em
transcritos codificadores de proteínas envolvidas em processos celulares basais) foram desenhados para amendoim
(Arachis hypogaea), enquanto para soja (Glycine max) foram desenhados 11 pares. Esse conjunto de primers foi
testado via PCR convencional usando como template cDNAs sintetizados a partir de RNA total de folhas e raízes
de S. scabra. Dos 17 primers testados, 29,4% (ADH3, 60s, ELF1B, G6PD, RHA1) apresentaram funcionalidade e
especificidade em ambos os tecidos analisados. Quando comparados os tipos de tecidos, foi verificado que 53%
dos primers foram funcionais no tecido radicular, ao passo que 35,3% dos primers amplificaram somente no
tecido foliar. O maior índice de transferabilidade foi obtido a partir de pares de primers desenhados para
sequências de amendoim (83,3%), contra os 45,4% dos pares de primers desenhados para soja. Tal fato pode estar
associado à maior sintonia entre S. scabra com o amendoim, uma vez que essas espécies apresentam-se
filogeneticamente mais próximas comparativamente à soja. Devido à importância de S. scabra como fonte de
genes importantes na tolerância a seca e, por ainda não existirem informações sobre a espécie em bancos de dados
públicos, os resultados obtidos neste estudo representam um valioso conjunto de genes para uso em RT-qPCR
como candidatos a genes de referência para análises de expressão de S. scabra em resposta ao déficit hídrico.
APOIO
CAPES, CNPq.
89
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular
SELEÇÃO DE GENES CANDIDATOS ASSOCIADOS À RESISTÊNCIA AO VÍRUS DO MOSAICO
SEVERO EM FEIJÃO-CAUPI
Ayug Bezerra Lemos1; Roberta Lane de Oliveira Silva1; Mitalle Karen da Silva Matos1; Flávia Tadeu de Araújo1;
Marianne Firmino de Oliveira1; Mireli de Santana Rêgo1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.], está entre as culturas mais importantes do Norte e Nordeste, tanto
no aspecto econômico quanto nutricional. O ataque de agentes patogênicos, especialmente o vírus do mosaico
severo (CPSMV, Cowpea Severe Mosaic Virus) tem gerado perdas significativas na cultura devido às dificuldades
de controle e forma de disseminação da doença, acarretando perdas no seu rendimento e qualidade dos grãos. O
objetivo do presente trabalho foi selecionar primers para a amplificação de análogos a genes de resistência e
fatores de transcrição da família MYB em acessos (IT85F-2687 e BR14-Mulato) de feijão-caupi contrastantes
quanto à resistência ao CPSMV. Diante disso, foi realizada a extração do RNA total do tecido foliar utilizando o
Kit "SV Total RNA Isolation System" (Promega), de acordo com instruções do fabricante. A verificação da
integridade do RNA extraído foi feita por eletroforese em gel de agarose 1,5%, em corrida a 60 V por 90 minutos.
Em seguida, as amostras foram quantificadas em fluorímetro Qubit e os RNAs purificados foram convertidos em
cDNAs usando o Kit QuantiTect Reverse Transcription (Qiagen®) seguindo as recomendações do fabricante. Os
primers utilizados na análise foram desenvolvidos por meio do programa Primer3Plus, seguindo os seguintes
parâmetros: conteúdo de GC 50%, tamanho do fragmento entre 70 e 200 pb, temperatura de Melting entre 40 e 60°
e junção exon-exon. As reações foram realizadas seguindo condições descritas na literatura, com temperatura de
anelamento de 58° C. Os produtos da PCR foram submetidos à eletroforese em gel de agarose 1,5 %, corado com
Blue-Green Loading Dye (LGC Biotecnologia). Dos 36 pares de primers testados, 15 (41,66 %) apresentaram
resultados positivos exibindo bandas nítidas no gel. Desse total, 13 (36,11 %) amplificaram de acordo com o
esperado (entre 100 e 200 pb) e dois (5,55 %) apresentaram bandas inespecíficas acima de 250 pb. Os resultados
obtidos contribuem para futuros testes de validação em PCR em tempo real (RT-qPCR), bem como para
confirmação dos dados in silico observados nas bibliotecas de RNA-Seq geradas pelo grupo e poderão
disponibilizar novas informações para os programas de melhoramento genético da espécie.
APOIO
CNPq; CAPES; Facepe.
90
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
TOXICIDADE DA PROTEÍNA CRY1IA EM EVENTOS DE ALGODÃO GM CONTRA A SPODOPTERA
FRUGIPERDA
Rosa Maria Mendes Freire1; Marilia de Macedo Freire Duarte2; Luana Camilla Cordeiro Braz3; Misael Mendes
Soares4; Liziane Maria de Lima1; Maria Auxiliadora Lemos Barros1; Terezinha Fernandes Duarte1; Eduardo
Domingos Vasconcelos1; Roseane Cavalcanti dos Santos1.
E-mail: [email protected]
(1)
Embrapa Algodão; (2)UEPB; (3)UFCG; (4)UFPB
RESUMO
Insetos lepdópteros são danosos a várias lavouras devido ao ciclo curto de reprodução e alimentação de qualquer
tecido da planta. A lagarta militar (Spodoptera frugiperda) é uma das mais sérias porque ataca várias lavouras e se
alimenta de ciclo de apenas 30 dias. O controle é feito com inseticidas sintéticos. O algodão, uma grande
commodity de ciclo longo (150-160 dias) tem predisposição a reincidentes ataques da lagarta. Vários
cotonicultores têm adotado cultivares de algodão GM, com resistência a lepidópteros, com vistas a minimizar os
custos de produção. A equipe de Biotecnologia da Embrapa Algodão desenvolveu um evento de algodão GM
contendo um gene Bt (cry1Ia), com resistência a lagarta militar, por meio de transformação direta. Em ensaios
prévios com a população T1 selecionada, cinco eventos foram avançados em ensaios moleculares e ELISA, por
apresentarem alta taxa de mortalidade de larvas e concentração da proteína acima de 2 µg/g de tecido. Trinta
sementes T2 de cada população foram cultivadas em casa de vegetação para estimar a estabilidade dos materiais
para posterior avanço nos trabalhos de melhoramento. As plantas foram cultivadas em fileiras, previamente
fertilizadas e regadas diariamente. A partir da floração (50-55 dae), tiveram início os bioensaios de alimentação,
usando larvas de 2º e 3º instars em placas de 24 poços. Adicionalmente, foram conduzidos ensaios de alimentação
em placas de petri contendo dieta artificial e folhas liofilizadas (2 mg de tecido/mL de dieta). Todos os ensaios
foram conduzidos em BOD, em 5 repetições. Em todas as populações analisadas, a média de mortalidade das
larvas situou-se entre 55-65%, com redução de toxicidade de 33 a 44% da população T1 (média de mortalidade de
91%). Em campo, utilizando-se culturas comerciais da Bollgard I, produtores de MT e GO têm registrado redução
da toxicidade da Cry1Ia na faixa de 30%, o que tem levado a adotar, adicionalmente, o controle químico para
minimizar os danos na lavoura. Esse achado coincide com o encontrado na literatura, sendo justificado pela
variabilidade natural imputada à lagarta militar, advinda de adaptação natural e/ou induzida, considerando-se a
maquinaria endógena dos insetos para tolerar pesticidas naturais ou sintéticos, durante seu ciclo de evolução.
APOIO
Embrapa, Capes, Cnpq
91
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ADAPTABILIDADE E ESTABILIDADE DE HÍBRIDOS DE MELÃO CANTALOUPE NO AGROPOLO
MOSSORÓ-AÇU
Francisco Linco de Souza Tomaz1; Elaíne Welk Lopes Pereira Nunes1; José Maria da Costa1; Anânkia de
Oliveira Ricarte1; Ana Carolina de Assis Dantas2; Isabel Macedo Guimarães1; Juliana Maria Costa da Silva1;
Fernando Antônio Souza de Aragão3; João Cândido de Souza4; Glauber Henrique de Sousa Nunes1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural do Semi Árido; (2)Campus São Raimundo das Mangabeiras; (3)Embrapa
Agroindústria Tropical; (4)Universidade Federal de Lavras
RESUMO
O presente trabalho teve como objetivo realizar a avaliação genotípica de três grupos de híbridos de melão do Tipo
Cantaloupe no Estado do Rio Grande do Norte no período de 2010 a 2015. O delineamento experimental utilizado
em todos os experimentos foi o de blocos completos casualizados com três repetições. Os caracteres avaliados
foram produtividade e teor de sólidos solúveis. Os parâmetros genéticos foram estimados pela metodologia
REML/BLUP, e a seleção dos genótipos baseou-se no método da média harmônica da performance relativa dos
valores genéticos (MHPRVG), a partir do contexto de modelos mistos. Verificou-se interação genótipos x
ambientes para as duas variáveis em todos os grupos de híbridos avaliados, indicando comportamento diferencial
dos híbridos em função das condições ambientais. Observou-se baixa correlação genotípica nos diferentes
ambientes (< 0,13) para as duas características, indicando predomínio da parte complexa da interação (63%) e, por
consequência maior dificuldade no processo seletivo. De acordo com o agrupamento de estabilidade,
adaptabilidade e produtividade, os híbridos HC-02, HC-10 e HC-12 foram responsivos com estimativas de
MHPRVG superior 1,20 vezes ao ambiente no qual forem plantados. Os referidos híbridos destacaram-se como
promissores para o cultivo no Agropolo Mossoró-Açu na época seca (julho a dezembro) em razão da elevada
produtividade (> 27 mg ha-1) e alto teor de sólidos solúveis (>10%).
APOIO
UFERSA e CNPq.
92
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ADAPTABILIDADE E ESTABILIDADE PARA FERRO, ZINCO E PRODUÇÃO DE GRÃOS EM
LINHAGENS DE FEIJÃO-CAUPI DE PORTE ERETO
Danillo Olegario Matos da Silva1; Carlos Antonio Fernandes Santos2; Sirando Lima Seido3; Rejanildo Robson
Cândido de Sousa1; Washington Carvalho Pacheco Coelho1; Deisy Aiane Lima de Aquino3; Jamille Cardeal da
Silva4.
E-mail: [email protected]
(1)
Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais - Universidade Estadual de Feira de Santana, BA; (2)Embrapa
Semiárido; (3)Pós-graduação Universidade Federal Rural de Pernambuco; (4)Universidade de Pernambuco Campus Petrolina
RESUMO
O feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.) é uma leguminosa cultivada em várias partes do mundo. Nas
regiões semiáridas tem sido um dos alimentos mais consumidos, fornecendo nutrientes importantes como proteína
e minerais. A biofortificação de feijão-caupi com elevados teores de Fe e Zn é de relevante importância em
programas de melhoramento que visam à obtenção de grãos com maior conteúdo nutricional. O presente trabalho
teve como objetivo estimar parâmetros de adaptabilidade e estabilidade da produção de grãos e minerais em
linhagens de feijão-caupi para possibilitar a recomendação e registro de novas cultivares para região do semiárido
brasileiro. Vinte e um genótipos foram avaliados em sete ambientes irrigados ou dependentes de chuvas, em
delineamentos de blocos casualizados, com três repetições. Sementes de 147 amostras foram trituradas e
analisadas em duplicatas, de acordo com procedimento padrão da AOAC, utilizando espectrofotômetro de
absorção atômica de chama. Os resultados foram expressos em mg.kg-1 para Fe e Zn de matéria seca dos grãos. A
produção de grãos foi corrigida pelo método da covariância com o stand médio de plantas das parcelas do
experimento. Aplicou-se o teste de médias de Scott e Knott a 5% de significância. As avaliações de adaptabilidade
e estabilidade dos genótipos foram realizadas utilizando os métodos de Eberhart e Russell e de Lin e Binns,
disponíveis no programa Genes. Foram observadas diferenças estatísticas significativas dos quadrados médios de
genótipos, dos ambientes e das interações genótipos x ambientes para os três caracteres. As linhagens que
apresentaram os maiores teores de Fe e Zn apresentaram produção de grãos abaixo da média geral. Os métodos de
Eberhart e Russell e Lin e Binns apresentaram resultados semelhantes quanto à seleção de genótipos superiores. A
linhagem C2J apresentou produção de grãos igual à média geral de 1.030 kg ha-1 do experimento, com valores
médios de Fe e Zn superiores aos valores das cultivares avaliadas, bem como estabilidade ampla e boa
previsibilidade na série de ambientes avaliados, tendo grande potencial para ser recomendada como nova cultivar
para a região do Vale do São Francisco.
APOIO
CNPq
93
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ADAPTABILIDADE E ESTABILIDADE PARA POTÁSSIO, CÁLCIO E PRODUÇÃO DE GRÃOS EM
LINHAGENS DE FEIJÃO-CAUPI DE PORTE ERETO
Danillo Olegario Matos da Silva1; Carlos Antonio Fernandes Santos2; Sirando Lima Seido3; Rejanildo Robson
Cândido de Sousa1; Washington Carvalho Pacheco Coelho1; Deisy Aiane Lima de Aquino3; Jamille Cardeal da
Silva4.
E-mail: [email protected]
(1)
Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais - Universidade Estadual de Feira de Santana, BA; (2)Embrapa
Semiárido; (3)Pós-graduação Universidade Federal Rural de Pernambuco; (4)Universidade de Pernambuco Campus Petrolina
RESUMO
O feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.) é uma leguminosa cultivada em várias partes do mundo, e em
regiões semiáridas é um dos alimentos mais consumido, fornecendo nutrientes importantes como proteína e
minerais. A seleção e recomendação de cultivares de feijão-caupi é de relevante importância em programas de
melhoramento que visam grãos com maior conteúdo nutricional. O presente trabalho teve como objetivo estimar
parâmetros de adaptabilidade e estabilidade da produção de grãos e minerais em linhagens de feijão-caupi, para
possibilitar a recomendação e registro de novas cultivares para região do semiárido brasileiro. Vinte e um
genótipos foram avaliados em sete ambientes irrigados ou dependentes de chuvas, em delineamentos de blocos
casualizados, com três repetições. Sementes de 441 amostras foram trituradas e analisadas em duplicatas, de
acordo com procedimento padrão da AOAC, utilizando espectrofotômetro de absorção atômica de chama. Os
resultados foram expressos em g kg-1 para K e Ca de matéria seca dos grãos. A produção de grãos foi corrigida
pelo método da covariância com o stand médio de plantas das parcelas do experimento. Aplicou-se o teste de
médias de Scott e Knott a 5% de probabilidade. As avaliações de adaptabilidade e estabilidade dos genótipos
foram realizadas utilizando os métodos de Eberhart e Russell e de Lin e Binns, disponíveis no programa Genes.
Foram observadas diferenças estatísticas significativas dos quadrados médios de tratamentos, dos ambientes e das
interações genótipos x ambientes para as três variáveis. Os métodos de Eberhart e Russell e Lin e Binns
apresentaram resultados semelhantes quanto à seleção de materiais superiores. A linhagem C3O apresentou
produção superior à média geral de 1.030 kg ha-1 do experimento, com valores médios de K e Ca superiores aos
valores das cultivares avaliadas, bem como estabilidade ampla e boa previsibilidade na série de ambientes
avaliados, tendo grande potencial para ser recomenda como nova cultivar para a região do Vale do São Francisco.
APOIO
CNPq
94
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ADAPTABILIDADE E ESTABILIDADE PARA PRODUÇÃO DE VAGEM VERDE DE FEIJÃO-CAUPI
(VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP.)
Deisy Aiane Lima de Aquino1; Carlos Antonio Fernandes Santos2; Danilo Olegario Matos da Silva3; Sirando
Lima Seido1; Rejanildo Robson Candido Sousa3; Washington Carvalho Pacheco Coelho3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE/PPGMP, Recife-PE. Brasil; (2)Embrapa Semiárido,
Petrolina-PE, Brasil; (3)Estadual de Feira de Santana, UEFS/PPGRGV, Feira de Santana-BA. Brasil
RESUMO
A literatura apresenta muitos estudos de genótipos de feijão-caupi com ampla adaptabilidade e estabilidade para
produção de grão seco. Porém, a produção de grão e vagem verde é realizada de forma independente pelos
agricultores, sem estudos que indiquem qual a melhor cultivar para esse mercado, levando em consideração as
preferências regionais. O objetivo do presente trabalho foi estimar parâmetros de adaptabilidade e estabilidade em
acessos de feijão-caupi para produção de grão e vagem verde, de forma a permitir a recomendação de cultivares
para a região do vale do Rio São Francisco. Foram avaliados 30 genótipos de feijão-caupi, sendo quatorze
linhagens da Embrapa, seis cultivares comerciais e dez variedades locais coletadas de agricultores dos municípios
de Juazeiro-BA e Petrolina-PE. Os experimentos foram conduzidos no segundo semestre, nos anos de 2013, 2014
e 2015, nos campos experimentais de Bebedouro, Petrolina-PE, e de Mandacaru, Juazeiro-BA, totalizando seis
ambientes. O delineamento adotado foi de blocos casualizados, com três repetições, em parcela com área total de 6
m2. O espaçamento adotado entre plantas foi de 1,0 m x 0,1 m, correspondendo à densidade populacional de
100.000 plantas/ha. Para a análise de adaptabilidade e estabilidade, utilizou-se o método de efeitos principais
aditivos e interação multiplicativa (AMMI) baseado em componentes principais. Na análise de variância conjunta,
observou-se diferença estatística significativa pelo teste F (P<0,01) para os efeitos de ambientes (A), genótipos (G)
e interação GxA. Utilizando o método multivariado AMMI, a interação GxA foi decomposta em cinco
componentes principais da interação (CPI) para produção de vagem verde. Porém, apenas o primeiro eixo (CPI1)
teve seu resíduo significativo pelo teste F (p<0,01). A interpretação gráfica da adaptabilidade e da estabilidade foi
realizada apenas com o CPI1, via biplot AMMI1. O primeiro componente principal da interação explicou 43,49%
para produção de vagem verde. O ambiente Mandacarú13 foi o que apresentou a maior produção de vagem verde
durante os três anos avaliados. Os genótipos P-209, P-303, P-508 e PC950409D02E apresentaram alta produção e
boa estabilidade, apresentando maior potencial para recomendação de cultivo para produção de grãos verdes de
feijão-caupi.
APOIO
Ao CNPq e a FACEPE
95
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ADAPTABILIDADE, ESTABILIDADE E TOLERÂNCIA DE ACESSOS DE MELOEIRO À
SALINIDADE
Antonia Eliziana Augusta da Silva1; Alex Rodrigues Ferreira1; Elaíne Welk Lopes Pereira Nunes1; Cheyla
Magdala de Sousa Linhares1; José Maria da Costa1; Anânkia de Oliveira Ricarte1; Adriano Ferreira Martins1;
Francisco Lincon1; José Francismar de Medeiros1; Glauber Henrique de Sousa Nunes1.
E-mail: [email protected]
(1)
Elizenir Alves
RESUMO
O objetivo do presente trabalho foi verificar a adaptabilidade e estabilidade de acessos de meloeiro à salinidade.
Foram avaliados 13 acessos e três híbridos simples em quatro condições salinas em blocos completos casualizados
com três repetições sendo a parcela constituída por uma linha de oito plantas no espaçamento 2,0 x 0,4 m. Os
ambientes se diferenciaram quanto à condutividade elétrica da água de irrigação, sendo definidos quatro níveis
salinos (S1: 0,91 dS m-1,S2: 2,14, dS m -1, S3: 2,90 dS m-1 e S4: 3,92 dS m-1). As variáveis analisadas foram: peso
médio do fruto, número de frutos, produtividade, espessura da polpa, firmeza da polpa e sólidos solúveis. Utilizouse a metodologia multivariada GGE Biplot para identificar os genótipos adaptados e estáveis. Também se utilizou
o índice de eficiência de produção para classificar os acessos quanto à tolerância à salinidade. Para todas as
variáveis, verificou-se que o modelo GGE Biplot com dois eixos, explicou mais de 90% da variação GGE
(genótipo + interação genótipo x ambiente). Observou-se diferenças genotípicas quanto à adaptabilidade e
estabilidade, com destaque para os acessos/cultivares A-29, A-50, A-13, A-14, A-39, (LPS-12 Pele de Sapo), Najd
I e A-7, considerados adaptáveis e estáveis à salinidade com escores reduzidos no gráfico GGE Biplot. Utilizou-se
o índice de eficiência de produção de frutos para classificar os genótipos quanto à tolerância à salinidade.
Conforme esse critério, genótipos com valores inferiores a 0,5 são classificados como sensíveis à salinidade. Nesta
classe estão os acessos A-8, A-16 e os híbridos Iracema, Olimpic e Noy Israel. Os acessos A-06, A-10 e A-27,
com índices entre 0,5 e 1,0, foram classificados como moderadamente tolerantes. Os referidos genótipos das duas
classes possuem características como prolificidade, espessura da polpa e firmeza da polpa e são promissores para
utilização em programas de melhoramento genético ou como porta-enxertos para cultivo em condições de
salinidade elevada.
APOIO
Ufersa; Capes
96
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ANÁLISE DA VIABILIDADE POLÍNICA DO GERGELIM (SESAMUM INDICUM L.) A PARTIR DA
VARIAÇÃO DO HORÁRIO DE COLETA
Hirisleide Bezerra Alves1; José Genilson Ribeiro Junior1; Nair Helena Castro Arriel2; Julita Maria Frota Chagas
Carvalho1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Cultivo de Tecido, Embrapa Algodão, Campina Grande, PB; (2)Embrapa Algodão, Campina
Grande, PB
RESUMO
O gergelim (Sesamum indicum L.), pertencente à família das Pedaliaceae, corresponde a uma das oleaginosas mais
importantes no cenário brasileiro devido ao seu potencial econômico, visto que suas sementes possuem cerca de
50% de óleo de ótima qualidade, o qual pode ser usado na indústria alimentar, química e farmacêutica. A demanda
pelo gergelim, por parte dos produtores, gera a necessidade de que sejam identificadas cultivares com alto
rendimento e teor de óleo, a fim de expandir o cultivo com ênfase na fertilidade das mesmas. Nesse contexto, a
análise da viabilidade dos grãos de pólen é imprescindível à obtenção de informações acerca da fertilidade das
cultivares, permitindo avaliar a probabilidade de ocorrer a formação de distintas combinações entre os alelos à
medida que aumenta a viabilidade polínica, denotando o grau de variabilidade genética e o consequente potencial
de reprodução de uma população. Objetivou-se por meio deste trabalho analisar a viabilidade polínica do gergelim
com ênfase na variação do horário de coleta a fim de determinar a relação entre viabilidade dos grãos de pólen x
horário de coleta. No presente trabalho foram utilizados dois acessos de gergelim (BRS ANAHI e BRS SEDA) ,
cuja análise da viabilidade polínica foi realizada mediante coloração com corante Cloreto 2,3,5-Trifenil Tetrazólio
(CTT) a 1%, considerando-se viáveis os grãos que adquiriram coloração marrom-avermelhada, com exina intacta e
protoplasma bem corado. Os botões florais foram coletados a cada uma hora no intervalo das 07:30 às 15:30
horas, realizando-se a análise a partir contabilização de 100 grãos de pólen/lâmina/genótipo com três repetições,
perfazendo 300 grãos de pólen de cada genótipo por hora. Os acessos BRS ANAHI e BRS SEDA apresentaram
viabilidades polínicas de 80% e 72%, respectivamente, considerando todo o período de análise. As taxas de
viabilidade foram maiores no intervalo de 10:30 às 12:30 horas, para ambos os genótipos, denotando percentual
correspondente a 79% (BRS ANAHI) e 70% (BRS SEDA), no horário supracitado, observando-se decréscimo
relevante a partir das 14:30 horas, denotando percentual de viabilidade 20% inferior. Os resultados obtidos
elucidam a alta viabilidade dos grãos de pólen dos acessos analisados, verificando-se redução dos índices a partir
da extensão do horário de coleta, enfatizando a influência deste fator abiótico sobre a viabilidade.
97
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ANÁLISE DE DIFERENTES PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS SOLÚVEIS
DE FOLHAS DE ALGODOEIRO COLORIDO
Geisenilma Maria Gonçalves da Rocha1; Melquisedec de Sousa Oliveira1; Elton Pedro Nunes Pena2; Fabiana
Aparecida Cavalcante Silva1; Liziane Maria de Lima3; Roseane Cavalcanti dos Santos3; Tercilio Calsa Junior1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, Centro de Biociências,
Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife, PE; (2)Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas,
Departamento de Genética, Centro de Biociências, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife, PE;
Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de Pernambuco, UPE, Recife, PE; (3)Centro Nacional de Pesquisa
do Algodão, Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, Campina Grande, PB
RESUMO
Algodão colorido é uma cultura que apresenta fibras curtas de coloração natural e hipoalergênica, de cultivo em
sistema agroecológico no modelo de agricultura familiar. Para esta cultura, há poucas informações sobre os
mecanismos de expressão gênica em condições de estresses bióticos e abióticos. Portanto, análises destes
mecanismos por diferentes ferramentas moleculares podem contribuir para o melhoramento do algodão colorido.
Dentre estas ferramentas, destaca-se a análise proteômica que contribui para caracterizar quali e quantitativamente
o proteoma diferencial. A etapa primordial para esta análise é a extração de proteínas solúveis totais. Objetivou-se
com este trabalho selecionar um método para extração de proteínas solúveis de duas cultivares de algodão
naturalmente colorido (BRS Rubi e BRS Verde), visando a análise proteômica. O material vegetal (folhas) foi
macerado em N2 líquido e submetido a quatro métodos de extração: (I) Fenol - tampão (EDTA 0,05 M; Tris-HCl
0,5 M pH 7,5; sacarose 0,7 M; β-mercaptoetanol 2%; PMSF 0,002 M; KCl 0,1 M), fenol saturado, metanol
contendo acetato de amônio (0,1 M) e lavagens com acetona a 80%; (II) Fenol/SDS - método I seguido de uma
etapa de limpeza em tampão SDS denso (Sacarose 30%; SDS 2%, Tris-HCl 0,1 M pH 8,0; β-mercaptoetanol 5%),
fenol saturado, metanol contendo acetato de amônio (0,1 M) e lavagens com acetona (80%); (III) TCA precipitação das proteínas com TCA/acetona (10%), seguido de lavagens com acetona (80%); (IV)
TCA/Fenol/SDS - método III (TCA) seguido do método II (limpeza com tampão SDS denso). Por fim todos os
extratos protéicos foram solubilizados em tampão de ressuspensão (uréia 7 M e tiouréia 2 M). As amostras foram
quantificadas pelo método de Bradford e separados em gel SDS-PAGE 1D (12,5%). Dentre os métodos testados,
destacou-se o IV por promover maior integridade das proteínas para as duas cultivares e um rendimento proteico
de 713,1 µg/g para BRS Rubi e 589,2 µg/g para BRS Verde. O método III também promoveu um bom rendimento
proteico de 702,0 µg/g e 731,4 µg/g, respectivamente, para BRS Rubi e BRS Verde, porém não preservou muito a
integridade das proteínas como foi observado em gel SDS-PAGE. Sendo assim, o método IV é o mais
recomendando para a cultura do algodão naturalmente colorido, uma vez que a obtenção de proteínas íntegras é
fundamental para as etapas posteriores de eletroforese bidimensional e espectrometria de massas.
APOIO
Embrapa Algodão, UFPE, RENORBIO.
98
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ANÁLISE DIALÉLICA PARA PRECOCIDADE EM GENÓTIPOS DE ALGODOEIRO HERBÁCEO
Damião Raniere Queiroz1; Francisco José Correia Farias2; José Jaime Cavalcante Vasconcelos2; Luiz Paulo de
Carvalho2; Lucas da Silva Santos de Souza3; José Henrique de Assunção2.
E-mail: [email protected]
(1)
UEPB / Embrapa Algodão; (2)Embrapa Algodão; (3)UFPB Areia / Embrapa Algodão
RESUMO
A obtenção de genótipos de algodoeiro de ciclo curto e com rápida maturação tem sido a principal estratégia
utilizada no melhoramento desta malvácea. Visando a convivência com a seca na região semiárida do Nordeste e
a redução dos danos causados pela praga do bicudo do algodoeiro, este trabalho foi realizado com o objetivo de
estimar as capacidades combinatórias CGC e CEC dos genitores e das combinações híbridas e selecionar
genótipos precoces de algodoeiro para a região semiárida do nordeste. Foram realizados cruzamentos entre seis
genótipos de algodoeiro herbáceo no ano de 2014 para a obtenção das sementes híbridas F1's. Os híbridos F1's
foram plantados no ano agrícola de 2015 em Patos - Paraíba, sendo o delineamento utilizado o de blocos ao acaso
com 3 repetições. Foram avaliadas as seguintes características para a precocidade (Aparecimento da primeira flor APF e Aparecimento do primeiro capulho - APC), procedeu-se a análise dialélica balanceada, segundo o modelo I
e o método II de Griffing (1956), em que se estimou a CGC e a CEC dos genitores e dos híbridos. Foram
observados pela análise de variância diferenças significativa a 1% e 5% de probabilidade pelo teste F entre os
genótipos. Para as características agronômicas APF e APC, os genótipos apresentaram as seguintes médias
respectivamente: 43,07 dias e 85,44 dias, seguidos dos seguintes Coeficientes de Variação 3,72% e 1,79%. As
estimativas das capacidades combinatórias revelaram que, de modo geral, a CGC foi mais importante que a CEC,
tanto para APF como para APC, revelando uma maior importância dos efeitos aditivos no controle destas
características. No caso da CGC, o genótipo TAMCOT-CAMD-E obteve a menor estimativa (-2,06 e -3,10) para
APF e APC, sendo indicado para compor populações em que se desejam desenvolver genótipos precoces. As
combinações CNPA 04-2080 x TAMCOT-CAMD-E e FM 993 x CNPA 04-2080 mostraram-se com estimativas
altas e negativas da CEC (-0,70 e -1,09) e genitores com estimativas da CGC negativa, sendo importante para a
determinação da precocidade.
APOIO
Embrapa Algodão.
99
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ANÁLISE FENÉTICA DE SEQUÊNCIAS DE CICLOTÍDEOS ISOLADAS DE MILHO (ZEA MAYS) E
CENTEIO (SECALE CEREALE)
Sheyla Carla Barbosa da Silva Lima1; João Pacífico Bezerra Neto1; Marx Oliveira de Lima1; Ana Maria Benko
Iseppon1; Valesca Pandolfi1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Centro de Ciências Biológicas, Departamento de Genética, Recife, PE,
Brasil.
RESUMO
Os ciclotídeos pertencem a uma classe de peptídeos expressos geralmente em resposta ao ataque de patógenos,
chamados de peptídeos antimicrobianos (AMPs). Esta família de AMPs subdivide-se em duas subfamílias:
bracelete e möbius. Apresentam 28 a 37 resíduos de aminoácidos, sendo seis deles resíduos de cisteína altamente
conservados e envolvidos em três ligações dissulfeto. Dada sua importância para a defesa vegetal frente a
patógenos, neste trabalho foram analisadas quatro sequências de ciclotídeos isoladas em Zea mays e Secale
cereale, ambas da família Poaceae. Foram selecionadas no GenBank/NCBI 15 sequências de ciclotídeos isolados
de diferentes espécies e famílias vegetais, sendo gerado um alinhamento múltiplo através do UGENE, o qual foi
editado no MEGA 6 para uso na análise fenética pelo método de Neighbor-Joining. Os seguintes parâmetros
foram adotados: bootstrap com 1.000 repetições e o modelo p-distance de substituições. Quando realizada a
construção da árvore fenética, o grupamento composto pelas sequências de interesse (Zeamays5, Zeamays6,
Secalecereale7 e Secalecereale9) se manteve agrupado, o que aponta para uma alta similaridade entre as mesmas.
Foi observada a formação de um grupamento entre Steinchisma laxum, Viola baoshanensis e Oldenlandia affinis,
pois estes compartilham resíduos de aminoácidos característicos da subfamília möbius, onde uma prolina antecede
a 6ª cisteína e uma treonina ocorre antes da 3ª cisteína. Outro caráter digno de menção refere-se à existência de
uma tirosina entre a 4ª e 5ª cisteína, como observado na sequência de Hedyotis biflora. Adicionalmente, com
exceção das espécies Viola baoshanensis e Hybantus floribundus, todas as outras espécies pertencentes à família
Violaceae formaram um cluster com todas AMPs agrupadas, indicando similaridade estrutural. Alguns bootstraps
apresentaram valores razoáveis (85 %) de confiabilidade dos clados, mas os grupos basais apresentaram valores
baixos. Em vista da maior conservação apenas das regiões que definem as pontes de cisteína, os resultados obtidos
são esperados, especialmente considerando que AMPs evoluem mais rapidamente que outras proteínas, face à
pressão seletiva patógeno-hospedeiro. Os ciclotídeos candidatos identificados representam interessantes alvos para
futuros estudos envolvendo expressão heteróloga e síntese, com potencial biotecnológico.
APOIO
CAPES, CNPq e FACEPE.
100
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ANÁLISE TRANSCRIPTÔMICA DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO EXPRESSOS SOB ESTRESSE DE
DÉFICIT HÍDRICO EM CANA-DE-AÇÚCAR.
Manassés Daniel da Silva1; George André de Lima Cabral2; Rahisa Helena da Silva3; Jorge Luís Bandeira da
Silva Filho4; Éderson Akio Kido5.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-graduação em Genética - CB - UFPE; (2)RENORBIO - UFPE; (3)Aluna de Graduação em
Ciências Biológicas / Bach - UFPE; (4)Aluno de Graduação em Ciências Biológicas / Bach - UFPE; (5)Professor
Associado do Departamento de Genética - CB - UFPE
RESUMO
Complexos mecanismos regulatórios estão envolvidos na indução e repressão de genes em resposta aos fatores
ambientais. Nesta regulação, interações entre fatores de transcrição (FTs) e elementos cis-regulatórios na região
promotora dos genes são cruciais na expressão gênica. A cana-de-açúcar (Saccharum spp.) é uma cultura de
extrema importância industrial, amplamente cultivada em países tropicais e subtropicais. Nessa cultura, a seca é
um dos estresses ambientais responsáveis por danos significativos à produção. Portanto, a identificação de FTs
expressos em cana-de-açúcar durante o déficit hídrico é importante para o sucesso de estratégias biotecnológicas
que visem uma resposta estresse-específica. Este trabalho almejou identificar o conjunto de fatores de transcrição
diferencialmente expressos na seca (24 h após supressão de rega) em relação ao controle sem estresse, de acessos
tolerantes e sensíveis ao estresse. Para tanto, foram alinhadas, via BLASTn (com no máximo um mismatch), 1.734
sequências nucleotídicas de (FT) de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) do banco de dados GRASSIUS
(www.http://grassius.org), contra transcritos de quatro bibliotecas SuperSAGE (205.975 unitags válidas (26 pb),
geradas de RNAs totais de raízes de um bulk de genótipos sensíveis e outro de tolerantes ao estresse) que
evidenciaram os fatores de transcrição diferencialmente expressos (p-value < 0,05, teste Audic-Claverie). Foi
obtido um total de 2.264 alinhamentos unitag-FT aceitáveis, envolvendo 1.833 unitags em 582 FTs. Os FTs
identificados abrangeram 38 das 41 famílias de FTs disponíveis para a cana-de-açúcar. Dos 582 FTs, 264 foram
diferencialmente expressos, com base nas unitags do pool de acessos tolerantes em relação ao respectivo controle
negativo, sendo 146 induzidos e 118 reprimidos. As famílias mais abundantes foram AP2/EREB (48 transcritos),
bZIP (48), bHLH (38) e ZIM (36). A partir de diagrama de Venn foi possível quantificar transcritos FTs
exclusivamente induzidos (116 FTs contendo apenas unitags induzidas) e reprimidos (88 FTs contendo apenas
unitags reprimidas) nos acessos tolerantes. Esses FTs, expressos em raízes de cana-de-açúcar sob déficit hídrico,
estão sendo validados por RTqPCR e servirão para auxílio de outros ensaios de expressão gênica, bem como são
candidatos naturais para estudos de transgenia.
APOIO
CAPES, FINEP, CNPq
101
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ATIVIDADE ANTIOXIDANTE EM GENÓTIPOS DE ALGODOEIRO SUBMETIDOS A DÉFICIT
HÍDRICO NA FASE INICIAL DE CRESCIMENTO
Vandré Guevara Lyra Batista1; Samara Lima Brito2; Pedro Dantas Fernandes3; Péricles de Albuquerque Melo
Filho4; Roseane Cavalcanti dos Santos5; Liziane Maria de Lima5.
E-mail: [email protected]
(1)
Doutorando/RENORBIO/UFRPE; (2)Mestranda/Ciências Agrárias/UEPB; (3)Doutor/Engenharia Agrícola/UFCG;
(4)
Doutor/Agronomia/UFRPE; (5)Doutora/Laboratório de biotecnologia/EMBRAPA Algodão
RESUMO
Apesar da alta adaptabilidade do algodoeiro a condições adversas, um dos principais fatores para perdas na
produção é o déficit hídrico. Esse tipo de estresse resulta em vários danos às plantas, entre eles, a oxidação celular
causada pelo aumento das espécies reativas de oxigênio (EROs). Como defesa, as plantas utilizam seu sistema
antioxidativo formado por várias enzimas além de metabólitos não enzimáticos. Objetivou-se analisar a atividade
dessas biomoléculas em genótipos sensíveis e tolerantes ao déficit hídrico na fase inicial de crescimento. Quatro
genótipos oriundos do BAG da Embrapa algodão foram investigados, dois considerados sensíveis (Delta Opal e
Precoce 1) e dois tolerantes (Mocó 1 e Mocó 2). O experimento foi conduzido em casa de vegetação localizada na
Embrapa algodão (Campina Grande-PB). As sementes foram plantadas em tubetes (288 mL) preenchidos com
substrato comercial para mudas (BASIPLAN). O delineamento experimental foi em blocos casualizados, em
esquema fatorial 4 x 2, com 4 repetições, sendo testados dois manejos: irrigado e não irrigado. A suspensão da
rega foi iniciada no 13º dia após emergência. As folhas verdadeiras foram coletadas no 3º e 6º dia de estresse
hídrico (DEH) e utilizadas para extração proteica e estudo das enzimas superoxido dismutase (SOD) de acordo
com Giannopolitis e Ries, 1977 e catalase (CAT) de acordo com Sudhakar et al, 2001 e o aminoácido prolina
(PRO) seguiu metodologia descrita por Bates et al, 1973. De acordo com a ANOVA, houve diferença significativa
(p<0,01) para interação genótipo e regime hídrico, indicando que houve influência dos tratamentos nas atividades
da SOD, CAT e PRO. Observou-se um aumento gradativo na atividade dessas biomoléculas em todos os genótipos
à medida que aumenta o déficit hídrico, fato esse esperado, pois em resposta ao estresse, as plantas produzem
EROs que por sua vez são neutralizados pelo seu sistema antioxidativo. Em relação ao aparato enzimático, no 6º
DEH, Precoce 1 obteve a melhor resposta com um incremento de 263% para a SOD e 171% para a CAT, seguido
do Mocó 1 com 136% para SOD e 78% para CAT. Para PRO, no 6º DEH, Mocó 1 apresentou um incremento de
1650% seguido do Precoce 1 com 100%. As enzimas SOD e CAT e a PRO apresentam-se como boas indicadoras
de déficit hídrico, os genótipos Precoce 1 e Mocó 1 obtiveram a melhor resposta em relação a atividade
antioxidante das enzimas e prolina.
APOIO
Embrapa Algodão, UFRPE, RENORBIO, Capes.
102
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ATIVIDADE ANTIOXIDANTE EM GENÓTIPOS DE AMENDOIM INOCULADOS COM
BRADYRHIZOBIUM E SUBMETIDOS A ESTRESSE HÍDRICO
Samara Lima Brito1; Daniela Duarte Barbosa1; Liziane Maria de Lima2; Paulo Ivan Fernandes Júnior3.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós Graduação em Ciências Agrárias; (2)CNPA Biotecnologia - Embrapa Algodão ; (3)Embrapa
Semiárido
RESUMO
O déficit hídrico é um dos fatores abióticos que mais afeta a cultura do amendoim. Nessas condições, a planta
ativa mecanismos que envolvem enzimas, açúcares e aminoácidos responsáveis por gerar uma cascata de respostas
antioxidantes. Microrganismos como Bradyrhizobium, a partir da fixação biológica de nitrogênio, podem
proporcionar um aumento da tolerância ao déficit hídrico. Objetivou-se nesse trabalho avaliar a interação de
isolados de Bradyrhizobium com genótipos de amendoim submetidos a déficit hídrico, baseada em respostas
bioquímicas. O experimento foi conduzido em casa de vegetação na Embrapa Algodão. Foram utilizados três
genótipos de amendoim (IAC Runner 886, 2012-33 e 2012-47), quatro tratamentos (duas estirpes de
Bradyhrizobium - ESA 123 e SEMIA 6144, com e sem nitrogênio químico) e duas condições hídricas (controle e
estresse), com esquema fatorial de 3 x 4 x 2 e 6 repetições. As plantas foram cultivadas em bacias de 32 L
contendo solo franco arenoso e inoculadas com Bradyhrizobium no momento da semeadura, 15 e 30 dias após a
semeadura (DAS). A irrigação foi suspensa no 20° dia após a emergência (DAE) e o estresse mantido até o 28°
DAE. Ao final do experimento (28 DAE), o material foi coletado, armazenado a -80°C e em seguida, usado para
extração de proteínas (3mL de tampão fosfato para 0,500mg de folha) e análise das enzimas Catalase (CAT),
realizada de acordo com Azevedo et al. (1998), Superóxido Dismutase (SOD) de acordo com Bulbovas et al.
(2005), Ascorbato Peroxidade (APX) por Nakano e Asada (1981) e do aminoácido Prolina (PRO) de acordo com
Bates et al. (1973). Os dados foram submetidos a análise de variância pelo teste F e a comparação de médias pelo
teste de Tukey a 5% de significância, utilizando-se o programa estatístico SISVAR, versão 5.6. A 1% de
probabilidade, APX e PRO foram significativos estatisticamente para todas as fontes de variação analisadas, como
também, SOD e CAT para a fonte de variação genótipo e condição hídrica. Em condições de estresse, APX
aumentou no genótipo 2012-33 com a estirpe ESA 123, SOD aumentou no genótipo IAC RUNNER 886 e 2012-47
com a estirpe ESA 123 como também nos tratamentos com e sem nitrogênio químico em todos os genótipos. O
teor de PRO foi elevada em todos os genótipos sob estresse hídrico, sugerindo sua ação na osmorregulação celular.
A interação planta x microrganismo favoreceu na atividade de algumas enzimas, principalmente a interação com a
estirpe ESA 123.
APOIO
UEPB e CAPES
103
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ATUAÇÃO DO HERBICIDA IMAZAPYR NA REGENERAÇÃO IN VITRO DE CULTIVARES DE
FEIJÃO-CAUPI [VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP.]
Paulo Vitor Galdino da Silva1; José Diogo Cavalcanti Ferreira2; Hayana Millena de Arruda Azevedo2; Ana
Maria Benko Iseppon2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal (LGBV) - Centro de Ciências da Saúde Universidade. Federal
de Pernambuco (UFPE), Recife, Pernambuco, Departamento de Genética.; (2)Laboratório de Genética e
Biotecnologia Vegetal (LGBV) - Centro de Ciências da Saúde. Universidade Federal de Pernambuco (UFPE),
Recife, Pernambuco, Departamento de Genética.
RESUMO
O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.], amplamente cultivado no país, apresenta diversas características
atrativas para os produtores, porém, a sua produtividade ainda é baixa devido aos estresses ambientais. Visando à
obtenção de indivíduos tolerantes às adversidades ambientais, faz-se uso de ferramentas como a transgenia.
Contudo, é necessária a adequação do protocolo da regeneração in vitro, auxiliando na determinação das
concentrações de fitormônio e do agente de seleção. O presente estudo avaliou o uso do herbicida Imazapyr como
agente seletivo de feijão-caupi, a fim de estabelecer as condições ideais para futuros experimentos realizados com
esta leguminosa com o gene Atahas que confere resistência ao herbicida supracitado. Dessa forma, embriões foram
cultivados em Meio MS de indução em diferentes concentrações de Imazapyr (0, 200, 250, 300, 500 e 1000 nM)
sob fotoperíodo de 16 h a 28ºC. Cada tratamento foi realizado em triplicata (três cultivares distintas), contendo
sete embriões por frasco, cujas folhas primárias foram removidas. Após três semanas, os embriões foram
analisados quanto ao crescimento. Por se tratar de uma espécie recalcitrante, a taxa de necrose foi alta nos
controles negativos (0 nM), sendo 14,2%, 19,1%, 23,8% para as cultivares Boca Negra, BRS Tumucumaque e
Novaera, respectivamente. Nas concentrações de 500 e 1000 nM, o crescimento dos embriões foi inibido, o que
seria prejudicial, dado que pode impedir a regeneração tanto das plântulas não transformadas quanto das
transgênicas com tolerância ao herbicida. A dosagem de 300 nM foi a mais eficiente para retardar o crescimento,
sendo responsável por reduzir o seu desenvolvimento em relação aos controles negativos em 34% (Boca Negra),
24% (Tumucumaque) e 25% (Novaera), além de impedir a formação de folhas e raízes. Em trabalhos de
regeneração in vitro realizados com feijão-caupi, feijão-comum, soja e algodão foi visto que a concentração de
Imazapyr varia para diferentes espécies e cultivares, desse modo quanto mais acurada for a etapa de otimização do
protocolo, maior a chance de sucesso no processo seletivo. A concentração mínima estabelecida por este estudo foi
de 300 nM, pois reduz a taxa de escape gênico e quimerização dos exemplares transformados. A cultivar que
mostrou melhores resultados foi a Boca Negra por apresentar menor recalcitrância na cultura in vitro do controle
negativo e maior retardamento no crescimento das plântulas.
APOIO
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de
Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Fundação de Amparo à Ciências e Tecnologia do Estado de
Pernambuco (FACEPE).
104
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
AVALIAÇÃO DA EMERGÊNCIA DE PLÂNTULAS DE MELANCIA PROVENIENTES DA
AGRICULTURA TRADICIONAL DO SERTÃO PERNAMBUCANO.
Kecia Mayara Galvão de Araújo1; Antonio Elton da Silva Costa1; Fábio Sanchez da Cunha1; Francine Hiromi
Ishikawa1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Vale do São Francisco, UNIVASF, Petrolina, PE
RESUMO
O trabalho teve como objetivo avaliar a emergência de 14 genótipos de melancia provenientes de agricultores
tradicionais do sertão pernambucano. O estudo foi conduzido no telado pertencente ao Laboratório de
Fitopatologia da Universidade Federal do Vale do São Francisco. O delineamento utilizado foi o de blocos ao
acaso, com três repetições e dez sementes por repetição. As sementes foram imersas em solução de hipoclorito de
sódio a 0,5% por 30 segundos e então lavadas com água destilada, em seguida foram semeadas. Para o semeio foi
utilizado uma bandeja de poliestireno de 200 células juntamente com o substrato comercial Topstrato. A avaliação
ocorreu durante 14 dias, sendo realizada a contagem de sementes emergidas diariamente, quando os cotilédones
estavam visíveis. Após a contagem foi realizado o calculo do índice de velocidade de emergência (IVE) e
porcentagem de germinação. Estes parâmetros foram submetidos ao teste de Bartlett e Shapiro-Wilk à 5% de
significância para verificar a homogeneidade das variâncias e normalidade dos erros, respectivamente. A ANOVA
foi realizada e os dados submetidos ao teste de Scott-Knott à 5% de significância com o auxílio do programa
estatístico R Core Team. A porcentagem de emergência não seguiu às premissas da ANOVA, contudo todos os
tratamentos obtiveram porcentagem de germinação acima de 90% e coeficiente de variação de 5,59%. Foi possível
realizar a análise de variância para o IVE constatando diferenças entre os tratamentos, sendo que os tratamentos
T6, T10, T13, T1, T2, T4 e T14 não tiveram diferenças estatísticas pelo teste de Scott-Knott à 5% de significância
e obtiveram os maiores índices, variando de 1,72 à 1,55 indicando que esses tratamentos emergem mais
rapidamente quando comparado aos demais. Além disso, todos esses tratamentos apresentaram percentual de
emergência superior à 93,3%. É importante a caracterização de acessos visando o conhecimento dos mesmos e
facilitar futuros trabalhos. Considerando que todos os acessos utilizados nesse estudo tiveram alta porcentagem de
emergência, podemos concluir que as sementes tem bom vigor.
APOIO
CNPq pela apoio financeiro e a CAPES pelas bolsas de pós-graduação
105
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
AVALIAÇÃO DA RESISTÊNCIA À RIZOCTONIOSE EM GENÓTIPOS DE MELANCIA
PROVENIENTES DA AGRICULTURA TRADICIONAL
Fábio Sanchez da Cunha1; Antonio Elton da Silva Costa1; Kecia Mayara Galvão de Araújo1; Izaias da Silva Lima
Neto1; Francine Hiromi Ishikawa1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Vale do São Francisco, UNIVASF, Petrolina, PE
RESUMO
O trabalho teve como objetivo avaliar a reação de acessos de melancia à Rhizoctonia solani. O trabalho foi
conduzido no telado do laboratório de Fitopatologia na Universidade Federal do Vale do São Francisco com 72
acessos do Banco de Germoplasma de Hortaliças da Univasf, 2 acessos do Banco Ativo de Germoplasma da
Embrapa Semiárido e a cultivar comercial Crimson Sweet como controle positivo, totalizando 75 acessos com 10
repetições por acesso. Os acessos foram inoculados com o isolado CMM-1053 de Rhizoctonia solani. Para o
preparo do inóculo, foi utilizado como meio de cultura arroz parbolizado. Para isso, Erlenmeyers de 250 ml
contendo 50g de arroz parbolizado e 30ml de água destilada foram autoclavados (120ºC, 15 min, 1atm). Resfriado
o arroz, foi adicionado ao meio 3 discos de micélios de 5 mm de diâmetro do fungo crescido por 7 dias em BDA.
Após 5 dias de incubação, o arroz colonizado foi utilizado como fonte de inóculo. Os acessos foram semeados em
bandejas de 200 células, utilizando o substrato comercial Topstrato®. As plântulas foram inoculadas quando a
primeira folha verdadeira estava completamente expandida, a inoculação se deu com a adição de um grão de arroz
infestado próximo ao hipocótilo da plântula e 15 após a inoculação foi realizada a avaliação, para isto, foi utilizada
uma escala de notas descritiva própria para o patossistema, as notas variando de 0 a 5 sendo que: 0= plantas sem
sintomas; 1= pequenas lesões nas raízes e/ou no hipocótilo; 2= lesões circundando o hipocótilo, sem ocorrência de
constrição; 3= início da constrição, destruição parcial dos tecidos sem damping-off; 4= tecidos necrosados com
damping-off pós-emergente; 5= Damping-off pré-emergente. Após a classificação foi calculada a média dos
tratamentos e então classificados em: 0 = imune; 0,1 a 1,0 altamente resistente; 1,1 a 2,0 resistente; 2,1 a 3,0
moderadamente resistente; 3,1 a 4,0 suscetível; 4,1 a 5,0 altamente suscetível. De acordo com as médias dos 75
genótipos avaliados apenas 4 acessos foram considerados moderadamente resistentes, com média entre 2,1 a 3,0,
estes resultados demonstram a dificuldade de se encontrar acessos com resistência à rizoctoniose devido à
agressividade do ataque do patógeno. Os acessos encontrados com moderada resistência servirão de base para o
desenvolvimento de cultivares resistentes à rizoctoniose.
APOIO
à CAPES pelas bolsas fornecidas ao primeiro e segundo autor e CNPq pelo financiamento do projeto.
106
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
AVALIAÇÃO FÍSICA DE FRUTOS EM VARIEDADES VITIS VINIFERA NA MICRORREGIÃO DE
BREJÃO-PE
Rodrigo Leite de Sousa1; Rosimar dos Santos Musser2; Mairon Moura da Silva3; Patricia Coelho de Souza Leão4;
Jesuito Bernardo de Araujo5.
E-mail: [email protected]
(1)
PPGAMGP, Depto. de Agronomia, Univ. Federal Rural de Pernambuco; (2)Depto. de Agronomia, Univ. Federal
Rural de Pernambuco; (3)Unid. Acadêmica de Garanhuns, UFRPE; (4)Embrapa Semiárido; (5)Inst. Agronômico de
Pernambuco
RESUMO
A videira cada vez mais importante na Fruticultura brasileira vem ampliando de cultivo exclusivo de zonas
temperadas para uma grande alternativa em regiões tropicais. O objetivo do trabalho foi avaliar atributos físicos de
cacho e baga em 10 variedades de Vitis vinifera L. na Microrregião de Brejão-PE para produção de Vinhos Finos.
O experimento foi implantado em setembro de 2013, em área com altitude média 900m e temperatura média anual
22,8ºC, com apenas 1 ciclo produtivo ao ano. O delineamento foi em blocos casualizados, com 5 repetições e
parcelas de 8 plantas, no sistema de espaldeira em duplo cordão esporonado, espaçamento 3,0m x 1,0m irrigadas
por microaspersão. Após a colheita (jan-fev/2016), os cachos foram levados ao Laboratório da Unid. Acadêmica
de Garanhuns - UFRPE, onde análises físicas foram realizadas em amostras de 5 cachos coletados em disposições
diferentes de cada 2 plantas previamente marcadas por parcela. No laboratório foi aferido o peso, largura e
comprimento dos cachos, após foram retiradas 100 bagas sendo 20 de cada cacho, feita aferição do volume de 100,
onde 50 destas seguiu a aferição do peso e extração do mosto por esmagamento para pesagem da casca e semente
possibilitando o cálculo do percentual de rendimento do mosto. Os resultados foram submetidos a Análise de
Variância - ANOVA e teste de média de Tukey (p≤0,05) no Programa GENES. Para todos os caracteres avaliados
os valores foram significativos a 1% de probabilidade. No teste de média para peso do cacho a Muscat Petit
(124,45g) apresentou diferença significativa da Merlot Noir, Sauvignon Blanc, Viognier e Syrah (43,77g) e não
diferiu da Cabernet Sauvignon, Malbec e Petit Verdot. No comprimento do cacho a Cabernet Sauvignon
(12,82cm) obteve resultado significativo diferindo da Muscat Petit, Malbec, Viognier, Sauvignon Blanc e Syrah
(7,98cm), e não diferiu da Petit Verdot e Merlot Noir. Para largura do cacho a média da variedade Petit Verdot
(8,74cm) diferiu significativamente das demais. No volume de bagas a Malbec (197,2 ml) não diferiu da Muscat
Petit sendo significativamente diferente das demais. Para rendimento do mosto a Muscat Petit (76,6%), Malbec,
Sauvignon Blanc, Viognier, Syrah, Petit Verdot e Merlot Noir não diferiram significativamente entre si, entretanto
a Merlot Noir não diferiu da Cabernet Sauvignon (62,4%). Os resultados são preliminares, devendo ser
confirmados após alguns ciclos produtivos das variedades na região.
APOIO
CAPES/EMBRAPA SEMIÁRIDO
107
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
AVALIAÇÃO MORFOLÓGICA DE COTILÉDONES EM GENÓTIPOS DE MELANCIA
Fábio Sanchez da Cunha1; Antonio Elton da Silva Costa1; Kécia Mayara Galvão de Araújo1; Francine Hiromi
Ishikawa1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Vale do São Francisco, UNIVASF, Petrolina, PE
RESUMO
O objetivo do presente trabalho foi avaliar genótipos de melancia quanto ao formato e intensidade da cor de
cotilédones, características utilizadas como descritores na cultura. O trabalho foi conduzido no telado pertencente
ao Laboratório de Fitopatologia da Universidade Federal do Vale do São Francisco. O delineamento utilizado foi
de blocos ao acaso com três repetições, e a parcela experimental foi constituída por dez plântulas. Foram avaliados
14 genótipos coletados junto a agricultores tradicionais do semiárido de Pernambuco. Todos os genótipos
utilizados apresentaram resistência à fusariose, causada pelo patógeno Fusarium oxysporum f. sp. niveum em
avaliação anterior. A avaliação do formato e intensidade da cor ocorreu após a emergência e o aparecimento da
primeira folha verdadeira. Quanto ao formato do cotilédone as plântulas foram classificadas como formato elíptico
estreito, elíptico médio e elíptico largo; e para a intensidade da cor os cotilédones foram classificados como
intensidade da cor verde claro, verde médio e verde escuro. Como são caracteres qualitativos optou-se por aplicar
o teste do Qui-quadrado para verificar se existe diferença entre tratamentos. Os resultados foram significativos
para ambas características indicando haver variabilidade genética entre os acessos resistentes à fusariose. Para
característica formato, observou-se uma maior freqüência do formato elíptico médio, seguido pelo formato elíptico
estreito e menor frequência do elíptico largo. Para o caráter cor dos cotilédones, observou-se apenas duas classes:
verde escuro e verde claro. Essas informações são úteis na caracterização morfoagronômica dos acessos de
melancia resistentes à fusariose pertencentes ao Banco de Germoplasma de Hortaliças (BGH) da Univasf e
indicam que a agricultura tradicional apresenta acessos com grande variabilidade genética.
APOIO
à CAPES pela bolsa de pós-graduação do primeiro e segundo autor, CNPQ pelo financiamento do projeto
108
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
CAPACIDADES COMBINATÓRIAS EM GENÓTIPOS DE ALGODOEIRO HERBÁCEO PARA A
PRODUTIVIDADE
Damião Raniere Queiroz1; Francisco José Correia Farias2; José Jaime Cavalcante Vasconcelos2; Luiz Paulo de
Carvalho2; Lucas da Silva Santos de Souza3; José Henrique de Assunção2.
E-mail: [email protected]
(1)
UEPB / Embrapa Algodão; (2)Embrapa Algodão; (3)UFPB Areia / Embrapa Algodão
RESUMO
O método de análise dialélica é amplamente utilizado por melhorista com o objetivo de selecionar genitores,
cruzamentos apropriados e determinar as capacidades de combinação geral (CGC) e específica (CEC). Este
trabalho foi realizado com o objetivo de selecionar genótipos de algodoeiro para a produtividade para a região
semiárida do nordeste e estimar as capacidades combinatórias CGC e CEC. Foram realizados cruzamentos entre
seis genótipos de algodoeiro herbáceo (Gossypium hirsutum) no ano de 2014 para a obtenção das sementes
híbridas F1's. Os híbridos foram plantados no ano agrícola de 2015 em Patos - Paraíba, o delineamento utilizado
foi de blocos ao acaso com 3 repetições. Foram avaliadas as seguintes características (Produtividade - PROD;
Produtividade de Fibra - PRODF e Porcentagem de Fibra - PF), procedeu-se a análise dialélica balanceada,
segundo o modelo I e o método II de Griffing (1956), em que se estimou a CGC e a CEC dos genitores e dos
híbridos. Foram observados pela análise de variância diferenças significativa a 1% e 5% de probabilidade pelo
teste F entre os genótipos. Para as características agronômicas PROD, PRODF e PF, os genótipos apresentaram as
seguintes médias respectivamente: 4518,46 Kg/ha, 1881,51 Kg/ha, 41,57%, seguidos dos seguintes Coeficientes
de Variação 21,48%, 21,96% e 2,03%. As estimativas das capacidades combinatórias revelaram que a CGC foi
mais importante que a CEC, para a PF, revelando uma maior importância dos efeitos aditivos no controle desta
característica. Para PROD e PRODF, a CEC foi mais importante que a CGC, apontando uma maior importância
dos efeitos não aditivos no controle destas características. No caso da CGC, os genótipos FM 993 e CNPA 042080 obtiveram as maiores estimativas para PROD (372,93 e 197,72), PF (0,87 e 0,68) e PRODF (190,51 e
112,24). Para a produtividade e produtividade de fibra, a combinação híbrida FM 993 x PSC 355, apresentou as
melhores estimativas positivas da CEC (3188,25 e 1302,13) acompanhadas de genitores com estimativas altas e
positivas para CGC e valores de médias altas, sendo indicadas para a melhoria do rendimento. Já para a
porcentagem de fibra, as melhores combinações foram: PSC 355 x IAC 26 (1,27) e CNPA 04-2080 x PSC 355
(1,10), respectivamente, com um dos genitores possuindo estimativas positivas para CGC.
APOIO
Embrapa Algodão
109
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
CARACTERIZAÇÃO IN SILICO DE GENES PR-10 EM VITIS VINIFERA L.
Jéssica Barboza da Silva1; Carolline de Jesús Pires1; Marianne Firmino de Oliveira1; Roberta Lane de Oliveira
Silva1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Laboratório de Genética e Biotecnologia
Vegetal, Recife, PE
RESUMO
As proteínas PR representam componentes adicionais do arsenal de defesa das plantas e têm sido rotineiramente
utilizadas como marcadores da SAR - Systemic Acquired Resistance. Após o contato com organismos patogênicos,
essas proteínas são codificadas por genes que são rapidamente induzidos por infecções patogênicas e pelo acúmulo
de ácido salicílico, ácido jasmônico e etileno. As proteínas PR da classe-10 (PR-10), apesar de já serem bastante
estudadas e possuírem ampla distribuição em todo o reino vegetal, ainda não possuem uma função biológica
definida. Diante disso, este estudo se propôs a identificar e caracterizar genes PR-10 promissores e relacionados
aos processos de defesa em Vitis vinifera. Para tanto, foi realizada uma busca no UniProt com as palavras-chave
"e;PR-10 AND Viridiplantae"e;, sendo selecionada uma sequência de Medicago truncatula para ser utilizada
como sonda. Essa sequência foi submetida a um tBLASTn no banco de dados do NCBI, visando selecionar
sequências candidatas na espécie com e-value igual ou inferior a e-10. Cada sequência candidata foi anotada,
traduzida e teve seus domínios conservados identificados com o auxílio das ferramentas BLAST, ORF-Finder e
CD-Search no NCBI. A ancoragem dessas proteínas foi realizada no banco de dados Phytozome. A predição do
peso molecular e o ponto isoelétrico das sequências proteicas foi realizada a partir do JVirGel 2.0 e a localização
subcelular, por meio do Cell-PLoc 2.0. Foram localizadas sete sequências candidatas do gene PR-10 em V.
vinifera com níveis significativos de similaridade (e-value ≥ e-10) e bitscore entre 97.1 e 164 . Foi observado que
as proteínas PR-10 candidatas são proteínas pequenas e que variaram de 109 a 168 aa. Os melhores quadros de
leitura foram +2 e +3. Foram identificados domínios Bet_v1-like, sendo seis completos e um incompleto na região
C-terminal. As PR-10 candidatas possuem ponto isoelétrico entre 4,57 e 8,68 e peso molecular variando entre 2,11
a 8,68 kDa, localização subcelular citoplasmática e todos os genes foram ancorados no cromossomo 5. As PR-10
são descritas na literatura como proteínas pequenas (?160 aa), intracelulares, uma vez que são expressas apenas no
citoplasma, reforçando os resultados encontrados. Os dados obtidos em nossas análises podem auxiliar no
entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos no processo de defesa de videira, disponibilizando novas
informações acerca dessa classe de genes.
APOIO
CNPq; CAPES; Facepe.
110
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
CARACTERIZAÇÃO DE SUBAMOSTRAS DE FEIJÃO-FAVA
Ramos, na1; Silva, Gc1; Magalhães, Ta1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE
RESUMO
Objetivou-se avaliar por meio da caracterização morfoagronômica a diversidade existente em 12 subamostras de
feijão-fava, oriundas da coleção de germoplasma do Departamento de Agronomia da Universidade Federal Rural
de Pernambuco-UFRPE. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado. A parcela
experimental foi uma fileira de três metros de comprimento, com espaçamento 1,0 x 1,0m. Após abertura da cova
e adubação com esterco curtido, foram semeadas quatro sementes por cova. Quando as plantas apresentaram três
folhas definitivas, foi realizado o desbaste deixando uma planta por cova a qual foi tutorada com uma estaca de
seringueira. Para a caracterização das subamostras, foram utilizados 16 descritores morfoagronômicos. As
características avaliadas referentes à semente foram: forma, comprimento, largura, espessura, cor de fundo, cor
padrão, segunda cor padrão, padrão do tegumento e a massa de 100 grãos; referente à planta: orientação dos ramos
e número de dias até a floração; referente à vagem: comprimento, largura, número de lóculos e número de
sementes. Todas as sementes apresentaram forma esférica e perfil achatado ou semi-achatado; o comprimento
ficou entre 11,22mm e 17,94mm para FA-02 e FA-01 respectivamente; a maior e menor largura foi de 9,28mm
(FA-02) e 13,58mm (FA-01). A cor do fundo das sementes variou em cinzento, branco, castanho, amarelo, preto
ou vermelho escuro; a cor padrão foi preto, castanho claro ou ausente, já a segunda cor padrão foi preto, marrom
ou ausente. Para o padrão do tegumento, os grupos definidos foram A, B e D2. A massa de 100 grãos variou entre
50g a 80g. Todas as subamostras foram classificadas com ramificações 3 ou 5. A floração mais precoce foi da FA03, com 93 dias, e a mais tardia, da FA-01 com 110 dias para florescer. Quanto as vagem; devido ao alto índice
pluviométrico na época de frutificação, nenhuma subamostra obteve produção de vagens úteis e suficientes para
realizar a caracterização. Existe variabilidade nas subamostras avaliadas, o que possibilita promover seleção. As
subamostras mais produtivas e precoces podem ser utilizadas como parentais para aumentar a médias desses
caracteres nas populações segregantes.
APOIO
Apoio: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-CNPq
111
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
CARACTERIZAÇÃO E IDENTIFICAÇÃO DE SUBAMOSTRAS DE FEIJÃO-FAVA
CONTRASTANTES PARA HÁBITO DE CRESCIMENTO VISANDO ESTUDO DE HERANÇA
Ramos, na1; Magalhães, Ta1; Silva, Gc1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE
RESUMO
Objetivou-se avaliar a diversidade de subamostras de feijão-fava (Phaseolus lunatus L.) visando identificar
materiais de hábito de crescimento contrastantes para fins de estudo de herança. Foram utilizadas 20 subamostras
de feijão-fava em experimento conduzido em delineamento inteiramente casualizado. A parcela experimental foi
constituída por uma fileira de três metros de comprimento, com espaçamento 1,0 x 1,0m. Quando as plantas
apresentaram três folhas definitivas, realizou-se o desbaste, ficando uma planta por cova, a qual foi tutorada com
estaca de seringueira. Utilizaram-se 16 descritores morfoagronômicos. As características avaliadas referentes à
semente foram: forma, comprimento, largura, espessura, cor de fundo, cor padrão, segunda cor padrão, padrão do
tegumento e a massa de 100 grãos; referente à planta: orientação dos ramos e número de dias até a floração;
referente à vagem: comprimento, largura, número de lóculos e número de sementes. Para as características das
sementes, as médias para todas as subamostras foram comprimento 14,09mm; largura 9,87mm; espessura 6,50mm.
Todas apresentaram forma esférica e perfil achatado ou semi-achatado. Houve variação para cor de fundo das
sementes (cinzento a castanho claro), cor padrão e segunda cor padrão (vermelho a ausente). Para o padrão do
tegumento os grupos definidos foram A, B, C2, D2, E1 e E2. A massa de 100 grãos variou de 15g e 55g. A
subamostra mais precoce foi a FA-16 e a mais tardia foi a FA-30. Devido ao alto índice pluviométrico na época de
frutificação, apenas a subamostra FA-25 obteve produção de vagens úteis e suficientes para avaliação. Quanto ao
hábito de crescimento, todas as subamostras foram classificadas como tipo 3 (um caule principal com ramos
laterais a começar dos primeiros nós), e tipo 5 (dois ou três caules principais a começar nos primeiros nós). Para o
estudo de herança é necessária a utilização de no mínimo dois parentais contrastantes, neste caso, sendo um deles
uma subamostra tipo 1 (um caule principal, ramos laterais curtos, raros ou inexistes), não encontrado no material
em estudo.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-CNPq
112
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
CARACTERIZAÇÃO FÍSICA E MORFOLÓGICA DE ACESSOS DE FEIJÃO-FAVA NO ESTADO DO
CEARÁ
Lays Laianny Amaro Bezerra; Bezerra, L. L. A.1; José Ribamar de Assunção Filho; Assunção Filho, J. R.2;
Railany Brito de Lucena; Lucena, R. B.1; Leandro Alves Pinto; Pinto, L. A.1; Silvério de Paiva Freitas Júnior;
Freitas Jr., S.p.1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Cariri; (2)Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz
RESUMO
A espécie Phaseolus lunatus ou feijão-fava, como é popularmente conhecido, é um alimento com relevante
produção e consumo principalmente na região Nordeste do Brasil. Essa leguminosa, pertencente à família
Fabaceae, tem grande potencial proteico e é utilizada em muitos costumes regionais como uma alternativa ao
consumo do feijão comum. Por outro lado, a cultura é pouco pesquisada, consequentemente faz com que os
conhecimentos do feijão-fava sejam limitados e poucos são os relatos sobre a caracterização morfoagronômica.
Dessa forma, o presente experimento teve como intuito realizar a caracterização física e morfológica de dez
acessos de feijão-fava obtidos de agricultores, caracterizando-se, portanto, como sementes crioulas. O trabalho foi
realizado no campus experimental da Universidade Federal do Cariri, na cidade de Crato-CE, no ano de 2015.
Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado, plantando-se três sementes por cova e cada acesso teve três
repetições, onde 0,50 cm separavam as plantas e 0,50 cm, parcelas. Além disso, irrigou-se diariamente por
arpersão, realizou-se adubação orgânica (esterco bovino) e química (NPK), desbaste e capinas e para dar suporte
ao vegetal foram utilizadas varas de bambu. Todos os acessos foram avaliados quanto ao comprimento e largura
de vagens e sementes, quantidade de lóculos, de sementes por vagem, peso de 100 sementes, formato e cor da
semente e os resultados foram submetidos às análises estatísticas pelo algoritmo de Gower, seguido pelo
agrupamento de UPGMA utilizando-se o programa GENES-UFV. Pelo agrupamento de Tocher, os genótipos
foram divididos em apenas três grupos, os acessos 2, 3, 5 e 9 alocados no grupo I, os acessos 1, 4, 6, 7 e 10 no
grupo II e o acesso 8 no grupo III. Estes resultados não corroboram com o agrupamento via UPGMA, pois, neste
apenas o acesso 8 de manteve em um grupo isolado. Este acesso, por sua vez, recebe destaque por possuir maior
comprimento de vagens e sementes e maior peso de grãos em relação aos outros. Foram obtidos valores de
distância máxima de grupos pelo acesso 3 e mínimo para o acesso 6, valores de distância máxima para os acessos
2 e 4 e os acessos 2 e 5 obtiveram para valores de distância mínima.
APOIO
CNPq, FUNCAP, NEFIMP e UFCA.
113
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
CARACTERIZAÇÃO MORFO-AGRONÔMICA DE GENÓTIPOS DE PHASEOLUS LUNATUS.L NA
REGIÃO SUL DO CEARÁ
Ítalo Bruno Bezerra Mota ; Mota,i.b.b.1; José Ribamar de Assunção Filho; Assuncao Filho, J. R.2; Rysley
Fernandes de Souza; Souza, R. F.1; Ana Larissa Raynara da Silva; Silva, A. L. R.1; Silvério de Paiva Freitas
Júnior; Freitas Junior, S.p.1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Cariri Crato-CE/BRASIL; (2)Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz da
Universidade de São Paulo; ESALQ/SãoPaulo-SP/Brasi
RESUMO
Phaseolus lunatus é uma leguminosa conhecida popularmente como fava ou feijão-fava (lima been, em inglês).
Não obstante, seja bastante produzida e consumida no Brasil, em especial na região Nordeste. Seu cultivo é anual
e praticado de modo tradicional, não raro, em sistemas de consórcio com a cultura do milho. A cultura da fava não
dispõe de pacotes tecnológicos e variedades melhoradas destinadas ao cultivo. Visando subsidiar o início de
programas de melhoramento, foram caracterizados por meio de descritores morfológicos dez genótipos de fava
provenientes no banco de germoplasma da Universidade Federal do Cariri. Os descritores avaliados seguiram o
guia do IPGRI (2001), entre eles: tamanho e largura de vagem, quantidade de lóculos, largura da semente,
quantidade de semente por vagem, altura e largura de sementes, cor do tegumento, formato da semente e peso de
100 grãos. O experimento foi conduzido na Universidade Federal do Cariri, na cidade do Crato-CE no ano de
2015, no qual foram semeados 72 genótipos, divididos em parcelas totalizando três por genótipo,com espaçamento
de 0,50 cm entre linhas e entre covas. As plantas foram tutoradas com varas de bambu e aos 21 dias foram
realizados desbaste e utilizadas adubação química e orgânica (esterco bovino), de acordo com as recomendações
da análise de solo. Os resultados foram obtidos através da análise feita pelo algoritmo de Gower, posteriormente,
realizou-se o agrupamento pela ligação média entre grupos (UPGMA), através do programa GENES- UFV. Pelo
agrupamento de Tocher, os genótipos foram divididos em apenas dois grupos, o acesso 6, alocado isoladamente no
grupo dois e os demais acessos no grupo 1, dados estes confirmados pelo agrupamento UPGMA disposto no
dendrograma. As maiores e menores distâncias foram observadas entre os acessos um e seis e os acesso dois e
oito, respectivamente. O genótipo seis destacou-se devido às características morfológicas, comprimento de vagem
e de sementes, obtendo maiores médias, e maior peso de grãos.
APOIO
CNPq, FUNCAP, NEFIMP e UFCA.
114
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
CASA DE SEMENTES, AMBIENTE DE FORTALECIMENTO DAS ORGANIZAÇÕES
COMUNITÁRIAS E DE RESGATE E PRESERVAÇÃO DAS SEMENTES CRIOULAS
Rysley Fernandes de Souza1; Marcelo Moura Chaves1; Cícero Secifram da Silva1; João Esdras Calaça Farias1;
Silvério de Paiva Freitas Júnior1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Cariri-UFCA
RESUMO
O uso de sementes adaptadas às condições edafoclimáticas das diferentes regiões do país, tais como as sementes
crioulas, é indispensável para garantir a autonomia dos camponeses que praticam a agricultura familiar. O resgate
dessas sementes torna-se indispensável para a manutenção da biodiversidade, como também por se tratar de
materiais potenciais, fontes de genes importantes para um programa de melhoramento. Nesse sentido, o trabalho
teve como objetivo fazer um levantamento das casas de sementes do Cariri Cearense e espécies preservadas em
casas da comunidade rural Baixio das Palmeiras, Crato-CE. Atualmente, existem 12 casas de sementes da região
do Cariri Cearense, estando apenas 7 delas em funcionamento nas comunidades Baixio das Palmeiras, Batateira,
Jenipapo, Vila São Francisco, Triunfo e Lagoa dos Faustino no município do Crato-CE e São Vicente no
município de Várzea Alegre-CE. A casa de sementes Baixio das Palmeiras foi fundada em 2011 e atualmente tem
15 famílias cadastradas. Em parceria estão a associação comunitária local e ONG'S como Cáritas Diocesana e
ACB (associação cristã de base). A partir do levantamento realizado foram identificadas em estoque sementes de
Gergelim (Sesamum indicum L.), Feijão (Phaseolus vulgaris L.), Fava (Vicia faba L.), Milho (Zea mays L.),
Amendoim (Arachis hypogaea L.), Arroz (Oryza sativa L.), Soja (Glycine max (L.) Merrill.), Fumo (Nicotiana
tabacum L.), Andu (Cajanus cajan (L.) Millsp.), Quiabo (Abelmoschus esculentus (L.) Moench.), Romã (Punica
granatum L.), Mamão (Carica papaya L.), Melancia (Citrullus lanatus (Thumb.) Mansf.), Jerimum (Curcubita
pepo L.), Pimenta (Capsicum spp), Cabaça (Lagenaria siceraria Ser.), Girassol (Helianthus annuus L.), Pepino
(Cucumis sativus L.), tendo as seguintes quantidades de acessos respectivamente, 6; 6; 4; 6; 4; 6; 6; 2; 2; 2; 3; 7; 3;
1; 7; 2; 7; 7. Na comunidade foi realizado acompanhamento, com palestras e orientações quanto ao
armazenamento adequado, viabilidade das sementes e teste de germinação. Foram realizadas capacitações visando
esclarecer a importância da manutenção e reposição das sementes preservadas nessas casas. É importante notar
que a função desses bancos vai além do armazenamento de sementes, sendo necessário desenvolver iniciativas de
resgate de variedades perdidas ou em risco de erosão genética, bem como a introdução de campos de multiplicação
dessas variedades resgatadas.
APOIO
Núcleo de pesquisa em fitotecnia e melhoramento de plantas-Nefimp, Conselho Nacional de Pesquisa-CNPQ e
Universidade Federal do Cariri-UFCA
115
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
COMPARAÇÃO DE PROGÊNIES OBTIDAS NO PRIMEIRO CICLO DE SELEÇÃO RECORRENTE
DE MILHO COMUM NO CARIRI CEARENSE.
Cicero Aritana Wilton Ferreira1; Antonio André Silva Alencar2; João Esdras Calaça Farias1; Sydney Pereira
Galvão1; Silvério de Paiva Freitas Júnior3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Cariri; (2)Mestrando em Genética e Melhoramento de Plantas-UENF; (3)Professor
Adjunto-Centro de Ciências Agrárias e da Biodiversidade-UFCA
RESUMO
O índice de seleção é uma técnica multivariada que associa informações relativas a várias características de
interesse agronômico com propriedades genéticas da população avaliada. A partir do índice de seleção é formado
um valor numérico, de caráter adicional e teórico, resultante da combinação das características sobre as quais se
deseja proceder à seleção simultânea. No presente trabalho, objetivou-se selecionar as melhores famílias de irmãos
completos por meio do índice de seleção de Smith (1936) e Hazel (1943), com a condução do primeiro ciclo de
seleção recorrente em famílias de irmãos completos de milho comum no genótipo crioulo Salva Terra. O ensaio de
competição foi realizado no campo experimental do Centro de Ciências Agrárias e da Biodiversidade da
Universidade Federal do Cariri, quando foram avaliadas as 210 famílias de irmãos completos. O plantio foi
realizado em maio de 2015, utilizando-se o modelo de delineamento em blocos casualizados com repetições dentro
de 'sets'. Utilizaram-se sete 'sets', com duas repetições, sendo que cada 'set' conteve 30 tratamentos. O espaçamento
utilizado foi de 3 m de comprimento da fileira, com 1 m de espaçamento entre elas, com 15 plantas em cada fileira
distanciadas em 0,2 m. Aos 21 dias após a emergência foi realizado o desbaste, deixando-se uma planta por cova.
Para estimativas dos ganhos percentuais preditos para o índice de seleção de Smith e Hazel foram utilizados como
pesos econômicos: coeficiente de variação genético (CVg), desvio-padrão genético (DPg), índice de variação
(CVg/CVe), herdabilidade (h2) e pesos atribuídos por tentativas (PA) (1, 50, 50, 1 e 100). Procurou-se obter na
seleção as famílias mais produtivas e que apresentaram redução nas médias de: número de plantas quebradas e
acamadas(TOMB), número de espigas mal empalhadas(EMP), número de espigas atacadas por pragas(EP) e
doenças(ED). No índice de Smith e Hazel, a característica ED apresentou ganho negativo, algo interessante, pois
almeja-se uma população com menor ataque de doenças. Para as características EMP e EP os ganhos obtidos
foram positivos, ou seja, características indesejáveis, possivelmente no próximo ciclo haverá menor qualidade nos
grãos, pois espigas mal empalhadas facilitam o ataque de pragas. Vale ressaltar que para a característica TOMB,
todos os pesos foram igual a zero, ou seja, nenhum dos pesos econômicos utilizados foi capaz de proporcionar
ganho, sendo a estratégia de seleção para essa característica ineficiente.
APOIO
MAPA, NEFIMP e UFCA.
116
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
CORRELAÇÕES GENOTÍPICAS, FENOTÍPICAS E AMBIENTAIS EM GENÓTIPOS DE BERINJELA
EM SISTEMA DE CULTIVO ORGÂNICO
José Carlos da Costa1; Alisson Jalles da Silva2; Emyliane Maria de Medeiros Lima3; Severino Ramos da Costa2;
Dimas Menezes2; José Luiz Sandes de Carvalho Filho2.
E-mail: [email protected]
(1)
IFPE; (2)UFRPE; (3)UFPE
RESUMO
Na agricultura, vêm ganhando espaço, as iniciativas que buscam conciliar a produção agrícola com a conservação
ambiental e os preceitos da segurança alimentar. Produtos orgânicos, agroecológicos, ambientalmente limpos ou
de alto valor biológico são apresentados como frutos da agricultura sustentável. A berinjela, Solanum melongena
L. é uma cultura que se encontra em fase de expansão, principalmente pelas propriedades medicinais dos seus
frutos na diminuição dos níveis de colesterol e pressão arterial. Este trabalho teve como objetivo avaliar
correlações genotípicas, fenotípicas e ambientais em genótipos de berinjela em sistema de cultivo orgânico. O
experimento foi conduzido no decorrer do ano de 2012 na área experimental da Estação Experimental Luiz Jorge
da Gama Wanderley - IPA em Vitória de Santo Antão, PE, localizada na Mesorregião da Mata Pernambucana. Os
genótipos foram avaliados em sistema de de cultivo orgânico conduzidos em delineamento de blocos casualizados.
A parcela útil foi constituída por uma área de 4,8 m2 contendo seis plantas, transplantadas no espaçamento de 1,0
m X 0,8 m, em seis repetições. As variáveis estimativas foram, diâmetro médio dos frutos, comprimento médio
dos frutos, massa média dos frutos por planta e número de frutos por planta. A partir dos componentes de
variância foram estimados os coeficientes de correlação fenotípica (rF) e genotípica (rG) e ambiental(rA). A
característica diâmetro médio dos frutos apresentou estimativas de correlação fenotípica significativa com a
característica comprimento médio dos frutos, no entanto foi de sinal negativo (rF=-0,97**), com relação a
correlação genotípica para mesma característica, foi alta e com sinal negativo (rG=-0,99). Também foi verificada
correlação fenotípica significativa para diâmetro médio dos frutos x massa média dos frutos (rF=0,90**), a
correlação genotípica para mesma característica também foi alta, (rG=0,93). A correlação fenotípica para
comprimento médio dos frutos x massa média dos frutos foi significativa (rF=-0,82*). As correlações das variáveis
em estudo que se destacaram e que podem ser utilizadas para fins de melhoramento foram: diâmetro médio dos
frutos x comprimento médio dos frutos e diâmetro médio dos frutos x massa média dos frutos por planta.
117
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
DESEMPENHO DA INFECTIVIDADE DO NEMATÓIDE DAS GALHAS EM GENÓTIPOS DE
MELANCIA NO SEGUNDO SEMESTRE NO SEMIÁRIDO NORDESTINO
Paloma Clementino da Cruz Lubarino1; Rita de Cássia Souza Dias1; José Mauro da Cunha e Castro1; Maria de
Fátima Correia Pontes1; Janderson Brito de Oliveira2; Joice Simone dos Santos1; Alison Borges Vitor3.
E-mail: [email protected]
(1)
EMBRAPA SEMIÁRIDO ; (2)Universidade de Pernambuco-UPE ; (3)Universidade Federal do Recôncavo
Baiano- UFRB
RESUMO
As altas temperaturas podem influenciar na redução da infectividade dos nematóides das galhas em plantas de
melancia. Neste bioensaio, o objetivo foi avaliar a influência das altas temperaturas em genótipos de Citrullus
lanatus L. com diferentes índices de resistência a Meloidogyne enterolobii. Para isto, o trabalho foi desenvolvido
nos meses mais quentes do ano, de setembro a novembro, utilizado-se nove genótipos de melancia, sendo três
linhas de melancia forrageira com maiores índices de resistência a nematóide, duas linhas de melancia comerciais
suscetíveis e quatro F1s provenientes do cruzamento das linhas comerciais com as melancias forrageiras. E foram
analisadas, a influência da temperatura registrada com a presença de galhas no sistema radicular de plantas
inoculadas, e a correlação do índice de galhas com os índices das clorofilas a, b e total (a + b), comprimento e
peso da parte aérea, e, comprimento e peso da raiz. O índice de galhas foi determinado utilizando a escala de notas
adaptada do "International Meloidogyne Project - IMP". No presente trabalho, a escala de cinco notas foi adaptada
até a nota quatro de infecção. Para a quantificação dos índices de clorofila foi utilizado o método indireto, através
de três leituras realizadas no florescimento pleno, sempre na primeira folha completamente expandida (do topo do
dossel para a base). Com relação aos dados do índice de galhas, esperava-se para as linhas comerciais suscetíveis,
a nota quatro, que corresponde a um alto grau de suscetibilidade. No entanto, estes apresentaram notas dois e três.
Sendo que, no mês de outubro foi registrada temperatura de 45 ºC no turno da manhã. O qual explica a
desinfestação do solo, pelo método de solarização, influenciando na baixa presença de galhas e o aparente
comportamento de resistência das plantas suscetíveis inoculadas. Assim, não seria prudente afirmar neste trabalho
a resistência dos genótipos com índice dois, pois o mesmo sofreu interferência das altas temperaturas. No estudo
da correlação, observou-se que das 28 combinações possíveis entre os oito caracteres, apenas nove foram
significativas. As altas temperaturas registradas interferiram no desenvolvimento das galhas implicando em uma
menor associação dos caracteres. Portanto, é recomendável que os estudos da resistência de plantas a nematóides
instalados na região do semiárido, sejam feitos no primeiro semestre do ano, quando as temperaturas são mais
amenas.
118
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
DESENVOLVIMENTO E SELEÇÃO DE PRIMERS PARA VALIDAÇÃO DE GENES RESPONSIVOS À
VIROSE EM VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP.
Mireli de Santana Rêgo1; Roberta Lane de Oliveira Silva1; Mitalle Karen da Silva Matos1; Flávia Tadeu de
Araújo1; Jéssica Barboza da Silva1; Ayug Bezerra Lemos1; Andreia Cristiny Cezarino de Araújo1; Marianne
Firmino de Oliveira1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Laboratório de Genética e Biotecnologia
Vegetal, Recife, PE
RESUMO
O feijão-caupi é uma leguminosa que possui grande importância socioeconômica para o sistema agroindustrial
brasileiro, especialmente no que se refere ao Norte e Nordeste do Brasil, por se tratar de um alimento amplamente
consumido pelas populações de baixa renda. No entanto, a cultura tem sido constantemente afetada por uma
variedade de doenças e pragas que ocasionam perdas significativas em sua produtividade. Neste sentido, o
desenvolvimento de acessos resistentes às principais doenças, como o Potyvírus (Cowpea Aphid Borne Mosaic
Virus, CABMV), tem se tornado de grande importância para o setor agrícola no Brasil. Dessa forma, objetivouse desenvolver primers adequados para utilização em ensaios de PCR em tempo real (RT-qPCR) envolvendo a
validação de genes candidatos representativos no transcriptoma do feijão-caupi infectado por CABMV.
Inicialmente foi realizada a extração do RNA total do tecido foliar dos acessos IT85F-2687 e BR 14-Mulato
(resistente e susceptível à infecção pelo Potyvírus, respectivamente), seguido da quantificação e conversão em
cDNAs. Os primers usados na análise foram desenvolvidos por meio do programa Primer3plus, de acordo os
parâmetros default, com algumas modificações. As reações foram realizadas seguindo condições descritas na
literatura, com temperatura de anelamento de 58° C e em seguida os produtos da PCR foram submetidos à
eletroforese em gel de agarose 1,5 %. Foram desenhados 36 pares de primers, sendo 20 pares para fatores de
transcrição da família MYB e 16 para a família NBS-LRR de genes de resistência. Deste total, 19 apresentaram
produtos de amplificação, onde 10 primers amplificaram bandas em 200 pb, cinco apresentaram fragmentos
abaixo de 200 pb, um apresentou banda em 250 pb e três apresentaram bandas inespecíficas. Apesar do desenho
não ter sido tão eficiente, levando em consideração o percentual de amplificação observado nas amostras testadas
(44,44 %), as reações ainda poderão ser otimizadas aumentando a temperatura de anelamento para 60 e 62° C.
Contudo, os resultados foram condizentes com o esperado, uma vez que tais primers foram desenhados para
amplificar em regiões de aproximadamente 200 pb. Os primers selecionados representam candidatos promissores
para validação da expressão gênica via RT-qPCR e se eficientes poderão ser utilizados para saturação do mapa
genético do Potyvírus, sendo alvos potenciais para o melhoramento genético do feijão-caupi e espécies
relacionadas.
APOIO
Apoio: CNPq; CAPES; Facepe.
119
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
DIVERGÊNCIA GENÉTICA EM ACESSOS DE SISAL BASEADA EM CARACTERES
MORFOAGRONÔMICOS
Silmara Chaves de Souza1; Jean Pierre Cordeiro Ramos2; Roseane Cavalcanti dos Santos3; José Jaime
Vasconcelos Cavalcanti4; Liziane Maria de Lima3.
E-mail: [email protected]
(1)
Mestranda em Ciências Agrárias, UEPB; (2)Doutorando em Agronomia, UFPB; (3)Pesquisadora da Embrapa
Algodão; (4)Pesquisador da Embrapa Algodão
RESUMO
RESUMO - O sisal (Agave sisalana) é a principal fonte de fibra dura produzida no mundo. No Brasil, a produção
concentra-se nos estados da Bahia, Paraíba e Rio Grande do Norte. Apesar da produção, são poucos os genótipos
de sisal disponíveis para cultivo, portanto, é importante estudar a divergência genética dos acessos do BAG a fim
de identificar progenitores que possam gerar materiais superiores. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi
estimar a diversidade genética de 37 acessos da coleção de germoplasma de sisal da Embrapa Algodão, com base
em caracteres morfoagronômicos. O experimento foi realizado no município de Monteiro-PB, no ano de 2016, em
delineamento experimental inteiramente casualizado, com 6 repetições. Os caracteres utilizados foram: número de
folhas (NFO), altura da planta (ALT), comprimento de folha (CFO), peso da folha (PFO), peso da mucilagem
fresca (PMF), peso da mucilagem seca (PMS), peso da fibra fresca (PFIF), peso da fibra seca (PFIS) e
comprimento da fibra (CFI). A quantificação da dissimilaridade entre os acessos foi estimada por meio da
Distância de Mahalanobis e o agrupamento pelo método hierárquico UPGMA. A análise indicou alta variabilidade
entre os 37 genótipos de sisal, com um coeficiente de correlação cofenética de 91% e significativo a 1% de
probabilidade. Na análise de agrupamento verificou-se a formação três grupos: Grupo 1, representado por 81% dos
acessos, incluindo o híbrido 400 folhas e o híbrido 11648, que possuem vantagem quanto a produção de folhas e
fibra; Grupo 2 com 5 acessos, incluindo o A. foucroydes bastante explorado por sua qualidade de fibra; Grupo 3, o
mais divergente, representado apenas pelos acessos Tatuí 4 e Tatuí 1, que se destacam, principalmente, pela
grande quantidade de mucilagem que geram. Os resultados obtidos neste trabalho podem ser aplicados no
programa de melhoramento do sisal visando a obtenção de genótipos com qualidades superiores.
APOIO
EMBRAPA/CAPES/CNPq
120
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ESTIMATIVA DE DISTÂNCIA GENÉTICA ENTRE ACESSO DE FAVA PHASEOLUS LUNATUS L.
José Tiago Barroso Chagas1; Silvério de Paiva Freitas Junior1; Artur Mendes Medeiros1; Cicero Aritana Wilton
Ferreira1; Tainá Macêdo dos Santos1; Thalyta Batista Clementino1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Cariri
RESUMO
A espécie Phaseolus lunatus L. é bastante disseminada e conhecida no Brasil, especialmente na região nordeste.
Sua produção e consumo são restritos às regiões específicas do cerrado, sertão nordestino, chapadas, serras,
sempre associadas a pequenos cultivos e a agricultura de subsistência, logo, melhorias na condução do cultivo são
essenciais para a renda do produtor e consequente manutenção do homem no campo. O objetivo do presente
trabalho consiste em caracterizar dez acessos de fava disponíveis no banco de germoplasma da UFCA (Núcleo de
Estudos em Fitotecnia e Melhoramento de Plantas - NEFIMP), por intermédio da estimativa da distância genética
entre os acessos. Foram utilizadas XX características quantitativas e XX qualitativas. A área experimental
utilizada foi a do Centro de Ciências Agrárias e da Biodiversidade localizada à latitude -7.234056 e longitude 39.369500. Foram cultivados 10 acessos, à profundidade de 3 a 5 cm, com espaçamento de 45 cm a 1 m entre
linhas e 23 cm a 50 cm entre plantas a depender do cultivar e, em cada genótipo, foram feitas seis covas. A análise
das variáveis qualitativas foi realizada utilizando os descritores do International Plant Genetic Resources Institute
(IPGRI). Os dados foram analisados utilizando o algoritmo de Gower e para o método de agrupamento de
Unweighted Pair Group Method with Aritmetic Mean (UPGMA). Segundo as análises, o genótipo 6 ficou mais
distante do genótipo 7, o que representa a divergência genética entre eles. A menor distância encontrada foi entre
os acessos genótipos 1 e 2. Os agrupamentos hierárquicos das análises individuais e simultâneas em função das
matrizes das distâncias sugerem que cruzamentos gerados entre os acessos 6 e 7, podem levar a maior
disponibilização de variabilidade para seleção. Por outro lado, os acesso 1 e 2, pela sua similaridade, só devem ser
considerados em cruzamentos em separado, caso apresentem alguma caraterística de interesse. O dendrograma
UPGMA corrobora com a estimativa de distância e ressalta o acesso como mais divergente, agrupado
isoladamente dos demais.
APOIO
CNPq, FUNCAP, NEFIMP e UFCA.
121
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
FEIJÃO TRANSGÊNICO: RISCOS PERCEBIDOS, RISCOS REAIS E SEGURANÇA AMBIENTAL E
ALIMENTAR
Paulo Paes de Andrade1; Marília Andreza Ferreira1; Diego Sotero de Barros Pinagé2; Marcia Maria Almeida de
Melo1; Amaro de Castro Lira Neto3.
E-mail: [email protected]
(1)
Centro de Saúde e Tecnologia Rural, UFCG, PATOS, PB; (2)Departamento de Botânica, UFPE, RECIFE, PE
Brasil; (3)Instituto Agronômico de Pernambuco -IPA, RECIFE, PE, Brasil
RESUMO
Em 2011 a CTNBio aprovou o evento EMBRAPA 5.1 de feijão (Phaseolus vulgaris L.) geneticamente modificado
resistente ao mosaico dourado através do mecanismo de interferência de RNA. Durante e após a avaliação da
CTNBio vários perigos foram apontados por diferentes interessados, refletindo uma percepção desfavorável ao
produto por parte de certos setores dentro e fora do país. Neste trabalho os perigos percebidos foram reavaliados
através da construção de novas rotas aos danos, seguindo a metodologia consensual estabelecida nos últimos anos
para a avaliação de risco de OGMs e obedecendo uma formatação rígida que permite constatar de forma direta a
abrangência, profundidade e pertinência da nova avaliação de risco. Entre os perigos originalmente avaliados
listamos como exemplo a mudança composicional dos grãos, o impacto sobre insetos não alvo e a perda de
eficiência do cultivar por mutações do vírus ou da planta. Quanto aos perigos novos, repetidamente veiculados na
mídia após a aprovação do cultivar pela CTNBio, enfatizamos a hipotética interferência do siRNA com o
metabolismo humano. As rotas ao dano para cada perigo, que não foram claramente desenhadas no parecer
original da CTNBio, foram agora construídas com base em hipóteses plausíveis, classificando-se assim as
probabilidades de dano para cada perigo. Por sua vez, os danos foram classificados com base na proposta da FAO.
Os riscos foram finalmente classificados com o emprego do algoritmo tabular do OGTR, com base nas
probabilidades e danos previamente classificados. O resultado de nossa avaliação aponta apenas riscos
negligenciáveis para todos os perigos trazidos pelos diferentes stakeholders, confirmando e estendendo os
resultados da avaliação feita pela CTNBio e trazendo um formalismo mais rigoroso, assim como maior
transparência da avaliação de risco e de suas conclusões.
APOIO
TargetDNA
122
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
GERAÇÃO E SELEÇÃO DE CLONES DE PENNISETUM SPP. PARA O SEMIÁRIDO
PERNAMBUCANO*
Maria da Conceição Silva1; Mário de Andrade Lira2; Mércia Virginia Ferreira dos Santos3; Erinaldo Viana de
Freitas4; Alexandre Carneiro Leão de Mello5; Djalma Cordeiro dos Santos6; Eduardo Bruno Afonso Ferreira
Pita7.
E-mail: [email protected]
(1)
Pesquisadora do IPA, [email protected]; (2)Professor da UFRPE, bolsista do IPA,
[email protected]; (3)Professora da UFRPE, bolsista do CNPq, [email protected]; (4)Pesquisadores
do IPA, [email protected]; (5)Professor da UFRPE, bolsista do CNPq, alexandre.lmello@ufrpe;
(6)
Pesquisadores do IPA, [email protected]; (7)Zootecnista, M.Sc/in memorian
RESUMO
O trabalho foi executado na Estação Experimental do IPA, em Serra Talhada-PE, objetivando gerar e selecionar
clones de Pennisetum spp. para o Semiárido pernambucano. Foi implantado um bloco de cruzamento para geração
de genótipos, utilizando como progenitores masculinos, os cultivares de capim elefante (P. purpureum Shum)
Taiwan A-146, Taiwan A-25, Pusa Napier 472-76, Guaçu IZZ, Cuba 116, IRI 381, Pusa Napier SEA, Elefante
Roxo, Merker SEA, e como feminino, o Milheto IPA Bulk-1-BF (P.glaucum (L.) Leeke) de forma que a
inflorescência do milheto era protegida e polinizada quando receptível. As sementes foram plantadas em
bandejas/estufa agrícola, e as plântulas transplantadas para o campo onde se eliminou milheto/autofecundação e
híbridos com produção inferior a 100g MV/touceira. Na Fase I foram avaliadas 241 combinações híbridas e
classificadas em três categorias: baixa %MS (inferior a 20), média %MS (entre 20 e 26) e alta %MS (superior a
26), selecionando-se as 12 mais produtivas para a Fase II. O experimento/Fase II foi implantado em Fev/2011
utilizando os híbridos e seus progenitores masculinos no delineamento de blocos ao acaso com 4 repetições, em
parcelas de 3m lineares/2m de área útil e espaçamento de 1m entre linhas. O corte de uniformização foi realizado
em Jun/2011 e após 60 dias, realizada avaliação quanto à produtividade, %MS e sobrevivência. A sobrevivência
foi determinada utilizando a escala de notas: 1. Morto, 2. Sobrevivência baixa/até 25% da parcela, 3.
Sobrevivência média/entre 26 e 50%, 4. Sobrevivência alta/até 75% e 5. Sobrevivência muito alta/acima de 75%.
Diante das precipitações pluviométricas em 2011 de 16,3mm/Março; 120,0mm/Abril; 20,5mm/Maio;
39,0mm/Junho; 16,2mm/Julho; 0,0mm/Agosto; 0,0mm/Setembro e 31,7mm/Outubro; o crescimento dos genótipos
foi comprometido, impossibilitando avaliações aos 60 dias, sendo a segunda e a terceira avaliação, realizadas em
intervalo de 106 dias, em nov/2011 e mar/2012, respectivamente. Os híbridos 36A (Taiwan A-146 x Milheto),
38A (Taiwan A-146 x Milheto), 48 (Merker SEA x Milheto) e 54 (Napier 472-76 x Milheto) foram superiores
(P<0,05) quanto à produtividade e sobrevivência, para os quais se obteve, respectivamente, produções de 1,42;
1,3; 0,99 e 1,18 kg de MS/parcela. Estes genótipos se mostraram superiores a seus progenitores masculinos quanto
à %MS, sendo o 36A classificado como de alta %MS (28,48). Assim, é possível selecionar clones Pennisetum spp.
com potencial para o Semiárido pernambucano.
APOIO
*Trabalho financiado pelo CNPq, IPA e UFRPE
123
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
HERANÇA DA COR DO MESOCARPO EM MELOEIRO
Adriano Ferreira Martins1; Anânkia de Oliveira Ricarte1; José Maria da Costa1; Elaíne Welk Lopes Pereira
Nunes1; Antônia Eliziana Augusta da Silva1; Karmita Thainá Correia Ferreira1; Cheyla Magdala de Sousa
Linhares1; Francisco Linco de Souza Tomaz1; Ana Carolina de Assis Dantas2; Glauber Henrique de Sousa
Nunes3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural do Semi-Árido; (2)IFNR - Campus São Raimundo das Mangabeiras; (3)DCV Universidade Federal Rural do Semi-Árido
RESUMO
O meloeiro (Cucumis melo L.) é a cucurbitácea de maior importância mundial em termos econômicos, tendo
grande relevância para o Brasil, mais precisamente para a região Nordeste que responde por mais de 90% da
produção nacional. Em programa de melhoramento genético do meloeiro muitas características são consideradas,
em especial àquelas relacionadas com o fruto, como a cor do seu mesocarpo. O conhecimento do controle genético
dessa característica é fundamental para auxiliar o melhorista no processo seletivo e na tomada de decisão sobre
qual estratégia será mais indicada para atingir seus objetivos. Foram realizadas poucas investigações com o intuito
de estudar a coloração da polpa do melão, assim o objetivo do presente trabalho foi estudar o controle genético da
cor do mesocarpo em frutos de meloeiro. Para estudar a herança da coloração do mesocarpo foram realizados
todos os cruzamentos possíveis entre as linhagens PV (mesocarpo verde), A-16 (mesocarpo branco) e OL-13
(mesocarpo salmão). A partir das gerações F1 e F2, juntamente com as linhagens genitoras, foi avaliada a cor do
mesocarpo do fruto. O experimento foi conduzido em blocos casualizados, com três repetições. Em razão da
variabilidade genética presente em cada geração, as parcelas foram constituídas pelos seguintes número de plantas:
15 (genitores e F1), 120 (geração F2). Foram testados possíveis modelos genéticos para explicar o controle
genético da cor do mesocarpo no fruto de melão, sendo aplicado o teste Qui-quadrado (χ2) com o nível de 5% (α =
0,05) de erro tipo I, e as análises foram processadas pelo software R. Concluiu-se que o controle genético da cor
do mesocarpo no melão não segue o modelo de dois genes epistáticos recessivos. A coloração branca é dominante
sobre a coloração verde, enquanto que a cor salmão é dominante sobre as cores branca e verde.
APOIO
CNPq UFERSA
124
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
HERANÇA DA RESISTÊNCIA DO ACESSO AC-02 À RAÇA 1 DE PODOSPHAERA XANTHII EM
MELOEIRO
Anânkia de Oliveira Ricarte1; Elaíne Welk Lopes Pereira Nunes1; Jose Maria da Costa1; Juliana Maria Costa da
Silva1; Adriano Ferreira Martins1; Ana Carolina de Assis Dantas2; Isabel Macedo Guimarães1; Karmita Thainá
Correia Ferreira1; Francisco Linco de Souza Tomaz1; Glauber Henrique de Sousa Nunes1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural do Semi Árido; (2)IFMA-Campus São Raimundo das Mangabeiras
RESUMO
O oídio é a principal enfermidade de natureza fúngica da parte aérea das cucurbitáceas em todo o mundo.
Podosphaera xanthii é a principal espécie causadora dessa doença, a mesma ocorre principalmente nos períodos
de baixa umidade relativa do ar e elevadas temperaturas, causando perdas significativas na produção do melão. As
populações desse fungo são geneticamente heterogêneas e formadas por raças fisiológicas. Este fato é um grande
problema para os programas de melhoramento genético visando à resistência ao oídio, pois o patógeno está sempre
se especializando, ocasionando o surgimento de novas raças, quebrando a resistência nos genótipos em cultivo. A
identificação de fontes de resistência no germoplasma disponível é uma das primeiras ações para se obter
cultivares resistentes. Uma vez identificado acessos com alelos que conferem resistência às novas raças ou
prevalentes em determinada região produtora, o próximo passo é saber o controle genético da resistência. O
conhecimento do controle genético é importante porque auxilia o processo de melhoramento utilizado para a
introgressão de alelos de resistência em genótipos com excelente qualidade de fruto. O objetico do presente
trabalho foi estudar a herança da resistência do acesso AC-02 à raça 1 de Podosphaera xanthii em meloeiro. Foi
realizado o cruzamento entre a cultivar suscetível 'Védrantais'com a cultivar resistente AC-02, e em seguida
obtidas as populações segregantes. O experimento foi conduzido em casa de vegetação na Universidade Federal
Rural do Semi-Árido (UFERSA), na cidade de Mossoró-RN, no ano de 2015. Adotou-se o teste de Qui-quadrado
(χ2) para testar modelos genéticos visando explicar a herança da resistência. As razões de segregações de
resistência/suscetibilidade observadas nas diferentes populações (F1, F2, RC1 e RC2) indicaram que a herança da
resistência do AC-02 à raça 1 é controlada por um gene composto por dois alelos, de modo que o alelo que confere
resistência domina o alelo para suscetibilidade.
APOIO
Comissão de Aperfeiçoamento de Pessoal do Nível Superior-(CAPES) e Universidade Federal Rural do Semi
Árido-(UFERSA)
125
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
HERANÇA DO TEOR DE SÓLIDOS SOLÚVEIS EM MELÃO
Juliana Maria Costa da Silva1; José Maria da Costa1; Karmita Thainá Correia Ferreira1; Anânkia de Oliveira
Ricarte1; Antonia Eliziana Augusta da Silva1; Cheyla Magdala de Sousa Linhares1; Alcileide Vieira Barreto1;
Elaine Welk Lopes Pereira1; Isabel Macedo Guimaraes1; Elaine Renata de Castro Viana Pereira1; Patricia Ligia
Dantas de Morais1; Glauber Henrique de Sousa Nunes1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFERSA
RESUMO
O teor de sólidos solúveis é o principal caráter relacionado à qualidade do fruto do meloeiro. O conhecimento da
herança auxilia o melhorista na tomada de decisão sobre qual a melhor maneira de promover o melhoramento
genético do referido caráter. O objetivo do presente trabalho foi estudar a herança do teor de sólidos solúveis em
melão. Os genitores contrastantes 'Vedrantais' (P1), com elevado sólidos solúveis (>10%), e A-16 (P2), com
reduzido sólidos solúveis (<6%), e as gerações F1, F2 e retrocruzamentos (RC1 e RC2) foram avaliados em
delineamento em blocos casualizados com três repetições. Os frutos foram colhidos por planta e devidamente
identificados. Em cada fruto de cada planta foi medido o teor de sólidos solúveis em refratômetro digital a partir
de alíquotas de suco homogeneizado. As análises foram feitas conforme a metodologia de Mather e Jinks (1984) a
partir do procedimento PROC MIXED do programa SAS® Versão 9.2. Observou que a presença de efeitos
aditivos e não aditivos na herança do teor de sólidos solúveis. A herança é poligênica com pelo menos 34 locus
envolvidos.
APOIO
UFERSA e CAPES.
126
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
HERANÇA PARA COR DE TEGUMENTO DO GRÃO EM DUAS CULTIVARES COMERCIAS DE
FEIJÃO-CAUPI
Sirando Lima Seido1; Carlos Antonio Fernades Santos2; Danilo Olegario Matos da Silva3; Deisy Aiane Lima de
Aquino1; Rejanildo Robson Candido Sousa3; Washington Carvalho Pacheco Coelho3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE/PPGMP, Recife-PE. Brasil; (2)Embrapa Semiárido,
Petrolina-PE, Brasil; (3)Universidade Estadual de Feira de Santana, UEFS/PPGRGV, Feira de Santana-BA. Brasil
RESUMO
A cor do tegumento do feijão-caupi é uma das principais características de consumo da cultura no Nordeste.
Atualmente, essa necessidade é ainda maior, já que a cultura esta diante de uma expansão de mercado tanto interno
quanto externo. Além disso, a biodisponibilidade de minerais nos grãos pode ser influenciada pela cor do grão. O
objetivo desse estudo foi avaliar a herança genética que controla a coloração do tegumento do feijão-caupi para
facilitar o desenvolvimento de cultivares. O cruzamento artificial foi realizado em casa de vegetação com a coleta
de pólen (flor aberta) pela manhã, conservação em refrigerador. A emasculação e polinização do botão floral
foram realizadas no fim da tarde, 14 horas antes de sua antese natural. As duas cultivares que compõem os
parentais foram a BRS Carijó (grãos brancos, com grande halo preto) e a BRS Acauã (grão marrom claro e hilo
esverdeado). A cultivar BRS Carijó foi utilizada como genitor masculino. Nas plantas F1 não foi observada
segregação para cor de tegumento do grão, sendo observados 100% das sementes com tegumento do grão preto
sólido. As 180 plantas F2:3 avaliadas apresentaram uma segregação variada de pigmentação de preto para branco.
Foram identificados dez grupos de cores sólidas no tegumento do grão das sementes. No entanto, 17 grupos de
cores no tegumento do grão da população não puderam ser classificados por exibirem uma variação contínua de
cores. A cor Preta é relatada como sendo dominante sobre o marrom. Desta forma, a região com halo preto da
cultivar BRS Carijó apresentou dominância sobre a cultivar BRS Acauã, com cor preta sólida em todas as plantas
F1. O teste de qui-quadrado para averiguar a hipótese de segregação independente para coloração de tegumento do
grão foi rejeitado por não poder ser ajustado a nenhuma proporção esperada, indicando que muitos genes podem
estar envolvidos na herança do caráter.
APOIO
A CAPES
127
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
IDENTIFICAÇÃO DE QTLS RELACIONADOS À QUALIDADE DE FRUTOS DE MELÃO
Karmita Thainá Correia Ferreira1; Ana Carolina de Assis Dantas2; Elaine Welk Lopes Pereira Nunes1; Anânkia
de Oliveira Ricarte1; Juliana Maria Costa da Silva1; Antonia Eliziana Augusta da Silva1; Alcileide Vieira
Barreto1; Adriano Ferreira Martins1; José Maria da Costa1; Glauber Henrique de Sousa Nunes1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural do Semiárido ; (2)Campus São Raimundo das Mangabeiras (IFMA)
RESUMO
A identificação de marcadores moleculares ligados a genes controladores de características quantitativas (QTLs)
no meloeiro pode auxiliar os programas de melhoramento, aumentando sua eficiência e agilidade. Com base nisso,
realizou-se este trabalho objetivando identificar, em duas avaliações, marcadores SSR ligados aos locos gênicos
(QTLs) controladores de seis caracteres relacionados à qualidade de melão. Foram avaliadas 100 famílias F2:3 do
cruzamento entre os genitores 'Hales Best Jumbo' (HBJ) e 'MR-1'. Essas linhagens foram avaliadas nos anos de
2011 e 2013 em época tradicional de cultivo do meloeiro (julho a outubro), em Mossoró, RN. Para a avaliação
fenotípica das famílias, foram conduzidos dois experimentos, nos quais foi utilizado o delineamento em blocos
casualizados com três repetições. Cada parcela foi constituída por uma linha com cinco plantas, com espaçamento
de 2,0 m entre as linhas e 0,3 m entre plantas. Foram avaliadas as características peso médio do fruto, índice de
formato, espessura da polpa, firmeza da polpa, sólidos solúveis e porcentagem de rachadura do fruto. Pelos
resultados, foi possível a identificação de marcadores moleculares estáveis ligados a caracteres de qualidade de
fruto de melão, através do processo de regressão múltipla. Os caracteres são: peso médio do fruto, índice de
formato, espessura da polpa, firmeza da polpa, sólidos solúveis e porcentagem de rachadura do fruto. Os
marcadores CMMS22-2, CMCTN4 e CMMS4-3 foram os mais estáveis nas duas avaliações. Os marcadores
CMGAN3, CMAGN33, CMSTN4, CMMS4-3, CMMS22-2 foram aqueles que destacaram como os mais
promissores para seleção assistida, visando o melhoramento da qualidade de melão.
128
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
IDENTIFICAÇÃO EM COLMO DE CANA-DE-AÇÚCAR DE PROTEÍNAS COM EXPRESSÃO
DIFERENCIADA EM RESPOSTA A GLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS
Rayssa Guedes Gomes da Silva1; Melquisedec de Sousa Oliveira1; Elton Pedro Nunes Pena2; Renata Rodrigues
de Almeida1; Fabiana Aparecida Cavalcante Silva1; Tercilio Calsa Jr.1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, Centro de Biociências,
Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE; (2)Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de
Pernambuco, Recife, PE
RESUMO
A cana-de-açúcar (Saccharum spp.) é uma planta C4 pertencente à família Poaceae, apresentando extrema
importância na economia do Brasil em razão, basicamente, da produção de açúcar e etanol. Entretanto, fatores
bióticos ou abióticos podem influenciar no aumento ou redução do potencial produtivo da cultura sucroalcooleira.
A interação endofítica entre Gluconacetobacter diazotrophicus (GD) e a cana-de-açúcar é benéfica, auxiliando na
fixação biológica de nitrogênio (FBN) e também no aumento significativo da biomassa da planta. O presente
trabalho visou analisar o proteoma do colmo da cana-de-açúcar envolvido na resposta ao simbionte. Foram
extraídas proteínas totais de colmo da variedade RB867515, não-inoculada (controle) ou inoculada com GD
(tratamento). As amostras de proteínas foram separadas via SDS-PAGE 10% unidimensional, seguida de análise
pelo programa Gel Analyzer. As bandas que apresentaram maior razão de variação quantitativa na comparação
controle x tratamento foram excisadas, submetidas à digestão com tripsina e os peptídeos foram identificados via
espectrometria de massas (MS). As proteínas foram presumivelmente identificadas por meio do programa Mascot
contra base de dados de Saccharum, Gluconacetobacter, Viridiplantae e Actinobacteria. Os resultados da
eletroforese apontaram que das 37 bandas encontradas no controle e 44 no tratamento com GD, foram
identificadas 10 quantitativamente diferenciais, cuja anotação presumível dos peptídeos mais abundantes
(teoricamente correspondentes às proteínas mais abundantes nas bandas) permitiu associá-los a respostas ao
estresse, hidrólise do ATP, transporte de prótons, microtúbulos, microfilamentos de citoesqueleto e transporte
núcleo-citoplasma. A utilização complementar de 2D-PAGE para identificação mais ampla de proteínas
diferenciais deverá contribuir com programas de melhoramento genético da cana-de-açúcar através do
desenvolvimento de variedades com maior eficiência na simbiose com GD para fixação biológica de nitrogênio.
APOIO
CNPq
129
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
INTERAÇÃO GENÓTIPO X AMBIENTE EM CARACTERES PRODUTIVOS DE BERINJELA
José Carlos da Costa1; Dimas Menezes2; José Luiz Sandes de Carvalho Filho2; Roberto de Albuquerque Melo2;
Sevrino Ramos da Costa2.
E-mail: [email protected]
(1)
IFPE; (2)UFRPE
RESUMO
A berinjela, Solanum melongena L. é uma cultura que se encontra em fase de expansão, principalmente pelas
propriedades medicinais dos seus frutos na diminuição dos níveis de colesterol e pressão arterial. Este trabalho
teve como objetivo avaliar a interação genótipo X ambiente em caracteres produtivos de berinjela em diferentes
sistemas de cultivo, identificando os mais adaptados à Mesorregião da Mata Pernambucana. O experimento foi
conduzido no decorrer do ano de 2012 na área experimental do Departamento de Agronomia da Universidade
Federal Rural de Pernambuco - UFRPE, Recife, PE, e na Estação Experimental Luiz Jorge da Gama Wanderley IPA em Vitória de Santo Antão, PE, localizada na Mesorregião da Mata Pernambucana. Foram avaliadas duas
cultivares de polinização aberta e seis híbridos de berinjela em três sistemas de cultivo: convencional, orgânico e
hidropônico. Os caracteres avaliados em frutos comerciais foram: massa média de frutos, comprimento, diâmetro e
número de frutos por planta. Utilizou-se o delineamento experimental em blocos ao acaso, com oito tratamentos e
seis repetições, em cada um dos três sistemas. O sistema de cultivo hidropônico apresentou os melhores resultados
em todos os genótipos nas variáveis estudadas. As correlações das variáveis que se destacaram e que podem ser
utilizadas para fins de melhoramento foram: diâmetro médio dos frutos x comprimento médio dos frutos; diâmetro
médio dos frutos x massa média dos frutos por planta e massa média dos frutos por planta x produção média de
frutos por planta. A interação significativa genótipo x ambiente massa média dos frutos por planta e número de
frutos por planta sugerem que estratégias específicas devem ser adotadas para o melhoramento e manejo de
variedades para cada sistema de cultivo.
130
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
INVESTIGAÇÃO SOBRE VARIAÇÃO SOMACLONAL EM ANFIDIPLÓIDES DE AMENDOIM
CULTIVADO IN VITRO
Julita Maria Frota Chagas de Carvalho1; Taiza da Cunha Soares2; Mauricélia Macário Alves3; Iara Cristina da
Silva Lima3; Rosa Maria Mendes Freire1; Roseane Cavalcanti dos Santos1.
E-mail: [email protected]
(1)
Embrapa Algodão; (2)UFRPE-RENORBIO; (3)UEPB
RESUMO
O cultivo de tecidos in vitro permite que células, embriões ou pequenos fragmentos retirados de uma planta, bem
como semente de baixa viabilidade em condições convencionais sejam regeneradas em meio de cultivo
apropriado, obtendo-se plantas idênticas à doadora. A variação somaclonal pode gerar mudanças na planta
proporcionando, valiosa fonte de variabilidade genética para a melhoria das culturas. Embora, não seja um evento
frequente, alguns exemplos promissores são reportados na literatura. Sementes de amendoim anfidiplóide com
baixa viabilidade foram previamente desinfestadas e em seguida imersas em solução de Ácido giberélico (GA3) a
0,5 mg.L-1 por 24 e 48 h, que após a imersão os eixos embrionários foram inoculados em meio MS. Com bases
nos dados de comprimento da radícula, comprimento do eixo apical e tamanho das plântulas, verificou-se que a
embebição prévia das sementes em solução aquosa, contendo GA3 (0,5 mg.L-1) por 24 h, seguida de inoculação
dos eixos embrionários em meio MS, possibilitou melhor resposta para recuperação da capacidade germinativa. As
sementes obtidas das plantas regeneradas (população 1) foram posteriormente cultivadas em casa de vegetação
para investigação quanto a possível ocorrência de variação somaclonal, baseando-se em caracteres fenotípicos
(emergência, ínicio de floração, ínicio formação e maturação completa de vargens, altura da harte principal,
número de vagens por planta, peso de cem vagens, peso de cem sementes e número de sementes por vagens) e
nutricionais (porcentagens de óleo, proteina e cálcio). Para fins comparativos, utilizaram-se sementes viáveis do
mesmo germoplasma obtidas de cultivo em campo (população 2). Nenhuma alteração significativa foi verificada
nas duas populações, indicando que os tratamentos utilizados não provocaram alterações somaclonais nas plantas
recuperadas in vitro.
APOIO
Embrapa Algodão e CAPES
131
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
ISOLAMENTO DO PROTEOMA SOLÚVEL DE FOLHA E RAIZ DE STYLOSANTHES SCABRA
VOGEL. PARA ANÁLISE DIFERENCIAL
Sheyla Carla Barbosa da Silva Lima1; Fabiana Aparecida Cavalcante Silva1; Elton Pedro Nunes Pena2;
Melquisedec de Souza Oliveira1; Natoniel Franklin de Melo3; Ana Maria Benko Iseppon4; Valesca Pandolfi4;
Tercílio Calsa Júnior1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE, Centro de Biociências, Departamento de Genética, Laboratório de
Genômica e Proteômica de Plantas, Recife, PE, Brasil; (2)Universidade Federal de Pernambuco - UFPE, Centro de
Biociências, Departamento de Genética, Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Recife, PE, Brasil;
Universidade de Pernambuco, Recife, PE, Brasil; (3)Embrapa Semiárido, Petrolina, PE, Brasil.; (4)Universidade
Federal de Pernambuco - UFPE, Centro de Biociências, Departamento de Genética, Laboratório de Genética e
Biotecnologia Vegetal, Recife, PE, Brasil
RESUMO
A Stylosanthes scabra é uma leguminosa com ocorrência no semiárido brasileiro, com características de
resistência à baixa fertilidade do solo, pH ácido, seca, entre outros. Identificar as proteínas acumuladas
principalmente em condição de déficit hídrico é relevante para entender a expressão de genes que as torna
tolerante à seca. Não são descritos métodos sobre extração de proteínas em S. scabra, assim este trabalho teve
como objetivo testar processos para esta espécie, acesso 85/UNEB. Foram testados três métodos com amostras de
folha e raiz. A primeira etapa foi igual para todos os métodos, a maceração com nitrogênio líquido até pó fino, em
seguida diferenciando em: método 1: ao tubo foi adicionado tampão de extração (EDTA 50 mM, Tris HCl 0,5
M pH 7,5, β-mercaptoetanol 2%, sacarose 0,7 M, PMSF 2 mM e KCl 0,1 M), manteve-se sob agitação em gelo,
seguiu-se pela adição de fenol saturado pH 6,8 e agitação em vortex. Após centrifugação, foi adicionado à fase
fenólica metanol com 0,1 M de acetato de amônio, incubando-se por 16 h a -20 °C. Em seguida foram feitas
lavagens com metanol contendo 0,1 M de acetato de amônio e acetona 80%, e ressuspensão em ureia (7M);
tioureia (2M). Método 2: foi adicionado à amostra TCA 10% e armazenada em freezer por 10 min, em seguida
centrifugada e o sobrenadante com TCA descartado, repetindo-se esta etapa duas vezes. Logo após, seguiu-se com
o método 1. Método 3: à amostra foi adicionado tampão de lise (ureia 7M/tioureia 2M, 4% CHAPS, 1% DTT), a
mesma foi centrifugada e o sobrenadante transferido para novo tubo. Após a ressuspensão, em todos os métodos o
material foi dividido em dois tubos com quantidades iguais. Uma parte das amostras foi submetida à limpeza com
tampão SDS denso, fenol saturado pH 6,8 e metanol contendo acetato de amônio (0,1 M), lavagens com este e
acetona 80%, seguidas de ressuspensão em ureia (7M); tioureia (2M). Com base no rendimento, o método 1 sem
limpeza adicional, apresentou-se mais eficiente para ambos tecidos 3212,83 µg/g (folha) e 1314,73 µg/g (raiz). O
gel SDS-PAGE 1D foi realizado de acordo com o manual do equipamento (cuba para eletroforese vertical,
OMNIPHOR) e em análise deste gel, tais amostras também apresentaram melhor qualidade (definição de bandas e
resolução). Assim, conclui-se que o método 1 é o mais recomendado para extração de proteínas totais foliares e
radiculares de S. scabra, possuindo quantidade e qualidade adequadas, sendo o mais apropriado para análise
proteômica subsequente.
APOIO
Apoio: CAPES
132
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
MÉTODO PARA EXTRAÇÃO DE DNA DE DISCOS FOLIARES DE MELANCIA SEM USO DE
COMPONENTES TÓXICOS
Antonio Elton da Silva Costa1; Fábio Sanchez da Cunha1; Amanda Rodrigues da Silva2; Patrícia Gonçalves
Castro Cabral3; Alexandre Sandri Capucho1; Francine Hiromi Ishikawa1.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Agronomia - Produção Vegetal, UNIVASF, Petrolina, PE; (2)Colegiado
Engenharia Agronômica, Campus Ciências Agrárias, UNIVASF, Petrolina, PE; (3)Departamento de Fitopatologia,
UFV, Viçosa, MG
RESUMO
A análise genética usando fragmentos de DNA possibilita caracterizar populações de plantas de forma rápida e
segura. A escolha do método de extração é importante, pois a depender do material vegetal usado, pode exigir
muito tempo, devido as várias etapas necessárias, e ainda expor o usuário a substancias de risco. O custo das
análises é outro fator importante, como o uso de kits comerciais que eleva os custos da extração. É desejável o uso
de metodologias de fácil manuseio, com substancias não contaminantes e de baixo custo. Para isso, adaptou-se um
protocolo para extração de DNA de folhas de melancia. Discos de 1,5 cm de diâmetro em folhas jovens foram
coletados e secos em estufa por 8 horas a 50 ºC. Após secagem cada disco foi transferido para microtubos
contendo 3 beads (1,5 mm) de zircônio, o tecido foi triturado em micro homogeneinizador por 25 segundos a 300
rpm. Para extração do DNA adicionaram-se 240 µL de NaCl e 360 µL do buffer [40% (v/v) de NaCl 5M e 60% de
buffer (40 mL de Tris/HCl 0,5M; 5 mL NaCl 5M; 5 mL EDTA 0,5M; 1 mL SDS 5%; 49 mL H 2O)] em cada
microtubo. Na etapa seguinte, os microtubos foram mantidos sob temperatura de 60°C por 30 minutos, com leve
agitação a cada 10 min. Em seguida foram centrifugados por 5 min a 2.500 x g (14000 rpm), com transferência de
270 µL do sobrenadante para tubos eppendorf de 2,5 mL com adição de 270 µL de 2-propanol. Os tubos foram
mantidos a -20 °C por 15 min e, centrifugados por 5 min a 2.500 x g. O 2-propanol foi decantado e adicionaram-se
200 µL de etanol 70%, com centrifugação por 5 min. O DNA foi ressuspendido em 50 µL de água. O método de
extração foi testado em 19 genótipos de melancia. Os valores da relação A260/A280 variaram entre 1,3 e 2,4. A
concentração observada oscilou entre 17,39 e 77,91 ng µL-1. Um parâmetro considerado na qualidade do DNA,
são valores da relação A260/A280 próximos a 1,8. Nesse estudo não foi usado RNase na extração, e a maioria das
amostras apresentou baixa contaminação com proteínas. Foi realizada PCR com primer RPS10F/RPS10R
(AGGCTCACCCTAAAAGAAGG/GGTCAACACAAGGATCTTACT) com a amplificação do fragmento de
interesse mesmo em amostras com menor quantidade de DNA. Portanto, o método estudado é aplicável a extração
de DNA de melancia, realizado de forma mais rápida quando comparada a protocolos já estabelecidos, além da
não exposição a materiais tóxicos comumente usados na extração de DNA de plantas como clorofórmio, fenol e βmercaptoetanol.
APOIO
CNPq e Capes
133
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
PERIGOS PERCEBIDOS E RISCOS REAIS DO EUCALIPTO TRANSGÊNICO PARA CRESCIMENTO
RÁPIDO
Marília Andreza da Silva Ferreira1; Paulo Paes de Andrade2; Diego Sotero de Barros Pinange1; Marcia Almeida
de Melo2; Amaro de Castro Lira Neto3.
E-mail: [email protected]
(1)
UFPE; (2)UFCG; (3)IPA
RESUMO
As preocupações com os impactos dos transgênicos são denominadas perigos e derivam da percepção de risco,
plasmada por diferentes fontes de informação. Os perigos nem sempre se concretizam em danos: se a rota ao dano
inexiste, o perigo jamais se concretiza em dano e o risco é nulo. Se existe, pode-se estimar a probabilidade com
que ele se concretize e a magnitude dos danos e assim classificar o risco associado ao perigo percebido. Apenas os
perigos derivados da biologia do OGM interessam ao avaliador de risco, cabendo a análise das questões sócioeconômico-culturais a outros especialistas. Os perigos identificados no caso da variedade de eucalipto de
crescimento rápido que expressa as proteínas Cel1 (permite o crescimento rápido) e NptII (permite a seleção de
plântulas transformadas pelo uso de neomicina) foram: (1) Desenvolvimento de resistência a antibióticos em
humanos pelo consumo do mel GM e da mesma forma, (2) resistência da flora do tubo digestivo de abelhas devido
à elaboração de mel a partir de flores de eucalipto GM; (3) Morte de abelhas devido ao contacto com o pólen de
eucalipto transgênico; (4) redução da biodiversidade em microbacias devido à redução de disponibilidade hídrica
causada pelo crescimento rápido da variedade H421 de Eucalyptus e (5) fluxo gênico e fixação do transgene em
variedades de eucalipto sem controle do agricultor. Os riscos precisaram então ser determinados estabelecendo
rotas ao dano plausíveis. Para o primeiro risco, avalia-se que quem causa resistência a antibióticos é o próprio
antibiótico. A presença da proteína NptII, que fosforila a neomicina e outros antibióticos, inativando-os, é
irrelevante porque a NptII não atua no ambiente extracelular; a enzima não pode ser transportada para dentro das
bactérias do trato digestivo, onde talvez pudesse ter esta ação; a enzima está presente em concentrações
nanomolares no mel; seu gene não pode ser transferido do pólen para bactérias e mesmo assim, o gene está sob
controle de um promotor de planta. Por tudo isso, a rota ao dano que liga este perigo ao aparecimento de
resistência a antibióticos em humanos não se concretiza e o risco é nulo. Rotas similares foram construídas para
todos os outros perigos. A conclusão final foi que, de todos os riscos biológicos o único que não é nulo ou
negligenciável é o impacto sobre a biodiversidade de microbacias. Por outro lado, fica evidente que o impacto
(eventual dano) será restrito no tempo e no espaço e, portanto, o risco será pequeno.
APOIO
TARGET DNA
134
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
REGENERAÇÃO IN VITRO DE SEMENTES DE CARTHAMUS TINCTORIUS L.
José Genilson Ribeiro Júnior1; Hirisleide Bezerra Alves1; Nair Helena Castro Arriel2; Julita Maria Frota Chagas
Carvalho1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Cultivo de Tecido, Embrapa Algodão, Campina Grande, PB; (2)Embrapa Algodão, Campina
Grande, PB
RESUMO
Cártamo (Carthamus tinctorius L.), pertencente à família Asteraceae, constitui uma cultura oleaginosa cuja
matéria-prima é destinada para produção de óleo na alimentação humana e na indústria para diversos fins. Os
teores de óleo dos grãos de cártamo podem chegar a 50%, e apresentam altas concentrações de ácidos linoleicos e
oleicos, sendo considerados de ótima qualidade tanto para consumo humano como para produção de biodiesel.
Apesar de ser uma cultura com grande potencial produtivo, o cártamo até então tem pouca expressão econômica
no Brasil, em virtude da escassez de conhecimentos técnicos com relação ao seu cultivo e a falta de cultivares
melhoradas e adaptadas. As sementes de cártamo são muito sensíveis a fatores ambientais onde todo excesso, de
água e temperatura, provoca decréscimo na germinação, visto que impede a penetração do oxigênio e reduz todo o
processo metabólico resultante. Nesse contexto, o cultivo in vitro expõe relevante aplicabilidade na regeneração de
sementes, visando à propagação e expansão de culturas de cártamo. Objetivou-se por meio deste trabalho
regenerar in vitro acessos de cártamo com baixa viabilidade, a partir do estabelecimento de um protocolo de
regeneração intrínseco à cultura. Foram utilizados 15 acessos de cártamo, com 10 repetições por acesso, cujas
sementes foram desinfestadas e, decorrido o período de 24 horas, cada semente inoculadas no tubo de ensaio em
meio de cultura MS semi-sólido, sendo incubadas a 27 ± 2°C e fotoperíodo de 24h. Germinaram dois acessos
correspondendo a 13,3%; destes acessos, quatorze sementes germinaram correspondendo a 70%, apresentando
uma variação na germinação dos acessos mencionados, mas com tempo de germinação de seis dias em
comparação ao plantio convencional que não houve nenhuma germinação dos acessos citados. Denotando a
eficácia do protocolo a partir da utilização de acessos viáveis. Posteriormente, as plântulas com raízes foram
transferidas para substrato turfa: vermiculita (2:1) para aclimatização, observando-se aspecto e crescimento
normal.
APOIO
Embrapa Algodão
135
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
RESISTÊNCIA A FUSARIOSE EM GENÓTIPOS DE MELANCIA CULTIVADOS NA AGRICULTURA
FAMILIAR NO SERTÃO DE PERNAMBUCO
Antonio Elton da Silva Costa1; Fábio Sanchez da Cunha1; Mayara de Souza Silva2; Alan da Cunha Honorato1;
Alexandre Sandri Capucho1; Izaías da Silva Lima Neto1; Francine Hiromi Ishikawa1.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Agronomia - Produção Vegetal, UNIVASF, Petrolina, PE; (2)Colegiado
Engenharia Agronômica, Campus Ciências Agrárias, UNIVASF, Petrolina, PE
RESUMO
O cultivo de melancia é uma importante atividade agrícola em diversos países. No Brasil, a Região Nordeste se
destaca com a produção do fruto, sendo também essa região reconhecida como centro secundário de diversidade
da espécie. As características de cultivo por parte dos pequenos agricultores contribuíram com a conservação da
variabilidade para diversos caracteres, dentre os quais está a resistência doenças, a exemplo das ocasionadas por
fungos habitantes do solo como a fusariose, causada pelo fungo Fusarium oxysporum f. sp. niveum. Assim o uso
de genótipos advindos da agricultura familiar é uma importante base para busca de fontes de resistência, sendo
esse o objetivo do estudo realizado. Foram usados para inoculação 54 genótipos de melancia do Banco de
Germoplasma de Hortaliças da Universidade Federal do Vale do São Francisco, e a variedade comercial Sugar
Baby como testemunha, com e sem inoculação. Os acessos foram coletados em municípios das mesorregiões do
Sertão e São Francisco Pernambucano. A inoculação ocorreu no semeio em substrato contendo clamidósporos, em
copos descartáveis de 250 mL. Foram usadas cinco repetições para cada tratamento, o semeio da testemunha sem
o fungo foi em substrato somente enriquecido com caldo BS mas sem inóculo. Após o semeio os copos foram
mantidos em sala com iluminação contínua por sete dias. Posteriormente os copos foram postos em delineamento
inteiramente casualizado em um telado com cobertura de sombrite 50% com irrigação diária até serem avaliados
22 dias após a inoculação. A avaliação foi segundo escala de notas com 5 níveis variando de 0 a 4. A reação foi
classificada em duas classes, resistente quando a média das notas fosse inferior a 2 e suscetível quando superior a
2. Com os dados de reações foi calculado o Índice de doença de McKinney pela equação Id = [Somatório(nota da
repetição x frequência) / (número de repetições x nota máxima da escala) ] x100. Entre os 54 genótipos
inoculados, 42 foram classificados como resistentes, não sendo observados dentre eles classificação de reação
semelhante a imune, ou seja, sem presença de lesões nas plantas. Os valores do Índice de Doença de McKinney
variaram entre 10 e 70% para os genótipos avaliados. A partir dos resultados observa-se a existência de
variabilidade e possíveis fontes de resistência à fusariose entre os genótipos cultivados por pequenos agricultores
na região que poderão ser utilizados no melhoramento visando resistência à fusariose.
APOIO
CNPq e Capes
136
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
TRANSFERIBILIDADE E MAPEAMENTO IN SILICO DE MARCADORES MICROSSATÉLITES
ENTRE THEOBROMA CACAO E T. GRANDIFLORUM.
Analine dos Santos Nascimento1; Karina Peres Gramacho2; Rafael Moysés Alves3; Lucília Helena Marcellino4;
Didier Clément5.
E-mail: [email protected]
(1)
UESC; (2)SEFIT/CEPEC-CEPLAC; (3)EMBRAPA; (4)EMBRAPA-CENARGEN; (5)CIRAD-CEPLAC
RESUMO
Das 22 espécies que compõem o gênero Theobroma, duas são amplamente cultivadas no Brasil, T. cacao e T.
grandiflorum. Ambas apresentam características que as tornam importantes economicamente. A primeira, ao
contrário da segunda, é amplamente estudada, principalmente, por sua interação com o fungo Moniliophthora
perniciosa, agente causador da vassoura-de-bruxa do cacaueiro (VBC). Com os avanços dos estudos com
marcadores moleculares é possível compartilhar informações genéticas entre espécies aparentadas, realizando
estudos de mapeamento genético em espécies pouco estudadas a partir de informações conhecidas de outra
espécie. Nesta premissa, os objetivos desse trabalho foram: i) testar a transferibilidade de marcadores
microssatélites SSR, desenvolvidos para T. cacao em T. grandiflorum, ii) posicionar in silico, no genoma do
cacaueiro, os marcadores SSR específicos para T. grandiflorum. Foram testados 181 marcadores específicos de
cacaueiro, em uma população de cupuaçuzeiro segregante para diversas características, entre elas, resistência a
VBC. Após amplificação, os fragmentos foram revelados por eletroforese em gel de poliacrilamida denaturante a
6% e corados em nitrato de prata. Do total, 107(56,91%) dos marcadores não amplificaram e 78 (43,09%) foram
transferíveis ao cupuaçuzeiro, destes, 42 (56,41%) foram polimórficos. Foi realizado um mapeamento, in sílico, de
149 sequências SSR específicas de T.grandiflorum com sequências conhecidas do genoma do cacaueiro através da
ferramenta genome browser (Cocoagen DB/Gbrowser). Vinte delas apresentaram alinhamento completo das
sequências (forward e reverse) sendo identificadas e posicionadas nos cromossomos do mapa genético consenso
do cacaueiro. Para testar transferibilidade cruzada, nove SSRs foram amplificados em cinco clones do cacaueiro
representativos da diversidade da espécie (B97; SCA6; ICS1, SIC864 e CCN51) mostrando diferentes alelos. Os
marcadores alinhados serão, posteriormente, analisados quanto a posição de genes referentes à resistência a VBC.
Os resultados do presente trabalho poderão ser utilizados como ferramentas de auxílio para programas de
melhoramento genético, bem como, na construção de mapas genéticos para a espécie T. grandiflorum.
APOIO
CAPES-EMBRAPA
137
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE VIGNA UNGUICULATA COM UM GENE CODIFICANTE DE
DEFENSINA DE MOMORDICA CHARANTIA
José Diogo Cavalcanti Ferreira1; Hayana Millena de Arruda Azevedo2; Luís Carlos Belarmino2; Ana Maria
Benko Iseppon2.
E-mail: [email protected]
(1)
Docente do Instituto Federal de Pernambuco - IFPE; (2)Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal,
Departamento de Genética, UFPE, Recife, PE
RESUMO
A produtividade agrícola é impactada negativamente por estresses bióticos e abióticos, reconhecidos como os
principais responsáveis pelas perdas na produção de feijão-caupi (Vigna unguiculata). Para se defenderem dos
estresses bióticos, os vegetais desenvolveram sofisticados mecanismos, incluindo o sistema de defesa préinvasivo, localizado nas partes externas dos vegetais, impedindo a entrada do patógeno e ativando a imunidade
inata, que reconhece estruturas fundamentais dos micro-organismos e induz a produção de proteínas de combate
aos patógenos. Dentre os elementos dessa linha de defesa, as defensinas destacam-se por sua ação antimicrobiana,
inviabilizando o estabelecimento de agentes invasores. Por sua vez, o melão-de-são-caetano (Momordica
charantia) dispõe de transcriptoma sequenciado, sendo conhecido pelas propriedades medicinais, como agente
antimicrobiano e anti-inflamatório. A partir de análises in silico no transcriptoma dessa espécie foram
selecionados cinco genes-candidatos da classe das defensinas. Destes, o gene McDef1 apresentou domínio
conservado completo com predição de atividade antifúngica. McDef1 exibe regiões conservadas na maioria das
defensinas de plantas incluindo oito cisteínas, uma serina na posição 8, um aminoácido aromático na posição 11 e
resíduos de glicina nas posições 13 e 34. Após análise fenética a McDef1 foi agrupada com outras defensinas já
descritas com atividades antifúngicas in vitro e/ou in vivo, o que reforça a predição revelada pelas análises in
silico. Um vetor pAHASMCDEF1, portando o gene McDef1 e Atahas, que confere resistência ao herbicida
Imazapyr, foi construído e utilizado para bombardear 880 embriões de feijão-caupi através da técnica de
biobalística. Destes, sete plantas transformadas foram geradas, com eficiência de transformação semelhante àquela
de trabalhos anteriores com feijão-caupi. As próximas etapas compreendem a multiplicação das plantas
transformadas até a geração T3, após o que as mesmas serão inoculadas com fungos fitopatogênicos, os quais
podem causar perdas de até 50% na produção em feijão-caupi.
APOIO
CAPES, FACEPE e CNPq.
138
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
UTILIZAÇÃO DE AZOSPIRILLUM BRASILENSE PARA POTENCIALIZAR A PRODUTIVIDADE DE
MILHO COMUM CRIOULO
Rysley Fernandes de Souza1; Silvério de Paiva Freitas Júnior1; Francisca Dayanne de Oliveira Alcantara1; Ítalo
Bruno Bezerra Mota1; Marcelo Moura Chaves1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Cariri-UFCA
RESUMO
O milho (Zea mays L.) é uma das culturas mais apreciadas no Brasil, não só do ponto de vista econômico, em
função da extensa área cultivada, mas também nutricional com destaque para a alimentação humana e animal. O
presente trabalho teve como objetivo avaliar o desenvolvimento do milho com a bactéria Azospirillum brasilense
inoculada via sementes em associação com doses de Nitrogênio. Os experimentos foram conduzidos no segundo
semestre de 2014 no município de Crato-CE. O delineamento utilizado foi o de blocos casualizados com 16
tratamentos e 4 repetições em 2 linhas de 5m com um espaçamento entre linhas de 0,9 m e entre plantas 0,2 m.
Foram avaliados a variedade BGHM54 e o hibrido BRS2022 sob a influência da adubação nitrogenada e da
inoculação com Azospirillum, quanto aos seguintes caracteres agronômicos: altura de planta, peso de espiga, peso
de grão e diâmetro de espiga. O experimento foi composto por um ensaio com delineamento experimental de
blocos casualizados, em esquema fatorial triplo. O fator 1, dois níveis: sem e com aplicação da solução da bactéria
Azospirillum brasilense; fator 2, quatro doses totais de nitrogênio: 0, 50, 100 e 150 kg/ha1 e o fator 3 dois
genótipos: a variedade crioula Newton Pequeno e o híbrido duplo BRS2022. Para a análise genético-estatística dos
resultados, foi utilizado o Programa GENES versão 2013.5.1 (CRUZ, 2013). Pela análise de variância a variedade
BGHM54 apresentou maiores médias para altura de planta, com e sem inoculante quando comparado ao Híbrido
BRS2022. Peso de espiga e peso de grãos denotam resultados positivos e superiores para o genótipo BRS2022,
comparado à variedade BGHM54 nas situações com e sem inoculante. Os ganhos médios gerais para os genótipos
inoculados e sem inoculação, em produtividade o incremento para PG foi de 19,62 % para a variedade e 9,18 %
para o híbrido, representando em valores de média 401,35 kg ha1 para a variedade e 252,18 kg ha1 para o híbrido
quando inoculado. Nota-se que para diâmetro de espiga as médias apontam que o híbrido sobressai à variedade
utilizando a adubações de 50 kg/ha1 e 100 kg/ha1. Pelos dados avaliados, a inoculação com Azospirillum foi
significativa para a produção com níveis menores de adubos nitrogenados, garantidos pelo aumento do peso de
grãos e diâmetro de espigas na condição de não adubação, bem como nas demais condições apresentando
aumentos graduais.
APOIO
Núcleu de pesquisa em fitotecnia e melhoramento de plantas-Nefimp, Conselho Nacional de pesquisa-CNPQ e
Universidade Federal do Cariri-UFCA.
139
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
UTILIZAÇÃO DE AZOSPIRILUM BRASILIENSE PARA POTENCIALIZAR A PRODUTIVIDADE DE
MILHO PIPOCA CRIOULO
João Esdras Calaça Farias1; Francisca Dayanne de Oliveira Alcantara2; Jakson dos Santos Nascimento1;
Antônio Eduardo Peixoto dos Santos1; Silvério de Paiva Freitas Junior3.
E-mail: [email protected]
(1)
Graduando em agronomia na Universidade Federal do Cariri ; (2)Mestranda em Desenvolvimento Sustentável, na
Universidade Federal do Cariri; (3)Professor no curso de Agronomia, na Universidade Federal do Cariri
RESUMO
Os Estados Unidos da América detêm a produção mundial de milho pipoca, com 500 mil toneladas/ano. A
produção brasileira encontra-se em segundo lugar, com 80 mil toneladas/ano, e uma movimentação de US$ 130
milhões. Apesar de o Brasil ocupar o segunda lugar mundial, a produção brasileira é modesta. Um dos principais
motivos para isso é o fator econômico, que limita o acesso a insumos agrícolas para muitos agricultores. O
nitrogênio (N) é o nutriente que mais frequentemente limita a produtividade em várias culturas agrícolas e
principalmente na cultura do milho, exigindo aproximadamente 20 kg ha-1 por tonelada de grão produzido. A
inoculação com bactérias diazotróficas pode ser uma alternativa biotecnológica na procura pela sustentabilidade
dos sistemas agrícolas, em razão de que pode promover incrementos na produção das lavouras com menor
dependência de fertilizantes nitrogenados sintéticos. Nessa perspectiva o presente trabalho teve como objetivo
avaliar a capacidade produtiva da inoculação com bactérias diazotróficas em milho pipoca crioulo, com diferentes
níveis de adubação nitrogenada. O experimento foi conduzido na área experimental da Universidade Federal do
Cariri/UFCA, Campus Crato, Crato/CE. Avaliou-se o genótipo de milho crioulo em duas condições, com e sem
inoculação com A. brasilense (estirpe AbV5 e AbV6). Os dois tratamentos foram submetidos a quatro diferentes
níveis de adubação nitrogenada sendo 0 50, 100 e 150 kg/ha1 e outro sem adubação nitrogenada. Utilizando-se o
delineamento experimental em blocos ao acaso, foram avaliados 8 tratamentos com quatro repetições. A análise
foi feita com 6 características: Altura de planta (ALTP), diâmetro de espiga (DE), comprimento de espiga (CES),
peso de grão (PG), peso de espiga (PE) e peso de 100 grãos (P100). Todas apresentaram interações significativas
para o inóculo (I), doses de adubação (A) e para interação (A x I). Pelos dados avaliados, a inoculação com
Azospirillum foi determinante na manutenção da produção com níveis menores de adubos nitrogenados, garantidos
pelo aumento do peso de grãos e diâmetro de espigas na condição de não adubação, bem como nas demais
condições apresentando aumentos graduais, contudo, há ganhos representativos até na ausência de adubação de
cobertura.
APOIO
NEFIMP, CNPq, Funcap e UFCA.
140
Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético
VARIABILIDADE GENÉTICA DA FAVA PHASEOLUS LUNATUS L. POR MEIO DA DISTANCIA
ENTRE OS ACESSOS
Antonio Eduardo Peixoto dos Santos1; Jose Tiago Barroso Chagas1; Laura Leopoldina Sousa1; Damião
Francisco de Sales1; Artur Mendes Medeiros1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade federal do cariri-CE
RESUMO
Apesar de cultivada em todos os Estados e de apresentar capacidade de adaptação e cultivo mais ampla que o
feijão-comum Phaseolus vulgaris L. O feijão fava Phaseolus lunatus L. é pouco produzido no Brasil, pois ainda há
vulnerabilidade dos sistemas de produção do feijão fava. O presente trabalho teve o objetivo de estudar a
variabilidade genética do banco germoplasma da Universidade Federal do Cariri-CE, por intermédio da estimativa
da distância genética entre 10 acesos, utilizando XX características quantitativas e XX características qualitativas.
O experimento foi conduzido na área experimental do campus de ciências agrárias da universidade Federal do
Cariri. Foram plantadas seis covas de cada um dos dez genótipos à fundidade de 3 a 5 cm, com espaçamento de 45
cm à 1m entre linhas e 23 cm à 50 cm entre plantas. Os caracteres quantitativos e qualitativos foram avaliados com
base nos descritores do International Plant Genetic Resources Institute (IPGRI). Utilizou-se o algoritmo de Gower
e o método de otimização de tocher para o agrupamento das médias dos acessos avaliados. Os acessos foram
alocados em seis grupos. grupo l foi composto pelos acessos 8,9,3 e 4 o grupo ll com os genótipos 1 e 5, o grupo
lll com o genótipo 10, grupo lV genótipo 2, grupo V genótipo 7 e grupo Vl genótipo 6. Estudos posteriores
visando explorar a variabilidade genética presente no Banco de Germosplasma do NEFIMP - UFCA, pode utilizar
como genitores os genótipos 1 e 2, pois foram os mais distantes.
APOIO
CNPq, FUNCAP, NEFIMP e UFCA.
141
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
ANÁLISE PRELIMINAR DAS MUTAÇÕES CAUSAIS PARA A SÍNDROME DO CORDEIRO ARANHA
E LISENCEFALIA E HIPOPLASIA CEREBELAR EM OVINOS DA RAÇA WHITE DORPER
Flávia Caroline Moreira Bezerra1; Pâmela Raiele Pinheiro Moreira2; Rafael Batatinha Rocha3; Samla Marques
Freire Cunha3; João José de Simoni Gouveia4.
E-mail: [email protected]
(1)
Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Participante
do Programa Institucional de Voluntários de Iniciação Científica (PIVIC/UNIVASF).; (2)Grupo de Pesquisa em
Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Bolsista do Programa Institucional de
Bolsas de Iniciação Científica (PIBIC/CNPq/UNIVASF).; (3)Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada,
Universidade Federal do Vale do São Francisco.; (4)Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada,
Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Docente, Colegiado Acadêmico de Zootecnia, Universidade
Federal do Vale do São Francisco.
RESUMO
A evolução da genômica tem possibilitado um enorme avanço na caracterização de mutações associadas ao
aparecimento de doenças genéticas em animais de produção. Entretanto, ainda são poucos os estudos no Brasil que
visam compreender a distribuição destas mutações nas raças ovinas. A Síndrome do Cordeiro Aranha (SLS) é uma
doença autossômica recessiva causada por uma transversão (T>A) no nucleotídeo 69 do éxon 17, do gene do
receptor do fator de crescimento de fibroblastos 3 (FGFR3). A Lisencefalia e Hipoplasia Cerebelar (LHC) também
é uma doença autossômica recessiva e sua mutação causal consiste em uma deleção de 31pb no éxon 36, do gene
da reelina (RELN). O objetivo do presente estudo foi identificar, através de métodos moleculares, animais
portadores das mutações causais tanto para a SLS quanto para a LHC em ovinos da raça White Dorper. Para isso,
foram coletadas amostras de sangue de 73 animais de rebanhos localizados nos estados da Bahia, São Paulo e
Sergipe. O DNA foi extraído utilizando um protocolo de extração salina. Para a genotipagem da mutação causal da
SLS, foi realizada uma PCR, utilizando os primers 5'-CCTTGTTTGACCGCGTCTAC-3' e 5'ATGTACCTGGGGGACATGC-3', seguida de digestão utilizando a enzima BTGI. Para a genotipagem da
mutação causal da LHC, foi realizada uma PCR utilizando os primers 5'-TTGCCTTCTCCGGTTTAATG-3' e 5'AGGGATTTGTGATGCTGGAC-3'. Os amplicons e produtos de digestão foram submetidos à eletroforese em gel
de agarose 3% por 3h a 80V e corados com brometo de etídeo. Todos os animais foram identificados como
homozigotos sadios para as mutações causais responsáveis pela Síndrome do Cordeiro Aranha e Linsencefalia e
Hipoplasia Cerebelar. A SLS foi inicialmente identificada em animais da raça Suffolk, nos Estados Unidos e,
posteriormente em outras raças, como a Hampshire Down. Já a LHC teve sua mutação causal descrita em animais
da raça Churra na Espanha. Trabalhos recentes indicam altos níveis de admixture entre raças modernas de ovinos,
o que pode aumentar a probabilidade de que as mutações causais associadas a doenças genéticas não segreguem
apenas em raças nas quais foram inicialmente descritas. Além disso, a identificação de animais heterozigotos em
raças cuja doença ainda não foi descrita pode permitir a implementação de estratégias de controle/erradicação da
mutação causal, antes que ocorram prejuízos financeiros advindos destas enfermidades.
APOIO
CNPq
142
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
ESTIMATIVAS DE VARIABILIDADE E ESTRUTURA GENÉTICA EM POPULAÇÕES DA FORMIGA
CORTADEIRA ATTA SEXDENS (HYMENOPTERA:FORMICIDAE) PRESENTES EM FRAGMENTO
DE CAATINGA NO SUDOESTE DA BAHIA, BRASIL.
Carla Faine Matos de Oliveira1; Tarcísio dos Santos Cardoso2; Cibelle Dias3; Mikael Gabriel Zimmermann3;
Neidson Silva Rodrigues3; Elisa Susilene Lisboa Santos4; Carlos Bernard Moreno Cerqueira Silva4.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Ciências Ambientais; (2)Curso de Ciências Biologicas, Universidade Estadual
do Sudoeste da Bahia, Itapetinga, Bahia, 45700-000; (3)Curso de Ciências Biológicas, Universidade Estadual do
Sudoeste da Bahia, Itapetinga, Bahia, 45700-000; (4)Departamento de Ciências Exatas e Naturais, Universidade
Estadual do Sudoeste da Bahia, Itapetinga, Bahia, 45700-000
RESUMO
Atta sexdens é uma formiga cortadeira conhecida por seu hábito de cortar folhas para o cultivo do fungo
simbionte. Em ambientes antropizados, tendem a aumentar a densidade de ninhos o que influencia
consideravelmente a intensidade de sua atividade forrageadora, tornando-as pragas agrícolas. A presença dessa
espécie no ambiente tem ocasionado mudanças de importância ecológica e econômica, fato que desperta o
interesse por estudos ecológicos e genético-moleculares com vistas ao entendimento das populações de formigas
cortadeiras. Com intuito de contribuir para o avanço de estudos genéticos para a espécie A. sexdens este trabalho
teve como objetivo estudar a diversidade genética das populações de A. sexdens com marcadores ISSR. Foram
estudados 17 ninhos (aqui considerados populações, representadas por um conjunto de 15 formigas operárias,
medindo em média de 1,5 cm), pertencente à Fazenda Lagoa das Covas (FLC) (13°54´S, 41°07´O), região da zona
de amortecimento da Floresta Nacional Contendas do Sincorá (FNCS), município de Contendas do Sincorá, Bahia.
Primeiramente testou-se 23 marcadores ISSR dos quais foram selecionados 12 com melhor padrão de visualização
cujo percentual polimórfico variou entre 20% (TriAGA3'RC) e 100% (DiCA 3'YG). A diversidade de A. sexdens
foi acessada através de seis primers ISSR (DiGA3'C, DiGA3'T, TriCAC 3'RC, TriCAC3'YC, TriCAC5'CY,
TriTGT3'YC) que genotiparam um total de 44 bandas nas populações, cujo percentual polimórfico variou entre
43% (DiGA3'C) e 100% (TricAC5'CY, TriTGT3'YC), sendo 83% a média geral do polimorfismo. A Análise
Molecular de Variância (AMOVA) apresentou elevados valores de estruturação (média de 0,47) bem como,
apresentou elevada variação intrapopulacional (84%) para as populações da FLC-FNCS. De acordo com a Análise
Bayesiana, as populações estudadas estão compostas e estruturadas por três pools gênicos (K = 3). Em síntese, os
primers ISSR comprovaram sua eficácia para estudos genético-moleculares de formigas cortadeiras e em relação à
diversidade genética, os resultados mostraram que apesar das populações estarem estruturadas, observou-se
elevada variabilidade intrapopulacional (i.e., em cada um dos ninhos), fato que pode ser explicado em partes pelo
acasalamento poliândrico (cópula de uma rainha com vários machos no período reprodutivo) existente em
formigas cortadeiras.
APOIO
À Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB)
143
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
ADAPTAÇÃO DE PROTOCOLO PARA CARIOTIPAGEM DE CÉLULAS DE RUMINANTES
Ludymila Furtado Cantanhêde1; Luana Oliveira dos Santos2; João Carlos Farias Santana da Silva2; Sérgio Alves
do Nascimento3; Maiana Silva Chaves1; Priscila Germany Corrêa da Silva1; Pábola Santos Nascimento1; José
Carlos Ferreira da Silva1; Maysa Ceci Soares Muniz1; Valeska Andréa Ático Braga1; Marcelo Tigre Moura1;
Marcos Antônio Lemos de Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biotécnicas aplicadas à Reprodução Animal - UFRPE; (2)Laboratório de Genética e Citogenética
Animal - UFPE; (3)Laboratório de Virologia Animal - UFRPE
RESUMO
A análise citogenética contribui para a avaliação da viabilidade embrionária, visto que alterações cromossômicas
podem causar baixa viabilidade neonatal e perda na produção. A partir da análise do protocolo de cariotipagem em
ruminantes, este trabalho teve como objetivo adaptar o protocolo de cariótipo de células de ovinos e bovinos a um
protocolo mais simples, bem estabelecido, utilizado em células humanas. Linfócitos ovinos foram obtidos de
sangue periférico e posteriormente tratados com fitohemaglutinina para estimular a mitose. A linhagem
imortalizada de células MDBK foi utilizada para a cariotipagem de bovinos. Os cultivos celulares foram feitos
com meio RPMI adicionado de 5% de SFB. As células foram tratadas com 0,0016% de colchicina por duas horas
para sincronização em metáfase. As amostras foram centrifugadas a 700xg por cinco minutos, o sobrenadante foi
descartado e adicionado solução hipotônica de KCl a 37 °C por 15 minutos e novamente centrifugados. O
sobrenadante foi retirado e a solução de fixação (3:1 metanol e ácido acético) foi gotejada, permanecendo por 20
minutos. Após nova centrifugação e descarte do sobrenadante, a suspensão de células foi gotejada em lâminas e
corada com 5% de Giemsa por 10 minutos. A cariotipagem de células em ovinos foi o mesmo protocolo descrito
para humanos. As células ovinas obtidas em metáfase tinham boa nitidez, apesar do baixo percentual de células
sincronizadas. Os cromossomos encontravam-se com boa coloração, individualizados, facilitando a observação
morfológica de seis cromossomos metacêntricos e 48 telocêntricos, totalizando os 54 cromossomos da espécie (2n
= 54). Em bovinos, o protocolo necessitou de algumas modificações no momento da preparação das células para
sincronização do ciclo celular. As células MDBK foram repicadas 24 horas antes da cariotipagem, para obter
maior percentual de células em mitose antes do tratamento com a colchicina. Esta modificação permitiu obter
células em metáfase, mas com difícil visualização dos cromossomos. Em algumas células, os cromossomos
encontravam-se individualizados, mas com cariótipo incompleto. Outras células apresentavam cromossomos
justapostos, impossibilitando a análise morfológica ou contagem. Ajustes na fixação deverão permitir a correta
visualização das metáfases em bovinos. O cariótipo de células de ovinos pode ser realizado com o protocolo
desenvolvido para humanos, embora seja necessário algumas adaptações para realizar o cariótipo de células de
bovinos.
APOIO
CNPq; CAPES; FACEPE
144
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
ANÁLISE DA VARIABILIDADE GENÉTICA EM CURIÓS (SPOROPHILA ANGOLENSIS) CRIADOS
NO VALE DO SÃO FRANCISCO
Joel Fonseca Nogueira1; Eulália Alves Barros2; João José de Simoni Gouveia2.
E-mail: [email protected]
(1)
Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco /Graduando
em Medicina Veterinária, Universidade Federal do Vale do São Francisco; (2)Grupo de Pesquisa em Genética
Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco /Docente, Colegiado Acadêmico de Zootecnia,
Universidade Federal do Vale do São Francisco
RESUMO
O curió (Sporophila angolensis) é uma ave canora nativa da fauna brasileira bastante cobiçada pelos criadores.
Devido à importância econômica e cultural que a espécie possui, o entendimento das questões referentes à sua
evolução genética merece destaque. Tais informações podem ser acessadas por análise do pedigree, que são
facilmente obtidos uma vez que são animais criados em cativeiro. O objetivo do presente trabalho foi analisar,
utilizando informações genealógicas, a estrutura populacional e a variabilidade genética de S. angolensis oriundos
de dois criatórios localizados no Vale do São Francisco. Foram analisadas informações de 59 indivíduos de dois
criatórios particulares (devidamente registrados no IBAMA), localizados nas cidades de Petrolina-PE e Paulo
Afonso-BA. Após tabulação das informações, foi realizada a análise de consistência dos dados e geração de
gráficos utilizando os pacotes kinship2 e Pedigree, do ambiente estatístico R. O software Endog v4.8 foi utilizado
para obtenção dos seguintes parâmetros populacionais: número efetivo de fundadores (fe), número efetivo de
ancestrais (fa), contribuição de cada ancestral para a variabilidade genética da população, coeficiente de
parentesco médio (AR), coeficiente de endogamia médio (F) e estatísticas F de Wright (FIS, FST e FIT). O
pedigree final consistiu de 557 indivíduos, distribuídos em nove gerações. Os valores estimados de fe e fa foram
88 e 64, respectivamente. Ao todo 34 animais foram identificados como responsáveis por 50% da variabilidade
genética da população. A diferença observada entre os valores de fe e fa indica que está ocorrendo o uso
desbalanceado de reprodutores, sendo este um dos fatores que pode levar a diminuição da variabilidade genética
de uma população. O coeficiente de parentesco médio (AR) e o coeficiente de endogamia médio (F) para
população total foram respectivamente, 1,09% e 1,02%. Quando analisados separadamente, os valores de AR e F
estimados para o criatório de Paulo Afonso foram 1,31% e 0,89%, e para o criatório de Petrolina 1,68% e 1,13%,
respectivamente. Estes valores indicam que, embora o número de reprodutores seja reduzido, os acasalamentos
endogâmicos não estão ocorrendo de forma intensa. Para as subpopulações estudadas, os valores da estatística F
de Wright observados foram Fis= - 0,0218; Fst= 0,0134 e Fit= - 0,008, indicando que não é possível diferenciar
geneticamente as subpopulações e que a variabilidade genética tem se mantido dentro dos criatórios.
145
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
ANÁLISE PRELIMINAR DA MUTAÇÃO CAUSAL PARA O RAQUITISMO HIPOFOSFATÊMICO EM
OVINOS DAS RAÇAS DORPER E WHITE DORPER
Sávio Luiz Pereira Nunes1,21; João José de Simoni Gouveia1,32.
E-mail: [email protected]
(1)
1Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco; 2Bolsista
do Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica (PIBIC/CNPq/UNIVASF).; (2)1Grupo de Pesquisa em
Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco; 3Docente, Colegiado Acadêmico de
Zootecnia, Universidade Federal do Vale do São Francisco.
RESUMO
Os programas de melhoramento genético permitem a seleção de genótipos mais produtivos. Todavia, a presença
de alelos recessivos deletérios nas populações, junto à utilização desbalanceada de reprodutores e os
acasalamentos endogâmicos podem contribuir para o aparecimento de doenças genéticas nos rebanhos. Diversas
doenças genéticas já possuem mutação causal descrita em ovinos, tais como o Raquitismo Hipofosfatêmico,
Astenia Cutânea, Síndrome do Cordeiro Aranha e Lisencefalia e Hipoplasia Cerebelar. O Raquitismo
Hipofosfatêmico foi descrito em animais da raça Corriedale e a mutação causal descrita é uma transição (C>T) na
posição 145 do gene da Fosfoproteína 1 Acídica da Matriz da Dentina (DMP-1), que leva ao aparecimento de um
stop codon prematuro, ocasionando a produção de uma proteína truncada na região C-terminal. Dentre os
sintomas, podem ser citados: deformidades angulares nos membros, lordose torácica e redução do crescimento.
Assim, o objetivo do presente estudo foi identificar, através de PCR-RFLP, animais portadores da mutação causal
para o Raquitismo Hipofosfatêmico em rebanhos das raças Dorper e White Dorper. Para isso, foram coletadas
amostras de sangue de 48 indivíduos, sendo 22 da raça Dorper e 26 da raça White Dorper. O DNA foi extraído
utilizando um protocolo de extração salina. Para a genotipagem foi realizada uma PCR utilizando os primers 5'ATGGAAAATGGGGTGACTTG-3' e 5'-CATCCCTTCATCGTCGAACT-3', seguida de digestão utilizando a
enzima NlaIII. Os produtos de digestão foram submetidos à eletroforese em gel de agarose 3% por 3h a 80V e
corados com brometo de etídeo. Todos os 48 animais genotipados foram identificados como homozigotos sadios
para o Raquitismo Hipofosfatêmico, caracterizados pelo genótipo CC. Apesar de não ter sido detectado o alelo
mutante nos animais amostrados, não se pode afirmar a ausência dele nas raças estudadas. Pois, como dito
anteriormente, a doença ora analisada foi descrita inicialmente na raça Corriedale e não nas raças estudadas neste
trabalho, porém a história de formação e os níveis de admixture encontrados nas raças de ovinos modernas
permitem propor que mutações causais associadas a doenças genéticas segreguem em raças diferentes da raça
inicialmente descrita. Dessa maneira, métodos de detecção dessas mutações se prestam como ferramentas
importantes no combate ao aparecimento de doenças genéticas que prejudiquem a produção.
APOIO
CNPq
146
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
CONECTIVIDADE GENÉTICA ENTRE POPULAÇÕES DE DROSOPHILA NEBULOSA (DIPTERA,
DROSOPHILIDAE) DA FLORESTA AMAZÔNICA E CAATINGA, DEMONSTRADA PELO
COMPARTILHAMENTO DE INVERSÕES CROMOSSÔMICAS
Rafaela Alves de Oliveira1; Geórgia Fernanda Oliveira1; Claudia Rohde1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Drosophila nebulosa é uma espécie que pertence ao grupo willistoni, sendo a única do grupo com elevada
ocorrência no ambiente semiárido da Caatinga. Isso demonstra sua alta plasticidade ecológica, já que é uma
espécie amplamente distribuída em variados ambientes da região Neotropical, desde o sul dos Estados Unidos, até
a porção central da Argentina. Por ser uma das espécies de drosofilídeos mais abundantes na Caatinga, objetivouse caracterizar a diversidade genética das populações locais deste bioma, em paralelo com investigações da
diversidade genética de populações de ambientes úmidos, em especial a Floresta Amazônica. Abordagens
anteriores feitas com sequências de genes mitocondriais não revelaram variabilidade capaz de diferenciar as
populações da Amazônia e da Caatinga. Na continuidade dos estudos, este trabalho se propôs a investigar as
mesmas populações quanto ao padrão de rearranjos cromossômicos, presentes no cromossomo III da espécie. As
lâminas contendo cromossomos politênicos foram preparadas a partir de células da glândula salivar de larvas em
terceiro estágio, mantidas em cultivo no Laboratório de Genética da UFPE-CAV. As coletas foram realizadas em
2008 e 2013 na Caatinga, e em 2015 na Floresta Amazônica. Os resultados indicaram que as populações da
Amazônia compartilharam rearranjos com as populações da Caatinga, especialmente uma das inversões,
denominada inv. III-C, que encontrou-se fixada nos indivíduos dos dois ambientes e não em amostras do sul do
Brasil. Os dados de ocorrência e frequência de inversões reforçam importantes premissas a respeito da
conectividade entre as florestas úmidas do Brasil (Atlântica e Amazônica) no passado e da importância dos
corredores ecológicos existentes nas regiões centrais do Brasil, dominadas nos tempos atuais pela Caatinga e
Cerrado. O fato de as populações de D. nebulosa da Caatinga possuírem os mesmos rearranjos que as populações
da Amazônia abre caminho para um aprofundamento dos padrões de conectividade, investigado por meio deste
marcador genético, visto que a presença de inversões cromossômicas está sob seleção natural devido à manutenção
de blocos gênicos, que não sofrem recombinação. A ocorrência de inversões interfere não só no sucesso de
colonização dos indivíduos que as portam, mas também na manutenção e na diferenciação genética das
populações. Assim, este estudo indica que há relação genética entre os ambientes da Amazônia e a Caatinga.
APOIO
PROPESQ-UFPE.
147
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
DESCRIÇÃO CARIOTÍPICA DE PROCYON CANCRIVORUS (CARNIVORA: PROCYONIDAE)
Elianderson Gomes de Sá1; Palloma Lima de Oliveira1; Gabriela Félix do Nascimento Silva2; Kyria Cilene de
Andrade Bortoleti1; Helen Maria Duarte do Rêgo Barros3.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVASF / Colegiado de Ciências Biológicas; (2)UNIVASF / Centro de Conservação e Manejo de Fauna da
Caatinga; (3)Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
O gênero Procyon está constituído por três espécies encontradas no continente Americano: P. lotor (Linnaeus,
1758), P. pygmaeus (Merrian, 1901) e P. cancrivorus (Cuvier, 1798), sendo esta última amplamente distribuída
entre as Américas Central e do Sul, incluindo todos os biomas brasileiros. Estudos citogenéticos estão disponíveis
somente para P. lotor, que apresenta número diploide 2n = 38 cromossomos e cariótipo constituído principalmente
por cromossomos de dois braços. A descrição do cariótipo de um táxon representa um passo inicial para o estudo
de comparações citogenéticas e, portanto, para o entendimento das alterações cromossômicas que surgem durante
a evolução dos organismos. Nesse sentido, esse trabalho teve como objetivo descrever o cariótipo de P.
cancrivorus (mão-pelada), mediante análise convencional e impregnação por nitrato de prata (AgNO3), a fim de
comparar seu complemento cromossômico com o de P. lotor. Amostras de sangue foram coletadas de sete
indivíduos de mão-pelada (quatro fêmeas e três machos) provenientes dos estados do Ceará, Pernambuco e Bahia,
mantidos no Centro de Conservação e Manejo de Fauna da Caatinga (CEMAFAUNA), em Petrolina/Pernambuco.
Para as análises cromossômicas, as preparações citológicas foram realizadas a partir da cultura de linfócitos do
sangue. Procyon cancrivorus apresentou 2n = 38, XX ou XY, com predominância de cromossomos metacêntricos
e submetacêntricos, cromossomo X de tamanho médio com morfologia metacêntrica e um pequeno Y
acrocêntrico, semelhante ao cariótipo de P. lotor. Devido à presença de 17 pares de cromossomos com dois braços
e um par com um braço, o número fundamental (NF) foi de 70, diferindo do descrito para P. lotor (16 pares com
dois braços e dois pares com um braço; NF = 74). Sítios das regiões organizadoras de nucléolo (Ag-RON) ativos
foram detectados nos braços curtos de um par de autossomos, coincidindo com o que tem sido reportado para a
espécie P. lotor. Os dados obtidos nesse estudo demonstram uniformidade no número diploide entre os
procionídeos cariotipados até o momento (quatro espécies). No entanto, diferenças no tamanho em alguns braços
cromossômicos foram observadas entre as duas espécies do gênero Procyon, as quais serão melhor investigadas
por meio de outras técnicas de coloração diferencial, permitindo um estudo citogenético comparativo mais
detalhado entre P. lotor e P. cancrivorus.
APOIO
Ministério da Integração Nacional
148
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
DETECÇÃO DE GENES DA FAMÍLIA 'DPPA' EM EMBRIÕES E CÉLULAS SOMÁTICAS DE
BOVINOS
Pábola Santos Nascimento1; Marcelo Tigre Moura1; Priscila Germany Corrêa da Silva1; Ludymila Furtado
Cantanhêde1; José Carlos Ferreira Silva1; Maiana Silva Chaves1; Maysa Ceci Soares Muniz1; Elizabete Julia da
Silva1; Roberta Lane de Oliveira Silva2; Ana Maria Benko Iseppon2; Cláudio Coutinho Bartolomeu1; Marcos
Antonio Lemos de Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Departamento de Medicina Veterinária, Laboratório de Biotécnicas
Aplicadas à Reprodução, Recife, PE.; (2)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética,
Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Recife, PE.
RESUMO
A família de genes DPPAs foi identificada em embriões no período antes da implantação e posteriormente no
epiblasto, células germinativas e células-tronco embrionárias (CTE). Os DPPAs são classificados como genes
relacionados à pluripotência (GRP), ou seja, contribuem para manutenção do estado indiferenciado de embriões e
CTEs. No entanto, os DPPAs ainda não foram caracterizados em ruminantes. Objetivou-se detectar os DPPA2,
DPPA3 e DPPA4 em células do cumulus e em blastocistos bovinos. Ovários bovinos foram coletados e
transportados ao laboratório. Foi realizada a aspiração dos folículos de 2-8 mm para obtenção dos complexoscumulus-oophorus (CCO). Os CCOs foram selecionados quanto à presença de mais de uma camada de células do
cumulus e citoplasma homogêneo do ovócito. As células do cumulus foram obtidas através de pipetagem em PBS
e imediatamente criopreservadas em freezer -80º C. Posteriormente, CCOs foram maturados em estufa com
umidade saturada, 5% de CO2 em meio TCM199 suplementado a 38,5º C por 24 horas. Em seguida, os CCOs
foram co-incubados com espermatozóides por 18 horas, enquanto que os embriões foram cultivados em meio SOF
por sete dias nas mesmas condições descritas acima. O RNA total foi extraído de pools de 16 blastocistos ou
500.000 células do cumulus através do kit ReliaprepTM (Promega). A síntese de cDNA foi realizada utilizando o
kit QuantiTect® (Qiagen). Os primers foram desenhados a partir de sequências de ovinos e bovinos no Genbank.
As reações de PCR foram realizadas em termociclador (Techne), com desnaturação inicial de 94º C por 5 minutos,
seguido por 35 ciclos de 94º C por minuto, 58º C por um minuto e 72º C por 1 minuto, e extensão final de 72º C
por 10 minutos. Os amplicons foram visualizados em gel de agarose 1,5% corados com Blue-Green Loading Dye
(LGC Biotecnologia). A eletroforese ocorreu a 80V, 120A por 40 minutos. O gene β-actina foi utilizado como
controle positivo. Apesar do DPPA3 ser essencial para a produção de oócitos através da repressão da transcrição e
da condensação da cromatina, o mesmo não foi detectado em células do cumulus de bovinos. Por ser expresso em
ovinos, isso sugere uma diferença espécie específica. A detecção do DPPA2 e DPPA3 em blastocistos sugere
perfil de expressão semelhante em embriões e CTEs em mamíferos. Os genes DPPA2 e DPPA4 foram detectados
em células do cumulus, sugerindo possíveis efeitos parácrinos sobre os ovócitos em estádio de vesícula
germinativa.
APOIO
FACEPE, CNPq e CAPES
149
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
DETECÇÃO DE GENES MARCADORES DE CÉLULAS DO CUMULUS E FIBROBLASTOS EM
PEQUENOS RUMINANTES
Ludymila Furtado Cantanhêde1; Marcelo Tigre Moura1; Roberta Lane de Oliveira Silva2; Priscila Germany
Corrêa da Silva1; Maiana Silva Chaves1; Pábola Santos Nascimento1; José Carlos Ferreira da Silva1; Maysa
Ceci Soares Muniz1; Valeska Andréa Ático Braga1; Ana Maria Benko Iseppon2; Marcos Antônio Lemos de
Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biotécnicas aplicadas à Reprodução Animal - UFRPE; (2)Laboratório de Genética e
Biotecnologia Vegetal - UFPE
RESUMO
Genes com expressão tecido-específica contribuem para monitorar o processo de reprogramação celular ou
caracterizar tecidos heterogênios. O objetivo foi testar primers para genes com expressão tecido-específica em
células do cumulus e fibroblastos de pequenos ruminantes. Ovários de caprinos e ovinos foram coletados em
abatedouros. Após aspiração dos folículos em meio TCM-199 Hank's suplementado, os complexos-cumulusoophorus foram selecionados para maturação in vitro em meio TCM-199 com sais de Earle's suplementado em
estufa com 5% de CO2, umidade saturada a 38,5 °C por 24 horas. Após a maturação, os ovócitos foram
desnudados com 0,2% de hialuronidase e as células do cumulus foram armazenadas a -80 °C. Por sua vez, os
fibroblastos foram cultivados em meio DMEM suplementado em estufa, sob as condições descritas acima. Os
cultivos de fibroblastos foram repicados uma vez por semana, caracterizando uma passagem. Assim, na quinta
passagem, estas células foram armazenadas a -80 °C. O RNA total foi obtido com o kit ReliaprepTM (Promega) e
realizou-se posteriormente a síntese de cDNA com o kit QuantiTect® (Qiagen), de acordo com as recomendações
dos fabricantes. Para as reações de PCR, o cDNA foi desnaturado e a enzima Taq polimerase foi ativada a 94° C
por cinco minutos em termociclador (Biorad). Foram realizados 35 ciclos de PCR, com desnaturação a 94 °C por
um minuto, anelamento a 58 °C por um minuto, extensão a 72 °C por um minuto e a etapa final de extensão a 72
°C por 10 minutos. Os amplicons foram visualizados em gel de agarose a 1,5% a 70V, 120 A por 40 minutos. Os
primers testados foram desenhados para seis genes candidatos com expressão tecido-específica: PTGS2 e HAS2
em células do cumulus, enquanto que THY1, SNAI2, AQP3 e TLR4 em fibroblastos. Foi observada a expressão
de PTGS2 em células do cumulus das duas espécies, porém HAS2 foi detectado apenas em ovinos, possivelmente
devido a polimorfismos na sequência amplificada ou baixo nível de expressão em caprinos. Apesar de THY1 não
ter sido detectado, SNAI2 foi expresso em fibroblastos de caprinos e ovinos. Este fato demonstra que SNAI2 é um
bom marcador molecular para fibroblastos de pequenos ruminantes. Os genes TLR4 e AQP3 são considerados
com expressão tecido-específica em queratinócitos na epiderme, mas TLR4 foi detectado em fibroblastos de
caprinos e ovinos. Conclui-se que os primers para os genes PTGS2, TLR4 e SNAI2 podem ser utilizados como
marcadores tecido-específicos em pequenos ruminantes.
APOIO
CNPq; CAPES; FACEPE
150
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
DIAGNÓSTICO MOLECULAR DA LISENCEFALIA E HIPOPLASIA CEREBELAR EM OVINOS DA
RAÇA SANTA INÊS NO ESTADO DA BAHIA
Nara Nagle Vieira Gonçalves Matos1; Jean Victor Nunes Hissette2; Flávia Caroline Moreira Bezerra3; João José
de Simoni Gouveia4; Gisele Veneroni Gouveia5.
E-mail: [email protected]
(1)
Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Mestranda
em Ciência Animal, Universidade Federal do Vale do São Francisco. Bolsista da Fundação de Amparo à Ciência e
Tecnologia de Pernambuco (FACEPE).; (2)Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade
Federal do Vale do São Francisco/ Bolsista do Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica
(PIBIC/CNPq/UNIVASF).; (3)Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do
São Francisco/ Participante do Programa Institucional de Voluntários de Iniciação Científica (PIVIC/UNIVASF);
(4)
Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Docente,
Colegiado Acadêmico de Zootecnia, Universidade Federal do Vale do São Francisco.; (5)Grupo de Pesquisa em
Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Docente, Colegiado Acadêmico de
Zootecnia, Universidade Federal do Vale do São Francisco
RESUMO
A ovinocultura vem se expandindo no nordeste brasileiro, contudo, faz-se necessário o desenvolvimento de
estudos que fomentem as criações. A Lisencefalia e Hipoplasia Cerebelar (LHC) é uma doença autossômica
recessiva associada à má formação do sistema nervoso central dos ovinos, devido a uma deleção de 31pb no éxon
36 do gene da reelina, que está associado à organização neuronal durante a embriogênese. O desenvolvimento das
raças modernas de ovinos está associado a altos níveis de admixture, sugerindo que mutações podem segregar em
raças diferentes das quais foram inicialmente relatadas. A história de formação do Santa Inês indica a participação
de animais originados da Península Ibérica, região onde a mutação causal foi primariamente descrita. O objetivo
deste estudo foi identificar, através de testes moleculares, animais portadores da mutação causal da LHC em
ovinos da raça Santa Inês. Para isso, foi colhido sangue de 101 animais de três propriedades no estado da Bahia.
Obteve-se o DNA utilizando-se um protocolo de extração salina. Para genotipagem, foi realizada uma PCR
utilizando os primers 5'-TTGCCTTCTCCGGTTTAATG-3' e 5'-AGGGATTTGTGATGCTGGAC-3' seguida de
eletroforese em gel de agarose a 3%, por 3h, a 80V e corados com brometo de etídeo. Todos os animais
genotipados foram identificados como homozigotos para o alelo selvagem (livres da mutação causal para a LHC).
Todavia, vale salientar, que a amostragem é relativamente pequena para que se possa inferir que não há esta
mutação na raça Santa Inês, tendo em vista que, mesmo nas raças onde já existe a descrição da doença, a
frequência do alelo mutante é relativamente baixa. A identificação de indivíduos portadores de mutações quando
realizada antes do aparecimento de animais afetados pode evitar prejuízos. Por isso, faz-se necessário que se avalie
um número maior de animais para a mutação em questão para quantificar de forma mais precisa este risco.
Portanto, torna-se evidente a importância de estudos com testes moleculares que possam identificar possíveis
mutações, guiando a realização dos acasalamentos e reduzindo possíveis prejuízos diretos e indiretos aos animais e
aos produtores.
APOIO
FACEPE
151
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
DIVERSIDADE CARIOTÍPICA EM HYPSIBOAS (ANURA: HYLIDAE): O QUE OS CROMOSSOMOS
PODEM NOS DIZER SOBRE A EVOLUÇÃO DO GÊNERO
Millena Santos Figueredo1; Marcelle Amorim Carvalho2; Miguel Trefault Rodrigues3; Caroline Garcia1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia; (2)Instituto de Nacional de Pesquisas da Amazônia; (3)Universidade
de São Paulo
RESUMO
Hypsiboas é um gênero da família Hylidae, composto por 92 espécies com ampla variação morfológica. No Brasil,
estudos citogenéticos deste grupo são escassos, com apenas 20 espécies com caracterização citogenética. Este
gênero apresenta conflitos taxonômicos e filogenéticos, sendo necessária a sua análise citogenética a fim de
esclarecer mecanismos de modificação cromossômica envolvidos na diferenciação do grupo e verificar a
ocorrência de diversidade críptica, contribuindo para elucidar suas relações evolutivas. No presente estudo foram
analisadas quatro espécies de Hypsiboas (H. albomargintaus, H. crepitans, H. faber e H. pombali) de quatro
municípios da Bahia (Jequié, Maracás, Uruçuca e Santa Cruz Cabrália) e um município do Espírito Santo (Santa
Teresa), a partir da técnica de Bandamento C e de impregnação por nitrato de prata. A análise comparativa
demonstrou a manutenção de número diploide padrão para a família com 2n = 24 e NF = 48. Apesar da
semelhante morfologia cromossômica, os padrões de distribuição de heterocromatina variam tanto entre
populações quanto entre espécies diferentes. É possível observar a manutenção de blocos de heterocromatina na
região centromérica. Foi encontrada variação intraespecífica em H. albomarginatus e H. crepitans, que pode ser
reflexo de diversidade críptica. Foram observadas similaridades na distribuição de heterocromatina em populações
geograficamente próximas nestas duas espécies. Variações na localização da RON foram evidenciadas em H.
albomarginatus e H. crepitans. Além disso, H. albomarginatus apresenta as RONs no par 2 precedidas de blocos
heterocromáticos, além de distribuição de heterocromatina concentrada na região pericentromérica, com exceção
da população de Santa Teresa-ES, mais distante geograficamente; o mesmo ocorre em H. crepitans, que apresenta
maior similaridade na distribuição dos blocos heterocromáticos na região pericentromérica, além de braços
heterocromáticos nas populações da Bahia. Os resultados descritos demonstram a ocorrência de inversões
pericêntricas e paracêntricas, caracterizadas pela variação na distribuição de heterocromatina, além fissões e fusões
que resultam na diferenciação morfológica e localização das RONS. Adicionalmente, este estudo sugere relação
filogeográfica no grupo. Destaca-se a necessidade de se ampliar os estudos para outras espécies e populações, a
fim de se obter maiores evidências para estabelecimento dos mecanismos de evolução cromossômica no grupo.
APOIO
CAPES
152
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
DIVERSIDADE GENÉTICA DE ESPÉCIES DE ACESTRORYNCHUS (CHARACIFORMES,
ACESTRORHYNCHIDAE) (BLOCH, 1794) DO RIO GURUPI MARANHÃO
Iraine Duarte de Souza1; Luis Fernando Carvalho Costa1; Wiiliam Rodrigues de Lima1; Israel Higino de Sousa1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFMA
RESUMO
Os peixes da ordem Characiformes fornecem um exemplo dos complexos padrões evolutivos e biogeográficos
geralmente vistos nas faunas tropicais e subtropicais. Dentro de Characiformes, a família Acestrorhynchidae é
composta por apenas um único gênero, Acestrorhynchus. Há poucos dados sobre a ocorrência e diversidade das
espécies de Acestrorhynchus em rios do Maranhão, principalmente, quanto ao seu status taxonômico e seus níveis
de variabilidade genética. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar os níveis de diversidade genética de
espécies de Acestrorhynchus no rio Gurupi, utilizando a região controle como marcador molecular. Foram
coletados exemplares de duas espécies nas bacias do Gurupi, A. lacustris e A. heterolepis. A análise revelou 12
haplótipos diferentes para as duas espécies, com uma diversidade haplotípica de 0,000 para A. lacustris e 0,514
para A. heterolepis. O segmento da região controle do mtDNA permitiu a identificação de apenas um grupo
monofilético para as duas espécies estudadas, pois observou-se compartilhamento de haplótipos ou haplótipos
muito parecidos entre indivíduos de A. lacustris e A. heterolepis. A árvore de máxima verossimilhança mostrou
que as espécies A. heterolepis e A. lacustris formam um único clado monofilético altamente suportado. A distância
genética entre A. lacustris e A. heterolepis foi zero. Estes resultados são passíveis de diferentes interpretações.
Durante edição das sequências foi perdida uma pequena parte da região inicial polimórfica, o que poderia explicar
uma baixa diversidade haplotípica, porém, não explica porque A. lacustris e A. heterolepis se comportam como
uma única espécie. Quanto a identificação morfológica, as duas espécies são bastante diferentes entre si, de modo
que erros de identificação seriam quase improváveis. Outra hipótese é a hibridização interespecífica, pois A.
heterolepis e A. lacustris podem ter hibridizado no mtDNA, mas mantendo suas morfologias inalteradas,
pois existem similaridades reais entre os espécimes identificados como A. lacustris e A. heterolepis, que coexistem
na mesma bacia e se comportam molecularmente como uma única espécie. Entretanto, são necessários outros
marcadores nucleares para confirmar a hipótese de introgressão e uma reanálise da morfologia dos indivíduos para
rejeitar a hipótese de erro de identificação.
APOIO
SISBIOTA UFMA LABGEM
153
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
EFEITOS GENÉTICOS SOBRE A PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS
Pábola Santos Nascimento1; Marcelo Tigre Moura1; Priscila Germany Corrêa da Silva1; Ludymila Furtado
Cantanhêde1; José Carlos Ferreira Silva1; Maiana Silva Chaves1; Valeska Andrea Ático Braga1; Maysa Ceci
Soares Muniz1; Joyce Patu de Oliveira Maciel1; Matheus Cavalcanti Farias1; Cláudio Coutinho Bartolomeu1;
Marcos Antonio Lemos de Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Departamento de Medicina Veterinária, Laboratório de Biotécnicas
Aplicadas à Reprodução, Recife, PE.
RESUMO
A produção in vitro (PIV) permite aumentar o número de descendentes de fêmeas com desempenho zootécnico
superior ou com distúrbios reprodutivos adquiridos. Os procedimentos para PIV já estão relativamente definidos,
onde diversos fatores ambientais foram identificados, como composição dos meios e condições laboratoriais, que
são constantemente aperfeiçoados para elevar a produtividade da tecnologia. Apesar disso, a eficiência da PIV
permanece muito variável, quando avaliada pela quantidade e qualidade dos embriões produzidos e seu potencial
de estabelecimento de gestações. No entanto, a influência dos aspectos genéticos sobre a eficiência da PIV
permanecem pouco investigados. O objetivo foi avaliar se há efeito genético sobre a produção in vitro de embriões
bovinos. Ovários foram coletados em abatedouro e transportados ao laboratório. Folículos entre 2-8mm foram
aspirados para obtenção dos complexos-cumulus-oophorus (CCO). Os CCOs foram selecionados e maturados em
meio TCM 199 suplementado, em atmosfera de umidade saturada com 5% de CO2 a 38,5ºC por 24 horas. Em
seguida, CCOs foram submetidos à fecundação in vitro (FIV) ou ativação partenogenética (AP). Para a FIV, os
ovócitos foram co-incubados com espermatozóides do Touro 1 (T1), Touro 2 (T2), ou Touro 3 (T3) por 18 horas.
Os demais ovócitos foram desnudados com 0,2% hialuronidase para AP. Em seguida, os ovócitos foram ativados
com 5µM ionomicina por 5 minutos e depois com 2mM 6DMAP por 4-5 horas. Os zigotos foram cultivados em
meio SOF em estufa sob as condições descritas acima. No dia 3, as estruturas foram avaliadas quanto a taxa de
clivagem, no dia 5 quanto a taxa de mórulas e no dia 7 quanto a taxa de blastocistos. Os resultados foram:
clivagem AP= 88,78%A ; T1= 58,33% B; T2=89,38%A ; T3= 77,77%A , mórulas AP= 28,03% A; T1= 31,66% A;
T2=53,09% B e T3= 51,11% B e blastocistos AP= 51,04%A; T1= 31,66% B; T2= 40,70% AB e T3= 33,33% B. Houve
diferença entre AP e as médias de clivagem dos três touros (p=0,022); mórulas (p=0,0012) e blastocistos
(p=0,011), demonstrando a influência genética sobre o desenvolvimento e sobrevivência embrionária. Outra
evidência desta hipótese foi a diferença entre os touros quanto ao desenvolvimento nos estádios iniciais (clivagem
e mórula), apesar dos três touros terem desempenho semelhante na produção de blastocistos. Conclui-se que
fatores genéticos tem efeito sobre a eficiência da produção in vitro de embriões bovinos.
APOIO
FACEPE, CNPq e CAPES.
154
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
ESTRUTURA POPULACIONAL EM OVINOS DA RAÇA DORPER ORIUNDOS DE REBANHOS
LOCALIZADOS NA REGIÃO NORDESTE DO BRASIL
João Luiz Pereira de Souza Filho1; Joel Fonseca Nogueira2; Eulália Alves Barros3; Taís Jobard Silva e Macedo4;
João José de Simoni Gouveia3.
E-mail: [email protected]
(1)
Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco; (2)Grupo de
Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco / 2Graduando em
Medicina Veterinária, Universidade Federal do Vale do São Francisco; (3)Grupo de Pesquisa em Genética Animal
Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco / Docente, Colegiado Acadêmico de Zootecnia,
Universidade Federal do Vale do São Francisco; (4)Doutoranda em Biotecnologia em Agropecuária, Rede Nordeste
de Biotecnologia
RESUMO
A ovinocultura possui um importante papel econômico na região Nordeste do Brasil e a raça Dorper tem se
destacado, principalmente, em cruzamentos como alternativa para incrementar a produção de carne. Os estudos
buscando entender os efeitos da endogamia em ovinos da raça Dorper no Brasil podem ser considerados
incipientes. Assim, o objetivo deste estudo foi estimar parâmetros populacionais em ovinos da raça Dorper em três
rebanhos localizados na região Nordeste do Brasil. Para isso, foram utilizadas informações genealógicas de 537
animais da raça Dorper pertencentes a três rebanhos localizados nos estados de Sergipe, Pernambuco e Bahia. A
identificação única de cada animal foi utilizada para acessar as informações genealógicas disponíveis no banco de
dados da Associação Brasileira de Criadores de Ovinos (ARCO) e o pedigree final consistiu de 1200 animais. A
análise de consistência dos dados e a geração dos pedigrees foram realizadas utilizando os pacotes kinship2 e
Pedigree do ambiente estatístico R, e o software Endog v4.8 foi utilizado para o cálculo dos seguintes parâmetros
populacionais: número efetivo de fundadores e ancestrais, coeficientes de endogamia, contribuição de cada
ancestral para a variabilidade genética da população e estatísticas F de Wright. O número efetivo estimado de
fundadores (fe) foi 86 e de ancestrais (fa) 64. A diferença encontrada entre os valores de fe e fa sugere uma
diminuição na variabilidade genética na população em decorrência do uso desbalanceado de reprodutores. Apenas
25 ancestrais foram responsáveis por 50% da variabilidade genética, o que também indica a utilização de forma
mais intensa de poucos reprodutores na formação da população estudada. Entretanto, o coeficiente médio de
endogamia (F) para a população foi de 0,0095 e os valores de F estimados para os três rebanhos separadamente
foram 0,019; 0,020 e 0,000, respectivamente. Tomados em conjunto, os valores de F juntamente com os valores
do coeficiente de endogamia de Wright (-0,024; 0,021 e -0,003, para FIS, FST e FIT, respectivamente) sugerem
que embora a base genética para formação dos rebanhos analisados seja pequena, a subdivisão populacional é
fraca e os acasalamentos estão sendo conduzidos de forma a evitar o aumento da endogamia. Por fim, deve-se
ressaltar que o presente estudo deve ser expandido para permitir a compreensão mais profunda da estrutura
populacional e da variabilidade genética de ovinos da raça Dorper na região Nordeste do Brasil.
APOIO
Univasf.
155
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
ESTUDO CROMOSSÔMICO EVOLUTIVO DE EURYSTERNUS HIRTELLUS (COLEOPTERA:
SCARABAEIDAE)
Moara Rodrigues Costa1; Igor Costa de Amorim1; Rita de Cássia de Moura1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, Universidade de Pernambuco (UPE); Programa de PósGraduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)
RESUMO
O gênero Eurysternus (Coleoptera: Scarabaeidae) possui 53 espécies e é endêmico da região Neotropical. Nesse
gênero, a análise citogenética foi realizada apenas em duas espécies e revelou a presença de cariótipos derivados,
sendo 2n=12, Xyp em E. hirtellus e 2n=8, neo-XY em E. caribaeus. Nesta última espécie também foi feito o
mapeamento de alguns genes de famílias multigênicas. O objetivo deste trabalho foi mapear as sequências de
DNAr 18S, 5S e histona H3 em E. hirtellus e comparar com os resultados observados em E. caribaeus, visando
esclarecer os mecanismos envolvidos na evolução cromossômica do gênero Eurysternus. Nesse estudo foram
analisados seis indivíduos coletados na RPPN Mata Estrela - RN. A FISH foi realizada usando sondas de DNAr
18S, 5S e histona H3, marcadas com biotina-14-dATP (Invitrogen) ou digoxigenina-11-dUTP (Roche) e
detectadas com FITC-avidina (Invitrogen) ou com rodamina associada a anti-digoxigenina (Roche). Os resultados
revelaram a localização do DNAr 18S na região pericentromérica do terceiro par acrocêntrico, enquanto que
DNAr 5S e histona H3 foram co-localizados na região pericentromérica do segundo par submetacêntrico. Estes
resultados diferem do observado em E. caribaeus, onde esses genes estão restritos aos cromossomos sexuais,
estando o DNAr 18S localizado no X e no Y, enquanto o DNAr 5S e histona H3 estão co-localizados no X. Os
dados da localização das famílias multigênicas e a análise dos cariótipos das duas espécies indicam que a redução
do número diploide 2n=20, Xyp, considerado ancestral para Coleoptera e família Scarabaeidae, para 2n=12, Xyp
em E. hirtellus foi devido, provavelmente, a ocorrência de inversões pericêntricas seguidas de fusões cêntricas
entre autossomos, mantendo assim o mecanismo sexual. Já a redução para 2n=8, neo-XY em E. caribaeus foi
decorrente de inversões pericêntricas seguidas de fusões cêntricas autossomos-autossomos e de uma fusão cêntrica
entre o terceiro par autossômico e o X, alterando o mecanismo sexual e transferindo o sítio de DNAr 18S para os
cromossomos X e Y de E. caribaeus. Em relação aos genes de DNAr 5S e histona H3, a localização desses sítios
no cromossomo X de E. caribaeus está, provavelmente, relacionada à recombinação ectópica ou elementos
transponíveis, diferindo do encontrado para E. hirtellus. Os dados apresentados neste estudo contribuíram para
uma melhor compreensão da evolução cariotípica em espécies do gênero Eurysternus.
APOIO
FACEPE, CNPq e CAPES.
156
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
EVIDÊNCIAS CROMOSSÔMICAS E MOLECULARES DE ESPECIAÇÃO CRÍPTICA EM
EUCHROMA GIGANTEA (BUPRESTIDAE, COLEOPTERA)
Crislaine Xavier1; Rógean Vinícius Santos Soares2; Diogo Cavalcanti Cabral de Mello3; Rita de Cássia de
Moura2.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-graduação em Genética, Centro de Biociências, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE),
Recife -PE / Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade
de Pernambuco (UPE), Recife-PE ; (2)Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, Instituto de Ciências
Biológicas, Universidade de Pernambuco (UPE), Recife-PE ; (3)GECEA, Departamento de Biologia, Instituto de
Biociências/IB, Universidade Estadual Paulista (UNESP), Rio Claro-SP
RESUMO
Euchroma Solier, 1833 (Buprestidae, Coleoptera) é um gênero monotípico para E. gigantea, que possui grande
polimorfismo cromossômico com seis cariótipos descritos. Neste trabalho, espécimes coletados em Recife-PE,
Maceió-AL, Belém-PA, Ribeirão Preto-SP e Brasília-DF foram cariotipados e analisados por hibridização in situ
fluorescente (FISH) com sondas de DNAr 18S e histonas (H3/H4), a fim de analisar a distribuição dos marcadores
nos cariótipos e os rearranjos envolvidos na evolução cariotípica da espécie. Além disso, os indivíduos foram
analisados filogeneticamente a partir de um fragmento do gene Citocromo oxidase I. Foram observados os
números diploides 2n=22(DF), 24(DF), 26(SP),32(PA), 34(PE,PA), 35(AL) e 36(AL,PE), com mecanismo sexual
múltiplo com cinco, seis ou oito cromossomos em cadeia. Apenas os cariótipos 2n=22 e 24(DF) não apresentaram
cromossomos B. A localização dos sítios de DNAr variou entre os diferentes cariótipos e indivíduos com mesmo
cariótipo. Espécimes de DF, SP e PE apresentaram dois sinais em autossomos, os de PA variaram de quatro a seis
sinais em autossomos e os de AL exibiram de dois a quatro sinais em autossomos e no X3. Os sítios de histonas
foram observados nas regiões centroméricas de todos os cromossomos de diferentes cariótipos. As análises
filogenéticas indicaram a formação dos grupos Norte, Nordeste e Centro Oeste/Sudeste, onde indivíduos de
distintos cariótipos compartilharam haplótipos e espécimes com mesmo número diploide apresentaram-se em
grupos diferentes. O alto grau de polimorfismo, considerando os números diploides apresentados por E. gigantea,
deve-se à ocorrência de rearranjos como inversões pericêntricas, fusões e fissões, além de translocações
robertsonianas, que são responsáveis pela variação nas cadeias de cromossomos sexuais. A variabilidade na
distribuição de sítios de DNAr e a conservação dos sítios de histonas não contribuíram na indicação do tipo de
rearranjo predominante. Esta variação pode ser decorrente de mecanismos como recombinações ectópicas ou
atividade de elementos de transposição. Por sua vez, a presença de Bs em todos os cariótipos, exceto nos de DF
sugere que fatores ambientais podem estar atuando na dinâmica desses elementos. Os dados apresentados indicam
a ocorrência de especiação críptica no gênero Euchroma. Assim, visando confirmar o status taxonômico de E.
gigantea e elucidar os mecanismos responsáveis pelo alto polimorfismo, outros marcadores genéticos estão sendo
utilizados.
APOIO
CAPES, CNPq, FACEPE, FAPESP.
157
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
EXPRESSÃO DOS FATORES DE TRANSCRIÇÃO ZFX, ZFP281 E RONIN EM BLASTOCISTOS DE
BOVINOS
Priscila Germany Corrêa da Silva1; Roberta Lane de Oliveira Silva2; Marcelo Tigre Moura1; Ludymila Furtado
Cantanhêde1; José Carlos Ferreira da Silva1; Pábola Santos Nascimento1; Valeska Andrea Ático Braga1; Maiana
Silva Chaves1; Ana Maria Benko Iseppon2; Marcos Antonio Lemos de Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biotécnicas Aplicadas à Reprodução, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade
Federal Rural de Pernambuco; (2)Laboratório de Genética Vegetal e Biotecnologia Vegetal, Departamento de
Genética, Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Os genes que controlam o desenvolvimento embrionário inicial de mamíferos são representados, quase que
exclusivamente, por fatores de transcrição (FT). Os genes ZFX, ZFP281 e RONIN são FTs caracterizados em
diversos tipos celulares de camundongos e humanos, incluindo embriões e células-tronco embrionárias. Estes FTs
regulam processos celulares como metabolismo e controle do ciclo celular. Apesar disso, apenas ZFX tem sido
caracterizado em bovinos, sendo utilizado em ensaios para sexagem de embriões. O objetivo foi avaliar a
expressão dos genes ZFX, ZFP281 e RONIN em blastocistos bovinos. Ovários foram coletados em abatedouros e
os complexos cumulus oophorus (CCO)s foram aspirados em meio TCM-199 Hank's suplementado com 10% de
soro fetal bovino (SFB), 2mM L-glutamina e antibióticos. Os CCOs foram selecionados e maturados em TCM199 com sais de Earle's suplementado com 10% SFB, 2mM L-Glutamina, e antibióticos em estufa com 5% de
CO2, umidade saturada e 38,5 °C por 24 horas. Os CCOs foram submetidos a fecundação in vitro por 18 horas em
estufa conforme descrito acima. Os presumíveis zigotos foram cultivados em meio SOF em estufa conforme
descrito acima por nove dias (D9). O RNA total foi extraído com kit Reliaprep TM (Promega) a partir um pool de
16 blastocistos D9. A síntese de cDNA foi realizada utilizando o kit QuantiTect® (Qiagen), conforme o fabricante.
As reações de PCR foram realizadas com desnaturação inicial a 94° C por 5 minutos, seguido por 35 ciclos de 94°
C por 1 minuto, anelamento a 58 °C por 1 minuto e extensão a 72 °C por 1 minuto. A etapa final de extensão foi a
72 °C por 10 minutos. Os amplicons foram visualizados através da eletroforese em gel de agarose a 1,5% corados
com Blue-Green Loading Dye (LGC Biotecnologia) a 80V, 120 A por 40 minutos. Os genes TBP e SDHA foram
utilizados como controles positivos nas reações de PCR. Os genes ZFX, ZFP281 e RONIN foram detectados em
blastocistos, sugerindo que tenham funções importantes neste estádio do desenvolvimento bovino. Em conclusão,
ZFX, ZFP281 e RONIN são fatores de transcrição expressos em blastocistos bovinos antes do período de
implantação. A análise por PCR em tempo real durante as fases iniciais do desenvolvimento embrionário permitirá
uma melhor caracterização destes genes.
APOIO
UFRPE, CAPES, CNPq e FACEPE.
158
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
EXPRESSÃO DE GENES RELACIONADOS À PLURIPOTÊNCIA DURANTE O
DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO DE OVINOS
Marcelo Tigre Moura1; Roberta Lane de Oliveira Silva2; Ludymila Furtado Cantanhêde1; Jéssica Barboza da
Silva2; Priscila Germany Corrêa da Silva1; Pábola Santos Nascimento1; José Carlos Ferreira Silva1; Maysa Ceci
Soares Muniz1; Valeska Andrea Ático Braga1; Maiana Silva Chaves1; Ana Maria Benko Iseppon2; Marcos
Antonio Lemos de Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biotécnicas Aplicadas à Reprodução, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade
Federal Rural de Pernambuco; (2)Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Departamento de Genética,
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Os genes relacionados à pluripotência (GRP) atuam na formação dos gametas e controle do estado indiferenciado
de embriões e células-tronco embrionárias. As funções dos GRPs têm recebido grande atenção em camundongos
e humanos, porém em ovinos, apenas alguns GRPs foram detectados em embriões e suas atividades são pouco
conhecidas. Deste modo, objetivou-se analisar a expressão de GRPs OCT4, SALL4, DPPA3, RONIN, KLF4,
KLF5 e ZFP281 em ovócitos e embriões de ovinos. Ovários foram coletados em abatedouros e transportados ao
laboratório. Folículos de 2-6 mm foram aspirados para obtenção dos complexos-cumulus-oophorus (CCO), os
quais foram selecionados e posteriormente maturados em meio TCM199 com sais de Earle's, suplementado com
10% de soro fetal bovino, 5µg mL-1 de pFSH, 2mM de L-glutamina e antibióticos, sendo armazenados em estufa
com umidade saturada, 5% de CO2 a 38,5 °C, por 24 horas. Em seguida, os ovócitos foram desnudados com 0,2%
de hialuronidase e pipitagem, sendo ativados com 5µM de ionomicina por 5 minutos e 2mM de 6-DMAP por 3
horas. Os presumíveis zigotos foram cultivados em meio SOFaa em estufa com umidade saturada, 5% de CO 2 a
38,5 °C. Os embriões foram avaliados no terceiro dia (D3) de cultivo quanto à taxa de clivagem e no sétimo dia
(D7) quanto à formação de blastocistos. O RNA total foi extraído com kit ReliaprepTM (Promega), a partir de pools
de 50 ovócitos ou 15 embriões D3 ou dois embriões D7. A síntese de cDNA foi realizada com o kit QuantiTect®
(Qiagen), conforme recomendações do fabricante. Por sua vez, as reações foram realizadas em termociclador
(Techne) com desnaturação inicial de 5 minutos a 95 °C e 35 ciclos de 95 °C por um minuto, 58 °C por um
minuto, 72 °C por um minuto, e extensão final a 72 °C por 10 minutos. Os amplicons foram visualizados por meio
de eletroforese em gel de agarose a 1,5% a 60V, 120A por 40 minutos. Os genes detectados em ovócitos foram
RONIN, ZFP281, SALL4, KLF4, KLF5 e SOX2, bem como estes GRPs foram detectados em embriões clivados e
blastocistos. OCT4 não foi detectado, sugerindo baixa expressão em gametas e embriões ovinos. Em conclusão,
diversos genes relacionados à pluripotência foram detectados durante o desenvolvimento embrionário de ovinos e
apresentaram perfil de expressão semelhante em embriões de diferentes estádios de desenvolvimento.
APOIO
UFRPE, CAPES, CNPQ e FACEPE.
159
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
EXPRESSÃO ENDÓGENA DE GENES RELACIONADOS À PLURIPOTÊNCIA EM FIBROBLASTOS
DE PEQUENOS RUMINANTES
Marcelo Tigre Moura1; Roberta Lane de Oliveira Silva2; Ludymila Furtado Cantanhêde1; Priscila Germany
Corrêa da Silva1; José Carlos Ferreira da Silva1; Pábola Santos Nascimento1; Valeska Andrea Ático Braga1;
Maysa Ceci Soares Muniz1; Maiana Silva Chaves1; Ana Maria Benko Iseppon2; Marcos Antonio Lemos de
Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biotécnicas Aplicadas à Reprodução, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade
Federal Rural de Pernambuco; (2)Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Departamento de Genética,
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
A atividade dos genes relacionados à pluripotência (GRP) mantém o estado indiferenciado de embriões e célulastronco pluripotentes. Além disso, a expressão exógena dos GRPs OCT4, SOX2, C-MYC e KLF4 em células
somáticas permite convertê-las em células pluripotentes induzidas. Apesar da crescente elucidação sobre a
atividade e funções dos GRPs em embriões e células-tronco pluripotentes, pouco se conhece sobre os GRPs em
células somáticas. Assim, objetivou-se analisar a expressão de 25 GRPs em fibroblastos de caprinos e ovinos. Os
fibroblastos foram isolados e cultivados em meio DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino e
antibióticos, em estufa com 5% de CO2, umidade saturada e 38,5 °C. Cultivos de fibroblastos de ovinos na quinta
passagem e fibroblastos de caprinos na primeira passagem foram usados para a análise da expressão gênica por
PCR. A extração do RNA total foi feita através do kit ReliaprepTM (Promega), utilizando pools de
aproximadamente 500.000 células. Para a síntese de cDNA foi utilizado o kit QuantiTect ® (Qiagen), usando 500
ng/µL de RNA. Por sua vez, as reações de RT-PCR foram realizadas em termociclador (Techne). A ativação da
Taq polimerase foi realizada a 94 °C por 5 minutos, seguido por 35 ciclos de 94 °C por 1 minuto, anelamento a
58-60 °C por 1 minuto, extensão a 72 °C por 1 minuto, com a etapa final de extensão a 72 °C por 10 minutos. Os
amplicons foram visualizados em gel de agarose a 1,5%, corados com Blue-Green Loading Dye (LGC
Biotecnologia) em eletroforese a 70V, 120A por 40 minutos. Os genes TBP e SNAI2 foram utilizados como
controles positivos da RT-PCR. Oito GRPs dos 25 analisados foram detectados em fibroblastos ovinos (32%), os
quais foram RONIN, ZFP281, KLF4, KLF5, DPPA2, C-MYC, ZFX e TCF3. As análises em caprinos
demonstraram que os mesmos oito GRPs foram expressos na espécie, indicando que o perfil de expressão dos
GRPs é conservado em pequenos ruminantes. Conclui-se que um grande percentual dos genes relacionados à
pluripotência são expressos em células somáticas de pequenos ruminantes, possibilitando que este conhecimento
contribua para elucidar os mecanismos de pluripotência e reprogramação celular neste grupo de animais.
APOIO
UFRPE, CAPES, CNPQ e FACEPE.
160
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
FILOGEOGRAFIA DE ARTIBEUS PLANIROSTRIS (CHIROPTERA, PHYLLOSTOMIDAE):
INFLUÊNCIA DOS ANDES E DA DIAGONAL SECA NEOTROPICAL
Francisco Geraldo de Carvalho Neto1; Maria de Mascena Diniz Maia2; Ana Cristina Lauer Garcia3; Valdir de
Queiroz Balbino1; Martin Alejandro Montes2; Neide Santos1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco. Avenida Prof. Moraes Rego, 1235. Recife PE, Brasil; (2)Departamento de Biologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Rua Dom Manoel de
Medeiros, s/n. Recife - PE, Brasil; (3)Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco. Rua
Alto do Reservatório, s/n.Vitória de Santo Antão, Recife - PE, Brasil
RESUMO
A Região Neotropical sofreu diferentes eventos naturais que causaram uma complexa dispersão da biota. A Ordem
Chiroptera, que é uma das mais representativas na região, em termos de número de espécies, apresenta forte
relevância no campo da Biogeografia, já que exibe distintas histórias evolutivas quando comparada a outros
mamíferos. Esta diferenciação deve-se a capacidade de voo, que garante alta vagilidade e variedade de guildas que
permitiu a radiação do grupo. Artibeus planirostris Spix, 1823 é uma das espécies mais comuns em levantamentos
de fauna e ocorre ao longo da América do Sul e Antilhas, contudo não há estudo que avaliou especificamente sua
filogeografia. Diante deste cenário, este estudo objetivou descrever o padrão filogeográfico, estrutura populacional
e história demográfica de A. Planirostris com base no gene mitocondrial Citocromo B. Foram captadas do
genbank 90 sequências e mais 22 haplótipos foram gerados neste estudo. A partir de um conjunto de dados de 112
sequências de 41 localidades, que compreendem toda a distribuição da espécie, foram geradas árvores
filogeográficas com os algoritmos de Inferência Bayesiana, Máxima Verossimilhança e Neighbor Joining. A
estrutura populacional foi avaliada a partir de Análise Molecular de Variância (AMOVA) e a história demográfica
foi observada com base em testes de neutralidade e datação molecular. Nossos resultados mostraram topologia
idêntica para as árvores. Elas apresentaram uma divisão em dois grupos principais datada em 3,4 milhões de anos,
o primeiro com amostras exclusivas da porção oeste dos Andes e o segundo com amostras ao leste dos Andes. Este
sudivide-se na diagonal seca neotropical em 2,12 milhões de anos com amostras da porção leste da Amazônia mais
Antilhas e Florestas secas mais Floresta Atlântica. Com base nesta divisão, a AMOVA revelou forte estruturação
(Fst=0,47) e os testes de neutralidade (Tajima e Fs) indicaram expansão populacional. Nosso estudo sugere que a
diferenciação genética de A. planirostris é reflexo de efeitos de vicariância causados pela elevação dos Andes e
formação do cinturão seco na América do Sul, pois as datações coincidem com os eventos.
APOIO
CAPES; UFPE; UFRPE.
161
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
FLUXO GÊNICO E DIFERENCIAÇÃO GENÉTICA ENTRE POPULAÇÕES NATURAIS DE
DICHOTOMIUS (L.) AFF. IRINUS (COLEOPTERA: SCARABAEIDAE)
Félix, Ap1; Amorim, Ic2; Cruz, Gas1; Moura, Rc1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, ICB, Universidade de Pernambuco, UPE; (2)Programa de
Pós-graduação em Genética, CB, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE
RESUMO
A espécie Dichotomius (L.) aff. irinus é endêmica da Mata Atlântica e desempenha um papel ecológico importante
no funcionamento do ecossistema através da aeração do solo e decomposição de matéria orgânica. O objetivo do
presente estudo foi analisar a estrutura genética de quatro populações de D. (L.) aff. irinus ocorrentes em
fragmentos de Mata Atlântica, por meio da utilização do marcador ISSR (Inter Simple Sequence Repeat). Foram
coletados 120 indivíduos por meio de armadilhas do tipo pitfall, sendo 30 representantes de cada população de:
RECD (Igarassu - PE), SAT (Tamandaré - PE) e ALD (Aldeia - Camaragibe) localizadas em fragmentos de Mata
Atlântica stricto sensu e BMD (Brejo da Madre de Deus - PE) e de brejo de altitude. As análises foram realizadas
a partir da extração do DNA, seguida de amplificação via PCR (Polymerase chain reaction) a partir da aplicação
de seis primers, com duas reações independentes para testar a reprodutibilidade do marcador. Foram analisados o
índice de diversidade genética (Dg), Heterozigosidade esperada (HE), índice de fixação (FST), distribuição da
variância molecular (AMOVA) além da realização de teste de Mantel. O valor de Dg=53% e H E=0.32 indicaram
níveis moderados de diversidade genética. O valor de FST=0.08 somado a distribuição da variância molecular
(AMOVA) onde foi observado que 92.2% está dentro das populações e apenas 7.8% entre essas, sugerem ausência
de diferenciação genética entre as populações. Por outro lado, considerando os valores pairwise de FST foi
observado índices moderados de diferenciação genética entre as populações de BMD-ALD=0.11 e RECDALD=0.09. O teste de Mantel indicou que não existe correlação positiva entre as distâncias genética e geográfica.
Os dados obtidos indicaram evidência de fluxo gênico histórico entre as populações SAT e RECD, porém apontam
para diferenciação genética entre BMD-ALD e entre RECD-ALD, apesar destas duas últimas serem próximas
geograficamente. Para fins de conservação, inicialmente os dados sugerem que as populações SAT e RECD
formam uma unidade de manejo, devendo BMD e ALD serem manejadas separadamente. Estudos
complementares baseados em um maior número de populações e marcadores estão sendo realizados, com o intuito
de contribuir na determinação do status de conservação de D. (L.) aff. irinus.
APOIO
CNPq, CAPES e FACEPE
162
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
GENÓTIPOS DO GENE LACTOPEROXIDASE ASSOCIADOS A VARIAÇÃO DA PRODUÇÃO
LEITERA EM BOVINOS DA RAÇA GIROLANDO 5/8 E HOLANDÊS
Edyjoelson Phelipe de Morais Luna1; Wellington Bizarria dos Santos1; Wellison Jarles da Silva Diniz2; Luciana
Florêncio Vilaça1; Maria das Dores Silva Araújo1; Kleber Régis Santoro1; Sebastião Inocêncio Guido3; Júlio
César Vieira de Oliveira4.
E-mail: [email protected]
(1)
UFRPE/UAG Universidade Federal Rural de Pernambuco Unidade Acadêmica de Garanhuns; (2)UFSCAR
Universidade Federal de São Carlos; (3) IPAARCOVERDE Instituto Agronômico de Pernambuco; (4)IPA SÃO
BENTO DO UNA Instituto Agronômico de Pernambuco
RESUMO
O gene Lactoperoxidase (LPO) está ligado a funções bactericidas, além de estar associado à resistência à mastite e
produção de leite, tornando-o candidato para identificação de marcadores genéticos. Assim, este trabalho teve por
objetivo avaliar os polimorfismos do LPO e associá-los à produção de leite em animais da raça Girolando e
Holandês, em Pernambuco. Foram coletadas 38.040 observações de produção de leite diária em litros/dia (média
20,73±6,65), no período de 2006 a 2014, provenientes de 119 animais, os quais 37 da raça Holandesa e 82 da raça
Girolando. Foi realizada análise de variância dos dados por meio da ANOVA e utilizando um modelo linear misto
pelo procedimento MIXED do SAS 9.3., retiramos os efeitos aditivos de outros genótipos e estimamos os efeitos
de cada genótipo, possibilitando a associação dos polimorfismos à produção de leite. As diferenças entre os
valores dos perfis médios dos padrões foram testadas por meio do test t (LSD) a 5% de significância. As
frequências genotípicas observadas resultaram em três genótipos: aa, bb e ac, onde, respectivamente, os valores
encontrados para as frequências no rebanho Girolando foram: 64,24%, 24,79% e 10,97%, e para o Holandês:
81,08%, 10,81% e 8,11%, destacando a maior frequência genotípica ao aa em ambos rebanhos. Os resultados da
análise de variância para ambos os rebanhos, demonstraram que o efeito dos polimorfismos sobre a produção de
leite foi significativo (p <0001). Realizado o teste t de médias produtivas (l/dia) para os três genótipos: aa, bb e ac,
onde, respectivamente, os valores encontrados no rebanho Girolando foram 8,1455, 10,6204 e 7,3357 e para o
Holandês 19,7282, 17,4235 e 18,9783. Observou-se que para o rebanho Girolando, o genótipo bb esteve associado
à maior produtividade leiteira e ac à menor produtividade, já para o rebanho Holandês os resultados diferiram do
outro rebanho, aa à maior produtividade leiteira e bb à menor produtividade. Portanto, determinar polimorfismos
associados à produção de leite é relevante, pois poderá ser utilizado como ferramenta para a seleção e
melhoramento dos rebanhos leiteiros, possibilitando obter o possível aumento da produtividade por meio de
ganhos genéticos.
APOIO
Cnpq, Ufrpe
163
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
IDENTIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE SEQUÊNCIAS REPETITIVAS NO GENOMA DE
DICHOTOMIUS (LUEDERWALDTINIA) SCHIFFLERI (COLEOPTERA: SCARABAEIDAE) E
FILOGENIA DOS ELEMENTOS GYPSY E TC1-MARINER
Igor Costa de Amorim1; Rita de Cássia de Moura1; Gabriel da Luz Wallau2.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Pernambuco;
Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos - Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de
Pernambuco, Recife, PE - Brasil; (2)Departamento de Entomologia, Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães FIOCRUZ, Recife, PE, Brasil
RESUMO
O genoma dos eucariontes é formado em grande parte por sequências repetitivas que estão organizadas in tandem
ou dispersas, como os elementos de transposição (TEs). Os TEs têm sido relacionados à evolução do genoma de
diversas espécies, uma vez que seu mecanismo de mobilização pode gerar variabilidade genética no genoma do
hospedeiro. O objetivo desse estudo foi sequenciar e caracterizar o genoma repetitivo de Dichotomius
(Luederwaldtinia) schiffleri (Coleoptera), visando selecionar elementos transponíveis conservados e, que
possivelmente estejam ativos e relacionados com o dinamismo da heterocromatina constitutiva no gênero
Dichotomius. O sequenciamento foi realizado na plataforma Illumina e a caracterização das sequências repetitivas
no RepeatExplorer. Além disso, foi realizada uma busca por elementos homólogos no NCBI e uma análise
filogenética dos elementos com maior número de domínios conservados. As árvores filogenéticas foram
construídas a partir de máxima verossimilhança. O sequenciamento e a caracterização do genoma repetitivo
revelaram uma alta proporção de sequências repetitivas. Em relação aos elementos transponíveis, foi identificada
uma maior abundância de retrotransposons em relação aos transposons de DNA, 13 superfamílias de elementos e
diferentes domínios conservados, sendo a transcriptase reversa e o DDE (região com três aminoácidos,
Asparagina-Asparagine-Glutamina), mais comuns para os retrotransposons e transposons de DNA,
respectivamente. Os elementos com maior quantidade e diversidade de domínios conservados pertencem às
superfamílias Gypsy e Mariner. Além disso, foi observada uma similaridade com as sequências de elementos de
espécies filogeneticamente distantes, incluindo fungos e vertebrados. A análise filogenética dos elementos Gypsy
e Tc1-Mariner indicou possíveis eventos de transferência horizontal desses elementos. O sequenciamento e
caracterização das sequências repetitivas de Dichotomius (L) schiffleri permitiu identificar possíveis elementos
ativos no genoma dessa espécie.
APOIO
CAPES; FACEPE; CNPq
164
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
IDENTIFICAÇÃO GENÉTICA DAS SEMENTES DE OSTRAS OBTIDAS ATRAVÉS DE COLETORES
ARTIFICIAIS NO MUNICÍPIO DE RAPOSA-MA
Elidy Rayane de Rezende França1; Bruno Leite Rodrigues2; Rodolf Gabriel Prazeres Silva Lopes1; Ícaro Gomes
Antonio1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual do Maranhão (UEMA); (2)Universidade Federal do Maranhão (UFMA)
RESUMO
As ostras do gênero Crassostrea (Sacco 1897) são exploradas rudimentarmente pelas comunidades tradicionais,
sem a preocupação da utilização de medidas de manejo que garantam um uso sustentável. A obtenção de sementes
através de coletores artificiais não distingue entre as espécies coletadas, podendo obter sementes de todas as
espécies de ostras presentes no ambiente natural. O presente trabalho teve como objetivo analisar as sementes
obtidas no ambiente natural através de coletores artificiais, avaliando a influência do tipo de coletor, bem como do
local de coleta, sob a especificidade das sementes coletadas. Para isso, foram utilizados marcadores mitocondriais
com o intuito de caracterizar as espécies coletadas em função das variantes utilizadas na coleta. As sementes de
ostras foram coletadas no município de Raposa-Maranhão. Estas sementes foram obtidas em dois locais de coleta
(Mangue-Porto), os quais diferem principalmente em relação à salinidade e a força da corrente. Em cada local de
coleta foram utilizados 2 tipos de coletores, com 3 repetições cada. As sementes coletadas foram separadas por
coletor e local de coleta, e preservadas em álcool absoluto, em seguida foram iniciados os procedimentos de
extração do DNA genômico. Avaliou-se a sensibilidade e especificidade do protocolo utilizado, detectando DNA
da C. gasar em baixas concentrações de DNA, e Crassostrea sp. em concentrações bem menores. Os resultados
demonstram que a técnica de PCR Multiplex se mostrou eficaz na detecção de DNA, em concentrações
equivalentes a de uma única semente de cada espécie, separados e combinados, ou quando misturado com extrato
de DNA total de uma amostragem. O protocolo proposto representa uma importante ferramenta para o
monitoramento contínuo do ciclo de vida das espécies, detectando variações temporais e espaciais das sementes
disponíveis no local de coleta para cada espécie. Assim, confirmando a aplicabilidade da metodologia, a
ferramenta se torna importante para a aquicultura ou em programas de conservação, que permitam o
monitoramento contínuo do ciclo de vida de C. gasar e Crassostrea sp., detectando os períodos certos de liberação
larval e de assentamento das espécies.
APOIO
FAPEMA
165
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE WOLBACHIA PIPIENTIS EM AMOSTRAS RECENTES DE
DROSOPHILA WILLISTONI (DIPTERA, DROSOPHILIDAE)
Zilpa das Graças Silva de Melo1; Ana Patrícia da Costa2; Wedja Kelly de Melo Vasconcelos2; Rita de Cássia de
Moura3; Cláudia Rohde2.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE); (2)Laboratório de
Genética, Centro Acadêmico de Vitória, UFPE; (3)Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos,
Universidade de Pernambuco (UPE)
RESUMO
Wolbachia pipientis é um endossimbionte comum de insetos, e algumas cepas são conhecidas por proteger seus
hospedeiros de alguns vírus e outros parasitas. Este efeito foi relatado pela primeira vez em Drosophila e tem sido
extensivamente estudado principalmente em duas espécies do velho mundo (Drosophila simulans e Drosophila
melanogaster) onde a presença da infecção foi relacionada com o aumento da sobrevivência dos drosofilídeos e
redução das infecções virais. Por outro lado, diferentes cepas da bactéria, como as denominadas wRi e wHa,
podem induzir incompatibilidade citoplasmática de seus hospedeiros, influenciando seu desenvolvimento, a
dinâmica populacional e evolução das espécies. A identificação de estirpes de Wolbachia com ocorrência em
populações naturais de Drosophila pode ser útil para entender processos e mecanismos evolutivos associados às
espécies de drosofilídeos. O objetivo deste trabalho foi conhecer melhor a dinâmica evolutiva entre o
endossimbionte e o hospedeiro Drosophila willistoni, considerada uma das espécies mais abundantes nas florestas
úmidas do Brasil. Vinte e cinco linhagens pertencentes a oito populações recentemente coletadas de D. willistoni
oriundas dos estados do Pará, Pernambuco, Paraíba, Minas Gerais, Rio de Janeiro e Distrito Federal, tiveram seus
DNAs extraídos para amplificação de sequências parciais (610 pb) do gene wsp (Wolbachia surface protein).
Todas as linhagens testadas apresentaram infecção positiva pela bactéria Wolbachia, sendo todas da estirpe
denominada wWil. Este resultado está de acordo com o descrito pela literatura, reforçando a ideia de que todas as
linhagens modernas da espécie estão universalmente infectadas e sugerindo elevada eficiência da transmissão
vertical desta variante de Wolbachia em populações naturais de D. willistoni.
APOIO
FACEPE, CNPq e PROPESQ-UFPE
166
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE ESPÉCIES DE FLEBOTOMÍNEOS (DIPTERA, PSYCHODIDAE,
PHLEBOTOMINAE) EM ÁREA ENDÊMICA DE LEISHMANIOSE NO MARANHÃO, BRASIL.
Bruno Leite Rodrigues1; José Manuel Macário Rebêlo1; Jorge Luiz Pinto Moraes2; Luís Fernando Carvalho
Costa1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Maranhão; (2)Laboratório de Entomologia e Vetores
RESUMO
Os flebotomíneos são insetos que habitam regiões, predominantemente rurais, e são incriminados como vetores
biológicos das leishmanioses. Sua correta identificação é de grande importância epidemiológica, visto que
espécies diferentes podem transmitir patógenos diferentes do gênero Leishmania. Entretanto, a taxonomia do
grupo pode ser confusa por conta da complexidade dos caracteres morfológicos. Assim, o uso de ferramentas
moleculares, como o DNA Barcoding, que usa um fragmento do gene mitocondrial da citocromo oxidase
subunidade I (COI), é essencial para complementar a identificação morfológica. Assim, o objetivo desse trabalho
foi identificar as espécies de flebotomíneos, que ocorrem em algumas áreas endêmicas de leishmaniose no Estado
do Maranhão, utilizando sequências de COI. Os indivíduos foram capturados com armadilhas luminosas (CDC)
nos municípios de Barreirinhas e São Luís, e identificados usando-se chaves de identificação. O DNA total dos
indivíduos foi extraído e o fragmento de COI amplificado e sequenciado. As sequências foram analisadas nos
programas Bioedit e Mega. As relações filogenéticas entre as espécies foram estimadas pelo método de Neighborjoining. Para a identificação molecular, as sequências foram comparadas no banco de dados BOLD Systems.
Foram analisadas 86 sequências (592 pares de base) para sete espécies de flebotomíneos identificadas
morfologicamente (Lutzomyia longipalpis, L. whitmani, L. termitophila, L. sordellii, L. migonei, L. lenti e
Brumptomyia avellari). Todas as espécies do gênero Lutzomyia foram identificadas com êxito, atingindo valores
de similaridades entre 96,9 e 99,8% com sequências dessas espécies presentes no BOLD (valor de referência da
literatura: ≥ 94%). A média das distâncias genéticas intraespecíficas foi de 0,11%, enquanto a divergência média
entre as espécies foi de 12,2% (11,5% a 17,1%). As sequências de B. avellari não encontraram correspondência no
BOLD porque não havia sequências dessa espécie depositadas na plataforma. A árvore filogenética formou oito
clados distintos, altamente suportados, que correspondiam às sete espécies identificadas morfologicamente.
Portanto, os dados demonstram a eficiência da ferramenta na identificação das espécies do grupo, e irão contribuir
para preencher a lacuna existente no BOLD Systems para B. avellari.
APOIO
Fundação de amparo à pesquisa do estado do Maranhão (FAPEMA).
167
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
INDUÇÃO À TRIPLOIDIA EM CURIMATÃ-PACU (PROCHILODUS ARGENTEUS AGASSIZ,1829)
Larissa Monteiro de Vasconcelos1; Athiê Jorge Guerra Santos1; Maria Raquel Moura Coimbra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco
RESUMO
A manipulação cromossômica, apresenta-se como uma ferramenta promissora nos programas de criação de peixes
e de conservação biológica. Dentre elas, a indução à triploidia apresenta benefícios que vão desde a otimização da
produção à minimização dos impactos causados na natureza pelos escapes de peixes cultivados. Tais benefícios
ocorrem, principalmente, em virtude da característica mais provável dos triploides: a esterilidade; que permite que
o gasto energético antes empregado no desenvolvimento gonadal seja realocado para o crescimento somático,
podendo resultar em taxas de crescimento mais elevadas e na melhoria da qualidade do filé. A curimatã-pacu
(Prochilodus argenteus) é um peixe endêmico do rio São Francisco muito apreciado por sua carne, que tem sua
abundância comprometida pelos barramentos das hidrelétricas dessa bacia, e que apresenta grande potencial para a
aquicultura extensiva. A eficiência de um método para indução à triploidia por choque térmico foi avaliada, por
meio de citometria de fluxo e o crescimento desses animais foi avaliado até o terceiro mês de cultivo. Os choques
foram aplicados 5 minutos após a fertilização (m.a.f), sendo os choques frios (1 a 4 °C) mais eficientes que os
choques quentes, cuja eclosão foi inexistente nas temperaturas de 39, 40 e 41 °C. Para os choques frios, 100% de
triploides foram obtidos a partir do choque térmico de 25 minutos de duração. Para os choques de 20, 15 e 10
minutos de duração, as taxas de triploidização obtidas foram de 82, 76,92 e 63,33%. Até o terceiro mês de vida, as
diferenças de crescimento (comprimento total e peso) entre diploides e triploides não apresentaram diferença
significativa (p>0,05). Acredita-se que tal característica, quando presente, deve se manifestar nas proximidades do
período de maturação sexual dos indivíduos, que nesse caso, ocorre próximo ao término do segundo ano de vida.
No presente estudo, como os animais ainda não atingiram essa idade, as diferenças de performance ainda não
puderam ser comparadas. No entanto, este é um dos poucos protocolos para espécies brasileiras cujas taxas de
triploidização obtidas chegam a 100%.
168
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
LOCALIZAÇÃO DAS REGIÕES ORGANIZADORAS DE NUCLÉOLO (RONS) EM POPULAÇÕES DE
KERODON RUPESTRIS (WIED-NEUWIED, 1820) OCORRENTES EM PERNAMBUCO
Deborah Alcantara de Araújo1; Palloma Lima de Oliveira2; Elianderson Gomes de Sá2; Patricia Avello Nicola
Pereira2; Helen Maria Duarte do Rêgo Barros3; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade de Pernambuco; (2)Universidade Federal do Vale do São Francisco; (3)Universidade Federal de
Pernambuco
RESUMO
Kerodon rupestris (Wied-Neuwied, 1820), popularmente conhecido como mocó, é uma espécie endêmica da
Caatinga e apresenta-se em status de vulnerabilidade de extinção. Possui ampla distribuição geográfica no
semiárido brasileiro, ocorrendo associada a afloramentos rochosos como populações disjuntas, o que pode
favorecer variação intraespecífica e ocasionar mecanismos de diferenciação cromossômica. Neste sentido, o
presente trabalho visou identificar o número de Regiões Organizadoras de Nucléolo (RONs) ativas e inativas em
duas populações de K. rupestris ocorrentes nos municípios de Salgueiro e Floresta (Pernambuco). Para isto, o
número de 10 indivíduos foi coletado, sendo três de Salgueiro (um macho e duas fêmeas) e sete de Floresta (três
machos e quatro fêmeas), os quais foram submetidos à extração de células da medula óssea para obtenção de
preparações cromossômicas mitóticas. Os sítios Ag-RON ativos foram identificados pela impregnação com nitrato
de prata e a Hibridização in situ Fluorescente (FISH) foi empregada na tentativa de observar sítios de DNAr 18S,
com sondas obtidas do DNA genômico da espécie, mediante amplificação por PCR utilizando os primers
Sca18SF/Sca18SR e marcação com digoxigenina-11-UTP. O número cromossômico diploide 2n=52, XX ou XY,
foi notado em ambas as populações, as quais apresentaram RONs ativas em pelo menos quatro pares de
autosossomos: 1) braço curto do par metacêntrico 9; 2) braço longo do par submetacêntrico 21; 3) braço curto do
par acrocêntrico 23; e 4) braço longo do par acrocêntrico 24. A FISH revelou sinais em alguns cromossomos;
entretanto, marcações mais evidentes foram observadas na região pericentromérica do par metacêntrico 4 e na
região intersticial do braço longo do par sumetacêntrico 16, as quais parecem não corresponder aos sítios AgRON, mas a um padrão de distribuição de outro tipo de sequência repetitiva, uma vez que a marcação apresentouse colocalizada com bandas C+ no par 16. Assim, faz-se necessário o sequenciamento do fragmento amplificado, a
fim de caracterizá-lo e compreender seu padrão de distribuição. Por fim, os dados obtidos, principalmente em
relação aos sítios Ag-RON, indicam que as populações estudadas apresentam diferenças cariotípicas frente aos
dados relatados para outras populações, o que pode estar associado a processos de diferenciação, devido
principalmente à distribuição fragmentada da espécie na Caatinga.
APOIO
Ministério da Integração Nacional
169
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
NEXT GENERATION SEQUENCING DATA UNCOVER THE EVOLUTIONARY HISTORY OF NEOXY CHROMOSOMES OF THE GARASSHOPPER RONDEROSIA BERGI
Diogo Milani1; Octavio Manuel Palacios Gimenez1; Diogo Cavalcanti Cabral de Mello1.
E-mail: [email protected]
(1)
Depto de Biologia, Instituto de Biociências, UNESP, Rio Claro, São Paulo, Brasil
RESUMO
The neo-sex systems arose independently, including in related species, evolving from an ordinary autosomal pair.
A remarkable characteristic for non-recombining sex chromosomes is the accumulation of repetitive DNAs in the
Y or W chromosomes. Among grasshoppers, the occurrence of derived sex systems, like neo-XY, was noticed
mainly in Melanoplinae, including the species Ronderosia bergi. In order to a better understanding of neo-sex
chromosomes evolution, here we characterized through Illumina sequencing and graph-based clustering the most
abundant tandem repeats of R. bergi, 2n = 22, neo-XY?. The analyses revealed the occurrence of ten families of
satDNAs comprising about 1.071% of the male genome. All the satDNAs recovered were distributed mainly on Cpositive regions of autosomes. For the neo-sex chromosomes variable patterns were revealed, like occurrence of
centromeric or interstitial signals on the neo-X. Four of the satDNAs occurred in the neo-Y, in which two were
located exclusively in this chromosome, Rber248 and Rber299. The analysis of mitotic embryo cells and meiotic
cells from adults using the Rber248 and Rber299 revealed the occurrence of multiple paracentric inversions in the
neo-Y, revealing four variants. Moreover the occurrence of an enlarged neo-Y was noticed, showing amplification
of two satDNAs, i.e. Rber1 and Rber59. Finally an intriguing fragmented neo-Y was noticed in one adult
individual that probably is resultant from multiple inversion events. The satellitome suggested the differentiation
between the neo-sex chromosomes, considering their composition and distribution of satDNAs. The sequenced
genomic data associated with cytogenetic mapping give us the opportunity of hypothesizes the possible events
involved in the evolution of neo-XY in R. bergi. Moreover it was possible a better understanding of neo-sex
chromosome dynamic in grasshoppers, revealing the occurrence of multiple additional rearrangements involved in
the neo-Y evolution of R. bergi.
APOIO
FAPESP and Cnpq
170
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
ORGANIZAÇÃO DO GENOMA MITOCONDRIAL DE RHAMMATOCERUS BRASILIENSIS
(ORTHOPTERA: ACRIDIDAE) E ANÁLISE FILOGENÔMICA
Adriana de Souza Melo1; Igor Costa de Amorim1; Gabriel da Luz Wallau2; Rita de Cássia de Moura1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de
Pernambuco, Recife, PE, Brasil. ; (2)Departamento de Entomologia, Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães FIOCRUZ, Recife, PE, Brasil.
RESUMO
O gafanhoto Rhammatocerus brasiliensis (Bruner 1904) (Acrididae, Gomphocerinae) tem sido estudado através da
citogenética clássica e molecular. Apresenta cariótipo 2n=23,XO, com cromossomos acrocêntricos e em algumas
populações de Pernambuco ocorrência de supernumerários. Com relação a outras abordagens genéticas, como
análises de estrutura populacional e/ou filogenética até o momento não há registros. O objetivo deste trabalho foi
caracterizar o DNA mitocondrial (mtDNA) de R. brasiliensis e estabelecer o posicionamento filogenético da
espécie na família Acrididae. Além disso, adicionalmente esse trabalho subsidiará a seleção de genes
mitocondriais adequados para estudos populacionais. Um exemplar da espécie R. brasiliensis, oriundo de
Itamaracá-PE, Brasil, foi sequenciado por baixa cobertura na plataforma Illumina Hiseq 2000. A montagem do
genoma foi realizada com o auxílio do pacote SOAP (Short Oligonucleotide Analysis Package) e a caracterização
no MITOS WebServer. Na análise filogenética foram utilizadas as sequências proteicas do mtDNA de 50 espécies
pertencentes a 12 subfamílias, sendo seis do grupo externo, e estando todas depositadas no NCBI. Para a
reconstituição da árvore filogenética foi utilizada a inferência Bayesiana com o auxílio do programa MrBayes
3.1.2. Os resultados demonstraram que o mtDNA de R. brasiliensis possui 16.596 pb e apresenta 37 genes, sendo
13 genes codificadores de proteínas, 22 RNAs transportadores (tRNA), dois genes de RNA ribossomais (rRNA).
A organização desses genes é semelhante a maioria das espécies de Acrididae analisadas, mostrando assim que o
mtDNA de Acrididae é estruturalmente conservado. No entanto, rearranjos nos genes de tRNA (tRNA - Lys e
RNAt - Asp) entre COII e ATP8, observados em R. brasiliensis, tem sido relatados frequentemente na subordem
Caelifera (Orthoptera). A análise filogenômica mostrou que R. brasiliensis se encontra na região basal entre os
gomphocerineos e a árvore está de acordo com outras árvores realizadas para Acrididae. Três espécies
pertencentes a diferentes famílias (Lentulidae, Ommexechidae e Romaleidae) do grupo externo não se mostraram
bem estabelecidas, como observado em trabalhos anteriores baseados em mtDNA, mostrando que apesar de serem
de diferentes famílias estão proximamente relacionadas.
APOIO
FACEPE; CNPq; CAPES
171
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
PRIMEIRA DESCRIÇÃO CARIOTÍPICA DE CONEPATUS SEMISTRIATUS (BODDAERT, 1785)
(CARNIVORA: MEPHITIDAE) E CARACTERIZAÇÃO CROMOSSÔMICA DE PUMA
YAGOUAROUNDI (É. GEOFFROY SAINT-HILAIRE, 1803) (CARNIVORA: FELIDAE) E CERDOCYON
THOUS (LINNAEUS, 1766) (CARNIVORA: CANIDAE) EM EXEMPLARES PROVENIENTES DA
CAATINGA
Palloma Lima de Oliveira1; Elianderson Gomes de Sá1; Gabriela Félix do Nascimento Silva2; Kyria Cilene de
Andrade Bortoleti1; Helen Maria Duarte do Rêgo Barros3.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVASF / Colegiado de Ciências Biológicas; (2)UNIVASF / Centro de Conservação e Manejo de Fauna da
Caatinga; (3)Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Vários estudos têm reportado o uso da citogenética em trabalhos sobre evolução cariotípica e filogenia na ordem
Carnivora. Entretanto, em relação às espécies com distribuição no Brasil, estudos são escassos sobre
caracterização cromossômica, incluindo espécies que ainda não foram sequer descritos os cariótipos, a exemplo de
Conepatus semistriatus. Diante disso, o presente trabalho analisou citogeneticamente as espécies Puma
yagouaroundi, Cerdocyon thous e Conepatus semistriatus, a fim de realizar comparações interpopulacionais e
adicionar dados cromossômicos à literatura. Amostras de sangue foram coletadas de 10 indivíduos, sendo cinco de
P. yagouaroundi (três machos e duas fêmeas), três de C. thous (um macho e duas fêmeas) e dois de C. semistriatus
(um macho e uma fêmea), provenientes da região de Caatinga e mantidos no Centro de Conservação e Manejo de
Fauna da Caatinga (CEMAFAUNA), em Petrolina/Pernambuco. As análises cromossômicas foram realizadas a
partir da cultura de linfócitos do sangue, sendo as lâminas coradas em solução de Giemsa 10%. O complemento
cromossômico de P. yagouaroundi mostrou-se semelhante ao descrito na literatura, com número diploide 2n = 38,
XX ou XY, morfologia cromossômica metacêntrica e submetacêntrica, bem como cromossomo X submetacêntrico
médio e o Y submetacêntrico pequeno. O número fundamental encontrado foi de NF = 72, diferindo do reportado
na literatura (NF = 76). Por sua vez, o cariótipo de C. thous foi constituído de 2n = 74, XX ou XY, NF = 106 (17
pares de cromossomos metacêntricos e submetacêntricos e 19 pares de acrocêntricos), X submetacêntrico grande e
Y acrocêntrico pequeno. O número de pares de autossomos em relação a essas morfologias diferiu de outras
populações estudadas, assim como o NF. Em se tratando de C. semistriatus, este trabalho relata a primeira
descrição cariotípica para a espécie, notando-se 2n = 46 e NF = 80, resultante da presença de 18 pares de
cromossomos metacêntricos e submetacêntricos e quatro pares de acrocêntricos, diferente do reportado para C.
leuconotus (2n = 46 cromossomos, sendo 19 pares com dois braços e três com um braço). O cromossomo X foi
submetacêntrico, diferindo da morfologia de C. leuconotus (metacêntrico); não foi possível a determinação do par
sexual do macho. Os resultados obtidos reforçam a importância de estudos cariotípicos, contribuindo para o
conhecimento e a conservação da biodiversidade no Brasil.
APOIO
Ministério da Integração Nacional.
172
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
REGISTRO DE INFECÇÃO PELA BACTÉRIA INTRACELULAR WOLBACHIA PIPIENTIS EM
POPULAÇÕES NATURAIS DE DROSOPHILA STURTEVANTI (DIPTERA, DROSOPHILIDAE)
Taiane de Lima Silva1; Gleyse Audria de França Nascimento1; Rita Dayane Coutinho da Silva1; Renan Paulino
Guimarães1; Claudia Rohde1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
No presente trabalho, houve uma análise molecular e a caracterização da bactéria intracelular Wolbachia pipientis
em populações naturais de Drosophila sturtevanti, que pertence ao grupo saltans, da família Drosophilidae.
Wolbachia é gênero de bactérias endossimbionte encontrada muito comumente em artrópodes, com estimativa de
70% de infecção entre as espécies. A infecção é herdada pela linhagem materna e é responsável por uma série de
alterações, entre elas, a reprodução dos seus hospedeiros e a incompatibilidade citoplasmática. Devido à grande
importância da dinâmica expansiva de infecção que inclui a transmissão horizontal entre as espécies hospedeiras,
Wolbachia tem sido extensivamente estudada no gênero Drosophila. No entanto, pouco se sabe sobre a ocorrência
dessa bactéria entre as espécies nativas da região Neotropical, especialmente no grupo saltans e no grupo
willistoni. O objetivo deste estudo foi realizar um levantamento inicial da presença de Wolbachia em 20
isolinhagens recentemente coletadas de populações de D. sturtevanti de várias localidades de estados da região
Nordeste do Brasil (como REBIO Saltinho/PE, Goiana/PE, REBIO Guaribas/PB, Reentrâncias Maranhenses/MA,
Jiquiriçá/BA) além do Norte (Belém/PA) e Sudeste (Rio de Janeiro/RJ). Após as coletas, identificação taxonômica
da espécie, e estabelecimento de cultivo das linhagens em laboratório, foi extraído o DNA de moscas adultas e
amplificado o gene cópia única wsp (Wolbachia surface protein) por PCR, com primers específicos. O gene wsp é
exclusivo de Wolbachia e permite a caracterização, após sequenciamento, de qual é a extirpe do endossimbionte
presente nos drosofilídeos. Todas as amostras testadas de D. sturtevanti se mostraram positivas para a presença de
Wolbachia. Além disso, foi possível verificar a elevada titulação do endossimbionte nas amostras, revelada pela
forte coloração das bandas no gel de agarose, em relação aos grupos controle positivo e negativo. Os resultados
abrem caminho para o aprofundamento da caracterização molecular da extirpe do endossimbionte e para
investigação em outras espécies, como a Drosophila prosaltans, com elevada ocorrência na região Nordeste.
APOIO
FACEPE
173
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
SATELLITE DNA EVOLUTION IN A AND B CHROMOSOMES OF ABRACRIS FLAVOLINEATA:
INTEGRATING CYTOGENETIC AND GENOMIC DATA
Diogo Milani1; Erica Ramos2; Vilma Loreto3; Dardo Andrea Martí4; Adauto Cardoso2; Cesar Martins2; Diogo
Cavalcanti Cabral de Mello1.
E-mail: [email protected]
(1)
Depto de Biologia, Instituto de Biociências, UNESP - Univ Estadual Paulista, Rio Claro, Brazil; (2)Depto de
Morfologia, Instituto de Biociências, UNESP - Univ Estadual Paulista, Botucatu, Brazil; (3)Depto de Genética,
Centro de Ciências Biológicas, UFPE - Univ Federal de Pernambuco, Recife, Brazil ; (4)Laboratorio de Genética
Evolutiva, IBS, Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales, Universidad Nacional de Misiones, Posadas,
Argentina
RESUMO
Satellite DNAs (satDNA) are sequences repeated hundred to thousand times tandemly arrayed, being enriched
mainly in heterochromatin located in centromeres and telomeres, or intercalary regions and moreover they could
populate specific chromosomes, like B chromosomes. Here we isolated through restriction enzymatic digestion the
first satDNA in the grasshopper Abracris flavolineata, named AflaSAT-1. The sequence was characterized by
integration of cytogenetic, molecular and genomic approach, aiming to understand the structural organization,
evolution in A and B chromosomes and possible functionality of this sequence. The AflaSAT-1 is a satDNA
shared with other grasshopper species, but our data suggests that it is exclusively enriched in the genome of A.
flavolineata. The AflaSAT-1 monomers recovered from individuals belonging to six populations and from the
microdissected B chromosome (μB-DNA) presented almost no variation between populations, but four exclusive
mutations in μB-DNA were noticed, reflecting the common higher mutational rate in B chromosomes. The
analysis using the sequenced genome revealed distinct organization for the satDNA with occurrence of clusters
containing only the AflaSAT-1 or containing the AflaSAT-1 associated to other satDNA, named AflaSAT-2, but
AflaSAt-2 was never found alone. Chromosomically in the population from Rio Claro/SP the AflaSAT-1 and
AflaSAT-2 were interglimed each other forming large blocks in centromeres of almost all chromosomes, except
the smallest element (pair 11). In the B chromosome only a small centromeric signal was noticed. At populational
point to view the chromosomal distribution for AflaSAT-1 showed slightly variations, like absence of some marks,
additional clusters and heteromorphism. This variation was reflected in AflaSAT-1 copy number estimated
through qPCR, suggesting dynamic for expansion or elimination of this satDNA. Finally, the cDNA analysis
revealed constitutively transcription signals for AflaSAT-1 in distinct tissues of adults, and in distinct life cycle
phases, besides in individuals harboring B chromosome.
APOIO
FAPESP and Cnpq
174
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
SELEÇÃO DE MARCADORES MOLECULARES SSR E ISSR INFORMATIVOS PARA ESTUDOS
GENÉTICOS POPULACIONAIS DE PROCHILODUS COSTATUS (VALENCIENNES, 1850)
Aparecida Jayane Sampaio Miranda1; Keyla Vitória Marques Xavier1; Liliane Gallindo Dantas de Oliveira2;
Geyner Alves Cruz3; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti1.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVASF / Colegiado de Ciências Biológicas; (2)UNIVASF / Colegiado de Ciências da Natureza/Campus
Senhor do Bonfim; (3)UPE / Instituto de Ciências Biológicas / Campus Recife
RESUMO
Prochilodus costatus (curimatã-pioa) é uma espécie endêmica da bacia do rio São Francisco e destaca-se na
atividade pesqueira de subsistência e comercial. Apresenta um papel fundamental na ciclagem de matéria orgânica
em ecossistemas límnicos devido aos seus hábitos bentopelágicos e detritívoros, enfatizando sua importância em
programas de conservação. O presente trabalho teve como objetivo selecionar marcadores moleculares
informativos para futuras análises da estrutura genética populacional de P. costatus. Foi testado um locus SSR
(Simple Sequences Repeats) (Pcos14) em 51 indivíduos coletados em três sub-bacias do rio São Francisco
[Moxotó - Arcoverde/PE (PM11); Brígida - Parnamirim/PE (PM16) e Terra Nova - Terra Nova/PE (PM17)], bem
como três loci ISSRs (Inter Simple Sequence Repeat) (817, 848 e 862) em seis indivíduos capturados nas subbacias Moxotó e Brígida (três indivíduos/sub-bacia). Para isso, DNA genômico foi extraído a partir de tecido
muscular, amplificado por PCR e a genotipagem dos indivíduos foi realizada em gel desnaturante de
poliacrilamida a 6% corado com nitrato de prata (SSR) e gel de agarose 1,5% corado com brometo de etídeo
(ISSR). Em relação ao SSR, o número de alelos, as heterozigosidades observada (HO) e esperada (HE) e índice de
diferenciação genética (FST) foram obtidos mediante o programa Arlequin (v. 3.5.2.2). Por sua vez, a capacidade
informativa de cada primer ISSR foi definida a partir do número total de bandas amplificadas; índice de
diversidade genética (Dg) e PIC (Polymorphism Information Content). O locus SSR mostrou alta variabilidade
alélica, sendo observados 21 alelos variando entre 120-250pb. As populações analisadas apresentaram alto nível
de heterozigosidade intrapopulacional, a qual variou entre Ho=1 (PM16 e PM17) a 0,878 (PM11), ressaltando
elevado índice de diversidade genética; adicionalmente, o baixo valor de FST=0.135 sugere a ocorrência de fluxo
gênico ou o isolamento recente entre essas populações. Os três loci ISSRs apresentaram índice Dg de 57%,
entretanto, o locus 848 destacou-se como o mais polimórfico nas amostras testadas, conforme notado pela
frequência de polimorfismo (92%). Os valores de PIC encontrados foram de 0,35, 0,17 e 0,13 para os ISSR848,
862 e 817, respectivamente. Os dados encontrados indicam que todos os primers SSR e ISSRs testados são úteis
em futuros estudos genéticos populacionais envolvendo P. costatus.
APOIO
UNIVASF e Ministério da Integração Nacional
175
Genética, Evolução e Melhoramento Animal
THE EVOLUTIONARY CONSERVATION OF THE BRCT DOMAINS IN BRCA1 THROUGHOUT
DIFFERENT MAMMALS AND NON-MAMMALS: AN IN SILICO EVALUATION
Penelopy Rodrigues de Macêdo1; Lis Souza Rocha2; Susan Smith3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade de Pernambuco; (2)Universidade Federal de Viçosa; (3)Kennesaw State University
RESUMO
The breast cancer is one of the most harmful cancers in women. Breast and Ovarian Cancer Susceptibility Gene
One (BRCA1) is a well-known gene responsible for producing tumor suppressor proteins, and for receiving
signals from other proteins in order to directly repair damages in DNA. In the BRCA1 protein, there are two
conserved motifs known as BRCA1 C-terminal 1 and 2 (BRCT1 and BRCT2). Herein both domains were
observed. In order to study their conservation, multiple sequence alignments of 33 mammal and non-mammal
species were performed using the editing software Jalview 2.8.1b1. All sequences were obtained from the NCBI
database using Reference Proteins (Refseq_protein), NP_009225.1 as the query sequence, maximum target
number of 5000 sequences, and default parameters (blastp program, word size of 3, expect value 10, BLOSUM62
matrix and a threshold of 11). Afterwards, the sequences were selected as the identity and query cover were in a
good average (e-value= 0). The distance tree presents three different groups of mammals: odd-toed ungulates,
ungulates and primates. The ungulate group includes all animals with hooves and are whales or dolphins, whereas
odd-toed ungulates are those with an odd number of toes. The identity and query cover among those primates were
very similar to the Homo sapiens sequence due to their evolutionary relationship. Curiously, Homo sapiens (Query
cover 100% - Identity 100%) and Chlorocebus sabaeus (Query cover 41% - Identity 89%), which are both
primates, do not have the same similarity. This evolutionary distance might exist because C. sabaeus belongs to
the Family Cercopithecidae instead of Hominidae. Thus, the BRCT conservation throughout evolution was
probably before the group of aminiotes had split into Reptiles and Mammals. Through the distance tree analysis, it
can be predicted that the entire BRCA1, or part of it, might be evolutionary conserved among chordata because the
gene is seen in reptiles, mammals and birds species. Since it is not exclusive to humans, it is predictable that this
gene may work in general control of cell proliferation, and reinforces its function in cycle cell checkpoints,
concluding that mutations on its conserved motifs may result in other types of cancer besides breast cancer.
APOIO
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Conselho Nacional de
Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).
176
Genética Humana e Médica
AIM2 POLYMORPHISMS AND SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS SUCEPTIBILITY IN
PATIENTS FROM STATE OF PERNAMBUCO
Andrezza Emily Monteiro Luz1; José Eduardo Adelino Silva2; Heidi Lacerda Alves da Cruz1; Alessandra
Pontillo3; Sérgio Crovella2; Jaqueline de Azevêdo Silva2; Paula Sandrin Garcia2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco; (2)Departamento de
Genética - Universidade Federal de Pernambuco; (3)- Departamento de Imunologia - Universidade de São Paulo
RESUMO
INTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is a chronic autoimune disease of uknown etiology.
Genetic, epigenetic, gender-related and environmental factors contributes to the pathogenesis of this disease. SLE
affects several organs and systems, including skin, kidneys, cutaneous and nervous system. The activation of
interferon (IFN)-stimulated genes (ISGs) is involved in SLE pathogenesis. One type of ISGs is the Ifi200-family
that includes the AIM2 protein, encoded by AIM2 gene. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) in AIM2 can't
alter the expression or function of AIM2 in SLE. OBJECTIVE: The purpose of this study is investigate the
possible association between AIM2 gene and SLE development. METHODOLOGY: Genotyping was performed
using the Taqman probe C__25762446_10 for the SNP rs2276405 [C/T], using Real Time PCR 7500 ( Applied
Biosystems). A total of 132 SLE Brazilian patients were selected at the Clinical Hospital, Federal University of
Pernambuco, and 154 healthy individuals, matched for sex and age were enrolled as controls. Fisher's Exact Test
was used to evaluate the possible association between the polymorphism and the development of SLE (considering
p.value<0,05). All statistical analyses were performed with RStudio software. RESULTS: No significant
diferences were found by comparing T alelle and the development of SLE (OR = 0.83 CI = 0.20 - 3.48 p.value =
1). CONCLUSION: The SNP rs2276405 [C/T] in AIM2 gene is not associated with development of SLE in
patients from State of Pernambuco. Therefore, is required evaluate if these SNPs can be associated with SLE in
another populations.
APOIO
Financial Support: CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico) and FACEPE
(Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco).
177
Genética Humana e Médica
ARHGAPS FAMILY HISTORY: ENRICHED NEIGHBOURHOODS
Hallana Souza Santos1; Pamela Laiz Paré da Rosa2; Maria Cátira Bortolini2; Vanessa Rodrigues Paixão Cortes1.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA ; (2)UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL
RESUMO
Several comparative genome studies have shown that there is a chromosome synteny conservation in the different
species, and eukaryotic organisms that have diverged recently have homologous DNA segments that containing
genes in the same position, relatively. This shared neighborhood demonstrates that these genes may have
important functional relations or shared regulatory mechanisms and were kept together during evolution. From this
assumption it is possible to unravel the gene families evolution patterns, and how they may influence the
organization of the human genome. A comparative analysis of the neighborhood of human chromosomes that have
ARHGAPS genes ( RHO GTPase activating protein) using the browser Genomicus (V.84), with a distance of 15
genes flanking the both sides was carried out. Using the boundaries of the regions observed, we retrieved
information of the expression variation of these regions with UCSC table browser, with the track Allen brain.
These values were evaluated in GREAT program as a functional enrichment of cis-regulatory regions. For some
ARHGAPs regions no significant enrichment was found. While, that most vicinity of the ARHGAPs are enriched
with genes and regulatory regions that are associated with different types of tumors. As hepatocellular carcinoma,
in ARHGAP12 neighborhood on chromosome 10 (p= 3.01555e-10). On chromosome 17 have enrichment of genes
associated with neuralgic amyotrophy in the region of ARHGAP23 (p=1.44650e-7) a hereditary disease of the
peripheral nervous system. One of its features is facial abnormalities, this can be explained because the
ARHGAP27 region which is also on chromosome 17, this region is enriched with genes that participate in the
morphological development of facial and cranial nerves (p = 1.44650e-7). The region where the ARHGAP19 on
chromosome 10 is enriched with genes that metabolize and distribute xenobiotics (p = 5.91901e-23). The
enrichment of many ARHGAPs regions for terms related to tumors may be related to the fact that these genes
encode signal proteins, mainly involved in remodeling of the cytoskeleton, and as tumors can be compared to stem
cells (embryonic and adult), regions involved with migration and cell differencing that can be co-opted by tumor
cells.
APOIO
FAPESB
178
Genética Humana e Médica
HLA-C SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISM ASSOCIATES WITH INCREASED VIRAL LOAD
LEVEL IN HIV-1 INFECTED PATIENTS FROM NORTHEAST BRAZIL
Rodrigues, Jessyca Kalynne Farias1; Moura, Ronald Rodrigues1; Coelho, Antonio Victor Campos1; Arraes, Luiz
Cláudio2; Brandão, Lucas André Cavalcanti3; Crovella, Sergio1; Guimarães, Rafael Lima1; Celerino da Silva,
Ronaldo1.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of
Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil.; (2)Institute of
Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil.; (3)Department of Pathology,
Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA),
Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil.
RESUMO
Individual variation in susceptibility to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) acquisition, control of viral
replication, and rate of disease progression has been studied. The underlying biological mechanisms to individual
susceptibility are multifactorial, with contributions from host genetic factors in addition to viral factors and
environmental exposures. Variations in genes as Human leukocyte antigen C (HLA-C) and Zinc ribbon domain
containing 1 (ZNRD1), have been associated with to influence the HIV-1 replication and disease progression. In
this sense, we evaluated the distribution of HLA-C (rs10484554, rs9264942) and ZNRD1 (rs3869068, rs8321)
single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 266 HIV-1-infected and 223 unexposed and uninfected individuals
from Northeast Brazil and their relationship with HIV-1 susceptibility, CD4 T cells count, and viral load. HLA-C
SNPs were in Linkage Disequilibrium (D'=0.84), constituting four possible haplotypes. Our results showed that
HLA-C and ZNRD1 SNPs as well as HLA-C haplotypes frequencies were not significantly different between HIV1-infected and healthy controls individuals. In addition, we analyzed HLA-C and ZNRD-1 considering CD4+
counts and viral load before the antiretroviral treatment. Individuals carrying HLA-C rs9264942 CC genotype
showed a significant increased level of HIV-1 viral load pre-treatment, in comparison with individuals carrying the
TT genotype (p-value = 0.0092). Finally we stratified our findings according to CCR5 ?32 allele presence along
with the studied SNPs: no statistically significant influence over viral load pre-treatment has been found. The
association between HLA-C rs9264942 SNP and viral load prior treatment in an admixed population from North
East Brazil was in agreement with findings from previous studies obtained on different ethnic groups; however
more studies should be conducted in order to clarify how HLA-C impair the HIV-1 replication.
APOIO
CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE.
179
Genética Humana e Médica
HLA-G 14 PB INS/DEL POLYMORPHISM AND THEIR RELATION WITH IMMUNOLOGICAL
RESPONSE IN HIV-1 INFECTED INDIVIDUALS UNDER ANTIRETROVIRAL THERAPY
Rodrigues, Jessyca Kalynne Farias1; Coelho, Antonio Victor Campos1; Arraes, Luiz Claudio2; Crovella, Sergio1;
Celerino da Silva, Ronaldo1.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of
Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil.; (2)Institute of
Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil.
RESUMO
The human leukocyte antigen G gene (HLA-G), located at 6p21.3, encodes a non-classical molecule of major
histocompatibility complex with important immunomodulatory properties. On HIV-1 infection, high serum levels
of soluble forms have been associated with immunosuppression and progression to AIDS. On the other hand,
decreased serum levels, due to the antiretroviral therapy (TARV) use, has been related with the immune
reconstitution, favoring the return of cytotoxic activity of CD8+ T lymphocytes and the progressive increase of
CD4+ T lymphocytes. The 14pb insertion/deletion polymorphism in the 3'UTR region of HLA-G has been related
to the messenger RNA (mRNA) instability. The insertion of 14pb in HLA-G has been related to reduced mRNA
levels, consequently, HLA-G low levels. The present study aims to check the possible relationship of the 14pb
ins/del polymorphism in HLA-G with immunological recovery in HIV-1 infected individuals in TARV. In this
study were selected 113 HIV-1-infected individuals with TARV regular and therapeutic success for over a one
year, divided into two groups: success (55) and immunological failure (58), in according with CD4 + T cell count
recovery in one year. The genotyping was performed by conventional PCR and electrophoresis in agarose gel
electrophoresis to 3%. About clinic-epidemiological characteristics, individuals with success and immunological
failure, respectively, were mostly women (69.1% and 62.1%), with median ages of 37.4 years, with median viral
load baseline of 4.51 and 4.30 log10 copies/mL, median of CD4+ T lymphocytes count baseline of 264 and 284
cells/mm3 and in of Non-Nucleoside Reverse Transcriptase Inhibitors (NNRTI) use (52.7% and 58.6%). No
significant differences were observed as the clinical-epidemiological characteristics (p>0.05). In relation to the
polymorphism, we found that the D allele (deletion of 14 pb) was more common among individuals with success
(50%) and immunological failure (56%). Among the genotypes, the D/I heterozygous was the more common both
groups studied (success [45.4%] and failure [50%]). Despite the percentage differences, no significant differences
were observed (p>0.05) in the comparison of groups, as the genotype and allele frequencies. Further studies
should be carried out in other populations and with the largest number of individuals.
APOIO
CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE.
180
Genética Humana e Médica
IMMUNE MODULATING GENES PTPN22, CTLA4 AND MBL2 POLYMORPHISMS PROFILE IN
TURNER SYNDROME PATIENTS
Luana Oliveira dos Santos1; Adriana Valéria Sales Bispo1; Juliana Vieira de Barros1; Raysa Samanta Morais
Laranjeira1; Jaqueline de Azevêdo Silva1; Andréa de Rezende Duarte2; Jacqueline Araújo3; Paula Sandrin
Garcia1; Sergio Crovella1; Marcos André Cavalcanti Bezerra4; Maria do Socorro Cavalcanti5; Neide Santos1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco. Av. da Engenharia, s/n, Cidade Universitária,
50740-600, Recife, PE, Brasil. ; (2)Serviço de Genética Médica, Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando
Figueira (IMIP), Rua dos Coelhos 300 Boa Vista. 50070-050, Recife, PE, Brasil; (3)Serviço de Endocrinologia
Pediátrica, Hospital das Clínicas HC/UFPE, Av. da Engenharia, s/n, Cidade Universitária, 50740-600, Recife, PE,
Brasil.; (4)Departamento de Biofísica e Radiobiologia, Universidade Federal de Pernambuco. Av. da Engenharia,
s/n, Cidade Universitária, 50740-600, Recife, PE, Brasil.; (5)Instituto de Ciências Biológicas, Rua Arnóbio
Marques 310, Santo Amaro, 50100-130, Recife, PE, Brasil.
RESUMO
Turner's syndrome (TS) is characterized by the presence of one X chromosome and a total or partial loss of second
sex chromosome. TS individuals display a set of clinical conditions such as dyslipidemia, obesity and autoimmune
diseases. Herein we performed a genetic association study enclosing polymorphisms in genes involved in
inflammatory and autoimmune processes, namely MBL2, CTLA4 and PTPN22 in TS patients from a Northeast
Brazil population. Additionally, we performed a thorough clinical characterization in these patients and whether
any clinical parameters were in fact related to those genetic variants assessed. Our study aimed to determine
whether PTPN22, CTLA-4 and MBL2 polymorphisms confer any differential susceptibility to clinical conditions in
TS patients. A total of 87 TS patients and 179 healthy individuals (as control group) were assessed. All groups
studied were from the same geographical region, State of Pernambuco. Genotyping assays were performed using
TaqMan flourogenic probes Taqman Universal Master Mix and for MBL2 exon 1 (A/O) we used SYBR Green
protocol assay. No significant differences in allele and genotype frequencies from PTPN22 +1858G/A
(rs2476601) were detected in TS and control group or any clinical conditions in those patients. For CTLA-4
+49A/G (rs231775) analysis, a trend of association was observed for A/G genotype (p=0.04, 95%CI=0.3-1.02 and
OR=0.56), indicating differential distribution for this SNP in TS patients. When assessing clinical features CTLA-4
G/G genotype was associated to overweight/obesity in TS patients (p-value=0.02, 95%CI=1.3927.13 and
OR=6.13). MBL2 promoter region -550(H/L) (rs11003125) presented H/L genotype frequency significantly higher
in TS patients when compared to healthy controls (p=0.01, OR=2.00, 95%CI=1.13-3.57), indicating that this
particular variant may influence upon this feature in TS patients. Furthermore, H/H genotype indicated differential
distribution in TS patients when compared to healthy controls (p=0.01, OR=0.23, 95%CI=0.04-0.82). No
differences in distribution of -221(X/Y) (rs7096206) and MBL2 exon 1 (A/O) alleles and genotypes were observed
in TS subjects and its clinical features nor when comparing to control group. Our results indicated that there is a
differential distribution of important variants within key inflammatory regulating genes in TS patients, which
might be a potential new line of research to improve quality of life in those patients.
APOIO
CNPq and FACEPE
181
Genética Humana e Médica
NLRC4 POLYMORPHISM IS NOT ASSOCIATED WITH SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS
Andrezza Emily Monteiro Luz1; José Eduardo Adelino Silva2; Heidi Lacerda Alves da Cruz1; Alessandra
Pontillo3; Sérgio Crovella2; Jaqueline de Azevêdo Silva2; Paula Sandrin Garcia2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco; (2)Departamento de
Genética - Universidade Federal de Pernambuco; (3)Departamento de Imunologia - Universidade de São Paulo
RESUMO
Keywords: NLRC4, SLE, polymorphism, inflammasomeINTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus
(SLE) is an inflammatory autoimmune associated with genetic, hormonal, environmental and immunological
factors, that involves a wide spectrum of immune cells and presents a several clinical manifestations by affects
multiple organs and systems. Inflammasomes is a multiproteic complex activated in response to cellular damageassociated molecular patterns (DAMPs). Detection of DAMPs can occur via the NOD-like receptor (NLR)
NLRC4. The NLRC4 inflammasome induces secretion of pro-inflammatory cytokines involved in the
pathogenesis of LES. OBJECTIVE: According this background, it is important to assess if SNPs in NLRC4 gene
is associated with susceptibility to SLE. METHODOLOGY: Genotyping was performed using the Taqman®
probe C_2486339_1_ for the SNP rs455060 [G/A], using Real Time PCR 7500 (Applied Biosystems). A total of
132 SLE Brazilian patients were selected at the Clinical Hospital, Federal University of Pernambuco, and 154
healthy individuals selected by gender and age, were included as controls. Fisher's Exact Test was used to
evaluate the possible association between the polymorphism and SLE development (considering p.value<0,05).
All statistical analyses were performed with RStudio software. RESULTS: No statistically significant
differences were found by comparing allelic and genotype frequencies between SLE patients and controls for SNP
rs455060 (OR = 0.837; CI; 0.57 - 1.21; p.value = 0.369) and no association was observed with the development of
SLE. CONCLUSION: The SNP in NLRC4 gene is not associated with SLE development in patients from
Pernambuco state.
APOIO
Financial Support: CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico) and FACEPE
(Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco).
182
Genética Humana e Médica
VDR POLYMORPHISMS MAY INTERFERE IN IMMUNOLOGICAL RESPONSE IN INDIVIDUALS
HIV-1+ UNDER ANTIRETROVIRAL THERAPY
Alves, Neyla Maria Pereira1; Celerino da Silva, Ronaldo2; Pereira; José Jorge de Souza1; Coelho, Antonio Victor
Campos1; Arraes, Luiz Claudio3; Brandão, Lucas André Cavalcanti4; Crovella, Sergio1; de Azevêdo Silva,
Jaqueline1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife,
Brazil; Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.; (2)Laboratory of
Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil; (3)Institute of
Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil.; (4)Laboratory of Immunopathology
Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil; Department of Pathology,
Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.
RESUMO
Antiretroviral therapy introduction has changed the landscape of Human Immunodeficiency Virus (HIV) treatment
in the last years, boosting immune function, reducing morbidity and mortality due to suppression of HIV
replication. However, some individuals receiving HIV care are not able to suppress the viral load to undetectable
levels as expected, a shortcoming known as virological failure. In some cases, despite the effectiveness in viral
load control, some individuals do not achieve quasi-normal CD4+ T-cell counts (immunological failure). These
two phenomena might be due to several factors, including host genetics, immunological and viral profiles. Vitamin
D (vit D) acts immunomodulating several immune system cells through vitamin D receptor (VDR). In HIV-1
infection, Vit D displays a dual effect depending on infection stage: it decreases the immune activation in acute
phase, or induces a less effective helper T lymphocytes response in chronic phase. Additionally, antiretroviral
therapy itself may alter the circulating levels of 25(OH)D, the metabolic precursor of Vit D, since sharing common
cytochrome P450 enzymes in their synthesis (Vit D) and excretion (antiretroviral drugs) metabolic pathways. Here
we evaluated VDR SNPs and treatment or immunological responses in HIV-1 infected (HIV-1+) individuals under
antiretroviral therapy (ARV). Two functional VDR SNPs were assessed: rs2228570 (Fok1) and rs11568820
(Cdx2) in 508 HIV-1+ individuals stratified into four groups according to drug treatment and immunological
response. All individuals were recruted in Institute of Integral Medicine Professor Fernando Figueira (IMIP-PE)
and genotyped by fluorogenic allele specific probes (Taqman) using real time PCR. Median age and therapeutic
regimen were associated to treatment failure (p-value<0.05). No statistically significant differences were observed
for the tested SNPs regarding treatment responsiveness. In relation to immunological response, the C allele, C/C
genotype of rs11568820 and GC (rs2228570-rs11568820) allelic combination were associated to immunological
failure (p-value<0.05). Our findings suggest a possible role for VDR SNPs on immunological failure in HIV-1+
individuals under ARV.
APOIO
CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE.
183
Genética Humana e Médica
PAPEL DO POLIMORFISMO DE NUCLEOTÍDEO ÚNICO DO IFN-γ (RS2069705) NA
SUSCEPTIBILIDADE E PROGRESSÃO DA OSTEOPOROSE PRIMÁRIA PÓS-MENOPAUSA
Camilla Albertina Dantas de Lima1; Anna Paula Oliveira de Souza2; Natássia Rodrigues Javorski1; Heitor
Horlando Sampaio Araújo da Silva2; Madson Allan de Luna Aragão2; Weberson Lima Guaraná2; Alexandre
Domingues Barbosa3; Paulo Roberto Eleutério de Souza4; Jaqueline de Azêvedo Silva1; Paula Sandrin Garcia1.
E-mail: [email protected]
(1)
(2)
Departamento de Genética, CB - UFPE; Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami/LIKA - UFPE;
Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami/LIKA - UFPE; (3)Hospital das Clínicas, HC - UFPE; Laboratório
de Imunopatologia Keizo Asami/LIKA - UFPE; (4)Universidade Federal Rural de Pernambuco - UFRPE
RESUMO
Introdução: O IFN-γ foi uma das primeiras proteínas relacionadas à Osteimunologia mas a compreensão dos seus
mecanismos pleiotrópicos ainda permanece um desafio frente às suas atuações antagônicas no ambiente ósseo.
Polimorfismos de um único nucleotídeo (SNP) em regiões codificantes do IFN-γ podem auxiliar no entendimento
da sua forma de atuação, bem como do seu possível papel como marcador de susceptibilidade, prognóstico e
terapia em doenças ósseas degenerativas, como a Osteoporose (OP). Objetivo: Verificar a possível associação
entre os diferentes genótipos do IFN-γ (rs2069705) e a susceptibilidade à OP, fraturas ósseas por fragilidade,
níveis séricos e adesão terapêutica. Metodologia: Foram selecionadas 244 mulheres diagnosticadas com OP
primária e 112 mulheres saudáveis com ausência de qualquer distúrbio osteometabólico, ambos grupos no período
pós-menopausa. Para o estudo de associação foram analisadas as frequências alélicas e genotípicas entre pacientes
e mulheres saudáveis, além da verificação de relação entre os genótipos e presença de fraturas. Um total de 52
mulheres tiveram níveis séricos da proteína mensurados através do soro por citometria de fluxo e comparados
entre os dois grupos. Para o estudo de adesão terapêutica 69 mulheres em terapia anti-catabólica foram
acompanhadas por um período de 1-4 anos para análise de variação da densidade mineral óssea (DMO) e sua
relação com as variantes genotípicas da citocina. Resultados: Observamos uma maior frequência do alelo G no
grupo de pacientes, associando o alelo com susceptibilidade à OP (p = 0,04; OR = 1,42; IC 95% 1,01-2,02). Em
relação à terapia, o SNP apresentou relação com aumento da DMO no fêmur total (p=0.016) após 3 anos de
tratamento e diminuição no colo de fêmur (p=0.019) após 4 anos de tratamento. Além disto, níveis de INF-γ se
mostraram correlacionados ao aumento de DMO na coluna lombar após 2 anos de tratamento (rho=0,867, p =
0.012). Conclusões: O polimorfismo IFN-γ (rs2069705) apresentou relação significativa com a susceptibilidade à
OP primária e variações de DMO em pacientes em tratamento anti-catabólico. Associado a isto, o aumento dos
níveis da proteína esteve correlacionado ao aumento dos níveis da DMO no segundo ano de terapia. Desta forma, a
citocina se mostrou como um importante elemento no estabelecimento e progressão da OP, sugerindo o
polimorfismo estudado como um candidato a possível marcador para cuidados profiláticos e possibilidade de
acompanhamento terapêutico.
APOIO
CAPES / CNPq / Facepe
184
Genética Humana e Médica
A 3'UTR SNP IN NLRP3 GENE IS ASSOCIATED WITH SUSCEPTIBILITY TO SYSTEMIC LUPUS
ERYTHEMATOSUS
Matheus da Silva Mesquita1; José Eduardo Adelino Silva2; Heidi Lacerda Alves da Cruz2; Heitor Horlando de
Luna Aragão1; Wlisses Henrique Veloso de Carvalho da Silva2; Alessandra Pontillo3; Sergio Crovella2; Jaqueline
Azevêdo Silva2; Paula Sandrin Garcia2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, LIKA, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife,
Brasil ; (2)Departamento de Genética da Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife, Brasil;
(3)
Departamento de Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo,São Paulo, Brasil
RESUMO
INTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized by production
of autoantibodies leading to inflammation and tissue damage. Its pathogenesis remains unclear but has
the contribution of genetic, hormonal and environmental factors. The activation of NLRP3 is involved with
inflammatory responses by proteolytic activation of caspase-1 resulting in secretion of mature proinflammatory
cytokines that plays key role in maintenance of chronic inflammation in SLE. SNPs are genetic variants that can
alter genic expression or function and has been used to understand the genetic susceptibility involved in disease
development. OBJECTIVE: Since SLE is a disease with a strong genetic component and NLRP3 is an important
pathway in inflammatory response, it is necessary evaluate if polymorphisms in NLRP3 is associated with
SLE susceptibility. METHODOLOGY: We recruited 132 SLE patients from Division of Rheumatology,
University Hospital of the Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil. The control group was composed by
154 healthy individuals from the same geographical area (Recife, Pernambuco, Brazil). Genomic DNA was
extracted from peripheral blood samples using a Salting Out Method. The genotyping was performed
using TaqMan probes; The PCR for detection of SNP was carried out according to the manufacturer's instructions
using Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System. The polymorphism studied was the rs10754558 [G>C]
located at 3'UTR. Allelic and genotype frequencies of patients and controls were compared using a Fisher's Exact
Test in R Software. RESULTS: We found an association between C allele (OR = 0,67; CI= 0,46 - 0,95; p.value=
0,023) and CC genotype (OR = 1,10; CI: 0,15- 0,84; p value= 0,011) showing a protection
against SLE susceptibility. CONCLUSION: In accordance with the location of SNP rs10754558 associated
at 3'UTR, we suggested that this may
be
able
to change its expression leading
to an
increase
in maturation of proinflammatory cytokines involved in SLE.
APOIO
FINANCIAL SUPORT: FACEPE and CNPq
185
Genética Humana e Médica
A GENETIC POLYMORPHISM WITHIN IL-18 IS ASSOCIATED WITH MALAR RASH IN PATIENTS
WITH SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS FROM STATE OF PERNAMBUCO
Guaraná, Wl1; Adelino Silva, Je2; Cruz, Hla2; Crovella, S2; Sandrin Garcia, P2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ; (2)Laboratório de
Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ; Departamento de Genética,
Universidade Federal de Pernambuco - Brasil
RESUMO
INTRODUCTION: IL18 gene encodes a pro-inflammatoy cytokine, interleukin 18 (IL-18), which acts in innate
and adaptative immunity. IL18 is expressed by a high spectrum of immune cells, such as natural killer (NK),
dendritic cells and macrophages. SLE is a chronic autoimmune disease that affects kidneys, joints and skin. In
addition to skin symptoms, SLE patients present malar rash (MR), a subtype of chronic Cutaneous Lupus
Erythematosus (CLE). Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) are genetic variants that can alter the expression
or function of the protein. Additionally, SLE is a systemic autoimmune disease caused by multiple enviromental
and genetic factors. OBJECTIVE: In this context, it is important to assess if polymorphisms in the IL18 gene may
contribute to the development of SLE and/or their clinical manifestations. METHODOLOGY: Genotyping was
performed using the Taqman® probe C_2898459_20 to analyze the SNP rs1946519 [C>A] in a exon region of the
IL18 gene. The assays were done using Real Time PCR 7500 (Applied Biosystems). A total of 136 SLE Brazilian
patients were recruited at the Division of Rheumatology of Clinical Hospital, Federal University of Pernambuco of
these 89 were positive and 47 negative for MR). 154 healthy individuals matched for age and sex with SLE
patients from the same geographical area, without previous familial history of autoimmune disorders, were also
enrolled as controls. Fisher's Exact Test was used to evaluate the association between the polymorphism and the
SLE susceptibility (considering p.value<0.05). All statistical analyses were performed with R software.
RESULTS: Significant differences were found by comparing allelic and genotype frequencies between SLE/MR+
patients and controls for SNPrs1946519 and the delopment of malar rash: A/C genotype (OR = 2.34; CI = 1.07 5.35; p.value = 0.024) A/A genotype (OR=4.65; CI =2.0 - 11; p. value = 9.49e-05). CONCLUSION: The SNP in
IL18 gene shows association with malar rash in SLE patients compared with healthy individuals. IL-18 contributes
to malar rash is SLE through angiogenesis and leukocyte recruitiment. According our results, it is possible that
polymorphism rs1946519 [C>A] enhances the properties of IL18 As a result, the polymorphism can be a possible
genetic marker to the development of malar rash.
APOIO
CNPq and FACEPE
186
Genética Humana e Médica
A GENETIC VARIANT WITHIN CASP1 GENE IS NOT A GENETIC FACTOR FOR SYSTEMIC
LUPUS ERYTHEMATOSUS SUSCEPTIBILITY
Heitor Horlando Sampaio Araujo da Silva1; José Eduardo Adelino Silva2; Heidi Lacerda Alves da Cruz1;
Alessandra Pontillo3; Sergio Crovella2; Paula Sandrin Garcia2; Matheus da Silva Mesquita1; Madson Allan de
Luna Aragão1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami; (2)Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami, Departamento de
Genética; (3)Departamento de Imunologia, Universidade de São Paulo, São Paulo
RESUMO
INTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus is a multifactorial autoimune disorder with a chronic
inflammatory state. This inflammation occurs through pyropotosis, a type of inflammatory programmed cell death
that results in release of proinflammatory molecules. Pyroptosis is mediated by caspase1 protein, encoded by
CASP1 gene, and is enhanced in macrophages from human and murine SLE individuals. OBJECTIVE: Since SLE
is an autoimmune disease with genetic component, it is importante to evaluate if Single Nucleotide
Polymorphisms (SNPs) within CASP1 is associated with SLE. METHODOLOGY: This is a case-control study
where enrolled a total of 132 SLE patients recruited from Division of Rheumatology, University Hospital of
Federal University of Pernambuco, used as case; and 154 healthy individuals from the same geographical area,
was used as controls. DNA was extracted using the DNA Extraction Kit (PROMEGA). Genotyping of SNP
rs572687 [G>A] was performed through Taqman probes using Real Time PCR in ABI 7500 platform (Applied
Byosistems). Statistical analyzes were perfomed using Fisher Exact's Test in R Software. RESULTS: We do not
found statistical association between the studied SNP and SLE susceptibility (OR=1.07; CI = 0.66 - 1.72; p.value
= 0.818). CONCLUSION: In this study, rs572687 SNP [G>A] was not associated with SLE susceptibility. Thus,
this genetic variant do not contributes to SLE pathogenesis in the studied population.
APOIO
CNPq; Facepe;
187
Genética Humana e Médica
A GENETIC VARIANT WITHIN IL10 GENE IS ASSOCIATED WITH A LOWER SEVERITY OF
RHEUMATOID ARTHRITIS AND UPREGULATES IL10 LEVELS
José Eduardo Adelino Silva1; Camilla Albertina Dantas de Lima1; Patrícia D'emery Alves dos Santos2; Madson
Allan de Luna Aragão2; Heitor Horlando Sampaio Araújo da Silva2; Maria Helena Queiroz de Araújo3; Eliézer
Rushansky4; Sérgio Crovella1; Jaqueline de Azevêdo Silva1; Paula Sandrin Garcia1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil; (2)Laboratório de
Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil; (3)Centro de Infusão de
Imunobiológicos, Hospital Oswaldo Cruz, Universidade de Pernambuco, Recife, Brasil; (4)Centro de Infusão de
Imunobiológicos, Hospital Oswaldo Cruz, Universidade de Pernambuco, Recife, Brasi
RESUMO
INTRODUCTION: Rheumatoid Arthritis (RA) is an autoimmune and inflammatory disease characterized by
synovitis and joint damage. Its etiology is unknown, but involves genetic, environmental and immunologic factors,
such a proinflammatory cytokine network. Interleukin 10 (IL10) is an anti-inflammatory cytokine that
downregulates key proinflammatory cytokines in RA pathogenesis, such as TNFα, interleukin 1β, and thus inhibits
the degradation of bone and cartilage. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) are genetic variants that can alter
the expression or function of several genes. OBJECTIVE: In this context, this study had a two aims: evaluate if the
SNP rs1800896 [T>C], within IL10, is associated with RA susceptibility and also assess if this SNP can alter the
IL10 levels. METHODOLOGY: A total of 126 RA patients were recruited at Oswaldo Cruz Hospital, Pernambuco
University. Clinical status assessement of RA patients were collected according criteria defined by American
College of Rheumatology (ACR). Genotyping was performed using Real Time PCR in ABI 7500 platform
(Apllied Byosistems) to evaluate the SNP rs1800896 [T>C] located at promoter region of IL10 gene. Genotypeguided levels of IL10 were assessed using CBA (Cytokine Bead Array) in FACSCalibur Flow Cytometry (BD
Biosciences). Statistical analyses were perfomed using Anova Test and Binary Regression Logistic in SPSS
Program, considering p.value < 0.05. RESULTS: We found an association between C/C genotype and a low
severity of RA, measured by Clinical Disease Activity Index score (CDAI) (p.value = 0.016). We also found an
association between C/C genotype and higher IL10 levels compared with CT (0.020) and TT (0.032) genotypes.
CONCLUSION: C/C genotype upregulates IL10 levels and then inhibits proinflammatory pathways leading to a
mild manifestations of RA, reflecting in a low severity disease index.
APOIO
FACEPE and CNPq
188
Genética Humana e Médica
A SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISM WITHIN CARD8 IS NOT ASSOCIATED WITH
SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS SUSCEPTIBILITY?
Matheus da Silva Mesquita1; José Eduardo Adelino Silva2; Heidi Lacerda Alves da Cruz2; Madson Allan de Luna
Aragão1; Alessandra Pontillo3; Sergio Crovella2; Jaqueline de Azevedo Silva2; Paula Sandrin Garcia2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de?Imunopatologia?Keizo?Asami, LIKA, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE,
Recife,?Brasil ; (2)Departamento?de Genética da Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife, Brasil?? ;
(3)
Departamento de Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, Brasil?
RESUMO
INTRODUCTION:? Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized
by autoantibodies against self-nuclear antigen, deposition of immune complexes and an exacerbated production of
pro-inflammatory cytokines that induces tissue damage in multiple organs. Its etiology is unknown, but several
factors contribute to its development, such genetic and environmental factors. CARD8, encoded by CARD8 gene,
down regulates the activation of IL-18 and IL1β, a pro-inflammatory cytokines with a important role in
maintenance of a chronic inflammatory state in SLE patients. CARD8 is also responsible by inhibiting activity
of NF-κB, a transcription factor responsible for the expression of TNFα, also important in SLE pathogenesis.
OBJECTIVE:?Since SLE is a disease with a strong genetic component and CARD8 is an important pathway
that?inhibits?key mediators to maintenance chronic inflammation in SLE pathogenesis, it is necessary
evaluate?if?polymorphisms?in CARD8 gene is associated with SLE. METHODOLOGY: We recruited 132 SLE
patients from Division of Rheumatology, University Hospital of the Federal University of Pernambuco, Recife,
Brazil. The control group was composed by 154 healthy individuals from the same geographical area
(Recife, Pernambuco, Brazil). Genomic DNA was extracted from peripheral blood samples using
a Salting Out Method. The genotyping was performed using TaqMan probes using Applied Biosystems 7500 RealTime PCR System. The polymorphism studied was the rs2043211?[A>T] that promotes a nonsense mutation by
change the amino acid arginine to a stop codon in exon 2. Allelic and genotype frequencies of patients and
controls were compared using a Fisher's Exact Test in R Software. RESULTS: No association was found between
this SNP (OR = 1.10; CI = 0.72 - 1.68;p.value = 0.611) and the susceptibility to SLE. CONCLUSION: According
to the present result, the polymorphism studied do not contributes to SLE pathogenesis in studied population.
APOIO
FINANCIAL SUPORT: FACEPE and?CNPq
189
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA ALFA-DEFENSINA 3 (HNP-3) EM COMPARAÇÃO AOS DIFERENTES TIPOS DE
DEFENSINAS HUMANAS E SUAS VARIANTES EM PRIMATAS
Beatriz de Lucena Villa Chan Cantalupo1; Pedro S. Pereira1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
As defensinas são peptídeos antimicrobianos, cujas subfamílias principais compreendem α-defensinas (HNPs) e βdefensinas (DEFBs). Devido à localização cromossômica, a suas estruturas gênicas e ao fato de seus peptídeos
precursores serem semelhantes, é provável que todas as defensinas de vertebrados tenham surgido a partir de um
precursor gênico comum. Procurou-se estudar a sequência de nucleotídeos e/ou de aminoácidos da HNP-3
humana, comparando-a com os demais tipos de defensinas humanas e suas variantes em diferentes espécies de
primatas. Utilizando o banco do NCBI, buscou-se sequências de HNPs 1, 2, 3 e 4 e DEFBs 1 e 2 para posterior
análise comparativa entre elas. Cada sequência-sonda serviu como base na busca por segmentos com similaridades
em mais dez espécies primatas. O melhor quadro de leitura da HNP-3 humana foi encontrado usando o ORFFinder e corresponde ao frame +3, com 285 pb. Os domínios conservados das sequências selecionadas foram
identificados através do Batch CD-Search. Foi gerado um gel 2D virtual no JVirGel, na qual as HNP-2, DEFB-2 e
DEFB-1 apresentaram valores mais baixos, com 3,33 kDa, 4,35 kDa e 5,10 kDa, respectivamente. A ancoragem
gênica da HNP-3 humana foi realizada usando o Genome Browser. Verificou-se que os genes que a codificam
estão localizados em um cluster no cromossomo 8. Realizou-se busca pelo peptídeo sinal da HNP-3 humana
usando o SignalP, que foi removido para gerar seu modelo 3D no Swiss-Model. O modelo gerado foi submetido à
análise estereoquímica através dos diagramas de Ramachandran, concluindo-se que 98% dos aminoácidos estão
localizados em zonas favoráveis. As duas subfamílias principais diferem no comprimento de seus segmentos
peptídicos, entre as seis cisteínas e seus emparelhamentos, associadas por ligações de dissulfeto. O alinhamento
das sequências das defensinas humanas usando o MEGA 7.0 mostrou a conservação das posições das cisteínas.
Foi gerada uma árvore fenética contendo as sequências de defensinas humanas e demais primatas, usando como
grupo externo uma sequência de defensina de Drosophila melanogaster, a fim de polarizar as análises, adontando
um bootstrap de 1000 repetições. Os nós mais basais apresentaram valores de bootstrap baixos, indicando que o
programa teve dificuldade em agrupar sequências similares nestas regiões. Alguns agrupamentos terminais,
porém, apresentaram valores de bootstrap altos, mostrando similaridades significativas.
APOIO
CAPES e FACEPE.
190
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-126 EM 03 LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER
HEMATOLÓGICO ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS.
Filipe de Albuquerque Silva1; Italo Alves Santos1; Suzanne Pinheiro Vieira2; Orlando Ronaldy da S. Santos3;
Gabriella Lombardi de Almeida Sales2; Elizabeth Andrade Noé da Silva2; Arthur Cardoso Almeida4.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia - FOUFAL. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.
Maceió, AL. Brasil.; (2)Aluna de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças
Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia
- ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)Aluno de Iniciação Científica.
LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em
Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (4)Professor de Citologia Clínica e Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola
de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.
RESUMO
INTRODUÇÂO:MicroRNAs (miRNAs) são pequenas sequências de ribonucleotídeos não codificadores de
proteínas que modulam processos fisiológicos como apoptose, proliferação e diferenciação celular. No câncer,
atuam como oncogenes ou como genes supressores de tumores. Assim, a análise da expressão gênica de miRNAS
tem se tornado uma ferramenta para o diagnóstico, prognóstico e identificação de novos alvos terapêuticos para
vários tipos de neoplasia.OBJETIVO:Avaliar a expressão do miR-126 em 3 linhagens celulares específicas de
câncer hematológico após o tratamento com daunorrubicina, citarabina e cisplatina.MATERIAL E
MÉTODOS:Foram usados as linhagens MOLM13, HL60 e U937. As culturas foram mantidas a 37°C em estufa de
CO2 e repassadas a cada 72h para manutenção das mesmas. Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia
das drogas (Daunorrubicina, Citarabina e Cisplatina) nas linhagens, procedendo-se à determinação da IC50 de
cada uma isoladamente e combinadas entre si (Daunorrubicina+Citarabina; Daunorrubicina+Cisplatina;
Citarabina+Cisplatina; Daunorrubicina+Citarabina+Cisplatina). A extração do RNA foi feita em sistema
automatizado-Maxwell®Promega. Por fim, os níveis de expressão do miR-126 foram avaliados por qRT-PCR nas
amostras tratadas e nos controles (linhagens não tratadas). O GAPDH foi usado como gene
constitutivo.RESULTADOS:A expressão do miR-126 se mostrou alterada e estatisticamente significante nas
linhagens tratadas com daunorrubicina, citarabina e na combinação dessas 2 drogas(p<0,05),comparando-se aos
controles. Nas linhagens tratadas com cisplatina, teve uma leve (0.1FC), porém não significativa alteração em
relação aos controles. Contudo, quando combinada com daunorrubicina e ou citarabina, a expressão do miR-126
se mostrou alterada em relação aos controles(p<0,05),mas inferior se comparado aos níveis de expressão nas
linhagens tratadas com daunorrubicina e ou citarabina, isoladas e combinadas entre si(média de diferença de
1.02FC;p<0.05).CONCLUSÕES:Os níveis alterados de expressão do miR-126 nas 3 linhagens após o tratamento
com daunorrubicina e citarabina, isoladas e combinadas, podem estar associados a um mecanismo de indução de
quimioresistência, onde o miRNA torna as células resistentes à quimioterapia. A cisplatina (não é uma droga de
primeira escolha), parece inibir, revertendo o efeito de indução de quimioresistência mediado pela daunorrubicina
e pela citarabina. Contudo, estudos serão necessários para definir esses mecanismos.
APOIO
CNPQ.
191
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-126 EM UMA LINHAGEM CELULAR DE CÂNCER DE BOCA.
Filipe de Albuquerque Silva1; Italo Alves Santos1; Suzanne Pinheiro Vieira2; Orlando Ronaldy da S. Santos2;
Gabriella Lombardi de Almeida Sales2; Elizabeth Andrade Noé da Silva2; Carlos Arthur Cardoso Almeida3.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL.
Brasil.; (2)Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e
Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR.
Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)Professor de Citologia Clínica e Hematologia
Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso
de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas UFAL. Maceió, AL. Brasil.
RESUMO
INTRODUÇÂO:MicroRNAs são curtas sequências de ribonucleotídeos que não codificam proteínas e apresentam
funções biológicas como apoptose, proliferação, diferenciação celular e regulação pós-trancricionais. Os miRNAs
são alterados em processos neoplásicos, pois podem reduzir ou aumentar miRNA transcritos dos genes supressores
de oncogenes, portanto, essas moléculas modulam a proliferação e a diferenciação das células de um
organismo.OBJETIVO:Avaliar a expressão do miR-126 em uma linhagem celular de câncer de boca após
tratamento com as drogas daunorrubicina, citarabina e cisplatina.MATERIAL E MÉTODOS:Foi usado a linhagem
H413. As culturas foram mantidas a 37°C em estufa de CO2 e repassadas a cada 72h para manutenção das
mesmas. Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas (Daunorrubicina, Citarabina e
Cisplatina) nas linhagens, procedendo-se à determinação da IC50 de cada uma isoladamente e combinadas entre si
(Daunorrubicina+Citarabina;
Daunorrubicina+Cisplatina;
Citarabina+Cisplatina;
Daunorrubicina+Citarabina+Cisplatina). A extração do RNA foi feita em sistema automatizado - Maxwell ®
Promega. Por fim, os níveis de expressão do miR-126 foram avaliados por qRT-PCR nas amostras tratadas e nos
controles (linhagens não tratadas). O GAPDH foi usado como gene constitutivo.RESULTADOS:A expressão do
miR-126 se mostrou alterada e estatisticamente significante (p<0,005) nas amostras tratadas com as drogas
isoladas e combinadas, comparando-se com as amostras controles. A linhagem tratada com cisplatina teve a maior
diferença de expressão (FC:3.7) em relação aos controles (FC:1,69). A daunorrubicina e a citarabina (não são
drogas de primeira escolha) tiveram uma pequena diferença na expressão do miR-126, isoladas (FC:2.1 e 1.9
respectivamente) e combinadas (FC:1,99). Porém, nas células tratadas com as 3 drogas combinadas, houve um
aumento na expressão do miR-126 quase que ao mesmo nível das células tratadas com cisplatina
(FC:3.66).CONCLUSÕES:A daunorrubicina e a citarabina tem pouco efeito sobre as células H413, mesmo assim,
houve uma leve diferença de expressão do miR-126 nas células tratadas com essas drogas. Nas células tratadas
com Cisplatina foi onde houve o maior nível de expressão do miR-126 em relação aos controles. É possível que
haja uma participação deste microRNA em um mecanismo de quimioresistência, processo no qual as drogas
perdem sua efetividade. Porém, novos estudos deverão ser realizados a fim de esclarecer esse mecanismo.
APOIO
CNPQ
192
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-146A EM 03 LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER
HEMATOLÓGICO ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS
Guilhermie Duarte de Melo1; Italo Alves Santos1; Orlando Ronaldy da S. Santos2; Gabriella Lombardi de
Almeida Sales3; Suzanne Pinheiro Vieira3; Elizabeth Andrade Noé da Silva3; Carlos Arthur Cardoso Almeida4.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia - FOUFAL. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.
Maceió, AL. Brasil.; (2)Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia
Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR.
Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)Aluna de Iniciação Científica. LADITEC Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências
Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.
Maceió, AL. Brasil.; (4)Professor de Citologia Clínica e Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola
de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.
RESUMO
INTRODUÇÃO: Os miRNAs são pequenas moléculas de RNAs não codificantes. Uma das suas funções nas
células é modular a expressão gênica e podem atuar promovendo diferenciação, proliferação, apoptose e outros
processos biológicos. Alterações nas atividades desempenhadas por eles podem provocar patologias, como o
desenvolvimento de neoplasias malignas. OBJETIVOS: Avaliar a expressão do miR-146a em 3 linhagens
celulares específicas de câncer hematológico após o tratamento com drogas antitumorais. MATERIAL E
MÉTODOS: Foram usados as linhagens MOLM13, HL60 e U937. As culturas foram mantidas a 37°C em estufa
de CO2 e repassadas a cada 72h. Foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas (Daunorrubicina, Citarabina
e Cisplatina) nas linhagens selecionadas, procedendo-se à determinação da IC50 de cada uma isoladamente e
combinadas entre si. A extração do RNA foi feita em Maxwell ® Promega, usando os kits e seguindo o protocolo
do fabricante. Os níveis de expressão do miR-146a foram avaliados por qRT-PCR nas amostras usando o GAPDH
como gene constitutivo. RESULTADOS: Comparados aos controles, os níveis mais alterados e estatisticamente
significantes (p<0,05) de expressão do miR-146a foram observados nas linhagens tratadas com daunorrubicina,
citarabina e na combinação dessas 2 drogas. Nas linhagens tratadas somente com cisplatina, houve uma leve
alteração em relação aos controles (p=0.00598), contudo, quando combinada com a daunorrubicina e ou com a
citarabina, as linhagens tratadas apresentaram níveis de expressão do miR-146a mais elevados que os controles
(p<0,05), porém mais baixos se comparados com os das linhagens tratadas apenas com daunorrubicina ou
citarabina (p<0,05). Com as três drogas combinadas, as células têm o nível de expressão do miR-146a volta a se
elevar, aproximando-se do nível das linhagens tratadas com daunorrubicina e citarabina combinadas (p<0,005).
CONCLUSÕES: Existem poucos relatos sobre a relação do miR146a e a quimioresistencia com as drogas nas
linhagens celulares estudadas. Os altos níveis de expressão do miR-146a nas 03 linhagens após o tratamento com
daunorrubicina e citarabina, isoladas e combinadas, pode sugerir um mecanismo de indução de quimioresistencia.
Entretanto, a ação da cisplatina quando combinada com a daunorrubicina e ou com a citarabina, parece inibir esse
efeito de quimioresistencia pois existe uma clara redução dos níveis de expressão do miR-146a. Faz-se necessário
estudos para elucidar esses mecanismos.
APOIO
CNPQ.
193
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-146A EM UMA LINHAGEM CELULAR DE CÂNCER DE BOCA
ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS.
Guilhermie Duarte de Melo1; Italo Alves Santos1; Orlando Ronaldy da S. Santos2; Gabriella Lombardi de
Almeida Sales3; Suzanne Pinheiro Vieira3; Elizabeth Andrade Noé da Silva3; Carlos Arthur Cardoso Almeida4.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia - FOUFAL. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.
Maceió, AL. Brasil.; (2)Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia
Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR.
Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)Aluna de Iniciação Científica. LADITEC Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências
Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.
Maceió, AL. Brasil.; (4)Professor de Citologia Clínica e Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola
de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.
RESUMO
INTRODUÇÂO: Os miR-146a são pequenos RNAs não codificantes, no entanto, são moléculas fundamentais
para o desempenho de processos celulares por atuarem no controle da expressão dos genes. O potencial dos
miRNAs atuarem como moduladores para as atividades de manutenção celular foi de grande importância para o
desenvolvimento de pesquisas. Quando esses sofrem alterações, podem ser os responsáveis pelo desencadeamento
de várias patologias, considerada uma das mais preocupantes é a proliferação celular desordenada dando origem
ao câncer. OBJETIVOS: Avaliar a expressão do miR-146a em uma linhagem celular de câncer de boca após o
tratamento com drogas quimioterápicas. MATERIAL E MÉTODOS: Neste estudo foi usado a linhagem H413. As
culturas foram mantidas a 37°C em estufa de CO2 e repassadas a cada 72h para manutenção das mesmas.
Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas (Daunorrubicina, Citarabina e Cisplatina) nas
linhagens selecionadas, procedendo-se à determinação da IC50 de cada uma isoladamente e combinadas entre si.
A extração do RNA foi feita em sistema automatizado - Maxwell ® Promega, usando os kits e seguindo o
protocolo do fabricante. Por fim, os níveis de expressão do miR-146a foram avaliados por qRT-PCR nas amostras
usando como gene constitutivo o GAPDH. RESULTADOS: Estatisticamente não houve alteração nos níveis de
expressão do miR146a na linhagem estuda em relação ao controle após o tratamento com daunorrubicina,
citarabina, daunorrubicina + citarabina, citarabina + cisplatina, daunorrubicina + cisplatina e das 03 drogas
combinadas. Apenas nas amostras tratadas com cisplatina houve um leve aumento da expressão (0.25 Fold) em
relação aos controles (FC: 1,0) (p<0,05). CONCLUSÕES: A literatura relata dados controversos em relação à
expressão do miR-146a em CA de boca relacionando-o tanto o aumento de expressão quando a diminuição com o
grau de agressividade do tumor. Nesse estudo, leve diferença de expressão apresentado pelo miR-146a quando
tratado com cisplatina pode sugerir um efeito de indução de quimioresistência. Esses dados são interessantes e
merecem atenção especial porque existem poucos estudos na literatura relacionando a quimioresistencia do miR146a com essa linhagem celular. Entretanto, estes resultados precisam ser repetidos para descartar qualquer falha
técnica do experimento e caso seja confirmado esse aumento de expressão, mais estudos serão necessários para
melhor definir esse mecanismo.
APOIO
CNPQ
194
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-22 EM 03 LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER
HEMATOLÓGICO.
Orlando Ronaldy da S. Santos1; Gabriella Lombardi de Almeida Sales2; Italo Alves Santos3; Suzanne Pinheiro
Vieira2; Elizabeth Andrade Noé da Silva2; Carlos Arthur Cardoso Almeida4.
E-mail: [email protected]
(1)
1- Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de
Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (2)2- Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de
Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola
de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)3Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL.
Brasil.; (4)4- Professor de Citologia Clínica e Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de
Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem
e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.
RESUMO
INTRODUÇÃO: Os micro-RNAs possuem cerca de 22 nucleotídeos distribuídos em um filamento único. Atuam
na regulação gênica, sendo fundamental para a diferenciação tecidual, ciclo celular, proliferação e apoptose. Além
de inúmeras evidências da sua importância em processos celulares vitais, no entanto, a desregulação na expressão
dos miRNAs está relacionada à diversas patologias em humanos, como doenças neurodegenerativas, problemas
cardíacos e vários tipos de câncer. A expressão dos miRNAs depende das características do tipo de câncer, do
estágio, dentre outras condições clínicas. O conhecimento sobre miRNAs tem propiciado aplicações ao
diagnóstico, prognóstico e terapia do câncer. OBJETIVOS: Avaliar a expressão do miRNA 22 em 03 linhagens
celulares específicas de câncer hematológico; avaliar a sensibilidade, a eficácia e a IC50 da daunorrubicina, da
citarabina e da cisplatina nas linhagens celulares selecionadas. MATERIAIS E MÉTODOS: Neste estudo foram
usadas as linhagens MOLM13, HL60 e U937. As culturas foram mantidas à 37°C em estufa de CO2 e repassadas
a cada 72h para manutenção das mesmas. Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas
(Daunorrubicina, Citarabina e Cisplatina) nas linhagens selecionadas, procedendo-se à determinação da IC50 de
cada uma isoladamente e combinadas entre si (Daunorrubicina + Citarabina; Daunorrubicina + Cisplatina;
Citarabina + Cisplatina; Daunorrubicina + Citarabina + Cisplatina). A extração do RNA foi feita em sistema
automatizado - Maxwell ® Promega, usando os kits e seguindo o protocolo do fabricante. Por fim, os níveis de
expressão do miR-22 foram avaliados por qRT-PCR nas amostras antes e após tratamento com as drogas.
RESULTADOS: Houve alteração na sensibilidade as drogas testadas isoladas e combinadas, sendo a Cisplatina a
que provocou a menor sensibilidade nas 03 linhagens testadas, mesmo combinada com as demais drogas. A
expressão do miR-22 também se mostrou alterada em relação aos controles (linhagens sem as drogas),
principalmente nas linhagens tratadas com Daunorrubicina, Citarabina e na combinação dessas 2 drogas.
CONCLUSÕES: A Cisplatina tem pouco efeito sobre as linhagens estudas; apesar de naturalmente expresso nas
03 linhagens estudadas, após o tratamento com Daunorrubicina e Citarabina houve uma queda nos níveis de
expressão do miR-22 em relação aos controles (linhagens não tratadas), sugerindo um efeito antitumoral onde as
células se tornaram mais sensíveis à ação da droga.
APOIO
CNPq
195
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-24 EM LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER
HEMATOLÓGICO ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS.
Italo Alves Santos1; Gabriella Lombardi de Almeida Sales2; Suzanne Pinheiro Vieira2; Elizabeth Andrade Noé da
Silva2; Orlando Ronaldy da S. Santos2; Carlos Arthur Cardoso Almeida3.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia - FOUFAL. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.
Maceió, AL. Brasil.; (2)Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças
Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia
- ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)Professor de Citologia Clínica e
Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia
Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal
de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.
RESUMO
Introdução. Dentre os mais de 1800 microRNAs já identificados em humanos, foi demonstrada a participação do
miR-24 em várias linhagens de câncer, incluindo tumores do sistema hematopoiético. Porém, muito pouco ainda
se conhece sobre a expressão e função desta molécula no câncer hematológico quando submetido à ação de drogas
antitumorais. Sabe-se que os microRNAs podem exercer influência no comportamento de células tumorais,
funcionando como oncomirs, ou seja, estimulando o desenvolvimento do tumor, ou como supressores tumorais,
inibindo seu desenvolvimento. Dessa forma, avaliar o padrão de expressão de um microRNA é uma boa
abordagem de estudo de sua função na patogênese do câncer, tendo em vista sua potencial utilização como
marcadores moleculares para diagnóstico, prognóstico e terapêutica. Dada a importância do estudo da expressão
de microRNAs em diferentes tipos de tumores quando submetidos a terapêutica medicamentosa, este trabalho teve
como objetivo avaliar a expressão do miR-24 nas linhagens celulares de câncer hematológico Molm-13, HL-60 e
U937, antes e depois de tratadas com as drogas Citarabina, Daunorrubicina e Cisplatina. Materiais e métodos.
Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas nas linhagens selecionadas, procedendo-se à
determinação da IC50 de cada uma isoladamente e das drogas combinadas entre si. Foi realizado, então, RT-PCR
quantitativo nas amostras tratadas com as drogas antitumorais a fim de analisar os níveis de expressão para o miR24. Resultados e discussão. O miR-24, naturalmente expresso nas 3 linhagens estudadas, apresentou-se
superexpresso em todas as amostras após o tratamento com daunorrubicina e citarabina, isoladas e combinadas,
em relação aos controles (linhagens não tratadas). Nas amostras tratadas apenas com cisplatina, o miR-24
apresentou um pequeno aumento de expressão em relação ao grupo controle. No entanto, nas amostras tratadas
com cisplatina combinada com as outras drogas, os níveis de expressão do miR-24 caíram em relação às amostras
tratadas somente com daunorrubicina e citarabina, isoladas ou combinadas. Conclusão. A superexpressão do miR24 sugere um efeito de quimiorresistência dos tumores, mediado pelo microRNA. Isoladamente, a cisplatina
exerce pouco efeito sobre as linhagens estudas. Quando, porém, combinada com daunorrubicina e citarabina, a
cisplatina parece funcionar como um inibidor do efeito de quimiorresistência do miR-24.
APOIO
CNPq
196
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-24 EM UMA LINHAGEM CELULAR DE CÂNCER DE BOCA
ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS.
Italo Alves Santos1; Gabriella Lombardi de Almeida Sales2; Suzanne Pinheiro Vieira2; Elizabeth Andrade Noé da
Silva2; Carlos Arthur Cardoso Almeida3.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia - FOUFAL. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.
Maceió, AL. Brasil.; (2)Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças
Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia
- ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)Professor de Citologia Clínica e
Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia
Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal
de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.
RESUMO
Introdução. Alguns tipos de câncer merecem especial atenção por sua agressividade e pelo impacto de suas
consequências na vida social dos pacientes. O câncer de boca é um dos mais traumáticos por suas consequências
após os tratamentos. Além disso, a imagem corporal também é uma causa de estresse psicológico, já que o
desfiguramento pós-cirúrgico dificilmente pode ser disfarçado. Estilo de vida e exposição a radiações e a agentes
químicos e físicos funcionam como fatores de expressão do câncer associados a fatores genéticos. O microRNA24, funcionam como reguladores gênicos, podendo modificar o comportamento da célula. Os microRNAs, são
pequenas moléculas com reconhecida ação sobre diversos tipos de câncer, podendo estimular o desenvolvimento
do tumor ou funcionar como supressores tumorais. Porém, muito pouco ainda se conhece sobre a expressão e
função desta molécula no câncer de boca quando submetido à ação de drogas antitumorais. Objetivo. Avaliar a
expressão do miR-24 em uma linhagem celular de carcinoma de células escamosas oral, H413 (ECACC
06092007), antes e depois de tratada com as drogas Citarabina, Daunorrubicina e Cisplatina. Materiais e métodos.
As células foram mantidas a 37°C em estufa de CO2 e repassadas a cada 72 h para sua manutenção. Inicialmente
foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas nas linhagens selecionadas, procedendo-se à determinação da
IC50 de cada uma isoladamente e combinadas entre si (Daunorrubicina + Citarabina; Daunorrubicina + Cisplatina;
Citarabina + Cisplatina; Daunorrubicina + Citarabina + Cisplatina). A extração do RNA foi feita em sistema
automatizado - Maxwell ® Promega, usando os kits e seguindo o protocolo do fabricante. Por fim, foi avaliado o
nível de expressão do miR-24 por qRT-PCR nas amostras antes e após tratamento com as drogas. Resultados. O
miR-24 se mostrou aumentado nas linhagens tratadas com drogas isoladamente e combinadas em relação aos
controles. Nas células tratadas somente com cisplatina, porém, o miR-24 teve um nível de expressão bem maior.
Conclusões. Os altos níveis de expressão do miR-24 nas 3 linhagens após o tratamento com daunorrubicina,
citarabina e cisplatina, isoladas e combinadas, sugere um mecanismo de indução de quimiorresistência, sendo que
este efeito foi maior nas células tratadas somente com cisplatina. A queda dos níveis de expressão do miR-24 na
associação da cisplatina com as outras drogas parece funcionar como um inibidor do efeito de quimiorresistência
do miR-24.
APOIO
CNPq
197
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIRNA-22 EM UMA LINHAGEM CELULAR DE CÂNCER DE BOCA
Orlando Ronaldy da Silva Santos1; Gabriella Lombardi de Almeida Sales2; Italo Alves Santos3; Suzanne Pinheiro
Vieira4; Elizabeth Andrade Noé da Silva4; Carlos Arthur Cardoso Almeida5.
E-mail: [email protected]
(1)
1- Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de
Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (2)2- Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de
Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola
de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)3Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de
Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL.
Brasil.; (4)Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e
Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR.
Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (5)4- Professor de Citologia Clínica e Hematologia
Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso
de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas UFAL. Maceió, AL. Brasil.
RESUMO
INTRODUÇÃO: MicroRNAs (miRNAs) são sequências curtas de nucleotídeos que participam da regulação de
processos biológicos fundamentais, tais como diferenciação e apoptose, tendo, dessa forma, importante
participação em diversas patologias, incluindo o Câncer. O câncer de boca é um dos tipos de câncer mais
prevalentes em todo o mundo e alguns estudos têm investigado o papel dos miRNAs na fisiopatologia desta
doença; porém, as informações ainda são escassas e este mecanismo permanece pouco esclarecido. Outro
mecanismo associado aos miRNAs é a indução de quimioresistência. Quimioresistência é o processo no qual as
drogas usadas no tratamento do câncer perdem sua efetividade, com as células transformadas adquirindo
resistência às mesmas, tornando o tratamento ineficiente. OBJETIVO: Avaliar a expressão do miRNA-22 em uma
linhagem celular de câncer de boca.MATERIAL E MÉTODOS: Neste estudo foi usado a linhagem H413. As
culturas foram mantidas a 37°C em estufa de CO2 e repassadas a cada 72h para manutenção das mesmas.
Inicialmente foi testada a estabilidade e eficácia das drogas (Daunorrubicina, Citarabina e Cisplatina) na linhagem
selecionada, procedendo-se à determinação da IC50 de cada uma e de combinações delas. A extração do RNA foi
feita em sistema automatizado - Maxwell® Promega, usando os kits e seguindo protocolo do fabricante. Por fim, os
níveis de expressão do miRNA-22 foram avaliados por qRT-PCR nas amostras tratadas e nos controles (amostras
não tratadas). O GAPDH foi usado como gene constitutivo. RESULTADOS: A expressão do miRNA-22 se
mostrou alterada (p<0,05) em todas as amostras tratadas. A cisplatina apresentou o maior nível de expressão
dentre as drogas isoladas (3,4 fold); controle (1,7 fold); daunorrubicina (2,0 fold) e citarabina (1.88 fold). As
amostras tratadas com as 3 drogas combinadas também apresentaram um alto nível de expressão (3,68 fold),
superior ao da cisplatina. CONCLUSÕES: O miRNA-22 encontra-se naturalmente expresso nas células H413.
Após o tratamento com as drogas, houve um aumento nos níveis de expressão do miRNA-22, principalmente nas
células tratadas com cisplatina, que está entre as drogas de primeira escolha para o tratamento do câncer de boca, e
com as 3 drogas combinadas. Os resultados desse trabalho sugerem a participação deste miRNA em um
mecanismo de quimioresistência nas células da linhagem em estudo, contudo, mais estudos serão necessários para
elucidar este mecanismo.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq
198
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DA FREQUÊNCIA DO POLIMORFISMO DO GENE MTRR EM AMOSTRAS DE
CARCINOMAS DUCTAL INVASIVO DA MAMA
Verena Silva Santos1; Aurélio Anderson Lopes Saraiva2; Sandra Mara Bispo Sousa2; Claudia Leal Macedo2;
Patrícia Santos Pereira Lima2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Campus Vitória da Conquista - UESB; Universidade de São Paulo,
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP-FMRP; (2)Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Campus
Vitória da Conquista - UESB
RESUMO
O carcinoma de mama é o segundo tipo de câncer mais frequente no mundo, sendo o que mais afeta as mulheres.
De origem multifatorial, compreende fatores externos ou ambientais e fatores internos, sejam hormonais ou
genéticos. Mecanismos epigenéticos como a metilação do DNA também são importantes no estudo do câncer. O
padrão normal de metilação do DNA pode ser modificado devido a alterações em vias essenciais a este processo,
como a via do folato, essencial aos processos de síntese e metilação do DNA. Dentre as enzimas pertencentes a
esta via, a metionina sintase redutase (MTRR) é umas das responsáveis pela biossíntese da metionina, sendo esta
precursora da molécula doadora universal do grupo metil. O gene MTRR possui o polimorfismo funcional A66G,
no qual acarreta diminuição da atividade enzimática da MTRR. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi verificar
o polimorfismo A66G do gene MTRR em amostras de carcinoma ductal invasivo da mama em mulheres do
Sudoeste da Bahia, avaliando as frequências alélicas e genotípicas do polimorfismo, correlacionando-os com o
câncer de mama e com os fatores clínicos e histopatológicos como idade das pacientes, grau histológico, tamanho
tumoral e comprometimento linfonodal. Foram avaliadas 62 amostras pela técnica de PCR-RFLP. As frequências
alélicas do polimorfismo do gene MTRR foram calculadas pelo software GenePop 4.2, verificando a associação
dos alelos e genótipos do polimorfismo com dados clínicos e histopatológicos. A frequência do alelo A na
população foi de 0,31 e do alelo G foi 0,69. As frequências genotípicas AA, AG e GG foram respectivamente
0,09, 0,43 e 0,47. As amostras estudadas não se encontram em aderência ao Equilíbrio de Hardy-Weinberg
(p=0,03), no entanto não houve associação do polimorfismo A66G com os fatores estudados. Assim sendo, o
desvio relacionado ao EHW pode ser explicado pelo excesso de heterozigotos existentes no grupo de amostras
(p=0,02), consequência do tamanho amostral (n=62). Diante dos resultados obtidos, faz-se necessário ampliar o
número amostral, avaliar este polimorfismo com outros polimorfismos de genes da via do folato, verificar a
associação do polimorfismo A66G com a dieta do folato e nível de homocisteína sanguíneo e realizar um estudo
caso/controle, contribuindo assim para um maior entendimento acerca dos polimorfismos da via do folato com o
carcinoma de mama.
APOIO
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia. Campus Vitória da Conquista - UESB Fundação de Amparo à
Pesquisa do Estado da Bahia - FAPESB
199
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DE ASSOCIAÇÃO DO POLIMORFISMO SDF-1 3'A COM A SUSCEPTIBILIDADE À
INFECÇÃO PELO HIV-1: UMA META-ANÁLISE GLOBAL
José Leandro Andrade Santos1; Wlisses Henrique Veloso Carvalho Silva1; Matheus da Silva Mesquita2; Antonio
Victor Campos Coelho1; Rafael Lima Guimarães1.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Genética (PPGG), Departamento de Genética, CB - UFPE, Recife - Brasil.;
(2)
Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami/LIKA - UFPE, Recife - Brasil.
RESUMO
Estima-se que cerca de 37 milhões de pessoas estejam infectadas pelo HIV-1, o agente etiológico da AIDS. O
ciclo do HIV-1 é dependente de receptores para a entrada na célula, os quais fisiologicamente desempenham
importantes funções na resposta imunológica por serem sítios de ligação de quimiocinas. Assim, estas moléculas
atuam como antagonistas do HIV-1. Entre esses receptores, destaca-se o CXCR4, que além de ser correceptor do
HIV-1 apresenta como molécula de ligação a quimiocina SDF-1, desempenhando inúmeras funções
imunomodulatórias e hematopoiéticas. Um polimorfismo no gene SDF-1 tem sido alvo de estudos, o rs1801157
(G>A, também chamado de SDF-1 3'A), localizado na região 3'-UTR, torna seu RNAm mais estável, aumentando
a síntese proteica e sua interação com o receptor. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi realizar uma metaanálise para avaliar se há associação do polimorfismo SDF-1 3'A com a susceptibilidade à infecção pelo HIV-1. A
pesquisa consistiu na busca por estudos de associação genética acerca da suscetibilidade ao HIV-1 envolvendo o
polimorfismo SDF-1 3'A publicados entre 1996 e 2016, indexados nos bancos de dados PubMed, Scielo, SNPedia
e Google Scholar, que apresentassem contagens alélicas nos grupos caso (indivíduos vivendo com o HIV-1) e
grupos controle (indivíduos não infectados pelo HIV-1). Foram extraídos dos artigos nome do primeiro autor, ano
de publicação, localização das populações estudadas e a contagem de genótipos e alelos. A meta-análise foi
realizada através do programa R. A partir dos critérios de inclusão, foram selecionados 28 estudos, de 15 países
diferentes distribuídos ao longo dos continentes, englobando um total de 11.682 indivíduos (6.258 casos e 5.424
controles). As frequências observadas para o polimorfismo nos grupos caso e controle foram de 22,9% e 24,7%,
respectivamente (OR=1,10; IC-95%=1,03-1,17; p=0,002). A heterogeneidade observada no estudo foi considerada
alta (I2=72,5%, Q=0,0918 p=<0,0001), indicando que os tamanhos amostrais das populações em estudo variaram
significativamente. A meta-análise não mostrou associação significativa entre a presença do polimorfismo SDF13'A com a susceptibilidade à infecção pelo HIV-1 (OR=1,00; IC de 95%=0,87-1,15). Estes resultados sugerem
que, sozinho, o polimorfismo SDF-1 3'A não exerce influência significativa na susceptibilidade à infecção pelo
HIV-1. Assim, mais estudos necessitam ser realizados para que os mecanismos deste fenômeno venham a ser
elucidados.
200
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DO PERFIL DE EXPRESSÃO GÊNICA DA SMAD7 NO DESENVOLVIMENTO DE
ÚLCERAS MALEOLARES EM PACIENTES COM ANEMIA FALCIFORME
Diego Arruda Falcão1; Igor de Farias Domingos1; Diego Antônio Pereira Martins1; Luana Priscilla Moraes
Laranjeira2; Thais Helena Chaves Batista2; Gabriela da Silva Arcanjo2; Jaqueline Cabral Peres3; Aderson da
Silva Araújo3; Antônio Roberto Lucena Araújo1; Marcos André Cavalcanti Bezerra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética/ UFPE- Universidade Federal de Pernambuco; (2)UFPE- Universidade Federal de
Pernambuco; (3)Fundação HEMOPE
RESUMO
As úlceras de membros inferiores são uma das manifestações clínicas mais comuns na anemia falciforme (AF),
uma doença monogênica, de caráter multifatorial, e com uma grande diversidade clínica entre os pacientes. Estão
presentes entre 8% a 10% dos pacientes homozigotos, atingindo percentual maior que 50% em pacientes que
residem em áreas tropicais. Essas úlceras ocorrem devido a vaso-oclusão, hipóxia tecidual, hemólise e fatores
genéticos, apresentando cicatrização lenta e alta taxa de recorrência, além de grande susceptibilidade à infecção.
Estudos recentes, têm evidenciado que seu desenvolvimento pode estar relacionado com diversos genes da via do
TGFβ, que parece exercer um papel fundamental na cicatrização destas lesões, entre eles, o gene da SMAD7. A
SMAD7 faz parte da via inibitória da via do TGFβ, e sua expressão aumentada pode estar relacionada com a não
ativação de genes alvo essenciais no processo de cicatrização e reepitelização. Dessa forma, o objetivo do estudo
foi investigar o perfil da expressão da SMAD7, e o seu papel no desenvolvimento da úlcera de membros inferiores
em pacientes com AF. Foram analisados 36 pacientes com AF cadastrados na Fundação HEMOPE, coletadas
amostras de sangue periférico e realizada extração de RNA. Destes, 18 pacientes estavam com a úlcera ativa no
momento da coleta, e não apresentavam nenhuma das outras manifestações clínicas da AF. Os outros 18 pacientes
com AF, não tinham nenhuma das principais manifestações clínicas da AF. Foram utilizados ainda, 12 pacientes
controle com HbAA. A análise da expressão do gene da SMAD7 foi realizada por qPCR através de quantificação
relativa, utilizando o gene constitutivo GAPDH, pelo método de 2-ΔΔCt. Foi visto que os pacientes com úlceras de
membros inferiores apresentam expressão de SMAD7 maior que os pacientes com AF sem manifestações clínicas
(P=0.036, FC=4,0), que por sua vez, apresentam expressão de SMAD7 maior do que os pacientes controle com
HbAA (p=0,0051, HbAA vs HbSS FC=2,5, Úlcera vs Sem manifestação FC=4,0). Diante dos resultados obtidos, a
expressão aumentada da SMAD7 parece estar relacionada com o desenvolvimento de úlceras de membros
inferiores nos pacientes com AF, confirmando o papel importante da via do TGFβ no desenvolvimento e
manutenção dessas lesões.
201
Genética Humana e Médica
ANÁLISE DOS CASOS DE EPIDERMÓLISE BOLHOSA HEREDITÁRIA NA REGIÃO SUDOESTE DA
BAHIA, UM ENFOQUE PARA O ACONSELHAMENTO GENÉTICO.
Thiago Lima Melo1; João Victor Saback1; Gabriela Santos1; Jader Mesquita1; Alessandra Nunes1; Patricia
Santos Pereira Lima1; Débora Gusmão Melo2; Maria Esther Ventim Oliveira Prates1; Sandra Mara Bispo Sousa1.
E-mail: [email protected]
(1)
DCN - UESB; (2)DM - UFSCAR
RESUMO
As epidermólises bolhosas hereditárias (EBH) se caracterizam por formar um grupo de doenças em que bolhas
surgem sobre a pele, podendo afetar também a mucosa. Mutações no DNA que acometem os queratinócitos são as
principais causas de EB hereditárias. Atualmente as EBH são classificadas em quatro grupos: simples, juncional,
distrófica e a síndrome de Kindler. É considerada uma doença genética rara, afetando 19 em um milhão de
nascidos vivos, mas com uma alta frequência na região sudoeste da Bahia. Com o objetivo de levantar e analisar
os casos de EBH na região sudoeste da Bahia e o tipo de epidermólise bolhosa com base nos dados clínicos, foram
obtidos os dados das famílias com aplicação de questionários sócio-demográficos e também com as informações
clínicas dos prontuários para a elaboração dos heredogramas das famílias. Até o presente momento, foram
analisadas 15 pacientes distribuídos em 15 famílias, sendo que, deste total 73% são meninos e 27% meninas, com
faixa etária entre 02 meses e 25 anos. Ao todo 53,3% são brancos, 33,3% mulato claro e 13,3% são pardos. Das 15
famílias analisadas, 66% apresentam outros casos de EBH e 73% são consanguíneas. Sendo esse último um dos
fatores que explicariam o grande número de casos nessa região do estado da Bahia. De acordo com as análises
iniciais dos heredogramas das famílias e com base nos dados clínicos e anatomopatológicos, o subtipo que ocorre
na região, na maioria dos casos é o distrófico recessivo. Esses pacientes vêm sendo acompanhados por uma equipe
multidisciplinar para garantir uma melhoria nas suas qualidades de vida, numa perspectiva para o aconselhamento
genético junto às famílias.
APOIO
UESB, FAPESB
202
Genética Humana e Médica
ANÁLISES GENÉTICAS ESPECÍFICAS PARA PACIENTES COM SUSPEITA CLÍNICA DE
DISTÚRBIOS GENÉTICOS NO ESTADO DO MARANHÃO
Silma Regina Ferreira Pereira1; Antonio Augusto Lima Teixeira Júnior1; Raissa Lacerda Pontes1; Vanessa
Ribeiro Moreira1; Maria Santana Pereira Viegas1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Maranhão
RESUMO
Introdução: a realização de exames genéticos e a correta identificação de alterações cromossômicas e moleculares
têm sido importantes ferramentas diagnósticas na prática médica, permitindo uma melhor conduta terapêutica.
Objetivo: o presente trabalho é um estudo retrospectivo dos exames citogenéticos e moleculares prestados pelo
Serviço de Genética Humana do Laboratório de Genética e Biologia Molecular (LabGeM) da Universidade
Federal do Maranhão, no período de 2002 a setembro de 2016. Metodologia: as análises citogenéticas foram
realizadas em cultura temporária de linfócitos de sangue periférico, pela técnica de bandamento GTG e as análises
moleculares e as análises moleculares foram conduzidas em pacientes com distúrbios da diferenciação sexual,
utilizando-se primers para sequências Y-específicas (genes SRY, DAZ e AMGY), além de β-Globina como
controle positivo reacional. Foram atendidos 583 pacientes, dos quais 385 realizaram exame citogenético, 81
pacientes realizaram análise molecular para sequências Y específicas e em 165 pacientes foi feita extração de
DNA para realização de outros exames moleculares específicos de acordo com as suspeitas clínicas. Resultados:
aas análises citogenéticas, 105 casos (27,2%) apresentavam alterações numéricas, 26 (6,7%) apresentavam
alterações estruturais e 65,9% cariótipo normal. Dentre as alterações numéricas, 47,6% dos casos apresentaram
cariótipo compatível com Síndrome de Turner, dos quais 54% com cariótipo 45,X, 42% eram mosaicos e 4%
outras alterações. Das alterações estruturais, as mais frequentes foram translocação (34,6%) e marcador (34,6%),
seguidas por deleção (15,3%), isocromossomo (7,7%) e cromossomo em anel (7,7%). Das análises moleculares,
16 pacientes (18,5 %) possuíam sexo cromossômico incompatível com o sexo de registro civil, dos quais 11
possuíam sexo de criação feminino, mas revelaram presença de gene SRY, e ausência de SRY em 4 pacientes com
sexo de criação masculino. Conclusão: os resultados deste projeto mostram a necessidade da assistência
laboratorial aos portadores de doenças genéticas para o diagnóstico etiológico, monitoração clínica e tratamento
adequado desses pacientes.
APOIO
Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão ? FAPEMA.
203
Genética Humana e Médica
APOBEC3G AND CUL5 POLYMORPHISMS : IMPLICATIONS WITH HIV-1 INFECTION AND
ANTIRETROVIRAL THERAPY IN A BRASILIAN POPULATION.
Jeanne Lucy Freitas Bastos1; Antônio Victor Campos Coelho2; Ronald Rodrigues Moura2; Luiz Claudio Arraes3;
Lucas André Cavacanti Brandão4; Rafael Lima Guimarães2; Sergio Crovella2; Ronaldo Celerino da Silva2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife,
Brazil; (2)Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of
Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil; (3)nstitute of
Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil; (4)Department of Pathology,
Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA),
Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil
RESUMO
Apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide like 3G (APOBEC3G) cause hypermutation of
proviral DNA leading to degradation or replication-incompetent HIV-1. The HIV-1 viral infectivity factor (Vif)
suppresses APOBEC3G activity through the Cullin 5 complex. APOBEC3G and CUL5 polymorphisms have been
involved with modulation of susceptibility to HIV-1 infection. In our study we evaluated the distribution of
selected SNPs in APOBEC3G (rs3736685, rs2294367) and CUL5 (rs7117111, rs7103534, rs11212495) genes,
among 264 HIV-1 infected (HIV-1+) and 259 unexposed uninfected individuals from Northeast Brazil, looking for
a possible association with susceptibility to HIV-1 infection, viral load, CD4+ T cell count and success of
antiretroviral therapy. We observed that the rs11212495 CUL5 G allele and the CUL5 rs7103534-rs7117111 CG
haplotype were more frequent among unexposed uninfected individuals than in HIV-1 infected individuals,
suggesting an association with a lower susceptibility to HIV-1 infection. Moreover, the APOBEC3G rs2294367
C/G genotype correlated with delayed viral load suppression. Being aware that our findings showed some
differences with those reported in the literature, confirming the heterogeneity of the associations described,
possibly depending upon the different ethnicities analyzed and the low number of individuals enrolled in all
studies, and also considering that our HIV-infection susceptibility control group was constituted by unexposed
uninfected individuals instead of exposed uninfected individuals (individuals quite rare and difficult to be
enrolled), our findings report novel genetic variants associated with susceptibility to HIV-1 (CUL5 rs7103534,
rs7117111) and partial viral load control (APOBEC3G rs2294367). Replica studies performed on higher number
of subjects and subsequent validation of the functional role of CUL5 and APOBEC3G genetic variants associated
with HIV-1 infection and viral replication are envisaged to confirm our and the literature findings.
APOIO
CNPq, CAPES and FACEPE
204
Genética Humana e Médica
ASSOCIAÇÃO DA HEMOGLOBINA S COM A HEMOGLOBINA N-BALTIMORE
Thais Helena Chaves Batista1; Rodrigo Marcionilo de Santana1; Gabriela da Silva Arcanjo1; Gabriel Maia dos
Santos1; Jessica Maria Florencio de Oliveira1; Diego Antônio Pereira Martins1; Aderson da Silva Araújo2; Ana
Claúdia dos Anjos2; Jaqueline Cabral Peres2; Antonio Roberto Lucena de Araujo1; Marcos André Cavalcanti
Bezerra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Núcleo de Hematologia Clínica e Laboratorial - UFPE; (2)Fundação HEMOPE
RESUMO
Introdução: A Hemoglobina (Hb) S é uma variante da globina β que, na posição 6 da cadeia β, tem o aminoácido
ácido glutâmico substituído pela valina. A Hb N-Baltimore é uma variante estrutural da Hb que não confere
sintomatologia clínica em heterozigose, sendo os portadores assintomáticos. Resulta de uma mutação no códon 95
da globina β, ocorrendo substituição do aminoácido lisina por ácido glutâmico. Objetivo: Tendo em vista que na
literatura existem poucos relatos da associação dessas variantes estruturais da Hb, o presente estudo teve como
objetivo estudar a interação da Hb S com a Hb N-Baltimore em uma paciente procedente do hospital HEMOPE.
Material e Métodos: O portador destas variantes é uma paciente de 1 ano, do sexo feminino, procedente do
programa de triagem neonatal para hemoglobinopatias, e encaminhado ao hospital HEMOPE. Foi realizado o
hemograma, a eletroforese alcalina de hemoglobinas para verificar a separação das cadeias globínicas,
quantificação das hemoglobinas por meio da cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e sequenciamento
do gene da globina β. Resultados e Discussão: O hemograma da paciente demonstrou microcitose e normocromia.
A eletroforese alcalina de hemoglobinas revelou migração de uma banda mais lenta que Hb A (sendo S-likeconfirmada por teste de solubilidade) e uma banda mais rápida que a Hb A, estas foram quantificadas por HPLC
de troca catiônica (56,5 % - Hb F, 28,8% - Hb X, 13,0% - Hb S e 1,7% - Hb A2). O sequenciamento do gene da
globina β revelou mutação no códon 95 (AAG ? GAG), em heterozigose, caracterizando a Hb N-Baltimore, bem
como mutação no códon 6 (GAG ? GTG), relativo à Hb S. O estudo molecular familiar revelou a presença da Hb
S em heterozigose no genitor e, Hb N-Baltimore, também em heterozigose, na genitora. Observou-se também que
o portador destas mutações associadas, aparentemente não apresenta sintomas clínicos característicos de doença
falciforme, sendo, portanto, um quadro oligoassintomático. Conclusão: Na literatura, existem escassos estudos a
respeito dessa interação e este é o primeiro relato no Brasil. Contudo, as possíveis interações intermoleculares
entre as variantes, deverão ser estudadas do ponto de vista de dinâmica molecular e funcional para melhor
compreensão desta associação.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico- CNPq
205
Genética Humana e Médica
ASSOCIAÇÃO DE POLIMORFISMOS NO GENE MBL2 COM OSTEONECROSE EM PACIENTES
COM ANEMIA FALCIFORME
Isabela Cristina Cordeiro Farias1; Gabriela da Silva Arcanjo2; Diego Arruda Falcão2; Luana Priscilla
Laranjeira Prado2; Mariana Barros Souto de Souza2; Kleyton Palmeira do Ó1; Gabriel Maia dos Santos2;
Taciana Furtado de Mendonça Belmont1; Luydson Richardson Silva Vasconcelos3; Patricia Muniz Mendes Freire
de Moura1; Maria do Socorro de Mendonça Cavalcanti1; Marcos André Cavalcanti Bezerra2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade de Pernambuco; (2)Universidade Federal de Pernambuco; (3)Universidade de
Pernambuco/FIOCRUZ
RESUMO
Introdução: A anemia falciforme (AF) é caracterizada por manifestações clínicas graves como vaso-oclusão, AVC
e osteonecrose (NACF). O gene MBL2, que codifica a lectina ligadora de manose (MBL), tem sido associado com
doenças vasculares. Objetivo: Determinar a frequência dos polimorfismos da região promotora -221 e -550 e do
éxon 1 do gene MBL2 em pacientes com AF e verificar a sua associação com a NACF. Materiais e Métodos: No
éxon 1 do MBL2, existem três mutações de ponto nos códons 52, 54 e 57 e estas variantes alélicas são designadas
coletivamente de "O". A genotipagem dos polimorfismos do éxon 1 e da região promotora do MBL2 foram
realizados por PCR em tempo real utilizando Syber Green ® (Melting Temperature Assay) e o sistema Taqman®,
respectivamente. Foram selecionados 171 pacientes com AF do HEMOPE. Destes, 73 com evidências de NACF,
formando o grupo caso, e 98 sem evidências de NACF, sendo o grupo controle. Resultados: A frequência dos
genótipos relacionados com alta produção de MBL foi de 60% (n=88) no grupo caso e de 57% (n=111) no grupo
controle. Nos genótipos relacionados à intermediária produção de MBL a frequência foi 13% (n=19) nos casos e,
24% (n=47) nos controles. A frequência dos genótipos relacionados com baixa produção de MBL foi de 27%
(n=39) nos casos e de 19% (n=38) nos controles. A associação dos genótipos de baixa com os de intermediária
produção de MBL entre os casos e controles apresentou diferença significativa (p=0,013). A frequência dos
haplótipos relacionados à alta produção de MBL (HYA/HYA, HYA/LYA, LYA/LYA) foi 33% (n=24) nos casos e
de 33% (n=32) nos controles. Nos haplótipos relacionados à intermediária produção de MBL (HYA/ HYO,
HYA/LXA, HYA/LYO, LXA/LXA, LYA/LXA, LYA/LYO) nos casos e controles foi de 55% (n=40) e 53%
(n=52), respectivamente. A frequência dos haplótipos relacionados à baixa produção de MBL (HYO/HYO
HYO/LXA, HYO/LYO, LXA/LYO, LYO/LYO) foi 12% (n=9) nos casos e de 14% (n=14) nos controles. A
associação entre os grupos estudados com os haplótipos relacionados à baixa e intermediária/alta produção de
MBL não mostrou diferença estatística (p=0,88). Quando analisados os polimorfismos, foi encontrada associação
apenas com a região promotora -221, com uma maior frequência do alelo "X" no grupo controle (p=0,0162).
Conclusão: Este estudo foi o primeiro trabalho a avaliar o gene MBL2 em pacientes com AF que desenvolveram
NACF, e estudos futuros são necessários para elucidar o real papel deste gene na AF.
APOIO
FACEPE e CNPq
206
Genética Humana e Médica
ASSOCIAÇÃO DO POLIMORFISMO IVS-14-1046 C>T NO GENE ANXA2 COM O
DESENVOLVIMENTO DO ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL EM PACIENTES PEDIÁTRICOS
COM ANEMIA FALCIFORME
Rayssa Leal Borges de Medeiros1; Diego Antonio Pereira Martins1; Betânia Lucena Hatzlhofer1; Igor Farias
Domingos1; Renata Cunha Azevedo2; Ana Claudia Mendonça dos Anjos2; Jaqueline Cabral Peres2; Aderson da
Silva Araujo2; Antonio Roberto Lucena Araujo1; Marcos André Cavalcanti Bezerra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco; (2)Fundação de Hematologia e Hemoterapia de
Pernambuco - HEMOPE
RESUMO
INTRODUÇÃO: Diante do acometimento vascular no desenvolvimento de acidente vascular cerebral (AVC)
principalmente em crianças com anemia falciforme (AF), é possível que alterações na via fibrinolítica possam
influenciar na oclusão dos vasos intracranianos. Estudos recentes demostraram que camundongos nocautes para o
gene anexina A2 (ANXA2) apresentam acúmulo generalizado de fibrina no interior dos vasos, com consequente
estenose. OBJETIVO: Avaliar a frequência do polimorfismo IVS-14-1046 C>T (rs7163836) no gene ANXA2 e
associar esses achados com a frequência de AVC em pacientes pediátricos com AF. CASUÍSTICA e
METODOLOGIA: Entre janeiro de 2003 a julho de 2016, 196 pacientes acompanhados pela Fundação HEMOPE
foram incluídos. Com base na velocidade do fluxo sanguíneo cerebral (Doppler transcraniano, DTC), pacientes
foram agrupados em: DTC normal (137 pacientes; 70%), DTC condicionante (39 pacientes; 20%) e DTC alto
risco (20 pacientes; 10%). Utilizando a metodologia TaqMan®, a genotipagem do polimorfismo IVS-14-1046
C>T do gene ANXA2 (MAF: 47%) foi possível em 182 pacientes (93%). RESULTADOS: Com um seguimento
médio de 12 anos, a taxa de AVC foi de 4% (oito pacientes). Cinquenta pacientes (27%) apresentaram o genótipo
homozigoto selvagem (CC), seguido por 97 pacientes (53%) com o genótipo heterozigoto (CT) e 35 pacientes
(19%) com o genótipo homozigoto variante (TT). A frequência de AVC foi significativamente maior nos pacientes
com genótipo TT (14%) (P=0,005). Além disso, pacientes com esse genótipo apresentaram um menor tempo para
o desenvolvimento de AVC (10,9 anos, 95%IC: 10-11,8 anos) comparado com pacientes dos grupos CT (12,8
anos, 95%IC: 12,5-13 anos) e CC (12,5 anos, 95%IC: 12-13,1 anos) (P=0,016). Não houve associação entre a
velocidade do fluxo sanguíneo e o polimorfismo IVS-14-1046 C>T (P=0,308). Contudo, quando analisados
separadamente, pacientes alocados no grupo DTC normal com o genótipo homozigoto variante TT apresentaram
uma maior frequência de AVC (15%; P=0,006). O polimorfismo IVS-14-1046 C>T não teve impacto na
frequência de AVC para os pacientes dos grupos DTC condicionante (P=0,096) e DTC alto risco (P=0,991).
CONCLUSÃO: A genótipo homozigoto variante TT do gene ANXA2 está associado com o desenvolvimento de
AVC nos pacientes com AF.
APOIO
CNPq
207
Genética Humana e Médica
ASSOCIAÇÃO INÉDITA DO SNP RS2125739 NO GENE ABCC10 A EFEITOS ADVERSOS
NEUROPSIQUIÁTRICOS EM PACIENTES HIV POSITIVOS SUBMETIDOS À TERAPIA COM
EFAVIRENZ NO ESTUDO DE COORTE BRASILEIRO.
Msc. Josué Jeyzon de L. S Valeriano1; Msc. Antônio V. C. Coelho1; Msc. Ronald R. de Moura1; Phd. Luiz Cláudio
A. de Alencar2; Phd. Lucas A. C. Brandão3; Phd. Sérgio Crovella1; Phd. Rafael L. Guimarães1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami
(LIKA) ; (2)Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP). Laboratório de Imunopatologia
Keizo Asami (LIKA); (3)Departamento de Patologia, Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório de
Imunopatologia Keizo Asami (LIKA)
RESUMO
A Terapia Antirretroviral Altamente Ativa (HAART) foi uma revolução que mudou drasticamente a evolução da
infecção pelo HIV/AIDS, transformando uma doença fatal em uma doença crônica. Efavirenz é um antirretroviral
muito eficiente, mundialmente prescrito, presente no tratamento de primeira linha HAART, mas que apresenta
uma alta frequência de efeitos neuropsiquiátricos que afetam a adesão ao tratamento, prejudicam a saúde e a
qualidade de vida dos pacientes. Neste sentido, este estudo visa identificar polimorfismos genéticos associados à
ocorrência de efeitos neuropsiquiátricos relatados no tratamento com Efavirenz em doses padrão. Através da
análise retrospectiva dos prontuários dos 162 pacientes HIV positivos que utilizavam Efavirenz, 82 (50,6%)
apresentaram efeitos adversos neuropsiquiátricos relacionados, dentre os quais: tonturas, cefaleia, insônia e
depressão se mostraram os mais frequentes. Nesta coorte, o uso do Efavirenz foi associado ao risco de
aproximadamente nove vezes para a ocorrência de efeitos adversos neuropsiquiátricos (OR: 8,9; p-valor <0,0001).
A análise de sobrevivência demonstrou que o uso de Zidovudina combinado ao Efavirenz, ao invés de Tenofovir
(HR: 2,7; p-valor: 0,04), e o sexo feminino (HR: 3,5; p-valor: 0,05) aumentam o risco de tonturas e depressão,
respectivamente, ao longo do tempo. Entretanto não houve diferenças significativas no risco de ocorrência de
tonturas entre o uso de Zidovudina ou Tenofovir, sem a presença do Efavirenz (OR: 1,9; p-valor: 0,6). Dez
polimorfismos em sete genes (CYP2B6, ABCB1, ABCC1, ABCC2, ABCC10, NR1I2 e NR1I3) foram analisados.
Apenas o polimorfismo no gene ABCC10 (rs2125739), alelo C, foi associado à ocorrência de efeitos adversos
neuropsiquiátricos no tratamento com Efavirenz (OR: 2,6; p-valor: 0,03). Análises por regressão logística ajustada
para variáveis demográficas, clínicas e genéticas, esta última relacionada ao aumento nas concentrações
plasmáticas do Efavirenz, mostraram que os genótipos CT ou CC no rs2125739 estavam ainda mais associados
com um risco elevado (OR: 5,1; p-valor: 0,007). Os resultados poderão contribuir para minimizar os riscos de
ocorrência de efeitos neuropsiquiátricos na terapia com Efavirenz, mantendo sua eficácia, identificando pacientes
susceptíveis e auxiliando na escolha da HAART combinada.
APOIO
CNPq, CAPES, FACEPE
208
Genética Humana e Médica
ASSOCIATION BETWEEN INTERLEUKIN-6 G-174C POLYMORPHISM AND STROKE
DEVELOPMENT IN SICKLE CELL ANEMIA
Igor de Farias Domingos1; Diego Antonio Pereira Martins1; Juan Luiz Coelho da Silva1; Rayssa Leal Borges de
Medeiros1; Diego Arruda Falcão1; Renata Cunha Azevedo2; Ana Claudia Mendonça dos Anjos2; Taciana Furtado
Mendonça Belmont3; Maria do Socorro Mendonça Cavalcanti3; Aderson da Silva Araujo2; Antonio Roberto
Lucena de Araujo1; Marcos André Cavalcanti Bezerra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics, Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil; (2)Department of Internal Medicine,
Hematology and Hemotherapy Foundation of Pernambuco, Recife, Brazil; (3)Department of Medical Sciences,
University of Pernambuco, Recife, Brazil
RESUMO
There is sufficient evidence in the literature to support the idea that specific genetic variants contribute to the
development of cerebrovascular disease in sickle cell anemia (SCA). With this in mind, several genotypephenotype association studies have identified promising novel genetic modifiers that are associated with a high
risk of stroke in SCA, albeit without a full understanding of their prognostic significance. Here, our focus was to
deduce the prognostic relevance of IL6 G-174C polymorphism and its association with cerebrovascular disease.
169 patients were followed from birth until December 2015 in a single reference center in northeast Brazil.
Ischemic stroke was defined as a regional loss of cerebral blood flow due to stenotic or occluded cerebral
vasculature, as subsequently confirmed by imaging exams. Genomic DNA from peripheral blood was extracted by
phenol-chloroform extraction. IL6 G-174C (rs1800795) polymorphism was detected by real-time PCR using the
TaqMan assay (Applied Biosystems), according to the manufacturer's instructions. Fisher's exact test or Chisquare test, as appropriate, were used to compare categorical variables, with the Wilcoxon rank-sum test used to
compare continuous variables. Cumulative incidence curves were constructed reflecting time to stroke
development as competing risks, with the Gray test used for comparison of curves. All P-values were two sided
with a significance level of 0.05. The median age of our cohort was 18 years (range: 6-27 years), with 71 males
(42%) and an estimated stroke rate of 14% (23 patients). Seventy-three patients (43%) were older than 18 years.
The entire cohort was fully characterized for the IL6 G-174C polymorphism: 103/169 patients (61%) carried the
IL6 GG genotype, while 60/169 (35%), and 6/169 (4%) presented with the GC and CC genotypes, respectively.
The frequency of stroke was higher in patients with IL6 CC (67%), compared to patients with the GC (17%), or
GG (9%) genotypes (P<0.001). The cumulative probability of stroke was significantly higher for patients with the
IL6 CC genotype (75%), compared to patients with either the IL6 GG (11%), or IL6 GC genotypes (21%),
(P<0.001). Our data suggest that IL6 G-174C may independently predict a higher risk of stroke in patients with
SCA.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq: Grant #483714/2013-5)
209
Genética Humana e Médica
ASSOCIATION OF THE PNPLA3 POLYMORPHISM (RS738409) WITH LIVER FIBROSIS AND
HEPATOCELLULAR CARCINOMA (HCC) IN PATIENTS INFECTED WITH HEPATITIS C (HCV)
João Victor Cordeiro Farias1; Penelopy Rodrigues de Macedo1; Raul Emídio de Lima1; Isabela Cristina Cordeiro
Farias2; Leila Maria Moreira Beltrão Pereira3; Patrícia Muniz Mendes Freire de Moura1; Luydson Richardson
Vasconcelos4.
E-mail: [email protected]
(1)
Instituto de Ciências Biológicas - Universidade de Pernambuco (ICB/UPE); (2)Faculdade de Ciências Médicas Universidade de Pernambuco (FCM/UPE); (3)Instituto do Fígado e Transplantes de Pernambuco (IFP); Faculdade
de Ciências Médicas - Universidade de Pernambuco (FCM/UPE); (4)Instituto do Fígado e Transplantes de
Pernambuco (IFP); Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães (FIOCRUZ-PE)
RESUMO
The hepatitis C virus infection (HCV) is a worldwide issue, affecting more than 170 million people around the
world, representing about 3% of the worldwide population. The chronic infection by the HCV is the most common
cause of chronic liver diseases, such as fibrosis and hepatocellular carcinoma (HCC). The liver fibrosis is a
common hallmark to assess the progression of chronic liver diseases. There are some predisposing genetic factors
for the rapid progression of liver fibrosis. One key genetic factor is considered a determinant factor, which is the
adiponutrin variant (PNPLA3 rs738409; C>G), that leads to a product with lower hydrolase catalytic activity,
therefore could be considered a risk factor for liver chronic diseases. The p.I148M adiponutrin variant of PNPLA3
is already known to be a key genetic factor for non-alcoholic fatty disease (NAFLD) and alcoholic liver disease
(ALD). According to the METAVIR scale, there are four fibrosis levels, which are F0, F1, F2, F3 and F4. Our
patients were classified as mild fibrosis (F0-F2) severe fibrosis (F3-F4), and HCC. In our study, 580 patients were
analyzed, 173 within the mild fibrosis group, 299 with severe fibrosis, and 108 with HCC. The polymorphism was
genotyped by using the PCR real time method (TaqMan). We analyzed the basal and biochemical features of the
patients, such as Body Mass Index, Sex, alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST),
gamma glutamyltranspeptidase (gGT), alpha-fetoprotein (AFP) and platelets counts. The patients with mild
fibrosis were significantly younger when compared to severe fibrosis and HCC (mean age 62.6 ±8.7, 57.8 ±8.9
and 52.4 ±12.2, respectively; p = 0.0212). The male gender was more prevalent in the HCC group (70.3%) and in
the mild fibrosis group (50.8%); however, it was slightly less prevalent in the severe fibrosis group (47.2%).
Bilirubin, AST, gGT and AFP were all higher in the HCC group (p = <0.0001). The association analysis was
performed by dividing the genotypes as with or without the minor allele [C] (CC/CG vs GG). The differences were
statistically significant when comparing mild fibrosis vs severe fibrosis and mild fibrosis vs HCC, respectively: p
= 0.0276 (OR: 2.876; CI: 1.166 - 7.093) and p = 0.0105 (OR: 3.500; CI: 1.272 - 9.627). In conclusion, we
observed that the presence of GG genotype was associated with the risk to develop liver fibrosis and HCC in
patients infected with HCV.
210
Genética Humana e Médica
ASSOCIATION STUDY OF CCR5DELTA32 POLYMORPHISM WITH THE SUSCEPTIBILITY TO
HIV-1 INFECTION IN POPULATIONS FROM STATE OF PERNAMBUCO
Wlisses Henrique Veloso Carvalho Silva1; José Leandro Andrade Santos1; Madson Allan de Luna Aragão2; Heitor
Horlando Sampaio Araújo da Silva2; José Eduardo Adelino Silva2; Antonio Victor Campos Coelho1; Rafael Lima
Guimarães1.
E-mail: [email protected]
(1)
Genetics Post-Graduation Program (PPGG), Department of Genetics, CCB - UFPE, Recife - Brazil;
(2)
Laboratory of Immunopathology Keizo Asami/LIKA - UFPE, Recife - Brazil
RESUMO
Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) is consequence of an infection by the Human Immunodeficiency
Virus type 1 (HIV-1), which destroys CD4+ T cells. To enter the cell, HIV-1 uses CD4 as a receptor and CCR5 as
co-receptor. CCR5 is a chemokine receptor widely expressed by several immune cells that are engaged in
inflammatory responses. Some populations have individuals exhibiting a 32 base-pairs deletion in the exon 3 of
the CCR5 gene (CCR5delta32) that produces a truncated non-functional protein and not expressed on the cell
surface. This polymorphism, also known as rs333, is more commonly found in European populations, but rare in
African, Asian and Amerindian populations; moreover, the CCR5delta32 allele has been described as a
susceptibility modifier of infections and inflammatory diseases, including HIV/AIDS. Therefore, the objective of
this study was to investigate the possible association of CCR5delta32 polymorphism with the susceptibility to
HIV-1 infection. We enrolled 443 (167 males and 276 females) HIV-1 positive patients at treatment (case group)
and 177 (60 males and 177 females) HIV-1 negative, clinically healthy individuals (control group) from
metropolitan region of Recife, Pernambuco, Northeast Brazil and performed CCR5delta32 genotyping. We
observed that among the 620 individuals, 575 did not have the deletion, 45 were heterozygous and no one was
homozygous for the CCR5delta32 allele. The allelic frequencies of CCR5delta32 were 4.5% (control group) and
3.3% (case group). The genotype distribution of CCR5delta32 allele was in conformity to Hardy-Weinberg
equilibrium in both groups. We did not find any association of CCR5delta32 polymorphism with the susceptibility
to
HIV-1 infection
(OR=0.72, 95%CI=0.37-1.42, p=0.31).
These
results
suggested
that
the CCR5delta32 polymorphism does not have significant influence on susceptibility to HIV-1 infection in the
studied population. Brazilian populations show a high genetic diversity because of the elevated degree of
admixture among Europeans, Africans and Amerindians. As a result, it might affect association studies with
the CCR5delta32 allele. This could explain the allele low frequency found in the studied population and,
consequently, the absence of association.
APOIO
CNPq FACEPE
211
Genética Humana e Médica
AVALIAÇÃO DE POLIMORFISMO NO GENE VDR NA SUSCEPTIBILIDADE AO
DESENVOLVIMENTO DE OSTEONECROSE EM PACIENTES COM ANEMIA FALCIFORME
Mariana Barros Souto de Souza1; Diego Antonio Pereira Martins1; Gabriela da Silva Arcanjo1; Thais Helena
Chaves Batista1; Gabriel Maia dos Santos1; Jessica Maria Florencio de Oliveira1; Rodrigo Marcioniolo de
Santana1; Aderson da Silva Araujo2; Antonio Roberto Lucena Araujo1; Marcos Andre Cavalcanti Bezerra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Fundação HEMOPE
RESUMO
Introdução: A osteonecrose é uma complicação crônica e progressiva da anemia falciforme (AF) e ocorre devido a
vaso-oclusão na microcirculação óssea, com infarto das superfícies articulares, especialmente de ossos longos
(fêmur e úmero). Sabendo que a ocorrência da osteonecrose possui uma base multifatorial, variantes polimórficas
de diversos genes, dentre eles o VDR, tem sido bastante estudados. Estudos envolvendo o FokI, encontraram uma
ligação entre este polimorfismo e a densidade mineral óssea de crianças e adolescentes. É possível que as
variações na função do receptor da vitamina D afetem diretamente a absorção do cálcio, resultando em alterações
na formação óssea. Assim o objetivo do nosso trabalho é avaliar se existe associação entre o polimorfismo FokI
com a frequência de desenvolvimento da osteonecrose nos pacientes com AF. Materiais e Métodos: O estudo foi
conduzido por comparação de grupos e as análises foram realizadas numa amostra de 188 pacientes HbSS, os
quais foram divididos em casos (n=77), os pacientes que apresentaram osteonecrose e controles (n=111) pacientes
acima de 18 anos e que não apresentaram o desfecho clínico avaliado. A genotipagem do polimorfismo foi
realizada por RT-PCR utilizando o sistema TaqMan®. Resultados: O polimorfismo FokI (rs2228570) mostrou-se
associado à uma menor taxa de desenvolvimento da osteonecrose (P=0,028; OR: 0,201; IC95%: 0,04-0,91). Na
nossa amostra 73% e 7% dos pacientes com genótipo selvagem mais heterozigoto (CC + CT) e homozigoto
variante (TT), respectivamente, para o polimorfismo FokI, desenvolveram osteonecrose. Avaliando o risco
cumulativo para o desenvolvimento da osteonecrose, observamos que os pacientes com genótipo CC + CT
apresentaram uma maior taxa de desenvolvimento de osteonecrose (73%) que os TT (7%) (P=0,005). Dessa
forma, o genótipo homozigoto variante para esse polimorfismo pode indicar um fator protetor contra o
desenvolvimento da osteonecrose. Conclusão: Diante do exposto concluímos que o polimorfismo do VDR FokI
(rs2228570), mostrou-se, em seu genótipo homozigoto variante, como fator de proteção para a ocorrência de
osteonecrose na amostra populacional estudada. A compreensão desses fatores de risco genéticos para o
desenvolvimento da osteonecrose torna-se necessária para fornecer novos conhecimentos sobre a patogênese desta
doença e, eventualmente, oferecer oportunidades para o seu tratamento, que atualmente é limitado.
212
Genética Humana e Médica
AVALIAÇÃO DO IMPACTO DO POLIMORFISMO RS685417 E DA EXPRESSÃO DO GENE KLOTHO
NAS COMPLICAÇÕES CLÍNICAS DA ANEMIA FALCIFORME
Jéssica Vitória Gadelha de Freitas Batista1; Diego Antonio Pereira Martins1; Luana Priscilla Laranjeira Prado1;
Thaís Helena Chaves Batista1; Gabriela da Silva Arcanjo1; Jaqueline Cabral Peres2; Fábia Michelle Rodrigues
de Araújo Callado2; Thales Allyrio Araújo de Medeiros Fernandes3; Aderson da Silva Araujo2; Antonio Roberto
Lucena de Araújo1; Marcos André Cavalcanti Bezerra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Fundação de Hematologia e Hemoterapia de Pernambuco ;
(3)
Universidade do Estado do Rio Grande do Norte
RESUMO
Embora a anemia falciforme (AF) seja uma condição monogênica, é marcada por intensa heterogeneidade
fenotípica. Além de fatores ambientais e econômicos, moduladores genéticos também influenciam no curso clínico
da doença nos indivíduos. Por isso, é interessante que genes candidatos a moduladores sejam pesquisados a fim de
auxiliar na indicação prognóstica dos pacientes e, assim, permitir um melhor acompanhamento clínico. Nesse
contexto, mostra-se interessante o gene KLOTHO (KL), o qual é envolvido em mecanismos importantes na
fisiopatologia da AF, como a inflamação, estresse oxidativo e expressão de moléculas de adesão. Dessa forma,
objetivamos avaliar a associação do polimorfismo intrônico rs685417 (G>A) com a frequência das principais
complicações clínicas da AF e investigar se o KL é diferencialmente expresso na AF e se os genótipos do
polimorfismo estudado influenciam nessa expressão Nosso estudo, então, foi realizado por comparação de grupos,
os quais foram compostos por indivíduos AF acompanhados na Fundação HEMOPE (Recife/PE) divididos em
casos e controles. Deles, foram extraídas amostras de DNA e RNA para realização dos ensaios de genotipagem
utilizando sondas TaqMan® (ensaio disponível no site https://www.thermofisher.com/order/genome-database
C__2983081_10) e também ensaio de expressão gênica relativa utilizando como referência o gene constitutivo
GAPDH. Para os ensaios de expressão foram utilizados também 23 indivíduos sem anemia falciforme, com padrão
de hemoglobina normal (HbAA). Com uma coorte de 346 pacientes com AF, percebeu-se que, aplicando o modelo
de associação sobredominante, houve associação do genótipo GA com uma maior frequência de úlceras de perna
(P=0,006; OR=2,44; IC(95%)=1,31-4,55), osteonecrose (P=0,036; OR=2,2; IC(95%)=1,09-4,42) e priapismo
(P=0,048; OR=2,39; IC(95%)=1,06-5,37). Quanto aos ensaios de expressão, os pacientes com AF mostraram
hipoexpressão do KL quando comparados aos indivíduos HbAA (P=0,001) e não foram encontradas diferenças
dos níveis de expressão entre os indivíduos com diferentes genótipos para o polimorfismo rs685417 (G>A). Diante
de nossos resultados, podemos concluir que pacientes com o genótipo GA do polimorfismo avaliado mostraram
maior frequência de úlceras de perna, osteonecrose e priapismo. Além disso, concluímos também que o nosso
gene alvo se mostra hipoexpresso nos pacientes com anemia falciforme.
APOIO
CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
213
Genética Humana e Médica
AVALIAÇÃO DO POLIMORFISMO DO GENE TGFA COMO FATOR DE RISCO PARA AS FISSURAS
LABIOPALATAIS EM PACIENTES COM PAIS SOROPOSITIVOS PARA LEISHMANIOSE E
ANÁLISE CARIOTÍPICA DOS FISSURADOS
Raysa Samanta Moraes Laranjeira1; Juliana Vieira de Barros1; Rafaella do Nascimento Pinto1; Arnoldo
Vasconcelos de Alencar Filho2; Maria das Graças Figueiredo2; Aronita Rosenblatt2; Neide Santos1; Merilane da
Silva Calixto3.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genética e Citogenética Animal e Humana- CB/UFPE; (2)Odontopediatria/FOP/UPE; (3)Unidade
Acadêmica de Ciências Biológicas/Centro de Saúde e Tecnologia Rural/UFCG
RESUMO
As fissuras labiopalatais (FL/P), estão entre as malformações congênitas de maior frequência que acometem o ser
humano. Os fatores etiológicos podem ser hereditários, ambientais, congênitos, genéticos, doenças virais ou por
protozoários. Atualmente, há relatos de doenças infecciosas como fatores de risco para FL/P, contudo doenças
negligenciadas, como a Leishmaniose, não têm sido estudada. No entanto, alguns genes têm sido implicados com a
ocorrência de FL/P. Genes relacionados ao desenvolvimento embriológico de fendas orofaciais, como o TGFA,
representam maior importância entre os estudos de ligação e associação, além de serem expressos durante o
período crítico da palatogênese. A associação entre FL/P e o polimorfismo do gene TGFA foi encontrada em
algumas populações, e estudos de interações gene-ambiente sustentam a hipótese do papel do gene como um fator
modificador da FL/P. Este estudo teve como objetivo definir o cariótipo dos pacientes com FL/P, não associados a
síndromes, assim como verificar associação entre o polimorfismo do gene TGFA com o desenvolvimento das FL/P
nos pacientes com genitores diagnosticados como soropositivos para Leishmaniose. Amostras de sangue coletadas
de 20 indivíduos fissurados e de seus pais (pai e/ou mãe) em áreas endêmicas de Leishmaniose em Pernambuco
passaram por confirmação imunológica pela reação de imunofluorescência indireta (IFI). A análise cariotípica
realizada pelo bandeamento G em 20 pacientes fissurados mostrou que 16 indivíduos analisados apresentaram
cariótipo normal, sendo 46,XX no sexo feminino e 46,XY no sexo masculino e quatro indivíduos apresentaram
alteração cromossômica envolvendo os cromossomos 9 e 16. O DNA genômico foi obtido pela técnica de fenolcloroformio e o polimorfismo foi detectado através da técnica de PCR em tempo real. As análises estatísticas para
estimar as frequências alélicas e genotípicas foram realizadas através do equilíbrio de Hardy-Weinberg, a partir do
teste exato de Fisher, X2, sendo considerado significativo p <0,05. Após análise estatística foi obtido um p value =
0,43 não sendo possível observar a associação entre essas duas condições. Os resultados sugerem que o
polimorfismo estudado não contribui diretamente para o surgimento das fissuras labiopalatais em pacientes que
possuem pais soropositivos para a Leishmaniose, reforçando sua origem multifatorial, com variantes ambientais,
teratogênicas e genéticas.
APOIO
CNPq e FACEPE
214
Genética Humana e Médica
CARACTERIZAÇÃO CLÍNICA, IMUNOMOLECULAR E CITOGENÉTICA DOS PORTADORES DA
LEUCEMIA DE CÉLULAS MADURAS B (LLA-L3) DA INFÂNCIA DO CEONHPE/HUOC/UPE
Izabelle Aguiar Pereira1; Maria Teresa Marquim Nogueira Cornélio1; Edinalva Pereira Leite2; Elizângela
Ferreira da Silva2; Maria Luiza Rocha da Rosa Borges3; Maria Luiza Macedo Silva4; Mariana Tavares de
Souza4; Mariluze Oliveira da Silva2; Eliane Maria Soares Ventura2; Terezinha de Jesus Marques Salles3.
E-mail: [email protected]
(1)
Instituto de Ciências Biológicas; (2)Hospital Universitário Oswaldo Cruz; (3)Faculdade de Ciências Médicas;
(4)
Instituto Nacional de Câncer
RESUMO
Introdução: A Leucemia de células B maduras (LLA-L3) é a forma disseminada do linfoma de Burkitt (LB), um
tumor de alto grau de malignidade de células B pequenas não clivadas. A LLA-L3 apresenta a t(8;14)(q24.1;q32)
em 85% dos casos e em 15%, suas variantes t(2;8)(p12;q24) e t(8;22)(q24;q11.2). Alterações cromossômicas
adicionais (ACA) são descritas em 70% dos LB e envolvem principalmente os cromossomos 1, 2, 6, 7, 8, 13, 17,
22 e X. As técnicas de citogenéticas podem detectar estas alterações que são importantes para diagnóstico, e
prognóstico da doença. Objetivos: Descrever as características clínicas, imunofenotípicas e citogenéticas da LLAL3, na idade entre 0-18 anos, diagnosticadas no CEONHPE no período de 2004 a 2015. Metodologia: O
diagnóstico foi dado pela morfologia LLA-L3 seguindo a classificação FAB e a imunofenotipagem, pelo encontro
da sIgM nas células leucemias. Os dados clínicos-laboratoriais foram obtidos dos prontuários médicos. O cariótipo
através do bandeamento G e técnica de FISH/MCB. Resultados: Foram diagnosticados 10 pacientes com LLA-L3.
Houve prevalência do sexo masculino (70%) e os principais sintomas foram febre (30%), desconforto abdominal
(30%) e perda de peso (5-10kg) (30%). Massas tumorais ocorreu em 50% dos casos (60% tumor abdominal).
Infiltração de medula óssea ocorreu em 50% dos casos. Um paciente tinha SNC envolvido. O hemograma em 2
casos mostrou leucócitose ≥17.02x103/uL, 4 casos plaquetopenia (≤72.000/mm3). Três pacientes tinham blastos no
SP ≥30%. A IMF foi negativa para IgMs em 2 pacientes. A t(8;14)(q24.1;q32) foi encontrada em 90% e a
t(2;8)(p12;q24) em 10%. Foram observadas ACA em 5 pacientes, sendo em 2 casos dup(1q), em 1 caso add(11q),
em 1 caso dup(13q) e em 1 caso t(11q;14q). Dos 5 casos que apresentaram ACA, 3 foram a óbito e 2 estão vivos.
Conclusão: A principal translocação encontrada foi a t(8;14)(q24.1;q32). A citogenética molecular (FISH e MCB)
foram importantes para definir alterações cromossômicas adicionais, rearranjos intersticiais e confirmação de
anormalidades do MYC. Os pacientes com LLA-L3 e alterações cromossômicas adicionais apresentaram alta taxa
de óbito 60%.
APOIO
PFA/UPE
215
Genética Humana e Médica
CDX-2 VITAMIN D RECEPTOR (VDR) POLYMORPHISM UP REGULATES VDR MRNA LEVELS IN
SILICO AND IN VIVO
Maria Eduarda Bezerra de Albuquerque Borborema1; Jorge José de Souza Pereira1; Sérgio Crovella1; Paula
Sandrin Garcia1; Jaqueline de Azevêdo Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética - UFPE
RESUMO
Vitamin D exerts immunomodulatory actions through interaction with its specific receptor named vitamin D
receptor - VDR, a 50kDa nuclear protein, and determines genomic responses by regulating transcription of several
genes. Polymorphisms within VDR gene are associated with immune related diseases development and its
maintenance, becoming a potential marker for several immune misbalances. VDR is located on chromosome 12
(12q13.11) being highly polymorphic with more than sixty described polymorphisms, which may lead to altered
gene function and/or expression and therefore compromising vitamin D function. The Cdx-2 polymorphism
(rs11568820), one of the most studied VDR polymorphism, is located within the promoter region (exon 1) and
consists of a Guanine by Adenine (G> A) change, with a 0,98 minimum allele frequency (MAF) in YRI and 0,22
in CEU populations. In silico analyses have shown that the presence of Cdx-2 A allele leads to a more effective
transcription factor TFIIB binding at the transcriptional complex, thereby increasing VDR expression. Herein we
aimed assess whether VDR expression in vivo were in fact modulated by individuals genotype and vitamin D
serum levels. We evaluate the expression levels of VDR mRNA from 27 samples including all 3 possible Cdx-2
genotypes (G/G, G/A, A/A - 6, 15 and 6 individuals respectively) with the G/G genotype as reference in our study
population. The expression assay was performed using VDR Taqman probe (Hs00172113_m1) and two reference
genes Actin-beta and GAPDH (Hs02758991-81 and Hs99999903_m1, respectively). The RNA input for cDNA
syntesis was 500ng for all samples and for expression analysis we used 2 -ΔΔCT method. Our results indicated that
VDR Cdx-2 A/A genotype individuals were up regulated 6.7 fold change when comparing to G/G genotype. The
Cdx-2 A/G genotype individuals presented up regulation of 3.37 fold change when comparing to VDR Cdx-2 G/G.
Therefore, herein we confirm that in fact there is a higher transcriptional activity in Cdx-2 A/A and A/G genotype
suggested by in silico previous analysis.
APOIO
CNPq and FACEPE
216
Genética Humana e Médica
COMORBIDADE ENTRE DISTÚIRBIOS GENÉTICOS E SÍNDROMES MIELODISPLÁSICAS (SMD)
EM PACIENTES ATENDIDOS EM PROGRAMA DE GENÉTICA COMUNITÁRIA
Érica Vieira Alcântara1; Ana Luiza Afonso Maltez dos Santos1; Vinícius Magalhães Borges1; Rafaela Marocci
Lima Pimenta1; Lucy Freitas1; Monica Jacobina Fonseca Vieira1; Lilia Maria de Azevedo Moreira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal da Bahia
RESUMO
Estudos de mutagênese mostram que quebras e alterações cromossômicas são eventos iniciais de processos de
carcinogênese que embora sejam mais frequentes em idades avançadas, afetam indivíduos de todas as faixas
etárias. Alguns distúrbios gênicos, além de estarem associados a características fenotípicas típicas, mostram
predisposição dos cromossomos em formar rearranjos ou apresentar outras alterações citogenéticas. Tanto a
instabilidade cromossômica quanto a ocorrência de genes mutados podem causar complicações na medula óssea.
Dentre as síndromes genéticas, observa-se que 50% dos casos de Anemia de Fanconi apresentam comorbidade
com SMD. Já na síndrome de Down há um risco de desenvolver câncer cerca de seis vezes maior que a população
geral, especialmente para neoplasias hematopoiéticas, observando-se que cerca de 10% dos recém-nascidos
desenvolvem uma forma de leucemia megacarioblastica. O objetivo deste estudo foi verificar a associação entre
distúrbios genéticos e síndromes mielodisplásicas em atendimentos do Programa Genética & Sociedade da
Universidade Federal da Bahia que abrange o atendimento genético laboratorial e atividades educativas/inclusivas
realizadas junto às atividades curriculares em comunidade e sociedade ACCS BIO456 (Genética e Diversidade
Humana) e ACCS BIOA94 (Inclusão: Contribuição da Genética e da Educação). Os pacientes foram
encaminhados por instituições parceiras ou procuraram diretamente o programa. Foram preenchidas fichas de
anamnese e realizados exames de cariótipo e, em suspeita de instabilidade cromossômica foi feito adicionalmente
estudo de quebras cromossômicas com Diepoxibutano. Em 818 atendimentos verificaram-se 04 casos de Anemia
de Fanconi, 02 casos de Síndrome de Down, com leucemia linfoide aguda e um caso de displasia ectodérmica
hipoidrotica com a mesma morbidade. Conclui-se pela importância da atenção à possibilidade de presença da
comorbidade distúrbios genéticos/mielodisplásicos em atendimentos genéticos, tendo em vista promover o
diagnóstico precoce e encaminhamento dos resultados a centros de tratamento.
APOIO
Pró-Reitoria de Extensão - Universidade Federal da Bahia
217
Genética Humana e Médica
CONTRIBUÇÃO DA MUTAÇÃO CCRΔ32 PARA A SUSCEPTIBILIDADE DE DOENÇAS
NEUROLÓGICAS EM PACIENTES HIV-1: ESTUDO PILOTO
Klaudia Emanuela Ramos Tenório1; Wlaldemir Roberto dos Santos1; Evandra Santos Pontes1; Sergio de Sá
Leitão Paiva Júnior1; Paulo Sergio Ramos de Araujo2; Valdir de Queiroz Balbino1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Universidade Federal de Pernambuco/Centro de Pesquisas Aggeu
Magalhães/FIOCRUZ
RESUMO
Introdução. O CCR5 atua na resposta inflamatória aumentando a resposta imunológica adaptativa, influenciando
no desenvolvimento de diversas infecções. Nas pessoas vivendo com HIV as infecções neurológicas são as mais
frequentes morbidades encontradas. Contudo, a presença destas infecções está associada a resposta imunológica
do hospedeiro, dependente de diversos fatores entre eles as quimiocinas e seus receptores, como o CCR5. O CCR5
pode apresentar uma deleção de 32 pares de bases que gera uma proteína truncada. Indivíduos com a deleção em
homozigose (Δ32/Δ32) apresentam a resistência ao HIV-1 e defesa contra outros patógenos, influenciando na
susceptibilidade de algumas doenças infecciosas. Objetivo: Investigar a associação entre a mutação CCRΔ32 e o
risco de desenvolvimento de infecções neurológicas causadas por Toxoplasmose, sífilis e citomegalovirose em
indivíduos vivendo com HIV. Metodologia: o estudo foi realizado com 298 indivíduos com HIV, em uso da
terapia antirretroviral, com e sem infecções neurológicas. O diagnóstico das infecções neurológicas foi obtido
através da análise dos prontuários. A presença da mutação CCRΔ32 foi determinada por PCR e associada com o
aparecimento ou não de infecção neurológicas. O estudo de associação foi realizado pelo SNPStats verificando
Odds ratio (OR) com intervalo de confiança de 95%, nível de significância p <0,05. Resultados: observou-se que
18.63% dos indivíduos apresentavam algum tipo de infecção neurológica (neurotoxoplasmose, neurossifilis,
neurocitomegalovírus). A frequência do alelo CCR5Δ32 nos indivíduos com infecção neurológica foi de 3%, já os
sem infecção neurológica foi de 4%. A análise genotípica total e dos indivíduos com e sem infecções neurológicas
não mostraram associação. Porém, quando foi analisado com fator de risco o sexo do indivíduo, o genótipo
selvagem (wt/wt) sugere maior susceptibilidade ao desenvolvimento de infecções neurológicas no sexo masculino,
com Or de 2.40 (1.06 - 5.42). Conclusões: sugerimos que a presença do alelo CCR5Δ32 pode ter um efeito
protetor no desenvolvimento de doenças neurológicas em indivíduos com HIV do sexo masculino. Esse fato pode
ser associado a negligência no diagnóstico da toxoplasmose em indivíduos do sexo masculino já que em mulheres
há uma maior vigilância epidemiológica relacionada ao risco de toxoplasmose congênita. Entretanto, sugerimos
novos estudos com amostras maiores para evidenciar a associação encontrada.
APOIO
Cnpq
218
Genética Humana e Médica
DC-SIGN AND APOBEC3G POLYMORPHISMS IN HIV-1 INFECTED AND UNEXPOSED
UNINFECTED INDIVIDUALS OF SOUTHERN BRAZIL
Jeanne Lucy Freitas Bastos1; Sergio Crovella2; Ronaldo Celerino da Silva3; Anselmo Jiro Kamada3; José Artur
Bogo Chies4.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.; (2)Department of Genetics,
Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA),
Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife,; (3)Department of Genetics, Federal University of Pernambuco
(UFPE), Recife, Brazil and Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of
Pernambuco (UFPE), Recife; (4)Department of Genetics, Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto
Alegre, Brazil
RESUMO
Host genetic factors play a major role in determining the outcome of HIV-1 infection. Dendritic-cell-specific
intercellular adhesion molecule-3 grabbing non-integrin (DC-SIGN) is a membrane receptor found in
macrophages and dendritic cells, responsible for HIV-1 internalizing cell through its interaction with the gp120.
While apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G (APOBEC3G), a restriction factor,
can cause destruction of the viral RNA or inserting mutations in the viral DNA after reverse transcription. Some
studies have associated variations in these genes with HIV-1 susceptibility. We evaluated the distribution of single
nucleotide polymorphisms (SNPs) in the DC-SIGN (rs4804803 and rs735239) and APOBEC3G (rs2294367 and
rs373685) in HIV-1 infected and healthy individuals of Porto Alegre (Brazil). We selected 160 HIV-1-infected
(HIV-1+) and 160 unexposed and uninfected individuals (healthy controls). The genotyping was performed with
allele specific fluorescent probes using real-time PCR. Allelic and genotypic frequencies were estimated by direct
count. Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) and associations were determined by X2-square and Fisher Exact Test
using R program. All SNPs were in HWE, except for rs4804803 (DC-SIGN) in healthy controls. In the DC-SIGN,
the A allele and AA genotype of rs4804803 were the most frequent in healthy controls (95.9% and 93.8%) and
HIV-1-infectd individuals (94.7% and 90%). For the rs735239, the A allele and AG genotype were the most
frequent in healthy controls (64.4% and 50.6%) and HIV-1-infectd individuals (60.9% and 49.4%). For the
APOBEC3G gene, the G allele and GC genotype of rs2294367 were the most in healthy controls (54.7% and
50.6%) and HIV-1-infectd individuals (54.7% and 49.4%). For the rs3736685, the T allele and TT genotype were
the most frequent in healthy controls (92.8% and 86.3%) and HIV-1-infectd individuals (95.9% and 91.9%).
Although the percentage differences between HIV-1 infected and healthy individuals, were not observed
significant differences (p> 0.05), suggesting that these SNPs are not related with the HIV-1 infection susceptibility
in the population studied. However, it is necessary to replicate studies with other populations and with a greater
number of individuals.
APOIO
CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE
219
Genética Humana e Médica
DELEÇÕES DOS GENES GSTM1 E GSTT1 E ASSOCIAÇÃO COM CÂNCER NO MUNICÍPIO DE
MONTE SANTO-BA
Cardoso Junior, Lm1; Carozo, Po2; Nascimento, Ilo3; Machado Lopes, Tmb4; Bomfim, Tf4; Acosta, Ax1; Abe
Sandes, K4.
E-mail: [email protected]
(1)
Serviço de Genética Médica, Hospital Universitário Prof. Edgard Santos, UFBA, Salvador, Bahia; (2)Laboratório
de Imunologia e Biologia Molecular, Instituto de Ciências da Saúde, UFBA, Salvador, Bahia; Programa de pósgraduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa, Fundação Oswaldo Cruz, Salvador, Bahia;
(3)
Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Instituto de Ciências da Saúde, UFBA, Salvador, Bahia;
Núcleo de Oncologia da Bahia, NOB, Salvador, Bahia; (4)Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular,
Instituto de Ciências da Saúde, UFBA, Salvador, Bahia
RESUMO
As enzimas glutationa-S-transferases são responsáveis pela detoxicação de compostos xenobióticos, assim,
polimorfismos nos genes que codificam estas proteínas, como a deleção completa destes genes, podem aumentar a
suscetibilidade a diferentes tipos de câncer. O município de Monte Santo apresenta alta taxa de consanguinidade e
frequência aumentada de doenças genéticas, incluindo o câncer. O objetivo deste trabalho foi verificar a possível
associação entre as deleções nos genes GSTM1 e GSTT1 com o câncer em uma amostra da população de Monte
Santo-BA. O trabalho foi aprovado em comitê de ética em pesquisa e a análise estatística (cálculo de odds ratio,
intervalo de confiança e valor de p) foi realizada no programa WinPepi 11.26. Foram selecionados 76 indivíduos
com diferentes tipos de câncer e 76 indivíduos controle. Análise molecular foi realizada por PCR-Multiplex com
visualização em gel de agarose a 2,5% corado com brometo de etídio. A amostra foi composta em sua maioria por
indivíduos classificados fenotípicamente como brancos ou mulatos claros. Os principais tipos de câncer da
amostra foram de próstata (35,5%), mama (19,7%), pele (10,5%), útero (7,9%) e neoplasias hematológicas (6,6%).
O grupo dos casos foi composto de 52,6% de homens e 47,4% de mulheres, com idade média de 61,3 anos.
História familiar de câncer (69,7%) e tabagismo (48,7%) foram associados ao risco de câncer entre os casos. Os
genótipos GSTT1 [-] e GSTM1 [-] tiveram frequência de 22,4% e 63,2% entre os casos e 36,8% e 52,6% entre os
controles, mas essa diferença não foi significativa quando comparada entre os grupos. A frequência do genótipo
combinado GSTT1 [+] / GSTM1 [-] foi de 50% nos casos e 32,9% nos controles, mostrando associação
significativa com o risco de câncer nessa amostra (OR = 1,66; IC95% = 1,31 - 5,27; p <0,005). As frequências
obtidas no estudo foram compatíveis com as observadas em outras populações no estado da Bahia, na região
nordeste e sudeste. Além disso, a população de Monte Santo possui elevada contribuição europeia e os dados são
compatíveis com o observado para este grupo populacional. Não foi calculado o equilíbrio de Hardy-Weinberg,
uma vez que o método permite obter apenas as frequências genotípicas. Apesar do limitado tamanho amostral e do
agrupamento de diferentes tipos de câncer no grupo caso, foi observada a associação das deleções combinadas dos
genes GSTT1 e GSTM1 com câncer.
APOIO
FAPESB, CNPq
220
Genética Humana e Médica
DESENVOLVIMENTO DE UM KIT DIAGNÓSTICO DE CAPTURA DE ANTICORPOS PARA
FILARIOSE LINFÁTICA.
André Pastor1; Abraham Rocha2; Paula Ancântara3; Maria Rosângela Grilis2; Marli Tenório4; Maressa
Rhuama5; Antonio Rezende4; Osvaldo Pompilio5; Ernesto Marques4; Rafael Dhalia5.
E-mail: [email protected]
(1)
1- Fundação Osvaldo Cruz - FIOCRUZ, PE. 2- Universidade Federal de Pernambuco - UFPE. 4-Instituto
Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Sertão Pernambucano - IFSertão-PE.; (2)1- Fundação Osvaldo Cruz
- FIOCRUZ, PE. 3- Serviço de Referência Nacional em Filarioses - SRFN. ; (3)1- Fundação Osvaldo Cruz FIOCRUZ, PE. 3- Serviço de Referência Nacional em Filarioses - SRFN. ; (4)1- Fundação Osvaldo Cruz FIOCRUZ, PE; (5)1- Fundação Osvaldo Cruz - FIOCRUZ, PE. 2- Universidade Federal de Pernambuco - UFPE.
RESUMO
A Filariose Linfática (FL) é uma doença que afeta 120 milhões de pessoas no mundo, sendo a Wuchereria
bancrofti (WB) o agente etiológico no Brasil. O diagnóstico apresenta inúmeras dificuldades, como horário de
coleta para exames parasitológicos (entre 23h-1h) e dificuldades de importação e altos custos para kits de
imunodiagnóstico. Sendo assim, o objetivo detse trabalho é o desenvolvimento de um teste nacional de captura de
anticorpos para a FL. Primeiramente, o gene sintético do antígeno WbX foi clonado no vetor pRSET-A e expresso
em E. Coli BL21. Após isso, a proteína purificada foi usada para padronizar o teste de captura de anticorpos IgG4
através da técnica de ELISA, denominado de ELISA antiWbX. A microplaca (96 wells, Corning 3690, Costar®,
USA) foi sensibilizada com 50μl do antígeno a 20μg/ml, 100μl do soro de cada paciente por poço (1:100 em PBS
0,5% BSA, pH 7.2) foi utilizado e a placa foi incubada a 37°C por 1h, lavada e incubada novamente por 1h com
50μl de HRP-Mouse Anti human IgG4. Por fim, foi usado o substrato BD OptEIA TMB (BD Biosciences, USA)
por 15min e a reação foi parada com 50ul/ul da solução de H2SO4 1N. As placas foram lidas a 450nm no
espectrofotômetro e os resultados foram expressos em densidade óptica (OD). O projeto foi aprovado pelo Comitê
de Ética em pesquisas com Seres humanos da FIOCRUZ-PE (CEP - 45085215.0.0000.5190), pois foram utilizados
soros de indivíduos divididos em 5 grupos: Infecatdos filarêmicos com WB (IF), pacientes crônicos (PC),
infectados com Strongyloides (IS), endêmicos normais (EN), não endêmicos normais (NEN). O ELISA antiWbX
apresentou sensibilidade de 90% e especificidade de 96,87%, o qual reconheceu 27 dos 30 pacientes do grupo IF e
apenas um indivíduo dos 32 do grupo NEN. Na comparação com o teste comercial (CELISA), o antiWbX
apresentou a mesma sensibilidade e maior especificidade, já que o comercial reconheceu como positivo 13
indivíduos do grupo NEN. Diante dos resultados, conclui-se que o ELISA antiWbX é um teste diagnóstico
eficiente e promissor, inclusive apresentando melhores resultados de especificidade do que o kit comercial
CELISA nas nossas amostras. Como perspectivas temos uma submissão de patente em andamento além de um
artigo científico em preparação. A expectativa é que o teste torne-se um kit comercial e possa diminuir os custos e
a dependência tecnológica brasileira na área de diagnóstico da filariose linfática.
APOIO
FACEPE/FIOCRUZ.
221
Genética Humana e Médica
DISTRIBUTION OF CHEMOKINES POLYMORPHISMS IN HIV-1+ INDIVIDUALS AND HEALTHY
CONTROLS FROM NORTHEAST BRAZIL AND THEIR POTENTIAL ASSOCIATION WITH HIV-1
INFECTION PROTECTION
Soares, André Luiz Bormann1; Arraes, Luiz Cláudio2; Coelho, Antonio Victor Campos1; Guimarães, Rafael
Lima1; Crovella, Sergio1; Celerino da Silva, Ronaldo1.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil and Laboratory of
Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.; (2)Institute of
Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil
RESUMO
Human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) entry in host cell is done mainly through CD4+ T-lymphocyte
cells, by interactions among the viral envelope proteins, CD4 receptor and HIV-1 coreceptors, as CCR5 and
CXCR4. Variations in the genes encoding HIV-1 coreceptors and their natural ligands (chemokines) have been
shown to modify HIV-1 infection susceptibility and disease progression. In this sense, we analysed the distribution
of chemokines (CCL3, CCL4, CCL5) single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 268 HIV-1 infected (HIV-1+)
and 221 unexposed and uninfected individuals (healthy controls) of Northeast Brazilian, and their possible
association with HIV-1 infection susceptibility. The genotyping were performed through allele specific
fluorogenic probes using real time PCR. Allelic and genotypic frequencies were estimated by direct count. HardyWeinberg equilibrium and associations were determined by Chi-square and Fisher Exact Test, using R program.
Linkage disequilibrium (LD) and haplotypic frequencies were evaluated by Haploview software. All
polymorphisms were in Hardy-Weinberg equilibrium, except for SNP rs2107538 (CCL5) in HIV-1+ individuals.
Two SNPs, located in CCL3 (rs1719134) and CCL4 (rs1719153) genes, showed significant differences among
HIV-1+ individuals and healthy controls. We observed that the GA genotype of rs1719134 CCL3 SNP were more
frequent in healthy controls (33.3%) than in HIV-1+ individuals (24.6%; OR=0.64; 95%CI=0.42-0.98; pvalue=0.033). For rs1719153 CCL4 SNP, the T allele and AT genotype were more frequent in healthy controls
(19.8% and 35.0%, respectively) than in HIV-1+ individuals (T allele: 14.1%; OR=0.67; 95%CI=0.47-0.95; pvalue=0.020 and AT genotype: 24.4%; OR=0.59; 95%CI=0.39-0.90; p-value=0.012). The rs1719134 (CCL3) and
rs1719153 (CCL4) SNPs presented linkage disequilibrium (D'=0.83). The AT haplotype frequency was increased
in healthy controls (17.3%) in relation to HIV-1+ individuals (11.0%; OR=0.60; 95%CI=0.41-0.89; pvalue=0.008). Since our results revealed an increased frequency of alleles and genotypes of CCL3/CCL4 SNPs and
haplotype (CCL3-CCL4) among healthy controls, we suggest a potential role these variations in modulation of
susceptibility to HIV-1 infection.
APOIO
CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE.
222
Genética Humana e Médica
DUPLICAÇÃO (XQ) ASSOCIADA À SÍNDROME DE TURNER: DOIS RELATOS DE CASOS
Juliana Vieira de Barros1; Luana Oliveira dos Santos1; Adriana Valéria Sales Bispo2; Raysa Samanta Moraes
Laranjeira1; Rafaella do Nascimento Pinto1; Kamylla Ramos da Silva1; Andrea de Rezende Duarte3; Neide
Santos1.
E-mail: [email protected]
(1)
1Laboratório de Genética e Citogenética Animal e Humana - Departamento de Genética/CCB/UFPE - Recife,
PE; (2)Instituito Federal de Educação Ciência e Tecnologia do Sertão Pernambucano- Campus Salgueiro,PE;
(3)
Serviço de Genética Médica, Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira - Recife, PE
RESUMO
A Síndrome de Turner (ST) é uma cromossomopatia caracterizada pela perda total ou parcial do segundo
cromossomo sexual ou por alterações estruturais do X, atinge cerca de 1:2500 recém-nascidos vivos do sexo
feminino. Cerca de 40% a 60% das pacientes com ST possuem uma linhagem celular 45,X sem mosaicismo
detectável e 25% apresentam mosaicismo 45,X/46,XX mas também podem existir outros cariótipos mosaicos,
sendo os mais comuns 46,X,i(Xq), 46,X,del(Xp), ou 46,X,dup(Xq). Duplicações parciais Xq são raras e ocorrem
com mais frequência nas regiões Xq12?q24 e Xq26.3?qter. Neste trabalho descrevemos as características clínicas
e genéticas de duas pacientes (19 e 22 anos) com suspeita clínica da ST atendidas no Serviço de Genética Médica
do Instituto Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP), apresentando ao exame clínico: baixa estatura,
amenorréia primária, pouco desenvolvimento mamário, útero com volume reduzido para faixa etária e ovários não
visualizados, pescoço curto, cúbito valgo bilateral, unhas com implantação profunda e dificuldade de
aprendizagem. Cerca de 25 metáfases mitóticas, obtidas através da cultura de linfócitos de sangue periférico,
foram analisadas através do bandeamento G para cada paciente. O cariótipo descrito para as duas pacientes foi
46,X,dup(Xq)[25] e 46,X,dup(Xq)[18]/45,X[10], compatíveis com ST. Os efeitos clínicos das duplicações Xq
estão diretamente ligados ao tamanho do seguimento duplicado, ou seja, quanto maior for a duplicação mais
alterações fenotípicas serão observadas. Em conclusão, os resultados gerados pela análise citogenética permitiram
estabelecer um diagnóstico complementar para cada paciente, permitindo o direcionamento para a conduta
terapêutica.
APOIO
FACEPE e UFPE
223
Genética Humana e Médica
ESTRUTURA DO RECEPTOR PPARGC1A HUMANO (PEROXISOME PROLIFERATORACTIVATED RECEPTOR GAMMA COACTIVATOR 1-ΑLFA) E COMPARAÇÃO COM
DIFERENTES ESPÉCIES
Beatriz de Lucena Villa Chan Cantalupo1; Pedro Silvino Pereira1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
O PPARG (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor GAMMA) é um receptor nuclear, originalmente descrito
no tecido adiposo, que controla a expressão de um grande número de genes reguladores no metabolismo de
lipídios e de sensibilização à insulina. Quando na presença do Coativado alfa-1 (C1A), forma o PPARGC1A, que
protege contra o ganho de peso, inflamação, perda de massa muscular e óssea e melhora a sensibilidade à insulina,
promovendo efeitos favoráveis sobre o metabolismo e resistência a doenças metabólicas. Em vista do melhor
conhecimento deste receptor em outras espécies, a presente pesquisa teve como objetivo caracterizar in silico a
estrutura do receptor PPARGC1A humano comparativamente a diferentes espécies com dados disponíveis em
bancos de dados. As análises foram feitas, a partir do banco do NCBI (National Center of Biotechnology
Information), através da sonda PPARGC1A, a partir de um tBLASTn específico para o organismo Homo sapiens.
A partir desta sonda, buscaram-se sequências para organismos de outras classes (Reptilia, Pisces, Mammalia e
Aves). As sequências foram alinhadas no ClustalW e em seguida submetidas a uma análise de domínios
conservados no CD-Search e à análise de localização subcelular no Cell-PLoc. Utilizando o Circoletto foi possível
comparar as sequências utilizadas. A análise fenética foi feita a partir da geração de alinhamento e das topologias
das árvores de Neighbor Joining e UPMGA. Através da busca de domínios conservados com o CD-Search, foi
observado que o PPARGC1A, não apresentava o domínio esperado na espécie Pan troglodytes (chipanzé). A
análise de localização subcelular das sequências, incluindo a sonda, indicou localização associada ao núcleo. A
investigação do pH e do peso molecular da proteína nas espécies, mostrou que a maioria apresenta propriedades
similares, com ponto isoelétrico e pH ácido com valores próximos. Na análise fenética, os nós mais basais
apresentaram valores de bootstrap satisfatórios entre as classes de indivíduos envolvidos. Os grupamentos
terminais apresentaram plena consonância com a classificação taxonômica dos grupos analisados. Além disso, o
Circoletto evidenciou conservação entre as sequências, já confirmada pela fenética. Apesar da descoberta dos
PPARs, ainda pouco se sabe sobre eles. Desta forma, faz-se necessário reunir e exaurir a maior quantidade
possível de dados que possam fornecer subsídios para maior compreensão destes receptores nucleares.
APOIO
CAPES e FACEPE.
224
Genética Humana e Médica
ESTUDO DE CASO EM GENÉTICA DE POPULAÇÕES: A CAPACIDADE DE ENROLAR A LÍNGUA
EM UMA POPULAÇÃO INDÍGENA NO MUNICÍPIO DE PALMEIRA DOS ÍNDIOS/AL, BRASIL
João Antonio dos Santos Neto1; David Joseph Ferreira Tenório de Almeida1; Thalita Ferreira Tenório de
Almeida2; Ebenézer Bernardes Correia Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
Instituto Federal de Alagoas - IFAL; (2)Centro Universitário CESMAC-AL
RESUMO
Os índios Xucurú-Karirí estão situados no município de Palmeira dos Índios/AL, em área de transição
fitoecologica (ecótono) entre a mata atlântica e a caatinga. Estas comunidades isoladas não são alvos de estudos
populacionais dirigidos, tornando escasso o conhecimento a respeito da miscigenação desses indivíduos ao longo
do tempo. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo identificar e quantificar as frequências fenotípicas,
alélicas e genotípicas da capacidade de enrolar a língua (herança autossômica dominante), e analisar se a
população encontra-se em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Este estudo foi realizado na Fazenda Canto, Palmeiras
dos Índios/AL. Foram entrevistados 112 indivíduos, de ambos os sexos, com a faixa etária entre 06 a 64 anos.
Durante a entrevista, os voluntários foram solicitados para executar o movimento de enrolar a língua sem o auxílio
dos dentes. Em relação à população, a frequência fenotípica dominante foi representada por 95 indivíduos, que
corresponde a 0,85; enquanto a frequência fenotípica da característica recessiva apresentou 17 indivíduos e
correspondeu a 0,15. A frequência do alelo recessivo (a) correspondeu a 0,39, e a do dominante (A) 0,61. A
frequência genotípica calculada ficou de 0,15 (17 indivíduos) para homozigoto recessivo (aa), 0,48 (54 indivíduos)
para heterozigotos (Aa) e 0,37 (41 indivíduos) para homozigoto dominante (AA). Para o cálculo de χ2 foi
encontrado o valor de 0,018, bem menor que o valor crítico de tabela a 5% (3,84). Sendo assim, caracterizou-se a
população em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Estudos nas demais populações poderiam confirmar como
ocorreram os processos de formações dessas aldeias. Embora em análise superficial, e apesar de preliminar, esta
análise é importante para auxiliar a compressão dos aspectos evolutivos e histórico das diversas etnias que
compõem a população brasileira.
225
Genética Humana e Médica
ESTUDO PRELIMINAR DO SNP -174 G/C E PERFIL DE METILAÇÃO DO GENE INTERLEUCINA-6
EM PACIENTES COM ARTRITE REUMATOIDE
Isaura Isabelle Fonseca Gomes da Silva1; Francisco Geraldo Carvalho Neto2; Hildson Dornelas Angelo3; Eliezer
Rushansky4; Maria Helena Mariano4; Paulo Roberto Eleuterio de Souza5; Martin Alejandro Montes5; Maria de
Mascena Diniz Maia5.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada da Universidade de Pernambuco, UPE,
Recife, PE; (2)Programa de Pós-graduação em Genética da Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife,
PE; (3)Instituto Federal de Pernambuco, Garanhuns, PE; (4)Ambulatório de Reumatologia Clínica, Hospital
Universitário Oswaldo Cruz, Recife, PE.; (5)Departamento de Biologia, Universidade Federal Rural de
Pernambuco, UFRPE, Recife, PE
RESUMO
Artrite Reumatoide (AR) é uma doença autoimune e progressiva caracterizada por causar inflamação nos tecidos
sinoviais. Sua etiologia não é bem esclarecida, mas sabe-se que fatores genéticos, epigenéticos e ambientais
podem estar relacionados à etiopatogênese da doença. Desordens nos mecanismos epigenéticos tais como,
alterações no nível de metilação do DNA, modificação de histonas, RNAs não codificantes, entre outros, podem
interferir na expressão de genes importantes para o funcionamento do processo inflamatório. A Interleucina-6 (IL6) é uma citocina que modula a resposta inflamatória, incluindo a diferenciação de Linfócitos T e B. Alterações
nos níveis de expressão da IL-6 podem amplificar o processo inflamatório e desencadear a resposta característica
da AR. O objetivo deste estudo foi verificar se existe relação entre o SNP -174 G/C e perfil de metilação de quatro
dinucleotídeos CpG (?1069, ?1061, ?1057 e ?1001) do gene IL-6 com o desenvolvimento de AR na população de
Pernambuco. Para o estudo foram utilizadas amostras de 30 pacientes com AR e 30 controles saudáveis atendidos
no Hospital Universitário Oswaldo Cruz - UPE. O DNA genômico foi extraído a partir de sangue periférico e foi
realizada a genotipagem do polimorfismo por PCR-RFLP, utilizando a enzima de restrição Hsp92II. O padrão de
metilação foi avaliado por PCR-MSP (Metilação Específica) após tratamento das amostras com bissulfito de
sódio. A análise univariada dos dados (Teste Qui-quadrado) foi realizada através do programa BioEstat 5.0. Os
resultados mostram que o padrão de metilação foi similar entre pacientes e controles, uma vez que a hipometilação
apareceu em 43.33% dos pacientes e 46.67% dos controles enquanto a hipermetilação apareceu em 6.67% de
ambos os grupos. As análises estatísticas indicam que não há diferença significativa quando comparado o
polimorfismo -174 G/C do gene IL-6 (χ2=1.162; GL=2; p=0.559) e perfil de metilação nos dinucleotídeos CpG
(?1069, ?1061, ?1057 e ?1001) (χ2=0.072; GL=2; p=0.965), com desenvolvimento da AR. Portanto não foi
possível estabelecer correlação entre esses dados e o desenvolvimento da AR. É válido destacar que são
incipientes os estudos que relacionam de maneira conjunta os níveis de metilação e polimorfismo da IL-6 em
pacientes com AR. Porém, sabendo que alterações epigenéticas podem ser exploradas como novos biomarcadores
de diagnóstico, é necessária a continuação dos estudos com maior número amostral para afirmar as atuais
conclusões.
APOIO
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).
226
Genética Humana e Médica
ESTUESTUDO PILOTO DO PERFIL DE METILAÇÃO DOS DINUCLEOTÍDEOS CPG ?628, ?610, ?574
E ?491 DO GENE IL-6 EM PACIENTES COM ARTRITE REUMATOIDE
Amanda Virginia Batista Vieira1; Isaura Isabelle Fonseca Gomes da Silva2; Francisco Geraldo Carvalho Neto3;
Géssica Dayane Cordeiro de Lima2; Victor Vasconcelos Costa4; Eliezer Rushansky5; Maria Helena Mariano5;
Paulo Roberto Eleutério de Souza6; Martín Alejandro Montes6; Maria de Mascena Diniz Maia6.
E-mail: [email protected]
(1)
Bacharelado em Ciências Biológicas, Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Recife, PE.;
Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco, UPE,
Recife, PE.; (3)Programa de Pós-graduação em Genética da Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife,
PE.; (4)Bacharelado em Zootecnia, Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Recife, PE;
(5)
Ambulatório de Reumatologia Clínica, Hospital Universitário Oswaldo Cruz, Recife, PE.; (6)Departamento de
Biologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Recife, PE.
(2)
RESUMO
Artrite Reumatoide (AR) é uma doença autoimune e crônica. Sua principal característica é a inflamação da
membrana sinovial e formação do pannus. A Interleucina-6 (IL-6) é uma citocina pró-inflamatória que
desempenha importante papel nos processos imunes. Pesquisas evidenciam que a alta expressão de IL-6 contribui
para a etiopatogênese da AR. Sabe-se que a expressão gênica pode ser controlada por processos epigenéticos
como, metilação do DNA, modificações nas histonas, e outros. A região promotora do gene IL-6 possui
aproximadamente 19 sítios CpG que podem sofrer metilação e alterar sua expressão. O objetivo do nosso estudo
foi avaliar o perfil de metilação de quatro dinucleotídeos CpG (?628, ?610, ?574 e ?491) do gene IL-6 (Genbank
No.: AY170325-1) e sua relação com o desenvolvimento de AR na população de Pernambuco. Para a realização
dessa pesquisa foi realizado um estudo tipo caso/controle composto por amostras sanguíneas de 30 pacientes com
AR e 30 controles saudáveis atendidos no Hospital Universitário Oswaldo Cruz - PE. Foi realizada a extração de
DNA dessas amostras e conversão das citosinas não-metiladas utilizando bissulfito de sódio. As amostras pósconversão foram submetidas a PCR-MSP (Metilação-Específica) e eletroforese em gel de agarose. Os cálculos
estatísticos utilizados foram Qui-quadrado e Odds Ratio através do programa BioEstat 5.0. Os resultados mostram
que o padrão metilado foi verificado em 76.67% dos pacientes com AR e 40% em indivíduos controles. O perfil
metilado apresentou um aumento significativo da chance de risco de desenvolver AR (OR=4.92; p=0.008).
Sabendo que a IL-6 é pró-inflamatória, esperava-se que o padrão metilado estivesse relacionado à diminuição do
risco de desenvolvimento da AR, devido a possível redução de expressão de IL-6. Contudo, os nossos resultados
indicam o padrão inverso. Dados da literatura indicam que, pela cronicidade da inflamação na AR, o aumento no
nível de metilação pode estar relacionado a maior ativação da DNA metiltransferase (responsável por metilar o
DNA de novo) que busca reduzir a inflamação metilando o DNA dos pacientes com AR. Portanto, pode-se
pressupor que o padrão metilado dos pacientes não está necessariamente ligado a etiologia da AR, porém pode
estar relacionado a uma forma de regulação epigenética para tentar minimizar o processo inflamatório.
APOIO
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).
227
Genética Humana e Médica
EXPRESSÃO DE GENES RELACIONADOS À RESPOSTA IMUNOLÓGICA EM PACIENTES COM
REAÇÕES HANSÊNICAS
Natalia Carine Almeida Conceição1; Meydson Benjamim Carvalho Correa1; Emilly Caroline dos Santos Moraes1;
Gustavo Henrique Correa Soares1; Patrícia Terra Alves2; Douglas Eulálio Antunes3; Isabela Maria Bernardes
Goulart3; Luiz Ricardo Goulart Filho2; Mayara Ingrid Sousa Lima4.
E-mail: [email protected]
(1)
Graduandos de Ciências Biológicas da Universidade Federal do Maranhão; (2)Instituto de Genética e
Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia; (3)Centro de Referência em Hanseníase e Dermatologia Sanitária
(CREDESH/UFU); (4)Departamento de Biologia, Universidade Federal do Maranhão.
RESUMO
As reações hansênicas são episódios inflamatórios agudos que podem ser classificadas em tipo 1 ou 2 e podem se
manifestar durante o período de tratamento do paciente ou até mesmo após a cura. Receptores fazem o
reconhecimento dos patógenos durante a infecção e agem como mediadores imunológicos, como: TLR1 e TLR2 e
ainda, várias citocinas participam da resposta imunológica, principalmente IL-10 e IFNy. Assim, com esse estudo
objetivou-se comparar o perfil de expressão de genes relacionados com a resposta imunológica em um grupo de
pacientes não reacionais e reacionais, a fim de avaliar se existe expressão diferencial desses genes. Para isso,
foram obtidas amostras sanguíneas de 26 pacientes (12 não reacionais-NR e 14 reacionais-PR). Na classificação
operacional todos os PR eram multibacilares, já nos NR tinham 3 pauci e 9 multibacilares. No teste de Mitsuda
todos os PR tinham ausência de formação da pápula subcutânea, enquanto os NR eram mais heterogêneos com 5
indivíduos que tinham resposta celular tardia. Foram extraídos o RNA dessas amostras para posterior análise da
expressão dos genes dos receptores TLR1, TLR2 e das citocinas IL-10 e IFNy por PCR em tempo real utilizando
um sistema Taqman®. Os resultados obtidos demonstraram que os TLRs estão diferencialmente expressos nos
pacientes reacionais, utilizando uma analise de quantificação relativa por ΔΔCT e tendo como gene endógeno
GAPDH. A expressão de TLR1 foi maior (p<0,05) no grupo de pacientes reacionais (Média de RQ: 1,60) quando
comparados aos não reacionais (Média de RQ: 1,01), porém não houve diferença significativa ao comparar os
pacientes com reação tipo 1 ou 2. Para o TLR2 houve um aumento estatisticamente significativo (p<0,01) da
expressão desse gene no grupo de pacientes reacionais (Média de RQ: 1,54) quando comparado aos não reacionais
(Média de RQ: 0,56). Após a estratificação do grupo reacional, observou-se que a maior (p<0,05) expressão de
TLR2 era encontrada nos pacientes com reação tipo 2 (Média de RQ: 1,69). Já IL10 e IFNy não apresentaram
expressão significativamente diferenciada entre os grupos. Para IL10 a RQ no PR foi de 0,68 enquanto que nos
NR foi 1,07 (p= 0,4012). E para IFNy o PR teve uma RQ de 0,44 e os NR foi 0,78 (p= 0,0806). Podemos concluir
que existe a expressão diferencial de TLR1 e TLR2 em pacientes reacionais com hanseníase, e com isso é possível
utilizar o nível de expressão desses genes como biomarcadores.
228
Genética Humana e Médica
FINDING NEW PRIMARY RESISTANCE MUTATIONS OF HIV INTEGRASE GENE ON NAIVE
PATIENTS.
Heitor Horlando Sampaio Araujo da Silva1; Madson Allan de Luna Aragão1; Ronald Moura2; Lucas Brandão3;
Sergio Crovella2; Wlisses Henrique Veloso de Carvalho da Silva2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami; (2)Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami, Departamento de
Genética; (3)Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami, Departamento de Patologia
RESUMO
INTRODUCTION: The Human Immunodeficiency Virus (HIV) it's an immunodeficiency was described two
years before the discovery of the AIDS, Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS), which is characterized by
progressive destruction of Lymphocytes TCD4+. The Highly Active Anti-Retroviral Therapy (HAART) in the last
decade provides a better treatment for the patients, reducing the mortality by HIV. For the best treatment with the
HAART it is important to catalogue the resistance mutations. Integrase consists in a protein with three domains
including one catalytic domain that performs the viral integration in the host DNA. The integrase inhibitors (IN)
such as Raltegravir, Elvitegravir and Dolutegravir bind to the catalytic domain, inhibiting the enzyme activity.
Occasionally, mutations on HIV genetic material happens to confer resistance to certain types of drugs which
affects directly the efficacy of the treatment. OBJECTIVE: Cataloging the resistance mutations to discovery what
drugs involved in the HAART of a patient are susceptible to these mutation, thus improving the treatment to
minimize the rate of resistance mutations. METHODOLOGY: We obtained HIV sequences of naïve patients from
HIV Los Alamos database and used Gene Cutter to isolate the Integrase gene. Using Adegenet 2.0 R package, we
listed all mutations and calculated their frequencies. The Stanford HIV Drug Resistance database provide a tool to
analyse the mutation and verify which variants indeed present drug resistance. RESULTS: We obtained 14
mutations (D25E; F100Y; V112T; Q136K; I234L; D278A; G283S) by tracing a threshold on the graphic, getting
the most frequency of the mutations, starting with this, we verify the frequency of this mutations than we compare
with the Stanford DB to discovery what drug is susceptible to the mutation. CONCLUSION: We know that all
Antiretroviral drugs causes a high rate of mutations, discovering new mutations we be able to indicate the right
drug for the patient.
APOIO
CNPq
229
Genética Humana e Médica
GENETIC ASSOCIATION BETWEEN IL1β POLYMORPHISM WITH A LOWER SUSCEPTIBILITY
TO PHOTOSENSITIVITY IN SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS PATIENTS
Madson Allan de Luna Aragão1; José Eduardo Adelino Silva2; Heidi Lacerda Alves da Cruz3; Alessandra
Pontillo4; Sergio Crovella2; Jaqueline de Azevêdo Silva2; Paula Sandrin Garcia2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratory of Immunopathology Keizo Asami - LIKA/UFPE; (2)Department of Genetics - UFPE, Laboratory of
Immunopathology Keizo Asami - LIKA/UFPE; (3)Department of Genetics - UFPE; (4)Department of Immunology
- USP
RESUMO
INTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized by loss of
immune tolerance and production of autoantibodies, leading to inflammation and tissue damage. SLE has a strong
genetic component affecting multiple organs and occurs in genetically predisposed individuals who are exposed to
environmental or stochastic stimuli, such UV light, which can lead to photosensitivity (PS). PS is one the most
common clinical manifestations of SLE, affecting about of 70% of patients with the disease. Interestingly, UV
light upregulates IL1β, a potent proinflammatory cytokine expressed in keratinocytes, contributing to PS in SLE
patients. OBJECTIVE: Since Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) can alter the expression or function of
genes, it is important to assess if SNPs within IL1β is associated with SLE photosensitivity. The aim of this study
was to analyze SNPs within IL1β and correlates the association of the composite genotype with the PS in SLE.
METHODOLOGY: A total of 85 SLE/PS+ patients and 154 healthy individuals from State of Pernambuco, Brazil,
were recruited for the current study. The genomic DNA was extracted from peripheral blood samples using the
Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega). Genotyping was performed for the selected SNP rs1143643
[C>T] using TaqMan® probes on Real-Time PCR using ABI-7500 (Applied Biosystems). The statistical analyses
were performed using Fisher' Exact Test in R software (considering p-value < 0.05). All genotype frequencies
were in Hardy-Weinberg equilibrium for SLE patients and controls groups. RESULTS: We found an association
between TT genotype and a lower susceptibility to PS in SLE patients (OR = 0.028; CI = 0.02 - 0.96; p-value =
0.028). CONCLUSION: According our results, TT genotype of SNP rs1143643 confers a genetic advantage by
contributes to a lower susceptibility to PS in SLE patients.
APOIO
FACEPE - Foundation for Science and Technology of Pernambuco; CAPES - Coordination for the Improvement
of Higher Education Personnel; CNPq - National Council for Scientific and Technological Development.
230
Genética Humana e Médica
HIGH LEUKOCYTE MITOCHONDRIAL DNA CONTENT IN SICKLE CELL DISEASE
Guilhermy Victor Sousa de Araujo1; Juan Luiz Coelho Silva1; Diego Antonio Martins Pereira1; Pedro Luiz de
França Neto1; Aderson Silva Araujo2; Ana Claudia dos Anjos2; Marcos Andre Cavalcanti Bezerra1; Antonio
Roberto Lucena de Araujo1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Fundação HEMOPE
RESUMO
A series of epidemiological evidence suggest that mitochondrial DNA (mtDNA) content variations in peripheral
leukocytes can be used as a biomarker to predict the impact of cellular stress. Additionally, several studies have
been show that aberrations in mitochondrial redox signaling and bioenergetics in Sickle Cell Disease (SCD)
contributing to worse clinical outcome in this diseases. Therefore, it is conceivable that variations in mtDNA
content may act as a signaling of differential clinical course in SCD. Here, we evaluated the mtDNA content in
peripheral leukocytes from patients with SCD and healthy donors. Four hundred forty patients with SCD (279
patients HbSS, 88 HbSC and 73 Sb thalassemia) with median age: 30 years (5-77 years and 224 male) were
included. For comparisons, we included 154 healthy donors (HbAA) with no history of hematological disease.
mtDNA content as determinate using qPCR. Briefly, CytB gene was used to represent the mtDNA, and PK1 gene
was used to represent the nuclear DNA. Relative mtDNA copy numbers were assessed after CytB normalization
by the single-copy nuclear gene PK1. First, we analyzed the mtDNA content from patients with SCD. Both SS and
SC-genotyped patients presented higher mtDNA content compared to healthy donors (P<.0001). We next showed
that the Sb+mild thal patients had a lower mtDNA content compared to Sb+severethal and Sb0 thal (P=.004). We
divided all SCA patients into median value of mtDNA content to compare their clinical and laboratory features.
Patients with low mtDNA content exhibited significantly shorter overall survival (OS) (48 years, 95% confidence
interval (CI):45-50 years) than patients with high mtDNA content (58 years, 95%CI:56-60 years) (P=.013). The
multivariate analysis revealed that low mtDNA content was independently associated with shorter OS (HR:3.4,
95%CI:1.3-8.9; P=.012), considering leukocytes count, Hb levels and cholelithiasis as confounders. Of interest,
mtDNA content levels were associated with lower Hb levels and higher hemolysis serum markers (reticulocyte
count and indirect bilirubin) in Sb thalassemia patients (P<.05). To our knowledge, this study was the first to
evaluate the mtDNA content in patients with SCD and to link these findings to clinical outcome. Although the lack
of functional assays in sickle erythroid precursors constitute the main limitation of our study, we provided the first
evidence that mtDNA content was differentially distributed in SCD-genotype leukocytes.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico.
231
Genética Humana e Médica
INFLAMMASOME GENES POLYMORPHISMS AND EXPRESSION PROFILE IN BRAZILIAN
PATIENTS WITH RHEUMATOID ARTHRITIS
Catarina Addobbati1; José Eduardo Adelino1; Thiago Sotero Fragoso2; Alexandre Domingues3; Angela Luiza
Branco Pinto Duarte3; Renê Donizeti Ribeiro Oliveira4; Paulo Louzada Júnior4; Eduardo Antônio Donadi4;
Alessandra Pontillo5; Jaqueline de Azevedo Silva1; Sergio Crovella1; Paula Sandrin Garcia1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco; (2)Serviço de Reumatologia, Universidade
Federal de Alagoas; (3)Divisão de Reumatologia, Universidade Federal de Pernambuco; (4)Divisão de Imunologia
Clínica, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo; (5)Departamento de Imunologia,
Universidade de São Paulo
RESUMO
Rheumatoid arthritis (RA) is an inflammatory and autoimmune disease characterized by joint commitment and
chronic inflammation with exacerbated IL-1β production.The genetic component has a pivotal role in RA etiology
with several genes contributing to immune balance breakdown.IL-1β secretion is induced by the activation of
inflammasomes, which are multiprotein complexes capable of promoting processing and maturation of IL1β.Polymorphisms and differential expression of inflammasome have been associated with in?ammatory diseases,
such as Systemic Lupus Erythematosus and hereditary periodic fever, as well as RA.In the present study, we
analyzed 13 single nucleotide polymorphisms within 6 in?ammasome genes (NLRP1, NLRP3, NLRC4, AIM2,
CARD8, CASP1) as well as IL1B and IL18 genes in two different Brazilian populations (from Northeast and
Southeast Brazil).We also evaluated inflammasome genes expression profile in resting and LPS+ATP-treated
monocytes from RA patients and healthy individuals. For genotyping study, 218 RA patients and 307 healthy
controls were genotyped. For gene expression study, inflammasome genes mRNA levels of 12 RA patients and 10
healthy individuals were assessed by RT-PCR. Our results showed that rs10754558 NLRP3 and rs2043211
CARD8 polymorphisms are associated with RA development (p-value=0.044, OR=1.772, statistical power=0.999)
and severity measured by HAQ (Health assessment questionnaire) (p-value=0.03), respectively. Gene expression
analyses showed that RA patients display a chronic activation of CASP1, IL1B and IL1R genes independently of
LPS+ATP activation. In LPS+ATP-treated monocytes, NLRP3 and NLRC4 expression was also significantly
higher in patients compared with controls. Our results, the first reported in Brazilian populations, support the role
of inflammasome in the development of RA.
APOIO
This work was supported by the following Brazilian funding agencies: CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento
de Pessoal de Nível Superior), CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico),
FAPESP (Fundação Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo) and FACEPE (Fundação de Amparo à Ciência e
Tecnologia de Pernambuco).
232
Genética Humana e Médica
INFLUENCE OF SOD2 VAL16ALA POLYMORPHISM ON STROKE DEVELOPMENT IN A SICKLE
CELL ANEMIA BRAZILIAN POPULATION
Igor de Farias Domingos1; Diego Antonio Pereira Martins1; Rayssa Leal Borges de Medeiros1; Diego Arruda
Falcão1; Betânia Lucena Domingues Hatzlhofer1; Taciana Furtado Mendonça Belmont2; Maria do Socorro
Mendonça Cavalcanti2; Anderson Ferreira Cunha3; Renata Cunha Azevedo4; Aderson da Silva Araujo4; Antonio
Roberto Lucena de Araujo1; Marcos André Cavalcanti Bezerra1.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics, Centre of Biological Sciences, Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil;
Department of Medical Sciences, University of Pernambuco, Recife, Brazil; (3)Department of Genetics and
Evolution, Federal University of São Carlos, São Carlos, Brazil; (4)Department of Internal Medicine, Hematology
and Hemotherapy Foundation of Pernambuco, Recife, Brazil
(2)
RESUMO
The National Heart, Lung, and Blood Institute recommendations represent the gold standard for stroke prevention
in sickle cell anemia (SCA); however, they are restricted for children and adolescents with SCA. Therefore,
cerebrovascular disease in adults with SCA continue to be a major cause of morbidity and mortality, with no
evidence-based strategy for prevention. SCA patients are susceptible to increased oxidative stress due to the
constant hemolysis of sickle red blood cells, and it has been suggested that some genetic factors related to
oxidative stress could influence the development of cerebrovascular disease. Here, we genotyped SOD2 Val16Ala
(rs4880) and evaluated the possible prognostic impact in a large series of SCA adults with well-defined stroke
phenotypes. One hundred and ninety-eight patients were followed in a single reference center in northeast Brazil.
Ischemic stroke was defined as a regional loss of cerebral blood flow due to stenotic or occluded cerebral
vasculature, as subsequently confirmed by imaging exams. Genomic DNA from peripheral blood was extracted by
phenol-chloroform extraction. SOD2 Val16Ala (rs4880) polymorphism was detected by real-time PCR using the
TaqMan assay (Applied Biosystems), according to the manufacturer's instructions. Fisher's exact test or Chisquare test, as appropriate, were used to compare categorical variables. Cumulative incidence curves were
constructed reflecting time to stroke development as competing risks, with the Gray test used for comparison of
curves. All P-values were two sided with a significance level of 0.05. Of 198 unrelated SCA adults, 21 patients
presented ischemic stroke during adulthood. Genetically, patients with the homozygous TT genotype of SOD2
Val16Ala presented a lower risk of developing stroke risk (odds ratio [OR]: 0.22; 95%CI: 0.05 to 0.96; p = 0.042).
Additionally, the cumulative probability of stroke was significantly lower for patients with the SOD2 TT genotype
(12%), compared to patients with the SOD2 TC + CC genotypes (44%), (p < 0.043). In summary, our findings
indicate that the SOD2 Val16Ala polymorphism is associated with the prevalence of stroke in our SCA population.
Other studies in a different population of SCA are needed to determine the true relevance of our findings.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq: Grant #483714/2013-5)
233
Genética Humana e Médica
INHERITANCE OF THE BANTU/BANTU HAPLOTYPE CAUSES MORE SEVERE HEMOLYSIS AND
INFLAMMATORY RESPONSE IN CHILDREN WITH SICKLE CELL ANEMIA DIAGNOSED
THROUGH THE NEWBORN SCREENING PROGRAM
Alberto de Lima Xavier1; Thais Helena C Batista1; Rodrigo M Santana1; Marianny F T Pacheco1; Gabriela da
Silva Arcanjo1; Gabriel Maia dos Santos1; Jessica Maria F Oliveira1; Aderson S Araújo2; Antonio Roberto
Lucena Araujo3; Diego A Pereira Martins1; Marcos A C Bezerra3.
E-mail: [email protected]
(1)
Centro de Biociências - Universidade Federal de Pernambuco, Recife-PE, Brasil; (2)Fundação HEMOPE, RecifePE, Brazil; (3)Centro de Biociências - Universidade Federal de Pernambuco, Recife-PE, Brasil; Fundação
HEMOPE, Recife-PE, Brazil
RESUMO
Introduction: Sickle cell anemia (SCA) has great clinical and epidemiological importance, being considered a publ
ic health problem in Brazil.
Characterized by homozygous hemoglobin S (HbSS, HBB: c.20A->Trs334) which causes two major pathophysiological processes: hemolysis
and vasoocclusion. However, the response varies greatly between SCA patients, and the mechanisms involved have not bee
n fully elucidated.
Large genome association studies suggested that genetic modulators, including the haplotypes associated with the
beta S-globin gene cluster
(bShaplotypes), may be involved in the different clinical outcome, particularly by genetic regulation of fetal hemoglo
bin levels.
Objectives: Here, we evaluated the clinical impact of bShaplotypes in patients with SCA, diagnosed and followed by a newborn screening
program (NSP) in single reference center from Pernambuco, Brazil.
Materials and Methods: One hundred fifty eight SSgenotyped patients were enrolled. The median age was 9 years (range: 3-16 years),
with 80 males (51%). The last update occurred in March 2016. The main clinical complications described in patien
ts with SCA and laboratory
profile were obtained from medical records. The characterization of bShaplotypes was determined by polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism as previously described (Domingos I. F. et al, 2014). Results: According
to bShaplotypes distribution, 94/158 patients (60%) carried the Bantu/Bantu haplotype, while 64/158 (40%) presented
the non-Bantu/Bantu haplotype (including Benin, ArabIndian, Cameroon and other different combination for the polymorphic sites, called
Atypical haplotypes). We next showed that patients with Bantu/Bantu haplotypes had higher levels of hemolysis m
arkers: total (P=0.01) and
indirect bilirubin (P=0.004), hemoglobin levels (P=0.02) also compared with nonBantu/Bantu patients. A marginal association has been showed
in reticulocytes levels, however no statistical association has been found (P=0.06). Finally, patients with Bantu/Ba
ntu haplotypes had higher
leukocytes count (P=0.03), suggesting a higher inflammatory process.
Conclusions: According to our findings, we believe that the hemolytic and inflammatory markers evaluated in this
study were influenced by
the Bantu/Bantu haplotype combination. We suggest that differences in the polymorphic sites are the key element t
o understanding the modulation of haplotypes in respect to the phenotypic expression of SCA patients.
APOIO
CNPq
234
Genética Humana e Médica
INTERAÇÃO DE COMPLEXOS DE RUTÊNIO COM DNA/BSA E INDUÇÃO A MORTE DE CÉLULAS
CANCERÍGENAS
Israel Higino de Sousa1; Linajanne Borges Muniz1; Vera Lucia Maciel Silva2; Ana Paula Silva de Azevedo dos
Santos1; Marcio Aurelio Pinheiro Almeida1; André Alvares Marques Vale1; Antonio Augusto Lima Teixeira
Junior1; Silma Regina Ferreira Pereira1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFMA; (2)UEMA
RESUMO
Segundo o INCA (Instituto Nacional de Câncer José Alencar Gomes da Silva), o câncer é definido como um
conjunto de mais de 100 doenças, tendo em comum o crescimento desordenado de células que invadem tecidos e
órgãos, podendo espalhar-se para outras regiões do corpo (metástase). A cisplatina e seus análogos são utilizados
no tratamento de diversos tipos de neoplasias malignas atualmente, há limitações neste uso, devido,
principalmente, à toxicidade a células normais e à ineficácia em relação a alguns tipos de câncer. Devido a isso, há
procura por novas drogas, com efeitos de tratamento superiores ou até similares a cisplatina, mas que não possuam
as limitações citadas anteriormente. Nesse sentido, os compostos contendo o metal rutênio têm demonstrado serem
drogas em potencial para uma possível substituição dos compostos de platina utilizados atualmente, devido às suas
boas capacidades terapêuticas e menores taxas de toxicidade para células normais. Este trabalho buscou avaliar as
propriedades de complexos de rutênio associados a aminoácidos e suas ações citotóxicas em linhagens celulares
cancerígenas (DU-145, câncer de próstata) e normais (RAW, macrófago imortalizado; MRC-5, fibroblasto;
leucócitos), assim como suas interações com biomoléculas (BSA, albumina sérica bovina) e DNA, para melhor
entendimento da ação destes compostos, utilizando as seguintes técnicas: MTT, Teste do Cometa, Titulação por
espectroscopia. Na interação de BSA com compostos de rutênio, observou-se essa interação do centro metálico
deste composto com o resíduo de triptofano da albumina. Já a interação DNA resultou em fragmentação do
material genômico. De modo sumário, os resultados obtidos nesta pesquisa mostraram que complexos de rutênio
(II) contendo os aminoácidos prolina e treonina em suas estruturas têm grande potencialidade para uso como
agentes de combate a células cancerígenas, mostrando baixa citotoxicidade relacionada a células normais.
Contudo, outros estudos serão necessários para confirmar os achados em outras linhagens celulares. Uma vez
realizados, e confirmados os resultados positivos, abrir-se-á uma nova oportunidade terapêutica para milhares de
pacientes oncológicos que atualmente sofrem com os efeitos colaterais ou até a ineficácia de seus tratamentos.
APOIO
FAPEMA, CNPq
235
Genética Humana e Médica
MIELOFIBROSE COM METAPLASIA MIELOIDE EM PACIENTE PEDIÁTRICO- UM RELATO DE
CASO.
Maria Luiza Rocha da Rosa Borges1; Izabelle Aguiar Pereira2; Eliane Maria Soares Ventura3; Maria Teresa
Marquim Nogueira Cornélio2; Edinalva Pereira Leite3; Marcos André Cavalcanti Bezerra4; Terezinha de Jesus
Marque Salles3.
E-mail: [email protected]
(1)
Faculdade de Ciências Médicas da Universidade de Pernambuco, Recife/Brasil; (2)Instituto de Ciências
Biológicas, Universidade de Pernambuco, Recife/Brasil; (3)Centro de Oncohematologia Pediátrica, Hospital
Oswaldo Cruz; (4)Universidade Federal de Pernambuco, Recife/Brasil
RESUMO
Introdução: A mielofibrose primária é uma neoplasia mieloproliferativa crônica caracterizada por uma fibrose
medular (aumento de fibra de reticulina e/ou colágeno), que resulta em hematopoese extramedular, citopenias,
desvio leucoeritoblástico e hepatoesplenomegalias. Os principais sintomas clínicos são febre, fadiga, suor noturno,
dor óssea, perda de peso. A incidência da mielofibrose em adultos é de 0,2 - 1,5 casos por 100.000 habitantes. Em
crianças ela é muito rara, existindo cerca de 47 casos publicados em literatura. Este trabalho descreve um caso de
um pre escolar com mielofibrose primária no CEONHPE/HUOC/UPE, através de pesquisa realizada entre os anos
de 2004 e 2016. Todas as informações clínicas e laboratoriais foram retiradas prontuário médico. O estudo
citogenético incluiu o bandeamento G e a técnica de FISH. Relato de caso: Paciente do sexo masculino, um ano de
idade, deu entrada no CEONHPE/HUOC/UPE com febre, palidez e dor abdominal. Ultrassonografia mostrou
esplenomegalia gigante que ocupava todo o abdômen. Seu hemograma mostrou: Hb: 7,6 g/dl; Leuc: 2.330
mil/mm3; plaq: 44.000 fl/L. A hematoscopia havia hemácias em lágrima, eritroblastos e desvio até mielócitos.
Mielograma revelava MO com hiperplasia, deseritropoese importante, muitas mitoses atípicas, cariocinese dos
eritroblastos, proliferação moderada de elementos imaturos de linhagem granulocítica e de elementos
monocitóides jovens. A biopsia da Medula óssea mostrou MO hipercelular com predomínio do setor granulocítico
e monocítico e importante fibrose de reticulina. O cariótipo foi 46,XY. O FISH usando as sonda CEP7/q32 Vysis,
MLL break apart, Vysis e CBFB Break Apart, Vysis, não apresentou anormalidades. O paciente foi diagnosticado
com mielofibrose primária, inicialmente tratado com hemocomponentes e posteriormente com purimethol e araC
em baixas doses, o paciente faleceu com quadro de infecção e sangramento, aguardando o transplante de MO.
APOIO
CAPES
236
Genética Humana e Médica
MODULAÇÃO DO PERFIL PROTEICO DE MACRÓFAGOS COM O ANTÍGENO RECOMBINANTE
SAGDELL DE TOXOPLASMA GONDII
Thaíse Anne Rocha dos Santos1; Jamilly Azevedo Leal Sena2; Jair Pereira da Cunha Junior3; Jane Lima dos
Santos4; Carlos Priminho Pirovani5.
E-mail: [email protected]
(1)
Discente do Mestrado em Genética e Biologia molecular UESC; (2)Doutora em Genética e Biologia Molecular
UESC; (3)Pesquisador da UFU; (4)Docente do curso de Ciências biológicas DCB/UESC; (5)5Docente do curso de
Ciências biológicas e orientador deste projeto
RESUMO
A toxoplasmose é uma doença sistêmica infecciosa causada pelo protozoário intracelular, o Toxoplasma gondii. A
infecção é amplamente difundida em animais e humanos, apresentando grande importância médica e
agroeconômica. Proteínas recombinantes de T. gondii, têm sido utilizadas em diversos modelos experimentais
envolvendo a caracterização imune e diagnóstico da patologia. Uma versão da proteína SAG2A foi clonada e
expressa em Escherichia coli na versão truncada SAG2ADell, correspondente à molécula faltando o epítopo
NDGSSA. Sendo assim, neste trabalho foi avaliado o perfil proteico de células da linhagem de camundongos
BALB/c, após serem submetidas ao contato com a proteína SAG2ADell visando à avaliação quanto ao seu
potencial de indução de imunidade de mucosa e produção de vacinas orais. O perfil proteico das células foi
avaliado por meio de eletroforese em géis uni e bi dimensionais, seguidos pela avaliação dos peptídeos por
espectrometria de massas e análise de similaridade in sílico, utilizando o programa Mascote (com banco de dados
para camundongo) para identificar as proteínas encontradas e o programa Blastogo para identificar os processos
biológicos em que essas proteínas estão envolvidas. Foram detectados 336 matches (combinação entre o grupo
controle e o grupo tratado) dos quais, 147 spots foram exclusivos do controle, 90 spots exclusivos do tratamento e
99 spots em comum entre controle e tratado, sendo 14 proteínas identificadas até o presente momento. Dentre as
quais destacam-se as proteínas Ras-like e ChK1, que tiveram sua expressão inibida significativamente no
tratamento com SAG2ADell em relação ao controle. Estudos demonstram que essas proteínas têm como funções
principais a transmissão de sinais e reparo de danos ao DNA, respectivamente, e, ambas o estão envolvidas em
processos de sinalização celular. Uma imunoglobulina de cadeia pesada foi expressa após o tratamento, estando
envolvida na resposta imune humoral. Estes dados sugerem que a SAG2ADell possui um possível potencial como
antígeno indutor de resposta imune, podendo ser utilizado como candidatos a vacinas orais contra a toxoplasmose.
APOIO
Cnpq
237
Genética Humana e Médica
MYD88 SNP RS6853 IS NOT ASSOCIATED WITH RHEUMATOID ARTHRITIS SUSCEPTIBILITY
AND TNFα LEVELS
José Eduardo Adelino Silva1; Camilla Albertina Dantas de Lima1; Patrícia D'emery Alves dos Santos2; Matheus
da Silva Mesquita2; Wlisses Henrique de Carvalho Veloso da Silva1; Maria Helena Queiroz de Araújo3; Eliézer
Rushansky3; Sérgio Crovella1; Jaqueline de Azevêdo Silva1; Paula Sandrin Garcia1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil; (2)Laboratório de
Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil; (3)Centro de Infusão de
Imunobiológicos, Hospital Oswaldo Cruz, Universidade de Pernambuco, Recife, Brasil
RESUMO
INTRODUCTION: Rheumatoid Arthritis (RA) is a multifactorial and autoinflammatory disorder characterized by
synovitis, joints and cartilage damage. RA pathogenesis involves genetic, environmental and immunologic factors.
Myeloid differentiation primary response gene 88 (MYD88) is an adapter protein activated by Toll-like receptors
pathway (TLRs) and promotes transcription of tumor necrosis factor alfa (TNFα), a potent proinflammatory
cytokine that promotes the degradation of bone and cartilage in RA patients. Single Nucleotide Polymorphisms
(SNPs) are genetic variants that can alter the expression or function of several genes, may thus be involved in the
RA development or progression. OBJECTIVE: In this context, this study had two aims: evaluate if SNP rs6853
[A>G] is associated with RA susceptibility and also assess if this SNP can alter TNFα levels. METHODOLOGY:
A total of 126 RA patients were recruited at Oswaldo Cruz Hospital, Pernambuco University. Genotyping was
performed using Real Time PCR in ABI 7500 platform (Apllied Byosistems) to evaluate the SNP rs6853 located
at 3'UTR region of MYD88 gene. Genotype-guided levels of TNFα were assessed using CBA (Cytokine Bead
Array) in FACSCalibur Flow Cytometry (BD Biosciences). Statistical analyses were perfomed using Anova Test
and Binary Regression Logistic in SPSS Program, considering p.value<0.05. RESULTS: No association was
observed between SNP rs6853 and the susceptibility to RA (OR=0.79; CI: 0.45 - 1.21; p.value = 0.87). We also do
not found any association between the studied SNP and TNFα levels (p.value = 0.731). CONCLUSION: The SNP
rs6853 within MYD88 gene is not associated with RA susceptibility and do not alters TNFα levels, in this studied
population
APOIO
CNPq and FACEPE
238
Genética Humana e Médica
NOVEL VSX1 AND SOD1 MUTATIONS IN ADVANCED BRAZILIAN KERATOCONUS PATIENTS
Rafaela G. da Silva1; Alex F.b. Feitosa1; Dulceria C. Silva1; Matheus A. de Oliveira1; Matheus C. Muniz1; Diego
N.b. Gadelha1; Bruno L.f. Schamber Reis*1.
E-mail: [email protected]
(1)
UniFacisa/Campina Grande
RESUMO
ABSTRACT:Introduction: Keratoconus is a progressive non-inflammatory deformation of cornea, affecting about
5% of population. When untreated, the disease can lead to severe astigmatism and blurred vision, leading to vision
loss. While environmental factors have been identified in keratoconus, numerous genetic mutations have been
associated with the disease. However, no genetic data was obtained for Brazilian population.Purpose: To perform
mutational screening in VSX1 and SOD1 genes in patients diagnosed with advanced stage of
keratoconus.Methods: Keratoconus patients were recruited at the ophthalmic division of School of
Medicine/UNIFACISA (Campina Grande/PB) and submitted to corneal topographic examination. Clinically
advanced patients matched inclusion criteria defined by KISA and I-S index values greater than 1000% and 2.0.
respectively, in at least one of the eyes. For mutation screening, VSX1 and SOD1 coding regions were
individually PCR-amplified from genomic DNA extracted from peripheral patient's blood and sequenced on an
ABI3130 platform using BigDye v3.1. Eventual missense and nonsense mutations were identified by comparing
sequences with ancestral sequences using ClustalW, and amino acid change impact with PMUT and Poly-Phen2
online tools.Result: Twenty-six patients were enrolled in this study. Average KISA and I-S values for the right eye
were 927.4% (±124.0) and 7.4 (±0.6) respectively; for the left eye, we found 1259% (±235.4) and 5.9 (±0.7). The
average age of patients was 47 years (±4), including males and females. Sequencing of VSX1 showed a change of
aspartate to glutamate at position 105 (D105E) on exon 1 in one patient. No VSX1 mutations were found in
controls. Scores for PMUT (0.66) and Poly-Phen2 (0.99) analysis suggested that this mutation is probably
damaging to VSX1 protein. Mutation D105E wasn't previously described in literature. In addition, two
synonymous changes (S6S and P79P) were found in two other patients and absent in controls, although its
involvement on disease development is still unclear. No mutations were found in SOD1 coding sequence in both
affected and normal volunteers.Conclusion: Mutation D105E in VSX1 gene can be potentially linked to
keratoconus pathogenesis. Additional patients will be recruited for genotyping, as well as verification of mutation
frequency in non-affected individuals. Further analysis is required to validate D105E mutation in this disease
aiming early diagnosis and treatment.
239
Genética Humana e Médica
PACIENTE COM HETEROZIGOSE PARA AS MUTAÇÕES DO FATOR V LEIDEN, PROTROMBINA
MUTANTE E METILENO: RELATO DE CASO.
Filipe Fonseca Borges1; Ilana de França Azevedo2; Andreza Pâmela Vasconcelos1; Bruno Luiz Gomes de
Albuquerque Conceição1; Fárida Coeli de Barros Correia Melo3; Washington Batista das Neves3; Raul Antônio
Morais Melo4.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE, Recife, Brasil.; (2)Universidade de Pernambuco - UPE, Recife,
Brasil.; (3)Fundação de Hematologia e Hemoterapia de Pernambuco - Hemope, Recife, Brasil.; (4)Universidade de
Pernambuco - UPE, Recife, Brasil. Fundação de Hematologia e Hemoterapia de Pernambuco - Hemope, Recife,
Brasil.
RESUMO
Introdução: O risco individual de trombose resulta da interação de vários fatores genéticos e ambientais. A
Trombofilia Hereditária (TH) refere-se à tendência geneticamente determinada para o desenvolvimento de
trombose. A TH decorre de mutações nos genes que codificam proteínas de coagulação e anticoagulantes naturais.
A mutação do Fator V de Leiden (R506Q) é a causa genética mais comum de TH, seguida da Protrombina
Mutante (G20210A). O papel da mutação da Metileno (C677T) na TH é controverso. O presente relato ilustra a
relação entre essas mutações em heterozigose com a ocorrência de eventos trombóticos em paciente jovem.
Relato: JME, 38 anos, masculino foi encaminhado ao Hemope em 2003 com edema em membro inferior e
histórico de trombose venosa profunda fazia três anos. Na ocasião foi anticoagulado e manteve o uso da warfarina
por seis meses. O paciente era vigilante, permanecia muito tempo em pé, e negava tabagismo. Em 2006, foi
internado em outro hospital com tromboembolismo pulmonar e o tratamento anticoagulante reiniciado. O
monitoramento pelo INR foi realizado para ajuste de dose do medicamento, mas, o paciente foi perdido de vista.
Em fevereiro de 2016, o paciente retorna ao Hemope por suspeita de arbovirose. Os testes moleculares para TH
foram realizados pela técnica qPCR para discriminação alélica e detectada heterozigose para as mutações R506Q,
G20210A e C677T. A anticardiolipina, homocisteína e antitrombina foram normais. Um filho do paciente
apresentou heterozigose dupla para R506Q e G20210A. Discussão: A ação sinérgica das mutações encontradas
pode explicar os quadros de trombose do paciente nesta faixa etária. Também, os resultados alertam para o risco
de novos eventos semelhantes e a necessidade de anticoagulação contínua. A dupla heterozigose do filho sugere
acompanhamento médico e extensão do estudo familiar para rastrear trombofílicos assintomáticos.
APOIO
FACEPE
240
Genética Humana e Médica
PERFIL POPULACIONAL DO DISTÚRBIO DE ESPECTRO AUTISTA EM UMA INSTITUIÇÃO
ESPECIALIZADA DE SALVADOR-BA
Vinícius Magalhães Borges1; Érica Alcântara Vieira1; Marise Souza Barbosa1; Lília Maria de Azevedo Moreira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal da Bahia
RESUMO
O Distúrbio do Espectro Autista (DEA) é uma alteração do desenvolvimento caracterizada por anormalidades
abrangentes em três domínios: (1) interação social recíproca, (2) comunicação e (3) presença de um repertório
comportamental de interesses restritos, repetitivo e estereotipado. Este distúrbio encontra-se inserido nos
Transtornos Globais do Desenvolvimento e apresenta causa multifatorial, estimando-se que 90% deva-se a fatores
genéticos. Os estudos sobre o DEA são ainda escassos, embora em número crescente. Pesquisas realizadas na
última década forneceram dados de prevalência, distribuição por sexo e de múltipla ocorrência familiar. Este
trabalho objetivou traçar o perfil populacional de indivíduos autistas, utilizando como instrumento de pesquisa a
análise de dados de 193 indivíduos inscritos em uma instituição dedicada ao autismo em Salvador-BA.
Considerando a totalidade dos indivíduos analisados, verificou-se predominância do sexo masculino com 79,25%
(153) homens e 20,73% (34) mulheres, com taxa de prevalência homem/mulher de 4.5. Recorrência de autismo na
mesma família se fez presente em 6,73% (13) dos casos, comumente primos, verificando-se também autismo em 3
irmãos dizigóticos (1,55%). O número de casos de autismo entre gêmeos monozigóticos foi de 1,03% (2)
enquanto casos de autismo associado à comorbidades corresponderam a 25.38% (49). O autismo associado a
morbidades genéticas foi verificado em 3,10% (6) casos. Enquanto que a taxa de distribuição de autismo
homem/mulher encontrada corrobora com a literatura, que apresenta taxas entre 3.6 até 5.1, a ocorrência de
autismo entre irmãos e gêmeos monozigóticos nas taxas de 1,55% e 1,03% foi diferente da literatura consultada,
cujos valores se apresentam, respectivamente, em 60% e 0%. Os dados de autismo associados à comorbidades não
apresentam valores comparativos na literatura, evidenciando a falta de pesquisas nesta temática. Este estudo faz
parte de um trabalho mais amplo sobre associação de autismo com síndromes genéticas raras e a sua continuidade
poderá trazer novas informações que contribuam para o entendimento do distúrbio de espectro autista.
APOIO
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia, FAPESB.
241
Genética Humana e Médica
POLYMORPHISMS IN THE APOPTOSIS EXTRINSIC PATHWAY GENES AND THEIR
RELATIONSHIP TO IMMUNOLOGICAL RESPONSE OF INDIVIDUALS UNDER
ANTIRETROVIRAL THERAPY
Alves, Neyla Maria Pereira1; Silva, Maria Leonilda Gondin2; Coelho, Antonio Victor Campos3; de Araújo, Paulo
Sérgio Ramos4; Crovella, Sergio5; Brandão, Lucas André Cavalcanti6; Celerino da Silva, Ronaldo5.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco,
Brazil.; (2)Department of Pathology, Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil.;
(3)
Department of Genetics, Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil.; (4)Hospital of Clinics
(HC-UFPE), Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil; (5)Laboratory of Immunopathology
Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil; Department of Genetics,
Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil.; (6)Laboratory of Immunopathology Keizo Asami
(LIKA), Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil; Department of Pathology, Federal
University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil.
RESUMO
The Antiretroviral therapy introduction has changed the Human Immunodeficiency Virus type 1's (HIV-1)
infection history, not being more a fatal disease but a chronic disease. It is able to suppress viral replication to
undetectable levels, thus reducing morbidity and mortality. However, there are some individuals that the
increasing in CD4+ T cell counts to normal levels fails (immunological failure) even with undetectable viral load,
even with good adherence to therapy. Several viral and host factors can be involved in this phenomenon. Viral
infection mechanisms can promote modulation of cell death pathways inducing release of death ligands (TNFα)
and expression of death receptors (TNFR1). These mechanisms can induce both inflammation and cell survival
through common pathway of NF-kB activation, or induce anti-inflammatory molecules recruitment (A20) that
downregulates the NF-kB complex and is able to induce an anti-inflammatory and pro-apoptotic response. Here,
we evaluated the distribution of TNFR1 (rs1800692 and rs767455), A20 (rs22700926), NF-kB (rs8904) and TNF
(rs1800629) SNPs and their relationship to immune recovery of patientes under regular use of Antiretroviral
Therapy. We selected 113 HIV-1 infected individuals who were divided in immunological success (control) or
immunological failure (case) groups, in according with recovery of CD4+ T cells count in one year. All
individuals were recruted in Institute of Integral Medicine Professor Fernando Figueira and genotyped by
fluorogenic allele specifc probes using real time PCR. Our results showed no significant associations between
immunological failure and genetic variants analysed, as well as clinical variants (weight, ethnia, age, gender and
treatment regimen). Although our study did not find association between apoptosis pathway gene SNPs and
immunological failure, further studies, with a larger number of variants and sample size are needed in order to
clarify the real role of these variants in immunological failure in HIV-1 infected individuals under antiretroviral
therapy.
APOIO
CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE.
242
Genética Humana e Médica
POLYMORPHISMS WHITIN NLRP1 ARE NOT ASSOCIATED WITH SYSTEMIC LUPUS
ERYTHEMATOSUS
Guaraná, Wl1; Adelino Silva, Je2; Cruz, Hla3; de Azevedo Silva, J2; Sandrin Garcia, P2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ; (2)Laboratório de
Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ; Departamento de Genética,
Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ; (3)Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco
- Brasil
RESUMO
INTRODUCTION: NLRP1 is an important member of NOD-like receptors (NLR) family that recognizes
molecular patterns derived from pathogens and damaged cells. When occurs activation of this receptor, it can
recruit the adaptor apoptosis-associated speck-like protein with a caspase activation and recruitment domain
(ASC). As a result, the inflammasome complex is formed. The Inflamassome implicated in production of mature
IL-1β, which is an important proinflammatory cytokine involved in Systemic Lupus Erythematosus (SLE)
pathogenesis. Aditionally, several data suggest that imbalanced IL-1β production may affect the risk of developing
SLE. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) are genetic variants that can alter the expression or function of
proteins. Moreover, SLE is multifactorial autoimmune disease with a strong genetic component. OBJECTIVE: In
this context, it is important to assess if polymorphisms in NLRP1 may contribute to SLE susceptibility.
METHODOLOGY: Genotyping was performed using the Taqman® probes C__1600689_10 and C__1600653_10
to analyze the SNPs 2670660 [A>G] (global MAF = 0.39) and rs12150220 [A>T] (global MAF = 0.19). A total of
132 SLE Brazilian patients were recruited at the Division of Rheumatology of Clinical Hospital, Federal
University of Pernambuco, 154 healthy individuals matched for age and sex with SLE patients from the same
geographical area were also enrolled as controls. Fisher's Exact Test was used to evaluate the association between
the polymorphisms and the development of SLE (considering p.value<0.05). All statistical analyses were
performed with R software. RESULTS: No significant differences were found between the studied SNPs
rs2670660 [A>G] (OR = 0.982; CI = 0.68 - 1.41; p.value = 0.982) rs12150220 [A>T] (OR = 0.837; CI = 0.58 1.24; p.value = 0.876) and SLE susceptibility. CONCLUSION: These SNPs within NLRP1 gene are not
associated with SLE susceptibility. Since the products of activation of NLRP1 have an important role in
inflammation, it is necessary investigate other SNPs and also replicate this study is other populations.
APOIO
CNPq and FACEPE
243
Genética Humana e Médica
POST TRANSCRIPTIONAL IMBALANCE INFLUENCE IN JAK-STAT SIGNALING PATHWAY
TRIGGERING INFLAMMATORY DISORDERS IN GESTATIONAL DIABETES
Nathalia Joanne Bispo Cezar1; Jessica Plaça2; Juliana Doblas Massaro1; Claudia Danella Polli1; Wilson Araújo
da Silva Júnior2; Elaine Móises3; Geraldo Duarte3; Eduardo Antonio Donadi1; Celso Teixeira Mendes Junior4.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil; (2)Regional
Blood Center - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil; (3)Department of
Gynecology and Obstetrics - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil;
(4)
Department of Chemistry - Faculty of Philosophy, Sciences and Letters of Ribeirão Preto, University of São
Paulo - Brazil
RESUMO
Gestational diabetes mellitus (GDM) is the most common metabolic disorder found during gestation and has been
defined as an abnormal glucose metabolism ?rst diagnosed during pregnancy. Actually, some microRNAs
(miRNAs) have been described to be differentially modulated in GDM. Since the induction of inflammation genes
in pregnant women with GDM has been elucidate and the transcriptional profile in GDM is very similar to that of
Type 1 diabetes (T1D), as previously observed by our research group, it seems possible that imbalance in post
transcriptional expression may be related to inflammatory disorders in GDM. Therefore, we have searched for
differentially expressed miRNAs in GDM patients and their targets (in silico) related to
immunological/inflammatory response. Large scale miRNA expression was evaluated in 32 GDM patients and in
32 healthy pregnant women using Next-Generation sequencing (MiSeq-Illumina), and differentially expressed
miRNAs between GDM and non-GDM pregnant women was detected using the DESeq2 package
(http://bioconductor.org/biocLite.R).
MiRNAs
targets
were
predicted
by
starBase
v2.0
(http://starbase.sysu.edu.cn/),
mirTARBase
(http://miRTarBase.mbc.nctu.edu.tw/)
and
mirWalk
(http://mirwalk.uni-hd.de/) and enrichment functional analysis was performed by DAVID database
(http://david.abcc.ncifcrf.gov). RNASeq analysis revealed 16 differentially expressed miRNAs between GDM
patients and healthy pregnant women (P < 0.01/ FC > |1.2|). Experimentally validated microRNA-target
interactions (mirTARBase) shows EP300 gene (mediator of classical signaling pathways in diabetes) as target for
hsa-miR-452-5p (down regulated in GDM patients: P = 0.001/ FC = -1.94). Additionally, DAVID functional
analysis revealed EP300 gene participation in JAK-STAT signaling pathway (involved in regulation of
inflammatory processes and obesity development). Although functional analyses are needed, this finding suggests
that the interaction miR-452-5p/EP300 mRNA may influence in JAK-STAT signaling pathway. This correlation
reinforces the hypothesis that inflammation may be associated to imbalance in post transcriptional expression in
GDM, triggering hyperglycemia and insulin sensitivity dysregulation.
APOIO
Financial Support: CNPq and FAPESP
244
Genética Humana e Médica
RARO TRANSCRITO E14A3 DO REARRANJO BCR-ABL1 EM PACIENTE ADULTO COM
LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA:RELATO DE CASO
Bruno Luiz Gomes de Albuquerque Conceição1; Ilana de França Azevedo2; Andreza Pâmela Vasconcelos1; Filipe
Fonseca Borges1; Fárida Coeli de Barros Correia Melo3; Washington Batista das Neves3; Raul Antônio Morais
Melo4.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Universidade de Pernambuco; (3)Fundação de Hematologia e
Hemoterapia de Pernambuco-Hemope; (4)Universidade de Pernambuco/Fundação de Hematologia e Hemoterapia
de Pernambuco-Hemope
RESUMO
Introdução: A t(9;22)(q34;q11) com formação do gene quimérico BCR-ABL1 é encontrada em cerca de 25% dos
casos de Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) no adulto. A depender do ponto de quebra cromossômico esse
rearranjo gênico pode dar origem a vários tipos de transcritos. O mais frequente é o e19a2 relacionado à proteína
p190, raramente encontrado em associação com e14a2, e13a2 ou e14a3, relacionados à p210. O presente relato
descreve o caso de um paciente adulto com LLA-B e presença dos transcritos e19a2 e e14a3. Relato do Caso:
F.S.L., masculino, 34 anos, agricultor com queixas de febre, tosse, palidez e visão turva foi diagnosticado e tratado
no Hospital Hemope. O paciente tinha contato com agrotóxicos, era tabagista, etilista crônico e hepatopata. Ao
exame apresentava epistaxe, petéquias e visceromegalias. O hemograma evidenciou anemia, plaquetopenia e
hiperleucocitose com 94% de blastos. O mielograma apresentava 93% de blastos classificados como do tipo
L1/L2. As análises citoquímicas e imunofenotípicas foram compatíveis com o diagnóstico de LLA-B. A conduta
consistiu de citorredução e tratamento com o protocolo quimioterápico HiperCVAD. O paciente não obteve
remissão hematológica completa e evoluiu com insuficiência renal e respiratória, sangramento pulmonar,
infecções bacterianas e foi a óbito devido a choque séptico após 61 dias de seguimento. O material biológico do
paciente mantido em biorrepositório foi analisado pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase Transcrição
Reversa (RT-PCR) um ano após o seu falecimento quando a técnica RT-PCR foi implantada para detecção de
rearranjos. Os resultados mostraram dupla positividade para o rearranjo gênico BCR-ABL1 com presença dos
transcritos e19a2 (p190) e e14a3 (p210). A pesquisa dos rearranjos ETV6-RUNX1, TCF3-PBX1 e MLL-AFF1 foi
negativa. Discussão: O rearranjo BCR-ABL1 é o mais frequente na LLA do adulto e confere prognóstico ruim. Ele
é ainda mais desfavorável com o transcrito e14a3, o mais raro. Assim, a falta de resposta ao tratamento pode ser
explicada pela não efetividade das drogas frente às alterações genéticas encontradas. Atualmente o tratamento
inclui quimioterapia, agentes inibidores da tirosinoquinase e transplante. Os antecedentes de doença hepática
devem ter contribuído para o desfecho. O relato mostra a importância da identificação de marcadores moleculares
prognósticos para orientar tratamentos alvo-dirigidos e melhorar a sobrevida de pacientes adultos com LLA.
APOIO
FACEPE
245
Genética Humana e Médica
RASTREIO DE DOENÇAS GENÉTICAS NO MUNICÍPIO DE MONTE SANTO-BA
Danniel Sann Dias da Silva1; Polyanna Carozo de Oliveira2; Paula Brito Corrêa3; Aruanã Mairê Maia Fontes4;
Angelina Xavier Acosta5; Kiyoko Abe Sandes6.
E-mail: [email protected]
(1)
Maternidade Climério de Oliveira, Universidade Federal da Bahia ;Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz,
Fundação Oswaldo Cruz; (2)Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Universidade Federal da Bahia;
Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz, Fundação Oswaldo Cruz; (3)Serviço de Genética Médica, Universidade
Federal da Bahia; (4)Pós-graduação em Medicina e Saúde, Universidade Federal da Bahia; (5)Faculdade de
Medicina, Universidade Federal da Bahia; Serviço de Genética Médica, Universidade Federal da Bahia;
(6)
Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Universidade Federal da Bahia
RESUMO
Monte Santo é um município baiano localizado no chamado polígono da seca, com população de 52.338
habitantes (IBGE, 2010), desta, 40% vive em situação de extrema pobreza, sendo o mais pobre entre os
municípios baianos com mais de 50.000 habitantes. Foi desenvolvido instrumento para aplicação por agentes
comunitários de saúde (ACS) (Ficha A-GEN) para levantamento de sintomas sugestivos de deficiências/doenças
que podem ter etiologia genética. As equipes do Programa de Saúde da Família do município foram treinadas para
a busca ativa de casos suspeitos e procedeu-se a validação da acurácia do instrumento. Estão sendo estabelecidos
fluxos específicos de investigação molecular para cada grupo de doenças. Mutações patogênicas ou de risco estão
sendo rastreadas em amostragem randomizada para fins de georreferenciamento e reconhecimento de áreas de
risco. Foram coletadas até o momento informações de 2142 famílas (16,2% do total cadastrado), das quais se
buscou casos para o estudo validação e 298 famílias da amostra randomizada (2,3% do total de famílias) das quais
realizamos estimativas de prevalência. Foram realizadas até o momento 58 audiometrias, 70 testes psicológicos de
inteligência e 237 avaliações por geneticista clínico. Os resultados preliminares demonstram sensibilidade e
especificidade, respectivamente, de 59% e 68% para DA, 78% e 53% para DI (Deficiência intelectual), 77% e
70% para DC (Defeitos congênitos), 90% e 95% para TM (Transtornos mentais). A amostra ainda precisa ser
ampliada, mas já se observa que a DA talvez seja a deficiência menos detectável por auto-relato (maior número de
falsos negativos). A prevalência estimada corrigida pelos valores preditivos sob amostra aleatória simples foi de
37,8% de DA, 22,6% de DI, 10,2% de DC e 4,0% de TM, e 1,1% de CA. O índice de consanguinidade observado
na população foi de 13,5%, e etiologia genética foi sugerida em 42,8%, 78,2%, 64%, 63,6% e 66% dos casos
suspeitos de DA (Deficiência auditiva), DI, DC, TM e CA (Câncer), respectivamente. Estes dados mostram que
pode ser viável e eficaz o uso de um instrumento de fácil aplicação para o rastreio de doenças genéticas através da
estratégia de saúde da família.
APOIO
FAPESB/PPSUS e CAPES (FIOCRUZ- Programa Brasil Sem Miséria)
246
Genética Humana e Médica
REGULATION OF EP300 TRANSCRIPT BY HSA-MIR-452-5P INFLUENCE IN GESTATIONAL
DIABETES DISORDERS
Nathalia Joanne Bispo Cezar1; Jessica Plaça2; Juliana Doblas Massaro1; Claudia Danella Polli1; Wilson Araújo
da Silva Júnior2; Elaine Moises3; Geraldo Duarte3; Eduardo Antonio Donadi1; Celso Teixeira Mendes Mendes
Júnior4.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil; (2)Regional
Blood Center - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil; (3)Department of
Gynecology and Obstetrics - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil;
(4)
Department of Chemistry - Faculty of Philosophy, Sciences and Letters of Ribeirão Preto, University of São
Paulo - Brazil
RESUMO
Some microRNAs (miRNAs) have been described to be differentially modulated in gestational diabetes mellitus
(GDM), the most common metabolic alteration observed during pregnancy. Since mechanisms related to GDM
onset remain unclear, it seems possible that post-transcription control of gene expression may be involved in GDM
disorders. Therefore, we have searched for differentially expressed miRNAs in GDM patients and their mRNA
targets (experimentally validated - mirWalk database) related to metabolic alterations. Large scale miRNA
expression was evaluated in 32 GDM patients and in 32 healthy pregnant women using Next-Generation
sequencing (MiSeq-Illumina), and differentially expressed miRNAs between GDM and non-GDM pregnant
women was detected using the DESeq2 package (http://bioconductor.org/biocLite.R). MiRNAs targets were
predicted by starBase v2.0 (http://starbase.sysu.edu.cn/), mirTARBase (http://miRTarBase.mbc.nctu.edu.tw/) and
mirWalk (http://mirwalk.uni-hd.de/) and enrichment functional analysis was performed by DAVID database
(http://david.abcc.ncifcrf.gov). RNASeq analysis revealed 16 differentially expressed miRNAs between GDM
patients and healthy pregnant women (P < 0.01/ FC > |1.2|). Of these, miR-452-5p was down-regulated in GDM
(P = 0.003/FC = -1.95) and targeted EP300 mRNA which presents an essential role in response to prohypertrophic stimuli including hyperglycemia and act as mediator of classical diabetes signaling pathways (Wnt,
Notch, TGF-beta and Jak-STAT). Although functional analyses are needed, this finding suggests that the
imbalance in the regulation miR-452-5p/EP300 mRNA may be one important mechanism to explain arising of
diabetes during pregnancy. These data reinforce the hypothesis that either miR-452-5p or EP300 mRNA may act
as potential targets to control disorders related to GDM.
APOIO
Financial Support: CNPq and FAPESP
247
Genética Humana e Médica
RELAÇÃO DO POLIMORFISMO VAL158MET NO GENE COMT COM A SEVERIDADE DA DOENÇA
DE PARKINSON EM PACIENTES ATENDIDOS NO HOSPITAL DAS CLÍNICAS DE PERNAMBUCO
Maria Eduarda Andrade Lima Martins1; Erinaldo Ubirajara Damasceno dos Santos2; Tiago Furtado Sampaio3;
Nadja Maria Jorge Asano4; Andore Guescel Asano4; Paulo Roberto Euletério de Souza1.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO; (2)UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO;
(3)
UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO; (4)HOSPITAL DAS CLÍNICAS
RESUMO
A Doença de Parkinson (DP) é um dos transtornos do movimento mais encontrado na população idosa, sendo
considerada a segunda doença neurodegenerativa mais comum. É caracterizada por uma disfunção
monoaminérgica múltipla e clinicamente caracterizada pelo "parkinsonismo clássico": bradicinesia, rigidez, tremor
de repouso e instabilidade postural. A DP é uma doença multifatorial e, portanto, está associada tanto com fatores
genéticos e ambientais. Dentre os fatores genéticos, o gene catechol- O-methyltransferase (COMT) codifica a
enzima COMT, responsável pela biodegração da catecolaminas, incluindo a dopamina. Polimorfismos nesse gene
têm sido constantemente associados com o tratamento da DP. O objetivo do presente estudo foi investigar uma
possível associação do polimorfismo Val158Met no gene COMT com a severidade da DP. A população de estudo
foi composta por indivíduos adultos diagnosticados com a DP e tratados no do Ambulatório Pró-Parkinson do
Hospital das Clínicas da UFPE. A extração do DNA genômico se deu a partir de sangue total periférico e a
genotipagem foi realizada pela técnica de PCR-RFLP. As análises estatísticas de associação foram realizadas
através do programa Bioestat versão 5.0. Cinquenta e nove por cento (59/100) da população era do sexo
masculino, com uma média de idade de 63,14 anos e com um tempo médio de doença 7,28 anos. Os 41% da
população feminina, tinham idade média de 63,22 anos e tempo médio da doença de 7,30 anos. Dentre as
características clínicas avaliadas a mais prevalente na população de estudo foi tremor presente em 71%, seguido de
rigidez (16%), bradicinesia (15%) e dor (9%). Nenhuma associação estatística foi encontrada quando com o
polimorfismo Val158Met no gene COMT foi comparado com a severidade da DP (p>0.05). Nossos resultados
sugerem que o polimorfismo Val158Met no gene COMT não esteja associado com a progressão da DP na
população em estudo. Entretanto, são necessários novos estudos para confirmação deste resultado.
248
Genética Humana e Médica
RELAÇÃO DOS POLIMORFISMOS DE BASE ÚNICA NOS GENES IL4, IL10 E LY6 COM
DISTÚRBIOS NEUROLÓGICOS EM PACIENTES VIVENDO COM HIV.
Klaudia Emanuela Ramos Tenório1; Wlaldemir Roberto dos Santos1; Evandra Santos Pontes1; Sergio de Sá
Leitão Paiva Júnior1; Paulo Sergio Ramos de Araujo2; Valdir de Queiroz Balbino1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães/FIOCRUZ
RESUMO
Introdução: O HIV causa imunossupressão possibilitando o surgimento de diversas patologias nos indivíduos. O
sistema nervoso central é um dos mais afetados, seja decorrente da ação do próprio HIV ou por infecções
oportunistas como Neurotoxoplasmose (Toxoplasma gondii), Neurossífilis (Treponema pallidum) e a
neurocitomegalovirose (Citomegalovírus). Diversos fatores podem influenciar na predisposição de desenvolver
infecções neurológicas como alterações nos genes do sistema imunológico. Os Polimorfismos de nucleotídeo
único (SNPs) induzem alterações nos genes do sistema imune. O gene Ly6 está associado ao tipo de progressão do
HIV, levando ao surgimento de coinfecções. Pesquisas indicam que as citocinas (IL-4,IL-10) e ativação do sistema
imune tem um papel importante no desenvolvimento de doenças neurológicas. Desta forma, o presente estudo tem
como objetivo avaliar as associações entre polimorfismos em genes relacionados ao sistema imunológico e o
desenvolvimento de infecções neurológicas (neurotoxoplasmose, neurossífilis e neurocitomegalovirose). Material
e Métodos: Foram coletados cinco ml de sangue total de 298 pacientes vivendo com HIV/aids atendidos nos
Hospital das clinicas de Pernambuco. Em seguida, os prontuários destes pacientes foram analisados e divididos em
dois grupos um com infecções neurológicas e o outro sem infecções neurológicas. Foi realizada PCR em tempo
real para os SNPs rs2572886 (Ly6), rs 2243250 (IL4), rs1800896 (IL10). Em seguida os dados foram analisados
através SNPStats, verificando o Odds ratio (OR), considerando o nível de significância de 5% (α>0,05).
Resultados: A análise genotípica de IL4 sugere que o genótipo TT (IL4) mostra maior susceptibilidade (12x) em
pacientes do sexo masculino para o desenvolvimento de doenças neurológicas, entretanto o p =0,053 não foi
significativo que pode ser influenciado pelo número de indivíduos analisados. Para os SNPs Ly6 e IL10 não foi
encontrada nenhuma associação com os distúrbios neurológicos causados por coinfecções em pessoas vivendo
com HIV/aids. Na análise da combinação dos genótipos uma possível associação foi encontrada entre o genótipo
TGC e o desenvolvimento de doenças neurológicas em pessoas vivendo com HIV/aids (OR 2,58 (1.04- 6,37), pvalue = 0.041). Os genes IL4, IL10 e LY6 estão relacionados ao funcionamento do sistema imune e necessitam de
maiores estudos para verificar possíveis associações ao desenvolvimento de infecções neurológicas em pessoas
vivendo com HIV/AIDS.
APOIO
CNPQ
249
Genética Humana e Médica
SÍNDROME DE DELEÇÃO 22Q13.3: ANÁLISE POR SNP-ARRAY
Neulice Correia1; Esmeralda Santos Alves1; Angelina Xavier Acosta1; Joanna Meira1; Acacia Fernandes L de
Carvalho2.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA - Hospital Universitário Prof. Edgard Santos; (2)UNIVERSIDADE
FEDERAL DA BAHIA - Instituto de Biologia Lab. Genética Humana e Mutagênese
RESUMO
Introdução - A síndrome de deleção 22q13, também conhecida como síndrome de Phelan-McDermid (OMIM:
606232), é um distúrbio neurológico caracterizado pela incapacidade intelectual, hipotonia neonatal, atraso
desenvolvimento global, ausência ou atraso grave de fala, comportamento autista e características dismórficas
menores. Objetivo: O objetivo do trabalho foi determinar os genes envolvidos nas dismorfias do paciente.
Casuística: Esse trabalho descreve um paciente com dismorfias e atraso global de desenvolvimento atendido no
Ambulatório de Genética Médica do Hospital Universitário Prof. Edgard Santos (COM-HUPES/UFBA) que foi
identificado pela citogenética clássica com presença de um cromossomo 22 em anel, 46,XY,r(22)(p11;q13).
Metodologia: Foi realizada análise por SNP-Array utilizando os chips HumanCytoSNP-12 BeadChip (Illumina
Inc., San Diego, CA). Resultados: A análise de SNP-array detectou a presença de apenas uma cópia da região
22q13.31-q13.33 (45764874-51169045)x1 com tamanho de 5,4 Mb. Conclusão: Essa alteração envolve vários
genes, com destaque para o gene SHANK3 (também conhecido como ProSAP2) (OMIM: 606230) identificado
como o gene crítico nos aspectos neurológicos e comportamentais observados em pacientes com deleções 22q13.
Mutações nesse gene são causa de transtorno do espectro do autismo (ASD).
APOIO
CNPq
250
Genética Humana e Médica
SÍNDROME DO CROMOSSOMO 21 EM ANEL ASSOCIADO A FISSURA PALATINA E ATRASO
GLOBAL DE DESENVOLVIMENTO
Esmeralda Santos Alves1; Neulice Correia1; Joanna Meira1; Angelina Xavier Acosta1; Acacia F L Carvalho1.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA - Hospital Universitário Prof. Edgard Santos
RESUMO
Introdução: Cromossomo 21 em anel é uma alteração cromossômica congênita rara. Os pacientes que possuem um
cromossomo 21 normal e seu homólogo em anel normalmente apresentam monossomia parcial desse cromossomo
levando a malformações neurológicas, oculares, do trato cardiovascular, digestivo, sistema geniturinário e
distúrbios hematológicos. Objetivo: O objetivo desse trabalho foi caracterizar molecularmente um cromossomo 21
em anel. Casuística: Esse trabalho descreve um paciente atendido no Ambulatório de Genética Médica do Hospital
Universitário Prof. Edgard Santos (COM-HUPES/UFBA) com dismorfias, incluindo fissura palatina e atraso
global de desenvolvimento, que apresentou através da citogenética clássica um cromossomo 21 em anel, cariótipo:
46,XY,r(21q). Metodologia: Foi realizada análise por SNP-array utilizando os chips HumanCytoSNP-12
BeadChip (Illumina Inc., San Diego, CA). Resultado: A análise de SNP-array identificou apenas uma cópia da
região 21q22.3 (43.087.772-48.098.824)x1 com tamanho de 5Mb. Conclusão: O OMIM genes descreve nessa
região cerca de 16 genes associados a doenças: RIPK4, TMPRSS3, RSPH1, CBS, CRYAA , SIK1, CSTB, AIRE,
TSPEAR, ITGB2, COL18A1, COL6A1, COL6A2, LSS, PCNT, FTCD. O DECIPHER relata pacientes com fissura
patina, atraso de linguagem e outras dismorfias, fenótipo também observado no paciente desse estudo.
APOIO
CNPq
251
Genética Humana e Médica
SÍNDROMES MIELOPROLIFERATIVAS / MIELODISPLÁSICAS - RELATO DE 15 PACIENTES
PEDIÁTRICOS
Maria Luiza Rocha da Rosa Borges1; Beatriz Almeida Barp Santos1; Maria Teresa Marquim Nogueira Cornélio2;
Edinalva Pereira Leite3; Eliane Maria Soares Ventura3; Marcos André Cavalcanti Bezerra4; Terezinha de Jesus
Marques Salles3.
E-mail: [email protected]
(1)
Faculdade de Ciências Médicas da Universidade de Pernambuco, Recife/Brasil; (2)Instituto de Ciências
Biológicas, Universidade de Pernambuco, Recife/Brasil; (3)Centro de Oncohematologia Pediatrica, Hospital
Oswaldo Cruz; (4)Universidade Federal de Pernambuco, Recife/Brasil
RESUMO
Introdução: As doenças Mielodisplásicas/Mieloproliferativas (SMD/DMP) são malignidades hematopoéticas,
caracterizadas por hipercelularidade de uma ou mais linhagem e pelo menos 20% de blastos na Medula óssea .
Doenças hereditárias como Neurofibromatose, Síndrome de Noonan e Noonan like são observadas
frequentemente. A classificação da SMD na infância se baseia na Orgaização Mundial de Saúde (OMS) 2003. O
diagnóstico da doença é feito pelos dados clínicos, mielograma e estudos genéticos. As anormalidades
cromossômicas são descritas em 35% dos pacientes, as mais encontradas são: Trissomia 8, monossomia 7 e
deleção (20q), sendo a monossomia 7 a mais frequente (25%). Objetivo: Classificar e diagnosticar por estudos
citogenéticos os pacientes com SMD infantis do Centro de oncohematologia pediátrica do Hospital universitário
Oswaldo Cruz (CEONHPE/HUOC) no período de 2004-2016. Material e Método: A partir das características
clínicas do prontuário e dos estudos citogenéticos pela técnicas de banda G e FISH realizadas na MO foram
classificados como Mielodisplásicas/Mieloproliferativas, pela OMS(2003) 15 pacientes pediátricos. Doze
pacientes com Leucemia Mielomonocítica Juvenil (LMMJ), 01 LMMJ com mielofibrose e metaplasia mieloide,
01 com mielopoese anormal transitória (TAM) e 01 com leucemia mieloide da síndrome de Down (SD). Houve
prevalência no sexo masculino (87%), a idade média foi de 3 anos, com exceção do portador de TAM,
diagnosticado aos 14 dias de vida.Um era portador de Neurofibromatose 1 e outro com Sínd. de Noonan-like.
Todos os pacientes com LMMJ apresentaram grande esplenomegalia e o paciente portador da mielofibrose
apresentou hepatoesplenomegalia gigante. Todos os casos tinham hiperplasia e displasia na MO. Os estudos
citogenéticos mostraram 07 casos (47%) com cariótipos normal e 08 (53%)alterados A monossomia 7 foi a
alteração mais frequente (20%). Foram a óbito 67% (10), 9 por doença e 1 decorrente do transplante alogênico de
medula óssea (AloTMO). Cinco pacientes estão vivos, 3 pós AloTMO, um em acompanhamento pós AloTMO em
uso de azaciditina e, outro está aguardando transplante. Os estudos citogenéticos são essenciais no diagnóstico da
SMD. A percentagem de cariótipos normais mostra a necessidade de outros estudos genéticos para doenças
hereditária subjacente e para definir os mecanismos genético e epigenéticos envolvidos nos pacientes com
SMD/SMP da infância.
APOIO
CAPES
252
Genética Humana e Médica
SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS IN CUL5 GENE IN HIV-1 INFECTED INDIVIDUALS OF
SOUTHERN BRAZIL: IMPLICATIONS WITH DISEASE PROGRESSION
Almerinda Agrelli1; Maria Cristina Matte2; Sabrina Esteves de Matos Almeida3; Jose Artur Bogo Chies4; Sérgio
Crovella5; Ronaldo Celerino da Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife,
Brazil.; (2)Department of Genetics, Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, Brazil;
(3)
State Foundation of Production and Research in Health, Porto Alegre, Brazil.; (4)Department of Genetics, Federal
University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, Brazil.; (5)Department of Genetics, Federal University of
Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.
RESUMO
Various host-virus protein-protein interactions are crucial for HIV-1 virus in its life cycle. The APOBEC3G
(apolipoprotein B mRNA editing enzyme, catalytic polypeptide-like 3G) family was discovered to have antiviral
activities of varying degrees leading to highly efficient interruption of HIV-1 replication. To counteract these host
restriction factors, the HIV-1 Vif protein hijacks host Cullin 5 (CUL5), among other proteins from the multisubunit E3 ubiquitin ligase complex, to induce APOBEC3G protein ubiquitination and degradation. Therefore,
genetic variations in CUL5 may lead to different upshots in the progression of the disease. In this work, we studied
three SNPs (rs7117111, rs11212495 and rs7103534) in the CUL5 gene that may be related with progression of
HIV-1 infection. Were selected 94 HIV-1 infected (HIV-1+) individuals from Porto Alegre, Brasil, which were
divided in two groups: slow progressors and rapid progressors. The genotyping of SNPs was performed with allele
specific fluorescent probes (TaqMan®) using platform for real-time PCR. Allele and genotype frequencies were
estimated by direct counting. The Hardy-Weinberg and probable associations were determined by X2 test and
Fisher's exact test, using R software. All SNPs were in Hardy-Weinberg equilibrium, except for rs11212495 in
HIV-1 rapid progressors. Among the CUL5 SNPs analysed, the rs7103534 presented significant differences
among slow progressors and rapid progressors HIV-1 individuals. We found that the C allele was significantly
more frequent in slow progressors (11.6%) than in rapid progressors (1.4%, OR = 0.11, 95% CI: 0.002-0.795,
P=0.01). Similarly, the TC genotype was significantly more frequent in slow progressors (11.6%) than in rapid
progressors (2.9%, OR = 0.10, 95% CI: 0.002-0.745, P=0.01). These data suggested that HIV-1 individuals with C
allele and TC genotype of rs7103534 have a lower susceptibility to AIDS progression. Taken together, the results
indicated the importance of CUL5 gene in progresion of HIV-1 infection for AIDS and may contribute to the
understanding of the different upshots of the disease.
APOIO
CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE.
253
Genética Humana e Médica
SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS IN HLA-C AND ZNRD1 GENES IN HIV-1 INFECTED
INDIVIDUALS OF SOUTHERN BRAZIL: IMPLICATIONS WITH DISEASE PROGRESSION
Almerinda Agrelli1; Maria Cristina Matte2; Sabrina Esteves de Matos Almeida3; Jose Artur Bogo Chies2; Sérgio
Crovella4; Ronaldo Celerino da Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife,
Brazil.; (2)Department of Genetics, Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, Brazil.;
(3)
State Foundation of Production and Research in Health, Porto Alegre, Brazil.; (4)Department of Genetics, Federal
University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.
RESUMO
Host genetic factors play a major role in determining the outcome of human immunodeficiency virus type-1 (HIV1) infection. Multiple host factors have been studied till date, among them, ZNRD1 (zinc ribbon domaincontaining 1) and HLA-C (major histocompatibility complex, class I, C), which have been shown to be strongly
correlated with HIV disease progression. HLA-C has a dual role of presenting antigens to T-cytotoxic cells and as
ligands to immunoglobulin-like receptors (KIRs) on NK (natural killer) cells, acting as a stimulator of the immune
response to the virus, while ZNRD1 is a DNA-dependent RNA polymerase that catalyzes the transcription of
DNA into RNA, and seem to influence HIV replication and viral load. Thus, genetic variations in these genes may
lead to different upshots in the progression of the disease. Here, we investigated the effects of genetic variations in
HLA-C (rs10484554 and rs9264942) and ZNRD1 (rs3869068 and rs8321) genes in progression of HIV-1 infection.
Were selected 94 HIV-1 infected (HIV-1+) individuals from Porto Alegre, Brasil, which were divided in two
groups: slow progressors and rapid progressors. The genotyping of SNPs was performed with allele specific
fluorescent probes (TaqMan®) using platform for real-time PCR. Allelic and genotypic frequencies were
estimated by direct count. Hardy-Weinberg equilibrium and associations were determined by X2 test and Fisher's
exact test, using R software. All polymorphisms were in Hardy-Weinberg equilibrium, except for rs11212495 in
rapid progressors. For the HLA-C gene, the T allele and TT genotype of rs10484554 were the most frequent in
slow (56% and 36.8%) and rapid progressors (68% and 50%). For the rs9264942, the C allele and CC genotype
were the most frequent in slow (83.3% and 72%) and rapid progressors (81% and 70%). For the ZNRD1 gene, the
C allele and CC genotype of rs3869068 were the most frequent in slow (77% and 60%) and rapid (79% and
61.1%) progressors. For the rs8321, the A allele and AA genotype were the most frequent in slow (98% and
96.4%) and rapid (94.5% and 92%) progressors. The variants of HLA-C and ZNRD1 genes have shown not to be
statistical significance associated with the progression of HIV's infection, however further investigations in others
populations with a larger number of samples are needed.
APOIO
CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE.
254
Genética Humana e Médica
SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS IN HLA-C AND ZNRD1 GENES IN TWO COHORT OF
HIV-1 MOTHER-TO-CHILDREN TRANSMISSION
Soares, André Luiz Bormann1; Guimaraes, Rafael Lima1; Crovella, Sergio1; Celerino da Silva, Ronaldo1.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil and Laboratory of
Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.
RESUMO
Humans show heterogeneity in their vulnerability to HIV-1 acquisition and infection, which is under controlling of
genes involved in immunity and virus replication. HLA-C (human leukocyte antigen C) molecules present
antigens to cytotoxic T lymphocytes (CTLs) and inhibit lysis of "natural killer" (NK) cells by inhibitory Killer
immunoglobulin-like receptor interaction; while ZNRD1 (zinc ribbon domain-containing 1) has identified among
250 host factors required for HIV-1 replication. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) in these genes have been
related to HIV-1 susceptibility. We evaluated the allelic/genotypic distribution of HLA-C (rs110484554,
rs9264942) and ZNRD1 (rs3869068, rs8321) SNPs and their relationship with HIV-1 mother-to-child transmission
(MTCT) susceptibility in India and Africa individuals. We used a Indian (82 individuals: 51+/31-) and a African
(45 individuals: 27+/18-) cohort of HIV-1 MTCT. Genotyping were performed by real time PCR using allelespecific probes. Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) and associations were estimated, respectively, by X2-square
and Fisher Exact Test. All SNPs were in HWE (Indian - except: rs10484554 in both groups; and African - except:
rs10484554 in HIV-1+ / rs3869068 in HIV-1-). In Indian, the C allele and CC genotype of HLA-C rs10484554
were, respectively, the most frequent in HIV-1+ (79%/ 72%) and HIV-1- (76%/72%) individuals. For rs9264942,
the T allele and CT genotype were, respectively, the most frequent in HIV-1+ (50%/45%) and HIV-1- (53%/40%)
individuals. For ZNRD1 rs3869068, the C allele and CC genotype were, respectively, the most frequent in HIV-1+
(83%/70%) and HIV-1- (74%/ 52%) individuals. In African, the C allele and CC genotype of HLA-C rs10484554
were, respectively, the most frequent in HIV-1+ (96%/96%) and HIV-1- (88%/82%) individuals. For rs9264942,
the C allele and CC genotype were, respectively, the most frequent in HIV-1+ (85%/73%) and HIV-1- (82%/76%)
individuals. For ZNRD1 rs3869068, C alleles and CC genotype were, respectively, the most frequent in HIV-1+
(68%/52%) and HIV-1- (70%/40%) individuals. The ZNRD1 rs8321 was monomorphic in HIV-1+ and HIV-1individuals of both the cohorts. No significant differences were observed when comparing the allele/genotype
distribution in HIV-1+ and HIV-1- of India and Africa, suggesting a not associated with HIV-1 MTCT. However,
investigations in others populations and with more samples are needed.
APOIO
CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE
255
Genética Humana e Médica
TRISSOMIA E TETRASSOMIA 21Q11.2-Q22.11 SEM A REGIÃO CRÍTICA DA SÍNDROME DE
DOWN: CORRELAÇÃO GENÓTIPO-FENÓTIPO.
Camila Capinam Pereira de Jesus1; Esmeralda Santos Alves2; Gabriela Scheibler2; Joanna Meira2; Angelina
Xavier Acosta2; Neulice Correia2; Acácia Fernandes Lacerda de Carvalho1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal da Bahia - Instituto de Biologia - Laboratório de Genética Humana e Mutagênese;
(2)
Universidade Federal da Bahia- Hospital Universitário Prof. Edgard Santos
RESUMO
Introdução: A síndrome de Down (SD)é a causa mais frequente de deficiência intelectual de origem genética. A
maioria dos casos resulta de trissomia completa do cromossomo 21. No entanto, alguns pacientes apresentam
trissomias parciais e fenótipo da SD. A região crítica responsável pelas principais características da SD tem sido
descrita em 21q22.12 a 21q22.3. Objetivo: Realizar uma correlação genótipo-fenótipo de um paciente com
trissomia e tetrassomia 21q sem a região crítica da SD. Casuística: Esse trabalho descreve um paciente com 8 anos
atendido no Ambulatório de Genética do Hospital Universitário Prof. Dr. Edgard Santos (COMP-HUPES) da
Universidade Federal da Bahia apresentando deficiência intelectual leve e dismorfias. A análise citogenética
clássica com bandamento GTG identificou um cariótipo com presença de um cromossomo adicional de origem
não identificada (47,XY,+mar). Metodologia: Foi realizada análise de SNP-array utilizando os chips
HumanCytoSNP-12 BeadChip (Illumina Inc., San Diego, CA) para caracterizar molecularmente o cromossomo
marcador. Resultados: a análise de SNP array demonstrou a presença de três cópias das regiões 21q11.2q21.1
(14,687,571-16,593,184)x3 e 21q21.2q21.3q22.11 (25,865,342-32,314,514)x3 com 1,9Mb e 6,4 Mb,
respectivamente e quatro cópias da região 21q21.1q21.2 (16,611,077-25,846,325)x4 com tamanho de 9,2 Mb.
Conclusão: Embora a região envolvida na duplicação desse paciente não inclua a região crítica da SD o paciente
apresenta algumas características da síndrome como: deficiência intelectual, atraso de desenvolvimento,
braquicefalia, fendas palpebrais oblíquas, palato em ogiva, orelhas malformadas, cardiopatia entre outras. Esse
trabalho contribui com outros estudos que têm demonstrado que embora a região 21q22.12 a 21q22.3 possua a
maioria dos genes responsáveis pelo fenótipo da SD, outras regiões também podem estar envolvidas na
manifestação do fenótipo.
APOIO
CNPq
256
Genética Humana e Médica
VITAMIN D RECEPTOR (VDR) VARIANT INFLUENCE UPON SPONTANEOUS PRETERM BIRTH
Natassia Javorski Rodrigues1; Camilla Albertina Dantas de Lima1; Lícia Vasconcelos Carvalho da Silva2; Sérgio
Crovella1; Jaqueline de Azevêdo Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética - UFPE; (2)Faculdade Asces
RESUMO
Preterm birth condition (PTB) is characterized by less than 37 weeks of gestational age or fewer than 259 days
since the first day of women`s last menstrual period, PTB rates continue to rise, increasing 30% during the last 25
years. This condition can be classified as a multifactorial syndrome and divided into spontaneous preterm birth
(SPTB) and provider-initiated PTB. Even though several aspects are involved in SPTB, immunological and
genetics interactions seem to play a pivotal role in SPTB triggering. The active form of vitamin D in addition to
the effects well described in bone metabolism and mineral homeostasis recently has been associated with immunemodulatory actions. Vitamin D acts through its receptor VDR, which encodes polymorphisms such as FokI
(rs2228570) described as functionally involved in the immune system. Herein we evaluated whether VDR
polymorphism is associated with the risk of SPTB. For this purpose, we analysed 104 pregnant women with SPTB
and 85 women with normal birth, a protocol was filled in and the blood samples were taken. Genomic DNA was
extracted from peripheral blood using the Mini-Salting out method adapted from Miller et al., 1988. The SNP
rs2228570 A>G of VDR gene was genotyped using commercially available TaqMan probes (Applied Biosystem)
and the samples were run at 7500 Real-Time PCR instrument (Applied Biosystem). Statistical analyses for
association was performed using the Fisher exact test in the program SPSS (version 23) and the confidence
interval in SNPStats program. Statistically significant differences were found when comparing allele and genotype
frequencies in both groups: the A allele (p=0.00014) and A/A genotype (p=0.00013) for rs2228570 was
significantly more frequent in SPTB group than in normal birth group. In conclusion, we found that SNP FokI was
associated with the SPTB syndrome, since it can be influence upon VDR final structure and along with the fact
that vitamin D display a important role in immune-modulatory actions the VDR pathway can be related with the
outcome found in these syndrome.
APOIO
CNPq and FACEPE
257
Genética de Microrganismos
EMERGÊNCIA DE RESISTÊNCIA A POLIMIXINA EM ISOLADOS DE KLEBSIELLA PNEUMONIAE
DEVIDO A INATIVAÇÃO DO GENE REGULADOR NEGATIVO MGRB
Hemilly Rayanne Ferreira da Silva1; Anna Carolina Soares Almeida2; Márcia Maria Camargo de Morais1.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco-UPE;
Programa de Pós Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco-UPE;
Departamento de Biologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco-UFRPE
(2)
RESUMO
O gene blaKPC, frequentemente associado a Klebsiella pneumoniae, está disseminado mundialmente e confere
resistência a quase todos antibióticos beta-lactâmicos, incluindo os carbapenêmicos. Neste contexto, a polimixina
é uma das últimas escolhas no tratamento de infecções causadas por estes micro-organismos, o que demonstra a
necessidade de estudos que caracterizem os mecanismos de resistência a este antimicrobiano. O objetivo deste
trabalho foi caracterizar os mecanismos genéticos envolvidos na resistência a polimixina em dois isolados de K.
pneumoniae produtores de KPC, oriundos do LCR de um paciente de UTI. A pesquisa fenotípica de
carbapenemases foi realizada utilizando o teste de Hodge modificado e o teste de inibição com EDTA. O perfil de
susceptibilidade aos antimicrobianos foi determinado por automação é interpretado segundo o CLSI (2016). O
PFGE e o MLST foram utilizados para analisar a relação clonal dos isolados e para determinação do perfil alélico.
A identificação dos genes que codificam beta-lactamases, bem como a caracterização do integron e os genes
envolvidos na resistência a polimixina (phoPQ, pmrAB e mgrB), foram realizadas por PCR, seguidas de
sequenciamento. A análise do conteúdo plasmidial foi realizada segundo Kieser (1984). Os resultados fenotípicos
mostraram que os isolados são produtores de carbapenemase de classe A, resistentes a todas as drogas testadas,
incluindo polimixina, com exceção de amicacina e gentamicina. Análises moleculares revelaram a presença dos
genes blaKPC-2, blaSHV-11, blaTEM-1, dfrA12 e aadA2, estes últimos, localizados na região variável de um integron de
classe 1. A tipagem molecular por PFGE e MLST mostrou que os isolados eram indistinguíveis, compartilhando o
mesmo perfil alélico, resultando no ST423. A análise plasmidial demonstrou que os isolados compartilhavam
plasmídeos de mesmo tamanho. A caracterização dos genes que compõem os operons phoPQ e pmrAB, bem como
seu gene regulador negativo mgrB, identificou, em ambos isolados, uma transição 449A>G, que resultou na troca
Asp150Gly, no domínio sensor de PhoQ. Além disso, foi identificada uma sequência de inserção, do tipo IS5,
interrompendo o gene mgrB, inativando-o. Estes resultados evidenciam o papel de eventos genéticos no
surgimento de um importante fenótipo de resistência em isolados de K. pneumoniae e alertam para a possibilidade
da disseminação policlonal deste mecanismo, já que não há relatos envolvendo isolados ST423 resistentes a
polimixina.
APOIO
FACEPE e CNPq
258
Genética de Microrganismos
ANÁLISE DA DIVERSIDADE BACTERIANA DO INTESTINO DE TILÁPIAS DO NILO
(OREOCHROMIS NILOTICUS) INFECTADAS COM AEROMONAS HYDROPHILA E SUBMETIDAS À
DIETAS CONTENDO PRODUTOS NATURAIS COMO ALIMENTOS FUNCIONAIS
Riani Ananda Nunes Soares1; Antônio Wilton Cavalcante Fernandes1; Samira Texeira Leal Oliveira1; Mateus
Matiuzzi da Costa1; Gisele Veneroni Gouveia1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Vale do São Francisco, Petrolina,PE
RESUMO
As drogas antimicrobianas utilizadas para o controle de doenças nos peixes têm tido sucesso limitado, pois
aumentam a pressão de seleção sobre os microrganismos levando à resistência bacteriana. Assim, outras
estratégias são necessárias para reduzir os impactos econômicos advindos do aparecimento das infecções
bacterianas. O acréscimo de produtos naturais à ração dos animais tem se mostrado promissor, podendo
influenciar a composição de microrganismos do intestino, influenciando na absorção de nutrientes e afetando o
crescimento. O presente trabalho objetivou investigar o efeito da adição à ração do óleo essencial de
orégano(OEO) e do extrato etanólico de própolis (EEP) sobre a diversidade bacteriana do intestino de tilápias do
Nilo (Oreochromis niloticus) desafiadas com Aeromonas hydrophila. Para isso, foi realizado um experimento in
vivo onde todos os animais foram matidos sob as mesmas condições ambientais e inoculados com A. hydrophila.
Os tratamentos constaram de: grupo que recebeu a ração controle, grupo que recebeu ração contendo 2,22 g de
EEP kg ração-1 e grupo que recebeu ração contendo 0,5% de OEO. Três peixes de cada tratamento foram
avaliados. O DNA das bactérias presentes no intestino dos peixes foi extraído e utilizado em Reações em Cadeia
da Polimerase (PCR) utilizando-se o TopTaq Master Mix kit (Qiagen®). Em seguida, foram avaliados pela técnica
DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) com gradiente de 40-75% em gel de acrilamida 8% para análise
de diversidade de bactérias. O grupo suplementado com EEP apresentou quatro bandas caracterizando a maior
diversidade bacteriana encontrada. O grupo suplementado com OEO apresentou um total de duas bandas, sendo
estas em comum com o grupo que recebeu EEP. O grupo que recebeu a ração controle apresentou uma banda
sendo ela em comum com os outros tratamentos, esse grupo representa a microbiota naturalmente encontrada em
tilápias de cativeiro, pois não recebeu nenhum tipo de suplemento. A maior diversidade encontrada no grupo que
recebeu EEP pode ser explicada pelo fato de que o EEP tem efeito antimicrobiano e ativa o sistema imune de
tilápias produzindo uma resposta contra a A. hydrophila contribuindo para um maior equilíbrio do microbioma
intestinal garantindo uma maior diversidade taxonômica e funcional. Porém, é necessário realizar o
sequenciamento dos microrganismos das microbiotas intestinais avaliadas para se identificar e classificar as
bactérias como sendo benéficas ou não para o peixe.
APOIO
CNPq
259
Genética de Microrganismos
ANÁLISE DE GENES CONSTITUTIVOS NA AVALIAÇÃO DA DIFERENÇA DE EXPRESSÃO DE
GENES ENVOLVIDOS COM A RESPOSTA IMUNE EM TILÁPIAS DO NILO VACINADAS CONTRA
A. HYDROPHILA E INOCULADAS COM ESTE PATÓGENO
Laiane Moreira Vianna Magalhães1; Esdras Medeiros Almeida1; Izabela Pinheiro de Santana Lacerda1; Mateus
Matiuzzi da Costa1; Gisele Veneroni Gouveia1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Microbiologia e Imunologia Animal, Campus de Ciências Agrárias, Universidade Federal do
Vale do São Francisco (Univasf), Petrolina, PE.
RESUMO
Um dos maiores entraves para a piscicultura é o processo doença instaurado pela bactéria oportunista Aeromonas,
que por ocorrer naturalmente no ambiente aquático tem seu controle dificultado, se tornando um fator limitante no
desenvolvimento da aquicultura. Uma das alternativas para o controle desse patógeno seria o desenvolvimento de
uma vacina. No entanto, ainda não se conhece como a infecção por Aeromonas em peixes ou a inoculação de
vacina nos mesmos afeta a expressão de genes relacionados com o sistema imune dos animais. Muitos testes são
realizados com a finalidade de analisar perfis de expressão gênica, porém PCR quantitativo em tempo real é
considerado como o mais preciso e viável. No entanto, esta técnica precisa de normalização para que haja uma
correta interpretação dos dados obtidos, a qual é realizada com a utilização de genes constitutivos; que são genes
que possuem expressão uniforme na maioria das células do organismo de estudo, bem como durante as várias
fases de desenvolvimento e sob diferentes condições ambientais. Portanto, a escolha correta do gene constitutivo
leva a uma maior confiabilidade dos resultados da reação. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi o de escolher
o melhor gene constitutivo, entre os genes 18S rRNA, GADPH e UBCE na avaliação da diferença de expressão de
genes envolvidos com a resposta imune em tilápias do Nilo vacinadas contra A. hydrophila e inoculadas com este
patógeno. Para tal, foram utilizados 144 alevinos de tilápias do Nilo, que em um trabalho realizado anteriormente
(de Santana Lacerda, I.P., et al, 2015) foram vacinados contra A. hydrophila e após 15 dias da imunização foi feito
o desafio com esse patógeno. Então, amostras de rim desses peixes foram coletadas no período de junho de 2014
nos tempos: 0 h, 12 h e 24 h após o desafio. Essas tiveram seu RNA total extraído, sendo utilizadas para síntese de
cDNA e na técnica de PCR em tempo real para análise da expressão dos genes. Com os valores de Ct, os genes
foram avaliados através do RefFinder, disponível em http://fulxie.0fees.us/?type=reference, o qual integra os
programas geNorm, Normfinder, BestKeeper, e o método Ct comparativo. Em todas as análises o gene 18s rRNA
se mostrou o mais estável dos genes testados, sendo ele o escolhido como constitutivo para a realização das
análises de expressão gênica em peixes vacinados contra Aeromonas hydrophila e inoculados com esse patógeno.
APOIO
CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior);CNPQ (Conselho Nacional de
Desenvolvimento Científico e Tecnológico)
260
Genética de Microrganismos
ANÁLISE DO TRANSCRIPTOMA DA LINHAGEM MUTANTE EM SACCHAROMYCES CEREVISIAE
COM DEFICIÊNCIA DA MVK
Manuella Maria Silva Santos1; Sergio S Paiva2; Will de Barros Pita3; Jaqueline de Azêvedo Silva1; Sergio
Crovella1; Marcos Antônio de Morais Junior1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universiddae Federal de Pernambuco- Departamento de Genética; (2)Universiddae Federal de PernambucoDepartamento de Estatística; (3)Universiddae Federal de Pernambuco- Departamento de Antibióticos
RESUMO
A via da mevalonato quinase (MVK) é crucial na produção de esteróis e de metabólitos intermediários envolvidos
em processos como a respiração. O quadro de deficiência na mevalonato quinase (MKD) em humanos causado
pelos efeitos na mutação do gene MVK (12q24) leva a uma doença auto-inflamatória de consequências clinicas
graves. Na levedura S. cerevisiae a via do mevalonato é essencial para viabilidade celular e síntese de isoprenóide.
As similaridades tanto no funcionamento da via do mevalonato como no fenótipo de mutantes deficientes na
atividade MKV entre células humanos e células da levedura tornam este último organismo um interessante modelo
biológico para se estudar o fenótipo MKD. Em ensaios de crescimento celular aeróbio em meio sintético a
linhagem deficiente Damp-erg12, com atenuação de 90% na expressão do ERG12 (ortólogo do gene humano
MVK), apresentou expressiva diminuição da velocidade de crescimento e biomassa final quando glicerol foi usado
como fonte de carbono em comparação com a linhagem parental BY4743. Por outro lado, nenhuma diferença no
crescimento foi verificado em meio contendo glicose. Amostras da fase exponencial de crescimento foram
coletadas para extração de RNA, síntese de cRNA, marcação diferencial com os fluoróforos Cy3 e Cy5 nas
seguintes combinações: [BY4743 glicerol]x[BY4743 glicose]; [Damp-erg12 glicerol]x[Damp-erg12 glicose];
[Damp-erg12 glicerol]x[BY4743 glicerol]; Damp-erg12 glicose]x[BY4743 glicose]. As misturas de cRNA foram
usadas para análise de expressão gênica relativa pela técnica de microarranjo de DNA. Os resultados foram
tratados por meio de análise estatística muito restritiva e os genes categorizados por meio de agrupamentos de
ontologia gênica. Considerando todas as interpolações entre os tratamentos e combinações, o resultado final
mostra que a mutação Damp-erg12 que atenua em 90% a atividade MVK em S. cerevisiae está relacionada com
defeito na biogênese mitocondrial, com indução da resposta a dados oxidativos e indução da expressão dos genes
de biossíntese dos aminoácidos sulfurados, fonte de moléculas anti-oxidantes intracelulares. Isto aponta para o fato
de que o déficit da via MVK, e/ou dos produtos desta via (isoprenoides e esteróis), resulta na indução de estresse
oxidativo generalizado, o que pode explicar o fenótipo MKD de auto-inflamação em humanos.
APOIO
Financiador: Facepe
261
Genética de Microrganismos
ARDRA IN SILICO: MODELO PARA ANÁLISES DE RIQUEZA EM AMOSTRAS AMBIENTAIS DE
BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS
Caio Suzart Argôlo1; Thaís Correia Magalhães1; Hellen Ribeiro Martins dos Santos1; Leandro Lopes Loguercio1.
E-mail: [email protected]
(1)
PPG em Genética e Biologia Molecular, Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC)
RESUMO
A bioinformática proporciona relevantes recursos e modelos teóricos in silico que auxiliam no estudo de questões
biológicas. É importante estimar mais precisamente a diversidade endofítica real em amostras ambientais, pois
curvas de rarefação vem indicando, para maioria dos estudos, que a riqueza total da amostra não foi atingida. A
técnica ARDRA (Amplified Ribossomal DNA Restriction Analysis) para análise de riqueza microbiana é
reproduzível, acurada e de baixo custo, mas há limitações a serem superadas. O objetivo do trabalho foi estimar in
silico o nº de fragmentos de restrição possíveis de serem visualizados em gel, a partir de um nº conhecido de
sequências bacterianas numa amostra ambiental. A hipótese de pesquisa foi que o nº máximo desses fragmentos
para uma dada comunidade atingirá um platô, independente do aumento no nº de espécies na mesma. Para testar
essa hipótese, usou-se sequências de 16s rDNA de endófitos obtidas no GenBank em diferentes combinações
aleatórias para compor comunidades 'artificiais' com nº definido de espécies. Três conjuntos de sequências foram
acessados: 50 spp endofíticas em geral, 50 de arroz e 35 de feijão. Análises de restrição in silico (enzima Alu I)
foram realizadas com as respectivas regiões de ~630 pb amplificadas pelos primers 799F e 1429R, gerando nº
'teórico' de fragmentos para cada comunidade aleatória. Elaborou-se um script baseado em 4 parâmetros: (i) o
conjunto total de sequências, (ii) o nº de sequências (spp) para compor as diferentes comunidades aleatórias (5, 10,
15, sucessivamente até o total de spp disponíveis em cada conjunto), (iii) o nº de repetições (combinações)
aleatórias de cada comunidade (3 mil neste estudo), e (iv) o nº de nucleotídeos que separa um fragmento do outro
(5 nt). Realizou-se 10 avaliações nestas condições, para os 3 conjuntos de dados, plotando-se a média e erro
padrão das 10 avaliações para cada comunidade, com regressão logarítmica. Os 3 conjuntos de spp mostraram-se
semelhantes, e confirmaram a hipótese de pesquisa. O script deste estudo auxilia a prever o nº máximo de spp
bacterianas em amostras ambientais possíveis de serem identificados por ARDRA. Para validar este modelo,
identificou-se endofíticos cultiváveis obtidos de sementes de cacau por sequenciamento parcial do 16s, digerindoos com Alu I. Comparar-se-ão fragmentos de comunidades aleatórias destes endofíticos com os dados in silico,
buscando aprimorar a acurácia de ARDRA para amostras ambientais.
APOIO
CAPES
262
Genética de Microrganismos
AVALIAÇÃO DA ESSENCIALIDADE DE HOMÓLOGOS DA PROTEÍNA DE LIGAÇÃO A CAUDA
POLI-A (PABP) PARA A SOBREVIVÊNCIA DE LEISHMANIA INFANTUM
Kleison da Costa Merlo1; Tamara De' Carli da Costa Lima2; Christian Robson de Souza Reis1; Barbara
Papadopoulou3; Osvaldo Pompílio de Melo Neto1.
E-mail: [email protected]
(1)
Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães/ FIOCRUZ, Recife-PE; (2)Faculdade Associação Caruaruense de Ensino
Superior, Caruaru-PE; (3)Centre de Recherche en Infectiologie/ Université LAVAL, Québec, Canadá
RESUMO
Tripanossomatídeos são microorganismos causadores de doenças em humanos, animais e plantas. Eles apresentam
uma complexa regulação da expressão gênica controlada por eventos pós-transcricionais. A proteína de ligação à
cauda poli-A (PABP - Poly-A Binding Protein) é uma das principais proteínas de ligação à mRNAs nos eucariotos
e possui papel crítico na tradução e controle da estabilidade dos mRNAs. Além de interagirem com a cauda poliA, as PABPs interagem com outras sequências nos mRNAs e com fatores proteicos, demonstrando o papel central
das PABPs em numerosas etapas da expressão gênica. Em espécies de Leishmania são observados três homólogos:
PABP1, 2 e 3. Dados recentes demonstram que em Leishmania a PABP1 parece ter um papel mais geral na
tradução, executando predominantemente as funções atribuídas a PABP em outros organismos. Já as PABPs 2 e 3
interagem diretamente entre si e parecem estar associadas a mRNAs que são preferencialmente traduzidos durante
a fase S do ciclo celular. Este trabalho teve como objetivo avaliar a essencialidade dos homólogos das PABP 1, 2 e
3, bem como investigar a capacidade de mutantes da PABP1 em complementar a função da proteína nativa em L.
infantum. Foram realizadas construções dos genes das PABPs onde a região codificante foi substituída pelas
marcas de resistência a antibióticos higromicina (SKO - single knockout) e puromicina (DKO - double knockout).
Essas foram obtidas através de PCRs convencionais e por SOE (splicing overlaping extension). Para a construção
dos mutantes da PABP1 (LMW, YGF, duplo LMW/YGF, TGM e mutante de desfosforilação) foram realizadas
alterações em resíduos específicos através de mutagênese sítio dirigida. Todas as construções foram clonadas no
vetor de expressão de Leishmania pSP-BT1-YneoαIR (neomicina). Foram realizadas transfecções em células
selvagens para obtenção dos SKO e DKO dos três homólogos. A partir de clones de SKO da PABP1, fizemos a
complementação com os mutantes e então realizamos os DKOs. Através das transfecções realizadas em formas
promastigotas de L. infantum pudemos observar a essencialidade das PABP 1 e 2 e a não essencialidade da PABP3
para a sobrevivência celular. Todos os mutantes de PABP1 (exceto o duplo LMW/YGF) foram viáveis após DKO,
porém ocorreu duplicação gênica para os mutantes LMW e YGF. Podemos concluir que tanto a PABP1 quanto a 2
são essenciais para a forma promastigota de L. infantum e que os resíduos LMW e YGF são críticos para a função
da PABP1.
APOIO
CNPq
263
Genética de Microrganismos
AVALIAÇÃO DE GENES CONSTITUTIVOS EM AEROMONAS HYDROPHILA SUBMETIDOS A
DIFERENTES CONDIÇÕES AMBIENTAIS
Ruan Emmanuell Franco de Abreu1; Thaís Correia Magalhães1; Adriana Mércia Guaratini Ibelli2; João José de
Simoni Gouveia1; Mateus Matiuzzi da Costa1; Gisele Veneroni Gouveia1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Microbiologia e Imunologia Animal, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Campus
Ciências Agrárias, Petrolina, PE; (2)Embrapa Suínos e Aves. Rodovia BR 153, km 110,Vila Tamanduá, Concórdia,
SC
RESUMO
Genes de referência são constitutivamente expressos pelas células e sofrem poucas alterações de expressão em
função de alterações do meio ao qual o organismos é submetido, geralmente codificam fatores/estruturas
indispensáveis para a manutenção da célula. Na RT-qPCR, com a abordagem relativa, o uso destes genes se faz
necessário para comparação da expressão gênica com os genes alvo. O objetivo do trabalho foi avaliar qual gene
constitutivo possui menor variação de expressão em Aeromonas hydrophila submetidas a diferentes condições
ambientais (pH 7,0 e 10,0; temperaturas 28ºC e 31ºC e 0,1 e 0,9 mg/L de amônia). Para se obter os diferentes
pontos de pH foram adicionados ao meio de cultura Trypticase Soy Agar solução ácida (HCl 1M) ou básica
(NaOH 1M), para obtenção dos diferentes pontos de amônia foi adicionado ao mesmo meio solução de amônia
(NH42SO4), e para obtenção das diferentes condições de temperatura foram utilizadas estufas. Seis isolados de A.
hydrophila foram submetidos às condições citadas, crescidos em estufa por 24 horas, seguindo-se da extração do
RNA, com conseguinte transcrição do mesmo para cDNA e análise da expressão gênica por PCR em tempo real.
A RT-PCR em tempo real (genes rRNA 16S, RopD e GyrA) foi realizada com a utilização do KAPA SYBR® Fast
qPCR kit Master Mix (2x) Universal. As reações para os genes rRNA 16S e RopD constaram de 0,4 µM de
iniciadores específicos para cada, 7,5 µl de syber green master mix, 0,1 µl de rox low e 400 ng de cDNA, em um
volume final de 15 µl. Para o gene GyrA o mix da reação constou de 0,8 µM de iniciadores específicos, 7,5 µl de
syber green master mix, 0,1 µl de rox low e 400 ng de cDNA, em um volume final de reação de 15 µl. Todas as
reações constaram de uma desnaturação inicial a 95ºC por 2m, seguida de 40 ciclos de desnaturação a 95ºC por
15s, anelamento a 60ºC por 30s e extensão a 72ºC por 30s. A curva de melting foi obtida pelo ciclo de 65ºC por
20s e 95ºC por 20s. Com os valores de Ct, os genes foram avaliados através do RefFinder, que integra os
programas geNorm, Normfinder, BestKeeper, e o método Ct comparativo. Desta forma foi possível observar que
quando submetidos a diferentes condições ambientais, o gene que apresentou menor variação na expressão gênica,
mais estável, foi o gene 16S rRNA, sendo assim recomendado em estudos com esta bactéria, submetida a
diferentes condições ambientais de pH, temperatura e concentração de amônia.
264
Genética de Microrganismos
AVALIAÇÃO E OTIMIZAÇÃO DA RT-PCR EM TEMPO REAL PARA A DETECÇÃO DO VÍRUS
CHIKUNGUNYA.
Tâmisa Morais Rêgo1; Klarissa Miranda Guarines1; Otávio Valério de Carvalho1; Bruna Varginha Ramos
Caiado1; Rafael Dhalia1; Ernesto Torres de Azevedo Marques Jr1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Virologia (Lavite). Fundação Osvaldo Cruz - FIOCRUZ, PE.
RESUMO
O vírus Chikungunya (CHIKV) atualmente é um dos arbovírus de grande relevância médica, transmitido aos seres
humanos pela picada do mosquito do gênero Aedes. O Brasil, por já ser considerado alvo de surtos epidêmicos de
Febre Chikungunya, deve se engajar e apresentar medidas de controle e prevenção da doença para um manejo
clínico apropriado. Para a detecção da infecção aguda a estratégia mais eficiente é a detecção do vírus por
transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR), justificando o nosso
objetivo de otimizar (às condições locais) e implementar em nosso laboratório o ensaio desenvolvido pelo Centro
de Controle e Prevenção de doenças (CDC), utilizando amostras de referência oriundas do LACEN-PE. Uma das
aplicações da PCR em tempo real no diagnóstico e pesquisa clínica de vírus, está na construção de uma curva
padrão utilizando concentrações conhecidas de RNA viral, permitindo a quantificação das amostras e
estabelecimento do limite de detecção do ensaio. Até o presente momento, o sistema de RT-qPCR foi otimizado e
a curva padrão foi desenvolvida. Para isso, fragmentos de 126 pares de base (pb) provenientes de um gene
sintético com tamanho de 1416pb foram clonados no vetor pGEM-T Easy. Em seguida, a transcrição in vitro dos
clones foi realizada para obtenção dos transcritos do CHIKV que foram então aplicados em uma curva padrão,
ensaio duplicata, em diluição seriada de fator 10, variando em 108 a 101 ssRNA/μl (móleculas de RNA). Clones
de 126pb foram obtidos e transcritos com fragmentos de 220nt foram produzidos. A curva padrão, que teve por
objetivo avaliar o limite de detecção e a sensibilidade da RT-qPCR, demonstrou uma eficiência de 98%,
amplificando até o último ponto da curva (101), o que representa em número de cópias de moléculas o total de 195
ssRNA/μl, e um CT de 33. A realização desta metodologia dentro do Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães é de
extrema utilidade pública, uma vez que poderá ser acionado para a triagem de indivíduos infectados pelo vírus
Chikungunya, dando suporte ao Ministério da Saúde.
APOIO
FACEPE
265
Genética de Microrganismos
BIOCHEMICAL ANALYSIS OF HOMOLOGOUS RECOMBINATION MACHINERY OF
CHROMOBACTERIUM VIOLACEUM
Daniel Chaves de Lima1; Mauro Modesti2; Silvia Regina Batistuzzo de Medeiros1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Rio Grande do Norte; (2)Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille
RESUMO
Chromobacterium violaceum is a ß-proteobacteria commonly found around tropical and subtropical regions
throughout the globe. It produces many metabolites with biotechnological properties such as antitumoral peptides,
antibiotics and polymers that have potential to replace the oil-based ones. Although it has been extensively studied
over the past 40 years, there are many aspects of C. violaceum that remains unclear until today. We have
conducted a biochemical study on the homologous recombination (HR) machinery of C. violaceum, mainly in
RecA and its paralog, RadA/Sms. We performed in vitro assays from initial and late steps of HR such as D-loop
formation and branch migration, respectively, with their corresponding molecular actors and how RadA/Sms
influenced each one. We observed cvRadA/Sms influences negatively D-loop formation promoted by cvRecA and
through pull-down assay we have observed an interaction between these two proteins. We also observed the DNAbinding preference of cvRadA/Sms and cvRecA and observed that this protein binds preferentially to dsDNA
instead ssDNA, unlike cvRecA. No involvement of cvRadA/Sms on branch migration reactions was
detected. These are the first biochemical analysis on HR in C. violaceum and improves our understanding in how
this important pathway works.
APOIO
CAPES/COFECUB; CNPq
266
Genética de Microrganismos
CARACTERIZAÇÃO DA MICROBIOTA ASSOCIADA AO ZOANTÍDEO PALYTHOA CARIBAEORUM
Gustavo Vasconcelos Bastos Paulino1; Leonardo Broetto2; Ciro Ramon Félix dos Santos Silva3; Melissa Fontes
Landell4.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica e Conservação nos Trópicos, Universidade Federal de
Alagoas, Campus A. C. Simões.; (2)Universidade Federal de Alagoas, Campus Arapiraca; (3)Universidade Federal
de Alagoas, Campus A. C. Simõ; (4)1Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica e Conservação nos
Trópicos, Universidade Federal de Alagoas, Campus A. C. Simões.
RESUMO
Grande parte da rica diversidade genética e metabólica marinha ainda não explorada encontra-se nos recifes de
coral. Além da macrofauna, suportam também diversas bactérias, que em conjunto com outros micro-organismos,
formam uma complexa comunidade hoje denominada coral holobionte. Eles desempenham um importante papel
na saúde do hospedeiro, provendo uma fonte de alimento e ocupando nichos específicos. A espécie Palythoa
caribaeorum é um zoantídeo comum nos recifes do Caribe e do Brasil, apontado como espécie-chave nos recifes
do nordeste, e que até então não possui sua comunidade bacteriana caracterizada. Nosso trabalho visou a descrição
do inventário taxonômico das bactérias associadas ao coral P. caribaeorum através do pirosequenciamento parcial
do gene rRNA 16S. As coletas foram realizadas em março de 2015, em dois locais: recife de coral da Ponta Verde
e recife de arenito da Sereia, ambos em Maceió - AL. Foram cortados fragmentos com cerca de 10 cm2 de três
colônias saudáveis diferentes de P. caribaeorum, então colocados em sacos plásticos estéreis, armazenados em
gelo durante o transporte para o laboratório e congelados a -20ºC até a extração de DNA ser realizada utilizando
protocolo de extração orgânica com fenol-clorofórmio. Após amplificação por PCR, foi realizado o
pirosequenciamento. As sequências obtidas foram analisadas de acordo com o protocolo proposto pelo Projeto
Microbioma Brasileiro. O pirosequenciamento das amostras resultou num total de 26,166 sequências, reduzidas
para 8,988 após o controle de qualidade, gerando um total de 459 OTU's com identidade de 97%. Análises de
diversidade demonstraram que no recife da Sereia a comunidade apresentou uma maior diversidade de OTU's e
uma maior similaridade entre as amostras do que na Ponta Verde, onde as comunidades demonstraram estar
passando por alterações na composição. Em geral, Proteobacteria (57,4%) foi o filo mais abundante, sendo
apontado pela literatura como um dos principais grupos associados à corais, seguido por Actinobacteria (12,1%),
filo encontrado em associação com diversas fontes biológicas, tais como moluscos e esponjas. Concluímos que a
espécie P. caribaeorum possui uma rica e diversa comunidade microbiana associada, havendo variação entre os
dois pontos coletados, possivelmente causada por fatores antrópicos.
APOIO
Capes e CNPQ
267
Genética de Microrganismos
CARACTERIZAÇÃO DAS INTERAÇÕES E DOS MRNAS ASSOCIADOS COM DIFERENTES
PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO A RNA EM LEISHMANIA
Ludmila Arruda de Assis1; Larissa Mélo do Nascimento1; João Ramos da Cruz Silva2; Fabiola Holetz3; Tamara
de Carli da Costa Lima2; Osvaldo Pompílio de Melo Neto2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães; (3)Instituto Carlos Chagas
RESUMO
A regulação da expressão gênica em tripanossomatídeos ocorre principalmente a nível pós-transcricional e envolve
tanto o controle da estabilidade dos mRNAs quanto a sua tradução. Em ambos os eventos uma participante crítica
é a Proteína de Ligação a Poli-A, ou PABP, que em Leishmania é representada por três distintos homólogos. A
PABP1 parece ser o principal candidato para desempenhar as funções conhecidas da PABP durante a tradução em
outros organismos. O papel funcional da PABP2 e 3 continua indefinido, embora é conhecido que interajam entre
si e se ligam a um conjunto distintos de mRNAs dos que se ligam a PABP1. Como as PABPs, uma grande
quantidade de outras proteínas de ligação ao RNA, as RBPs, com típicos domínios de ligação a RNA, estão
presentes em tripanossomatídeos. Este estudo teve como objetivo identificar os mRNAs alvos de duas RBPs que
estão diferencialmente associadas com PABPs de Leishmania, bem como caracterizar as interações entre estas e os
homólogos de PABP. Para isso, as três PABPs foram submetida a imunoprecipitação (IP) e análises de
espectrometria de massa e RBPs diferencialmente associadas a PABP1 e PABP2 e 3 foram identificadas. A
RBP23 foi encontrada associada com PABP1 e a DRBD2 foi encontrada com PABP2. Para identificar os mRNAs
ligantes a estas duas RBPs, primeiramente foram expressas proteínas fusionadas a HA em células de L. infantum.
Extratos citoplasmáticos destas células foram usados em nova IP e os RNAs ligados a RBP23-HA e DRBD2-HA
foram extraídos e usados para construir uma biblioteca de cDNA e sequenciamento de nova geração. Um grande
número de reads de mRNAs de proteínas ribossomais foi encontrado co-precipitando com a RBP23, o que esta de
acordo com experimentos prévios que mostram estes mesmos mRNAs encontrados preferencialmente associados
com a possível parceira PABP1. Os reads derivados dos experimentos com a DRBD2, entretanto, foram
enriquecidos com sequências codificadoras de histonas, novamente consistente com dados prévios onde mRNAs
de histonas foram encontrados em IP da possível parceira PABP2. Foram também realizados ensaios de interação
proteína-proteína, entre as PABPs fusionadas a GST e estas duas RBPs marcadas radioativamente. Foi visto que
neste ensaio a RBP23 interage diretamente com a PABP1, e a DRBD2 é capaz de interagir diretamente com as três
PABPs. Com estes experimentos espera-se avançar no conhecimento de diferentes RBPs de Leishmania e do seu
papel na tradução de conjuntos distintos de mRNAs.
APOIO
CAPES
268
Genética de Microrganismos
CARACTERIZAÇÃO DO SISTEMA CRISPR EM ISOLADOS CLÍNICOS DE PSEUDOMONAS
AERUGINOSA
Ana Carolina de Oliveira Luz1; Julia Mariana Assis da Silva2; Maria Paloma Silva de Barros3; Tereza Cristina
Leal Balbino3.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Genética - PPGG/UFPE; (2)Universidade Federal de Pernambuco - UFPE;
(3)
Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães - FIOCRUZ/PE
RESUMO
O locus CRISPR e as genes cas são os principais componentes genéticos do sistema CRISPR/Cas, maquinaria
responsável pelo sistema imune adaptativo encontrado em procariotos e arqueas contra elementos genéticos
móveis invasores. O locus CRISPR é constituído por repetições diretas (DR) intercaladas por espaçadores, sendo
estes provenientes de fagos e plasmídeos com os quais a célula já teve contato previamente. Estes espaçadores,
quando transcritos em RNA CRISPR, funcionarão como guia para a maquinaria de clivagem de DNA (proteínas
Cas). O objetivo do presente trabalho foi caracterizar o sistema CRISPR em isolados clínicos de Pseudomonas
aeruginosa, patógeno humano oportunista, relevante pela resistência que possui a diversos antimicrobianos. Foram
estudados 130 isolados clínicos de P. aeruginosa, resistentes a diferentes antimicrobianos, oriundos de distintos
sítios de infecção e setores de dois hospitais de Recife-PE. Foram identificados por PCR três loci CRISPR
(CRISPR 1, 2 e 3) nos isolados. Dois loci CRISPR de dois isolados foram analisados através de sequenciamento
para identificação do número e tamanho de suas DRs e espaçadores. Foram encontrados 35 (26,9%) isolados
positivos para um ou mais loci CRISPR, corroborando com a literatura de que apenas 20% dos isolados de P.
aeruginosa possuem estes loci. Vinte isolados foram positivos para CRISPR 1, 13 para CRISPR 2, e 27 para
CRISPR 3. Ao total, um isolado comporta os loci 1 e 2; três isolados os loci 1 e 3; e onze, os três loci. Foram
sequenciados os CRISPR 1 dos isolados de P. aeruginosa nomeados 22 e 42, ambos oriundos do mesmo hospital,
do mesmo sítio de infecção (secreção traqueobrônquica) e do mesmo setor hospitalar (UTI). A análise das
sequências permitiu observar: DRs de 28 pares de bases (pb), idênticas para as duas amostras; uma DR atípica, a
primeira, com a mesma substituição de bases (C por T) na mesma posição para ambos os isolados; espaçadores
com 32 pb (10 no isolado 22 e 14 no isolado 42). Tais espaçadores não são iguais entre as amostras analisadas, e
alguns apresentam similaridade com sequências de fagos do gênero Pseudomonas depositados em bancos de
dados. Os resultados demonstram a presença dos loci CRISPR em isolados brasileiros de P. aeruginosa, primeira
descoberta para esta espécie no país. Perspectivas para o trabalho são: sequenciamento de mais loci e análises mais
profundas; avaliação da expressão e do funcionamento do sistema CRISPR/Cas e a relação clonal dos isolados do
estudo.
269
Genética de Microrganismos
CARACTERIZAÇÃO DOS GENES SODA, SODC E DA ATIVIDADE DA SUPERÓXIDO DISMUTASE
EM ISOLADOS DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS OBTIDOS DE CAPRINOS E
OVINOS NO SEMIÁRIDO DE PERNAMBUCO.
Yasmin da Silva Gonçalves1; Adijailson de Oliveira Neri1; Evandro Santos Amanso1; Matheus Lima Meira1; Deize
Raquel Reis Cruz1; Gisele Veneroni Gouveia1; Wagner Pereira Felix1; Mateus Matiuzzi da Costa1.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVASF
RESUMO
Corynebacterium pseudotuberculosis é um bacilo gram-positivo, intracelular facultativo, imóvel e anaeróbico
facultativo, pertencente à família Actinomycetae. É o agente etiológico da linfadenite caseosa, uma das principais
doenças infecciosas de caprinos e ovinos. A compreensão da patogenicidade bacteriana é fundamental para
estabelecer medidas de controle e profilaxia. Esta bactéria possui como um dos principais fatores de virulência a
habilidade de sobreviver ao estresse oxidativo, contribuindo com a permanência do patógeno dentro de
macrófagos. Em outros organismos esta atividade é associada à presença da enzima superóxido dismutase (SOD;
EC 1.15.1.1.). A SOD é classificada em quatro grupos distintos de acordo com o seu cofator: Fe++ (sodB),
Mn++ (sodA), Ni++ (sodD), Cu++ e Zn++ (sodC). O trabalho objetivou detectar a presença de SOD, identificar e
purificar os tipos de superóxido dismutase existentes em cepas de C. pseudotuberculosis oriundas de pequenos
ruminantes, e caracterizar os genes sodA e sodC codificantes das isoformas MnSOD e CuZnSOD. Utilizou-se 30
isolados de C. pseudotuberculosis obtidos em propriedades de diferentes municípios pernambucanos. Realizou-se
extração e quantificação de proteínas, analisando-as por SDS-PAGE para verificar seu perfil eletroforético e
acompanhar as etapas de purificação; PAGE com NBT e riboflavina para determinar a presença da SOD nativa; e
teste de inibição com KCN e H2O2 para identificação do tipo de SOD presente. Três amostras foram escolhidas
para purificação da proteína através das seguintes etapas: precipitação com sulfato de amônio com saturação 60%,
cromatografia de troca iônica (DEAE Sephadex A-50) e cromatografia de afinidade saturada com Cu++ e Mn++. A
verificação dos genes nos isolados foi por Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Treze amostras foram
positivas para a presença de duas isoformas da superóxido dismutase. Tais amostras foram cromatografadas em
matriz de troca iônica e o pico não retido foi coletado, dialisado e aplicado na coluna cromatográfica de
afinidade HiTrap Chelating Sepharose HP, na qual observou-se o pico devidamente retido, indicando assim tratarse de CuZnSOD e MnSOD. Na amplificação dos genes, todos os 30 isolados testados apresentaram resultados
positivos para sodA e sodC. Assim, foram identificados nos isolados clínicos de C. pseudotuberculosis os
genes sodA e sodC, e as isoformas CuZnSOD e MnSOD foram isoladas e caracterizadas.
APOIO
CNPq e FACEPE
270
Genética de Microrganismos
CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DA DINÂMICA DE GRUPOS BACTERIANOS DURANTE A
TRANSIÇÃO ENTRE ÁREA NATIVA E CULTIVADA DE UM ARGISSOLO DA CAATINGA DO
SERTÃO PERNAMBUCANO
Alícia Lie de Melo1; Gisele Veneroni Gouveia1; João José de Simoni Gouveia1; Natoniel Franklin de Melo2;
Mateus Matiuzzi da Costa1; Adriana Mayumi Yano de Melo1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Vale do São Francisco; (2)Embrapa Semiárido
RESUMO
Os micro-organismos são peças-chave na manutenção dos ecossistemas, participando de processos de
decomposição da matéria orgânica, ciclagem de nutrientes e interações com outros organismos. O solo é a
principal fonte de micro-organismos e abriga a maior diversidade do planeta; em decorrência das ações
antropogênicas, particularmente devido ao uso intensivo para atividades agrícolas, este ambiente sofre constante
mudança. Estudos demonstram relação inversa entre intensidade de cultivo e biodiversidade, com mudanças na
estrutura da comunidade microbiana pela conversão de áreas nativas em cultivadas. Porém, mesmo levando ao
desaparecimento de alguns grupos, a atividade agrícola pode não causar perdas na diversidade, pois outros grupos
podem aparecer em razão dessas práticas - essas diferenças na comunidade podem, inclusive, não corresponder a
perdas de funcionalidade. Neste sentido, abordagens moleculares podem ser importantes ferramentas para
compreender a dinâmica dos micro-organismos do solo frente às alterações provocadas pelo homem, considerando
que apenas 1% dos micro-organismos pode ser cultivado in vitro. Assim, buscou-se conhecer a estrutura e as
mudanças ocorridas na comunidade microbiana edáfica de uma área de argissolo do Vale do São Francisco que
passou de área nativa à cultivada. As coletas ocorreram em quatro períodos: 1) mata nativa (MN), 2) 192 dias após
o desmatamento da área nativa (192 DAD), 3) preparo do solo (PS, solo arado e gradeado) e 4) sob cultivo
(maracujá em consórcio com feijão caupi), com quatro repetições, em que cada unidade experimental era
composta por seis subamostras, totalizando 24 amostras por período. Após a extração de DNA das amostras de
solo, estas foram sequenciadas utilizando a tecnologia MiSeq (Illumina®). As sequências foram analisadas
utilizando o software mothur, sendo classificadas em phylotypes. As proporções dos grupos dominantes de
bactérias mudaram ao longo do tempo, em especial os grupos Acidobacteria, Actinobacteria e Proteobacteria. As
Acidobacteria, inicialmente, representavam 52,25% da comunidade (MN), passando para 43,49% (192 DAD),
4,65% (PS) e 22,9% ao longo do tempo. Estes resultados indicam que as práticas de aragem e gradagem, adubação
e a introdução das culturas aumentaram a proporção das Actinobacteria e Proteobacteria, sendo tal fato atribuído
ao maior teor de nitrogênio decorrente destas práticas.
APOIO
Facepe e CNPq
271
Genética de Microrganismos
CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DO PESTALOTIOPSIS GUEPINII E VERIFICAÇÃO DA
PRESENÇA DA ROTA BIOSSINTÉTICA DE PACLITAXEL (TAXOL), ATRAVÉS DE MARCADORES
MOLECULARES
Hortência Farias de Andrade1; Elys Karine Carvalho da Silva1; Cícero José Luíz dos Ramos Almeida1; Márcia
Vanusa da Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFPE
RESUMO
Atualmente as plantas possuem mecanismos promissores, evolutivamente, e que propiciam uma excelente
integração no que diz respeito planta-microrganismo. Esses mecanismos podem ser de natureza química e/ou
biológica e que podem conferir a planta uma função paralela as suas funções naturais. Alguns estudos demonstram
que os microrganismos possuem importantes funções para os seus hospedeiros, pois podem sobreviver em
simbiose e mutuamente. Em 1993 foi registrado pela primeira vez, um fungo produtor de taxol, um diterpenóide e
tem efeito contra o câncer de mama e o útero. O objetivo desse trabalho foi caracterizar, molecularmente, o fungo
Pestalotiopsis guepinii e realizar um rastreamento primário, por meio de genes chaves da via biossintética, a
possível produção do paclitaxel. Para a execução foi utilizado o fungo Pestalotiopsis guepinii depositado na
micoteca - URM na UFPE em 2013, na água. A extração do DNA foi realizada por meio da técnica CTAB, com
algumas modificações. O DNA foi amplificado por PCR com os primers universais ITS 1 e ITS 4. Logo após foi
feita um rastreamento primário com três genes chaves na rota biossintética do paclitaxel por PCR. Os primers
utilizados foram: ts-F, ts-R, dbat-F, dbat-R, bapt-F, bapt-R. A caracterização molecular, sequenciamento, permitiu
a comparação e confirmação do gênero e espécie, através do National Center for Biotechnology Information
(NCBI), usando o BLAST. A confirmação da presença dos genes específicos da biossíntese do paclitaxel através
da técnica de PCR sugere a possível produção deste elemento antitumoral pelo fungo Pestalotiopsis guepinii.
Dessa forma, verifica-se que o fungo pestalotiopsis guepinii possui a rota da biossíntese do paclitaxel e por isso
pode ser um excelente produtor desse antitumoral. Faz-se necessário analises posteriores como: extrato em fase
orgânica para qualificação da produção do paclitaxel, por meio do HPLC.
APOIO
CAPES
272
Genética de Microrganismos
CONSTRUÇÃO DE QUIMERAS DO GENE L1 FUSIONADAS AO GENE E5 DE BPV-1 POR PCR DE
FUSÃO PARA GERAÇÃO DE ANTÍGENOS PROFILÁTICO-TERAPÊUTICOS CONTRA A
PAPILOMATOSE BOVINA.
Thais Moreira Alexandre da Silva1; Filipe Colaço Mariz1; Antonio Carlos de Freitas1.
E-mail: [email protected]
(1)
Edna Moreira da Silva e Valdemar Alexandre da Silva Filho
RESUMO
O Brasil possui o maior rebanho comercial de bovinos do mundo, possuindo grande destaque na exportação de
carne bovina, na produção de leite e couro. O papilomavírus bovino (BPV) é um vírus altamente disseminado no
mundo em rebanhos bovinos, sendo reconhecido como agente etiológico da papilomatose bovina. A papilomatose
bovina acomete o gado e resulta no aparecimento de lesões benignas na pele e que, se desenvolvidas na bexiga ou
trato gastrintestinal superior, pode levar a carcinomas quando associadas a co-fatores como a ingestão de
samambaia. Contudo, a ausência de dados precisos sobre a doença dificulta o desenvolvimento de medidas de
controle para a papilomatose e potencializa a perda econômica para os pecuaristas. Atualmente não existe vacina
ou tratamento efetivo para o combate a doença. O objetivo do trabalho foi a construção de quimeras do gene L1
fusionadas a epítopos do gene E5 com potencial para geração de antígenos profilático-terapêuticos contra a
papilomatose bovina. A construção das quimeras ocorreu mediante a técnica de PCR de fusão a partir da inserção
de epítopos do gene E5 na região do loop D-E do gene L1 selvagem de BPV-1 não códon-otimizado, clonado
previamente no vetor de expressão pPGKΔ3. A amplificação do fragmento foi realizada utilizando primers
específicos contendo em sua sequência os epítopos de E5 a serem inseridos na região do loop D-E. A análise dos
fragmentos foi feita por eletroforese em gel de agarose 1% para confirmação da construção dos insertos com
tamanho de 1650 pb. As construções foram clonadas no vetor de passagem pGEM-T Easy e a confirmação da
clonagem foi feita por digestão enzimática com as enzimas BamHI e KpnI. A análise do sequenciamento de DNA
foi realizada para confirmação da construção dos insertos por PCR. Os resultados obtidos confirmaram que houve
a correta construção das quimeras de L1/E5, sendo observada na região do loop D-E do gene L1 a presença do
epítopos do gene E5 trabalhado. A obtenção das quimeras irá permitir o desenvolvimento de uma estratégia
vacinal aplicada ao controle/tratamento das doenças relacionadas à infecção pelo BPV.
APOIO
Capes
273
Genética de Microrganismos
DESENVOLVIMENTO DE VACINA DE DNA BASEADA NO GENE L2 DO PAPILOMAVÍRUS
BOVINO
Ana Paula Ferreira Campos1; Marcelo Nazário Cordeiro1; Anna Jéssica Duarte Silva1; Rita de Cássia Pereira
Lima1; Gabriel Henrique de Arruda Cardozo1; Larissa Silva de Macêdo1; André Luiz Santos de Jesus1; Antonio
Carlos de Freitas1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Os papilomavírus (PVs) incluem vírus de DNA circular em dupla fita, pequenos, não envelopados, de capsídeo
icosaédrico e, geralmente, envolvidos em lesões benignas de epitélio e mucosas. Apresentam grande disseminação
entre diversos grupos animais, que, uma vez infectados, podem permanecer assintomáticos ou apresentar lesões
como verrugas e papilomas de pele. A papilomatose bovina é uma doença que pode vir a comprometer
severamente a lucratividade do rebanho, pois as suas lesões decorrentes da infecção pelo Papilomavírus Bovino
(BPV) resultam em danos ao couro, susceptibilidade a infecções secundárias e perda de peso com redução da
produção de carne e leite. A proteína L2 é produzida na fase tardia do ciclo de infecção viral, sendo uma das
formadoras da estrutura do capsídeo. A nossa abordagem vacinal baseia-se em imunização genética contra um dos
principais epítopos contidos na proteína L2 (11-200), responsável por resposta cruzada de anticorpos neutralizantes
entre diferentes tipos de PVs. Além disso, a porção inteira do gene L2 será utilizada visando comparação entre as
expressões gênicas. O presente trabalho consiste na construção de candidatos vacinais por meio de vacina de
DNA propondo uma abordagem preventiva contra BPV, além de poder fundamentar modelos experimentais
válidos para imunização contra o papilomavírus humano (HPV). Os genes L2 e L2(11-200), do BPV2,
respectivamente, foram amplificados por PCR e clonados, individualmente, no vetor plasmidial pGEM - T easy
(Promega™) para propagação em Escherichia coli (linhagem DH5α). Em seguida, foram subclonados nos vetores
de expressão pVAX (Invitrogen™) e pCI-neo (Promega™) através dos sítios de restrição EcoRI/Notl. Ambas as
sequências construídas foram avaliadas por digestão enzimática, PCR e seqüenciamento. Ademais, será realizada a
avaliação da expressão das construçoes em cultura de células da linhagem de HEK 293 usando SDS PAGE e
Western-Blot e posteriormente será aplicado o ensaio em modelos pré-clínicos.
APOIO
CAPES, FACEPE e CNpQ
274
Genética de Microrganismos
DIVERSIDADE E TAXONOMIA MOLECULAR DE LEVEDURAS EPIFÍTICAS EM FRAGMENTOS
DE MATA ATLÂNTICA NO ESTADO DE ALAGOAS/BRASIL
Felix, Ciro R1; Casanova, Hector M1; Paulino, Gustavo2; Broetto, Leonardo1; Landell, Melissa Fontes1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Alagoas - UFAL; Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica e
Conservação dos Trópicos - PPG-DIBICT; (2)Universidade Federal de Alagoas - UFAL; 2Programa de Pósgraduação em Diversidade Biológica e Conservação dos Trópicos - PPG-DIBICT
RESUMO
A diversidade genética é um fator fundamental para manutenção da biodiversidade. Leveduras são organismos
eucariotos, unicelulares, ubíquos e pertencentes ao reino Fungi. O conhecimento sobre a diversidade genética de
leveduras possui potencial para aplicação em diversas áreas: e.g. biotecnologia, taxonomia e evolução. Diante
disto, este trabalho objetivou avaliar a diversidade e realizar a taxonomia molecular de leveduras associadas ao
filoplano de bromélias da Mata Atlântica em Alagoas/Brasil através sequencias da região D1/D2 do gene 26S do
rDNA. As amostras de bromélias foram coletadas em quatro fragmentos da Mata Atlântica: União dos Palmares
(UP), Quebrangulo (Q), Murici (M), Maceió (Ma). Em seguida, foram processadas e os isolados obtidos foram
caracterizados e estocados. O DNA genômico de cada isolado foi extraído e a região D1/D2 foi amplificada por
PCR utilizando os oligonocleotídeos iniciadores NL-1 e NL-4. As análises das sequências e estatísticas foram
realizadas utilizando os softwares Mega 6 e R, respectivamente. Foram obtidos 123 isolados, e identificados até o
momento 117. A riqueza (S) e diversidade (H) foram calculadas pelo índice de Shannon-Weaver, obtendo-se os
seguintes valores para os pontos amostrados:(UP): H=3,072 e S=24; (Q): H=2,726 e S= 16; (M): H=2,59 e S=16;
(Ma): H= 2,97 e S=23. Destaca-se a identificação de 78 polimorfos, que foram analisados relacionando-os com as
diferenças nos tamanhos dos fragmentos (A) dos locais amostrado e com a distância destes da linha do Equador,
procurando um padrão de distribuição latitudinal. Levou-se em consideração as espécies com mais genótipos
distintos: Aureobasidium thailandese (7 isolados, 3 genótipos), Candida bambusicola (4 isolados, 3 genótipos) e
Papiliotrema leoncinii (6 isolados, 3 genótipos). O local com mais genótipos distintos por amostra foi (Q): 3,33 e
A= 30,40 Km², seguido por (UP): 2,88 e A= 27,97 Km²; (M): 1,72 e A= 61,16 Km² e (Ma) :1,28 e A= 1,14Km². O
padrão de distribuição da diversidade genética não mostrou relação estatisticamente significativa com o tamanho
do fragmento e a distância do equador, p=0.85 e 0,19 respectivamente. Porém, foi possível observar uma tendência
da diversidade genética em relação aos dois fatores. A riqueza tendeu a aumentar em relação ao tamanho do
fragmento e diminuir em relação a uma maior distância do Equador. Sendo assim, sugere-se mais estudos em
relação a este componente além de um aumento no esforço amostral de coletas.
APOIO
CNPq
275
Genética de Microrganismos
DIVERSIDADE MOLECULAR DE FUNGOS FILAMENTOSOS ASSOCIADOS À INVERTEBRADOS
MARINHOS
Gustavo Vasconcelos Bastos Paulino1; Ciro Ramon Félix dos Santos Silva2; Melissa Fontes Landell1.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica e Conservação nos Trópicos, Universidade Federal de
Alagoas, Campus A. C. Simões.; (2)Universidade Federal de Alagoas, Campus A. C. Simõ
RESUMO
Os recifes de coral abrigam uma biota extraordinariamente diversa, incluindo uma ampla variedade de
invertebrados sésseis conhecidos por apresentarem uma grande diversidade de micro-organismos que podem estar
associados à diversos papéis ecológicos, incluindo a participação em ciclos biogeoquímicos, proteção contra
patógenos ou no suprimento de nutrientes. Apesar de frequentemente subestimados, o isolamento e identificação
de fungos derivados de substratos marinhos vem ganhando mais atenção. Ainda assim, mesmo sendo ubíquos e
podendo ser facilmente isolados tanto a partir do tecido interno de esponjas quanto das diversas camadas e muco
que compõem os corais, pouco se sabe sobre a diversidade, natureza das associações e importância ecológica dos
fungos filamentosos associados à invertebrados marinhos sésseis. O presente trabalho visou a identificação
molecular de isolados de fungos filamentosos obtidos à partir de corais e esponjas coletados em dois recifes
diferentes do litoral de Maceió - AL. Quatro coletas foram realizadas entre 2014 e 2016 no recife de coral da
Ponta Verde e recife de arenito da Sereia. Fragmentos dos invertebrados foram cortados, colocados em sacos
plásticos esterilizados e armazenados em gelo durante o transporte para o laboratório, onde foram cortados em 4
fragmentos de 1 cm³ e dispostos de forma equidistante em placas contendo extrato de malte + cloranfenicol. Após
o isolamento e estoque, foi realizada a extração de DNA genômico dos isolados, seguida pela amplificação da
região ITS usando os oligonucleotídeos iniciadores ITS-1 e ITS-4, e posteriormente o sequenciamento dos
fragmentos. As sequências foram analisadas usando a plataforma BLAST. Foram obtidos 95 isolados a partir de
59 amostras, entre corais e esponjas, sendo 52 obtidos na Ponta Verde e 43 obtidos na Sereia. Até o momento, a
identificação preliminar de 39 isolados mostra que os gêneros mais abundantes foram: Aspergillus (n = 21),
Trichoderma (n=7) e Penicillium (n=6), todos grupos comumente encontrados em associação à invertebrados
marinhos sésseis. Dois isolados representam possíveis espécies novas, reforçando ainda mais a importância de se
explorar esse ambiente extremamente promissor e ainda pouco explorado.
APOIO
Capes e CNPQ
276
Genética de Microrganismos
EFEITO DO FLORFENICOL NA DIETA ALIMENTAR SOBRE A DIVERSIDADE BACTERIANA DO
INTESTINO DE TILÁPIAS DO NILO (OREOCHROMIS NILOTICUS) INFECTADAS COM
AEROMONAS HYDROPHILA
Riani Ananda Nunes Soares1; Antônio Wilton Cavalcante Fernandes1; Samira Texeira Leal Oliveira1; Mateus
Matiuzzi da Costa1; Gisele Veneroni Gouveia1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Vale do São Francisco, Petrolina, PE
RESUMO
Como forma de atender à crescente demanda por alimentos, o controle de doenças em peixes tem se concentrado
no uso de antibióticos, sendo o florfenicol o mais utilizado no combate a infecções bacterianas. O acréscimo de
antibióticos na ração pode influenciar a composição genética de microrganismos do intestino dos peixes que
influenciam na absorção de nutrientes pelo animal. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da
suplementação com diferentes concentrações do antibiótico florfenicol sobre a diversidade bacteriana do intestino
de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) infectadas com Aeromonas hydrophila. Foi montado um
experimento in vivo que constou dos seguintes tratamentos: grupo que recebeu ração controle e peixes inoculados
com solução salina, grupo que recebeu ração controle e peixes inoculados com Aeromonas hydrophila, grupo
recebendo ração contendo 20 mg de florfenicol; grupo recebendo ração contendo 40 mg e grupo recebendo ração
contendo 60 mg de florfenicol, sendo todos os peixes inoculados com A. hydrophila. O DNA das bactérias
presentes no intestino de três peixes de cada tratamento foi extraído e utilizado em Reações em Cadeia da
Polimerase (PCR) com TopTaq Master Mix kit (Qiagen®) e primers universais de bactérias acrescidos de um
grampo GC. Em seguida, foram avaliados pela técnica DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) com
gradiente de 40-75% em gel de acrilamida a 8% para análise de diversidade de bactérias. A análise do DGGE
demonstra que os grupos que receberam ração contendo 40 mg e 60 mg de florfenicol apresentaram cinco bandas
representando a maior diversidade bacteriana encontrada. No entanto, os grupos que receberam ração controle e
foram inoculados com solução salina; que receberam ração controle e que receberam ração contendo 20 mg de
florfenicol (ambos inoculados com A. hydrophila) exibiram três grupos bacterianos, sendo os três em comum. Isso
pode ser explicado pelo fato de que altas doses de antibiótico podem alterar o perfil de microrganismos induzindo
a seleção daqueles que são resistentes à droga, alterando assim a composição da microbiota inicial, sendo que a
ausência de alguns grupos bacterianos pode permitir o aparecimento de novos grupos, por isso os grupos
recebendo as maiores doses de florfenicol podem ter apresentado maior diversidade bacteriana. No entanto, é
necessário realizar o sequenciamento dos grupos encontrados para se identificar as bactérias e verificar a
patogenicidade das mesmas.
APOIO
CNPq
277
Genética de Microrganismos
ENTOMOPATOGENICIDADE DE ISOLADOS DO COMPLEXO DE ESPÉCIES FUSARIUM
INCARNATUM-EQUISETI SOBRE DACTYLOPIUS OPUNTIAE CONFIRMADA POR MARCADOR
MOLECULAR ISSR
Mariele Porto Carneiro Leão1; Patricia Vieira Tiago2; Antonio Félix da Costa3; Neiva Tinti de Oliveira2.
E-mail: [email protected]
(1)
Departmento de Micologia, Universidade Federal de Pernambuco e Instituto Agronômico de Pernambuco;
Departmento de Micologia, Universidade Federal de Pernambuco; (3)Instituto Agronômico de Pernambuco
(2)
RESUMO
O cultivo da palma forrageira Opuntia ficus-indica, importante na sustentabilidade da pecuária regional do estado
de Pernambuco, vem sendo comprometido por uma cochonilha da espécie Dactylopius opuntiae. O uso de fungos
entomopatogênicos poderá ser uma alternativa de baixo impacto ambiental para o controle desse inseto-praga. O
gênero Fusarium tem sido descrito como promissor no controle de insetos. Assim, esse trabalho teve como
objetivos avaliar e confirmar a eficiência/presença em campo de isolados pertencentes ao complexo de
espécies Fusarium incarnatum-equiseti no controle biológico de D. opuntiae, utilizando caracteres morfológicos e
moleculares. Suspenções de 107 conídios/mL dos isolados URM6782, URM6778 e URM681, previamente
avaliados em laboratório como eficientes no controle dessa cochonilha, foram pulverizadas, separadamente, em
um plantio de O. ficus-indica com infestação natural de D. opuntiae. A identificação do isolado
de Fusarium causador da morte do inseto foi realizada pela análise morfológica, aliada à utilização do marcador
molecular de ISSR (Inter Simple Sequence Repeats) UBC 834, anteriormente selecionado para este fim. Com base
nos caracteres morfológicos, os isolados URM6782 e URM6778 causaram 42.66% e 40.66% de
mortalidade, respectivamente, e não diferiram estatisticamente entre si. O isolado URM6811 apresentou uma taxa
de mortalidade de 14%, diferindo significativamente dos demais isolados. Baseado nas características moleculares,
dos 42.66% das cochonilhas mortas no tratamento com URM6778, 84.52% foram exibidos por DNA
fingerprinting ser URM 6782. No tratamento com URM6778, dos 40.66% das cochonilhas mortas, 54.71% foram
exibidos por DNA fingerprinting ser URM6778 e no tratamento com URM6811 dos 14% das cochonilhas mortas,
19.76% foram exibidos por DNA fingerprinting ser URM6811. Os resultados sugerem que os isolados URM6782
e URM6778 são promissores para o controle de D. opuntiae e o iniciador UBC834 pode ser utilizado para
monitoramento desses isolados quando lançados em campo. Esses dados reforçam a necessidade de monitorar os
fenótipos ao nível do genoma, antes e após sua aplicação no campo, a fim de que seja obtida uma resposta
ecológica e uma segurança na certificação da ação efetiva e específica dos isolados utilizados no controle
biológico da cochonilha do carmim.
APOIO
CAPES e Facepe
278
Genética de Microrganismos
EVOLUTIONARY INFERENCE AND MOTIF CONSERVATION BETWEEN DENGUE, ZIKA AND
CHIKUNGUNYA VIRUS FROM THE ENVELOPE PROTEIN GENE.
Fellipe Alves Ozorio do Nascimento1; Michely Correia Diniz2.
E-mail: [email protected]
(1)
Graduando em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Vale do São Francisco - UNIVASF Colegiado de Ciências Biológicas- Campus Ciências A grárias - Petrolina, PE. ; (2)Professora Doutora do
Colegiado de Ciências Biológicas da Universidade Federal do Vale do São Francisco - UNIVASF - Campus
Ciências Agrárias - Petrolina, PE.
RESUMO
Dengue virus (DENV), Zika (ZIKAV) and Chikungunya (CHIKV) became an interest global having as main
vectors Aedes aegypti and Aedes albopictus mosquitoes. The host infection in many cases is associated with the
envelope protein, which interacting with receptors present in the cell surface of vector-mosquitoes and vectorhuman. Although they are from different families, they may have submitted to the same evolutionary pressures
that shaped their infection forms through of the envelope protein. This study aimed infer the evolutionary
relationships among DENV serotypes (DENV-1 to DENV-4), ZIKAV and CHIKV and verify the motif
conservation of gene sequences "E", responsible for encoding the structural envelope glycoprotein. The sequences
were extracted of NCBI - National Center for Biotechnology Information. The alignment and the consensus
sequences were performed using the BioEdit 7.2.5 software. The distance analysis, nucleotide composition and
topology construction based on the consensus sequences were performed using the Mega 7 software. We used the
MEME tool, of the suite MEME (Motif-based sequence analysis tools) for verification of conserved motifs. The
Bootstrap method, 100 replications was used to evaluate associations reliability between the branches. The
grouping was the result of the Maximum Likelihood method (ML) with the Jukes-Cantor association model. The
sequences size ranged from 1332 to 2430 bp. Sequences of DENV-1 had an average of 1450 bp; DENV-2 average
of 1456 bp; DENV-3 average of 1322 bp; DENV-4 average of 1477 bp; ZIKAV average of 666 bp and CHIKV
average of 1142 bp. The resulting tree showed topologies well supported by bootstrap with DENV serotypes 1, 2
and 3 closer to each other in the branches. Three conserved motifs have been identified for the Dengue, two for
Chicungunya and one of the Zika. The identified motifs vary between 50 bp and 41 bp. Results may help to
understand the topological relations and conservation motif between viruses. The identification of similar regions
can contribute in the infection mechanism studies and in a near future development of new control strategies that
can inhibit the virus penetration into the cell.
279
Genética de Microrganismos
EXPRESSÃO DE ANTÍGENOS RECOMBINANTE EM LEISHMANIA TARENTOLAE PARA
UTILIZAÇÃO EM MODELOS VACINAIS CONTRA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
Santos, W. J. T1; Reis, C. R. S.2; Magalhães, F.b.3; de Melo Neto, O. P.4.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Genética (Pernambuco, Brasil); (2)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães
- Fundação Oswaldo Cruz, MICROBIOLOGIA (Pernambuco, Brasil); (3)Faculdade ASCES, Bioquimica
(Pernambuco, Brasil).; (4)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães - Fundação Oswaldo Cruz, MICROBIOLOGIA
(Pernambuco, Brasil).
RESUMO
As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários flagelados da família
Trypanosomatidae e gênero Leihsmania. No Brasil, a Leishmaniose Visceral (LV), forma mais grave da doença, é
causada pela Leishmania infantum e o cão doméstico é o seu principal reservatório. Portanto, uma vacina eficaz
contra a doença no cão é uma das principais estratégias para o controle da LV. Ela deve contar com a geração de
uma imunidade de células T eficiente, predominantemente com resposta Th1 para destruição dos parasitos pelo
sistema imune. Para isto, a utilização de vacinas atenuadas da Leishmania seriam uma boa alternativa, pois
mimetizaria melhor a doença, além de estimular a reposta imunológica desejada. Nesses estudos, a Leishmania
tarentolae, espécie não infectiva em mamíferos, tem sido amplamente utilizada devido a sua alta eficácia como
modelo de expressão de proteica e ao seu potencial de estimulação da resposta imune. Este estudo objetiva montar
ferramentas de expressão de antígenos recombinantes de L. infantum para a estimulação da resposta vacinal em
modelo murino através da sua expressão em L. tarentolae. Primeiramente, foram selecionados três construções
com potencial vacinal (Lci10, Lci13 e Q1), previamente identificadas pelo grupo. Elas foram obtidas a partir de
PCR, clonadas em pGEM-T-Easy e subclonados no vetor pLEXSY-hyg2. Após a confirmação das subclonagens
as construções foram transfectadas em L. tarentolae por eletroporação. A confirmação da integração dos genes no
genoma do parasito foi realizado através de reações de PCR, que liberaram fragmentos no tamanho predito. A
expressão dos antígenos desejados em L. tarentolae foram avaliadas através de ensaios de imunocitoquímica,
frente a anticorpos específicos, e visualizadas em microscópio confocal. Esses resultados demonstram a eficácia
do método de expressão proteica em modelo eucarioto, que serão utilizadas como proposta vacinal para avaliação
da resposta imunológica em modelos murino.
APOIO
CAPES
280
Genética de Microrganismos
EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS QUIMÉRICAS CONTENDO EPÍTOPOS NS1 DO VÍRUS DA DENGUE
PARA FINS DIAGNÓSTICOS E VACINAIS
Purificação Júnior, A.f.1; Coêlho, D. F.1; Caiado, B.v.r.1; Dhalia, R.2; Lins, R.d.2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco - Recife - PE; (2)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães /FIOCRUZ- PE
RESUMO
A dengue é uma importante doença de aspecto emergente e um grande desafio para a saúde pública mundial. No
mercado, existe apenas uma vacina licenciada que não é totalmente eficaz na prevenção da doença, além disso,
existe a dificuldade de expressar antígenos virais para o diagnóstico sorológico dessa arbovirose em sistemas
procarióticos, ocasionando um alto tempo de processamento e custo final elevado. O presente estudo, por meio da
engenharia de proteínas, visa propor moléculas alternativas de interesse diagnóstico e/ou vacinal para a dengue, a
um custo reduzido e com alta eficiência de produção. Fazendo uso da metodologia "epitope-scaffolding", através
de ferramentas computacionais, foram selecionadas curtas sequências da proteína NS1 (epítopos) do vírus da
dengue e em seguida inseriu-se na proteína Top7 (scaffold), proteína sintética que não existe na natureza, portanto
sem atividade imunogênica e também conhecida por sua notável estabilidade térmica e ambiental. Usando-a como
carreadora, a proposta foi construir proteínas quiméricas estáveis que continham epítopos de NS1-DENV, de
forma a apresenta-los na mesma conformação encontrada na proteína nativa. Ainda com auxilio dos métodos
computacionais, threading, de novo design e simulação de dinâmica molecular, as estruturas das quimeras foram
preditas e algumas se apresentaram energeticamente e estruturalmente estáveis. Os genes correspondentes a essas
proteínas foram otimizados, sintetizados comercialmente e clonados no vetor de expressão pRSET A. A clonagem
foi confirmada por digestão com enzimas de restrição e sequenciamento. O DNA foi expresso em larga escala e
extraído, sendo posteriormente transformado em células de Eschericha coli BL21 para a produção das proteínas de
interesse. As proteínas tiveram sua expressão confirmada por ensaios de imunoblot com anticorpo contra suas
caudas de histidinas (anti-HIS) e purificadas por cromatografia de afinidade, apresentando alto rendimento e
solubilidade. No entanto, o processo de purificação não foi eficiente para retirar todas as proteínas contaminantes
de E. coli que são reconhecidas por anticorpos presentes nos soros dos pacientes. Apesar disso, os sinais
detectados para as quimeras sugerem que elas são potencialmente imunogênicas. Outros métodos de purificação
estão sendo testados para se obter proteínas recombinantes puras e em seguida será feita a avaliação da
sensibilidade e a especificidade com painéis sorológicos de referência.
APOIO
PPSUS, CAPES, CNPq, FACEPE
281
Genética de Microrganismos
EXPRESSÃO DO ANTÍGENO P24 DO NUCLEOCAPSÍDEO DO VÍRUS DA IMUNODEFICIÊNCIA
HUMANA TIPO 1 (HIV1) EM LEISHMANIA TARENTOLAE
Adalúcia da Silva1; Gustavo Barbosa de Lima2; Christian Robson de Souza Reis2.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Genética PPGG/UFPE. Departamento de Virologia - CPqAM /FIOCRUZ-PE. ;
(2)
Departamento de Microbiologia. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães - CPqAM /FIOCRUZ-PE
RESUMO
A Síndrome da Imunodeficiência Humana é uma das principais doenças infecciosas do mundo, seu agente
etiológico é o vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), um retrovírus, transmitido por via sexual, vertical e
transfusional. O diagnóstico do HIV é feito pelo uso de antígenos recombinantes que permitem reconhecer
anticorpos produzidos por pacientes infectados com este vírus. Um dos antígenos de maior interesse diagnóstico é
a proteína p24 por aparecer precocemente e permanecer na corrente sanguínea por um longo período de tempo.
Porém a produção de antígenos virais em células procarióticas em muitas situações não é bem sucedida,
justificando o desenvolvimento de novos estudos que utilizem sistemas de expressão alternativos para obtenção de
proteína viral em grandes quantidades, de forma rápida e eficaz. Para isso, o sistema de expressão eucariótico
baseado em Leishmania tarentolae apresenta vantagens como rápido crescimento e capacidade de realizar
modificações pós traducionais. Além disso, esse protozoário é facilmente cultivável em laboratório NB1,
alcançando altas densidades celulares em um curto espaço de tempo. O objetivo desse trabalho é expressar a
proteína p24 do HIV 1 em L. tarentolae. O gene da proteína p24 do HIV 1 foi amplificado por PCR e clonado no
vetor pGEM-T-easy e sequenciado para verificar a integridade da sequência gênica. Em seguida, o gene foi
subclonado no vetor comercial de L. tarentolae pLEXSY hyg2. A partir das construções plasmidiais obtidas foram
obtidos cassetes de integração gênica por meio de digestão dos vetores e em seguida culturas de L. tarentolae
foram transfectadas permitindo a obtenção de duas linhagens transgênicas: uma de expressão episomal e outra de
expressão constitutiva. Para avaliação da expressão do transgene, extratos celulares foram fracionados em gel SDS
PAGE 20% que permitiu a visualização da proteína expressa no tamanho predito e a confirmação da expressão foi
feita por Western blot utilizando anticorpos anti-p24, que demonstrou a presença da proteína em ambas às
linhagens recombinantes de L. tarentolae. Em conclusão, este trabalho conseguiu realizar a expressão da proteína
recombinante p24 do HIV 1 em Leishmania tarentolae, e esse novo sistema de expressão pode ser utilizado para
expressão de outros antígenos virais.
APOIO
CAPES, CPqAM /FIOCRUZ-PE
282
Genética de Microrganismos
GENOMIC IDENTIFICATION AND PATTERNS OF EXPRESSION OF SECONDARY METABOLITE
GENE CLUSTERS IN THE ENTOMOPATHOGEN FUNGUS METARHIZIUM ANISOPLIAE.
Nicolau Sbaraini1; Augusto Schrank1.
E-mail: [email protected]
(1)
PPGBCM CBiot UFRGS
RESUMO
The Metarhizium genus harbors cosmopolitan fungi that infect arthropod hosts. Importantly, while some species
infect a wide range of hosts (host-generalists), other species infect only a few arthropods (host-specialists). This
singular evolutionary trait permits unique comparisons to determine how pathogens and virulence determinants
emerge and evolved. Among the several virulence determinants that have been described, secondary metabolites
(SMs) are suggested to play essential roles during fungal infection. Nevertheless, genes related to SM production
in Metarhizium spp. are scarcely described and little is known about their genomic organization, expression,
regulation and role during host recognition and infection. Here, we have performed a deep survey and description
of SM biosynthetic gene clusters (BGCs) in M. anisopliae and assessed conservation among the Metarhizium
genus. RNA-seq data from fungi grown on cattle-tick cuticles (mimicking infection) was analyzed to evaluated
validate some of the predictions and to access the differential expression of BGCs. Furthermore, our analysis
extended to the construction of a phylogeny for the following three BGCs: a tropolone/citrinin-related compound
(MaPKS1), a pseurotin-related compound (MaNRPS-PKS2), and a putative helvolic acid (MaTERP1). Among 73
BGCs identified in M. anisopliae, 20% were up-regulated during initial tick cuticle infection and presumably
possess virulence-related roles. These up-regulated BGCs include known clusters, such as destruxin, NG39x and
ferricrocin, together with putative helvolic acid and pseurotin- and tropolone/citrinin-related compound clusters as
well as uncharacterized clusters. Concerning host-range several up-regulated BGCs were not conserved in hostspecialist species from the Metarhizium genus, indicating possible differences in the metabolic strategies
employed by generalist and specialist species to overcome and kill their hosts. These differences in metabolic
potential may have been partially shaped by horizontal gene transfer (HGT) events, as our phylogenetic analysis
provided evidence that the putative helvolic acid cluster in Metarhizium spp. originated from an HGT event. In
conclusion, several unknown BGCs are described, and their organization, regulation and origin are discussed,
providing support for the impact of SM on the Metarhizium genus lifestyle and infection process.
APOIO
CAPES, CNPq
283
Genética de Microrganismos
IDENTIFICAÇÃO DE RAOULTELLA ORNITHINOLYTICA PRODUTORA DE CARBAPENEMASE DO
TIPO KPC ISOLADA DE UM HOSPITAL UNIVERSITÁRIO DE RECIFE
Wendell Palôma Maria dos Santos1; Ana Caroline Oliveira Alves Ribeiro1; Rodrigo Tenório Gomes Pereira1;
Anna Carolina Soares Almeida2; Márcia Maria Camargo de Morais1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Resistência Microbiana, Instituto de Ciências Biológicas - ICB/UPE; (2)Laboratório de
Resistência Microbiana, Instituto de Ciências Biológicas - ICB/UPE / Departamento de Biologia - UFRPE
RESUMO
Introdução: O gênero Raoultella é composto por bacilos gram-negativos, aeróbicos, pertencentes à família
Enterobacteriaceae. Raoultella ornithinolytica é encontrada em ambientes aquáticos e hospitalares. A ocorrência
desta espécie em humanos é rara, mas tem sido reportada em casos de infecções e apresentando resistência a
múltiplas drogas. Objetivos: Determinar o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos em um isolado de R.
ornithinolytica proveniente de infecção nosocomial e caracterizar os determinantes gênicos responsáveis pela
resistência aos carbapenêmicos. Materiais e Métodos: Um isolado de R. ornithinolytica foi coletado de uma
amostra de abscesso cavitário de um paciente do Hospital Universitário Oswaldo Cruz (HUOC) - Recife, em
dezembro de 2014. O perfil de susceptibilidade a antimicrobianos foi determinado pelo sistema automatizado
Vitek2® (BioMerieux, Marcy l'Etoile, France) e interpretada segundo o CLSI, 2016. O DNA genômico foi
extraído através do kit BRAZOL, segundo recomendações do fabricante. A detecção do gene de resistência a
carbapenêmicos (blaKPC) e dos genes de ESBLs (blaCTX, blaSHV, blaTEM) foi realizada através da técnica de PCR,
utilizando primers e condições especificas. Resultados e Discussão: O isolado estudado apresentou resistência a 12
dos 16 antimicrobianos testados, dentre eles, a colistina, com CIM (concentração inibitória mínima) >=16mg/mL.
Em relação à caracterização molecular, o isolado foi positivo para os genes blaKPC, blaCTX, blaTEM. Por se tratar de
uma espécie raramente encontrada no ambiente hospitalar, ainda há poucos relatos na literatura de R.
ornithinolytica produtora de carbapenemase do tipo KPC e, além disso, apresentando resistência à colistina, o que
representa grande preocupação, visto que esta é uma das últimas opções terapêuticas para o tratamento de
infecções causadas por microrganismos resistentes aos carbapenêmicos. Estudos posteriores que visem a
caracterização da região codificante dos genes envolvidos na resistência a colistina são necessários para a
compreensão do funcionamento deste mecanismo.
APOIO
Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia de Pernambuco - FACEPE; Conselho Nacional de Desenvolvimento
Científico e Tecnológico - CNPq
284
Genética de Microrganismos
IDENTIFICAÇÃO DE INTERAÇÕES ENTRE HOMÓLOGOS DOS FATORES DE INICIAÇÃO DA
TRADUÇÃO EIF4B E EIF5 DE LEISHMANIA SP. COM DIFERENTES COMPONENTES DA
MAQUINARIA DE SÍNTESE PROTEICA
Irassandra Rooze Pereira Uchôa Cavalcanti de Aquino1; Ludmila Arruda de Assis2; Tamara De' Carli da Costa
Lima2; Osvaldo Pompílio de Melo Neto2.
E-mail: [email protected]
(1)
Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães/Fiocruz, Recife-PE e Universidade Federal de Pernambuco, Recife-PE;
(2)
Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães/Fiocruz, Recife-PE
RESUMO
Os tripanossomatideos são os agentes causadores de doenças de grande impacto mundial, tais como a doença do
sono, doença de Chagas e as diversas formas de leishmanioses. Estes organismos apresentam características
peculiares, raramente encontradas na maioria dos eucariotos, como a regulação da sua expressão gênica que
acontece basicamente a nível pós-transcricional através do controle da estabilidade dos mRNAs e da tradução, esta
última possivelmente na sua etapa de iniciação. Nos eucariotos, a iniciação da tradução envolve diversas proteínas,
denominadas de fatores de iniciação da tradução. Dentre esses, se destaca o complexo eIF4F (eIF4A, eIF4E,
eIF4G) que facilita a montagem do ribossomo junto ao mRNA. No entanto para que essa ação ocorra se faz
necessária a ação de outros fatores como: o eIF4B, que reforça a atividade helicase do eIF4A e o eIF5, que atua a
nível do reconhecimento do códon AUG. Este trabalho teve como objetivo obter as ferramentas necessárias para a
caracterização in vivo dos fatores EIF4B e EIF5 em Leishmania infantum. Os genes EIF4B e EIF5 foram
amplificados a partir de oligonucleotideos desenhados especificamente para cada um, e então clonados no vetor
pGEM T-Easy. Uma vez confirmados por sequenciamento, os genes foram subclonados no vetor de expressão
pSP-BT1-YneoαIR. Posteriormente as proteínas foram superexpressas em L. infantum fusionadas ao epítopo HA.
A superexpressão foi confirmada por ensaios de Western-blot de extratos celulares com anticorpo contra HA. Na
expressão do EIF4B foram observados indícios de fosforilação, característica também observada em mamíferos e
sugerindo uma possível regulação específica no ciclo de vida do parasita. Por fim foram realizados ensaios de
imunoprecipitação utilizando anticorpos policlonais a fim de investigar a associação in vivo do possível homólogo
EIF4B e EIF5 com prováveis parceiros proteicos que atuam na etapa da tradução. Porém não foram observadas
interações entre o EIF4B com as proteínas PABP1, PABP2 e a EIF4AI e, do EIF5 com as proteínas EIF3E e
ribossomais (P0 e L19), esperados parceiros proteicos. A partir destes resultados espera-se entender melhor como
esses fatores atuam na tradução nos tripanossomatídeos, agregando informações relevantes sobre a iniciação da
tradução nestes patógenos.
APOIO
Universidade Federal de Pernambuco, Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães/FIOCRUZ e Conselho Nacional de
Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq.
285
Genética de Microrganismos
IDENTIFICAÇÃO DE LEVEDURAS EM GRÃOS DE KEFIR DE ÁGUA POR METAGENÔMICA
Natália Almeida Onofre1; José Antônio Santos Junior2; Maria Carolina de Oliveira Souza3; Cláudia Sampaio de
Andrade Lima3; Ricardo Yara2; Ederson Akio Kido4.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Antibióticos da Universidade Federal de Pernambuco; (2)Departamento de Engenharia
Biomédica da Universidade Federal de Pernambuco; (3) Departamento de Biofísica e Radiobiologia da
Universidade Federal de Pernambuco; (4)Departamento de Genética da Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Grãos de kefir são compostos basicamente por bactérias e leveduras simbiontes envoltas por uma matriz
polissacarídica. Estes micro-organismos são responsáveis pelas propriedades probióticas do kefir. O objetivo do
trabalho foi identificar as espécies de leveduras que constituem a mcrobiota dos grãos do kefir através de análise
metagenômica. Para isso, o DNA foi extraído diretamente a partir dos grãos do kefir, as bibliotecas foram
construídas utilizando-se de iniciadores específicos para a região ITS rRNA, e sequenciadas em plataforma
Illumina 2500 HiSeq. As tags brutas, geradas a partir de montagem, foram filtradas e os artefatos quiméricos,
removidos. As sequencias foram então usadas para gerar o conjunto de OTUs e para anotação das espécies, onde
sequências com similaridade ≥ 97% foram atribuídas a uma mesma OTU. Foram ainda estudadas as relações
filogenéticas de diferentes OTUs e a complexidade e diversidade das amostras (duas repetições), avaliadas por
análise de diversidade alfa. No total, 59.055 tags efetivas com anotação foram obtidas, sendo as sequencias
atribuídas a 53 OTUS (assumindo 97% de similaridade). Em media, 100 % das sequencias efetivas puderam ser
agrupadas ao nível de reino e 92% ao nível de filo, classe e ordem, família, gênero e espécie. Com base na análise
da abundância relativa, o filo Ascomycota foi predominante. Análise do Heat map mostrou que Saccharomyces
eubayanus, Dekkera bruxellensis, Torulaspora quercuum, Lachancea fermentati e Candida californica foram as
espécies mais abundantes. A curva de rarefação tendeu à assíntota, sugerindo sucesso no esforço amostral da
diversidade existente. De acordo com a origem dos grãos, do método ou do substrato utilizados para o cultivo, a
composição microbiológica do kefir pode sofrer variações. Este trabalho demonstrou, entretanto, que a análise
metagenômica é um método eficaz na elucidação da composição de leveduras presentes nos grãos de kefir em
estudo.
286
Genética de Microrganismos
IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE MATING TYPES DE FUSARIUM SPP., ISOLADOS DE PALMA
FORRAGEIRA.
Tarcio Tomé da Silva.1; Michele Freitas Santiago2; Alice Maria Gonçalves Santos3; Delson Laranjeira4; Tereza
Cristina de Assis5; Amaro de Castro Lira Neto5.
E-mail: [email protected]
(1)
Instituto de Ciências Biológicas -UPE, Instituto Agronômico de Pernambuco -IPA; (2)Lab. Fungos de Solo /
Fitopatologia - UFRPE, Instituto Agronômico de Pernambuco -IPA; (3)Lab. De Fitopatologia -UFPI; (4)Lab.
Fungos de Solo / Fitopatologia - UFRPE; (5)Instituto Agronômico de Pernambuco -IPA
RESUMO
Em eucariotos, como o Fusarium spp., a compatibilidade sexual é controlada por mecanismos moleculares
denominados mating types. Este gênero possui um locus denominado MAT onde se encontra o gene que possui os
idiomorfos MAT-1 e MAT-2 que determinam o mecanismo de mating type. A espécie que apresentar apenas um
desses idiomorfos é dita heterotálica, se ambos, homotálica. Sabe-se que a reprodução sexuada representa um dos
principais fatores responsável pelo aumento e manutenção da variabilidade genética dentro das populações
biológicas. Em Fusarium spp., esse aumento pode resultar em estirpes com maior virulência dificultando, assim,
um manejo mais eficiente das doenças causadas por este patógeno. Neste projeto, objetivou-se identificar através
de métodos moleculares a presença de isolados compatíveis sexualmente baseando-se nos genes localizados no
loco MAT. Foram avaliadas 13 estirpes quanto à presença dos idiomorfos MAT-1 e MAT-2, coletados de palmas
forrageira com sintomas de fusariose nos municípios de Arcoverde, Limoeiro, Surubim e Pedra localizados no
estado de Pernambuco. Essas estirpes foram testadas quanto à patogenicidade, sendo utilizadas somente as
patogênicas. Realizou-se a extração de DNA pelo método CTAB modificado seguido de PCR. Os primers
utilizados foram: fusALPHAfor e fusALPHArev, para MAT-1, fusHMGfor e fusHMGrev para MAT-2. O produto da
PCR foi encaminhado à eletroforese em gel de agarose a 1% para que o peso molecular do DNA amplificado seja
determinado com base em comparações com um marcador molecular 1Kb, com MAT-1 tendo 200pb e MAT-2
tendo 260pb. Verificou-se que dos 13 isolados analisados dez apresentam MAT-2 representando 77% dos isolados
testados e três apresentam MAT-1 representando 23% dos isolados testados. Identificando-se que o MAT-2 se
apresenta em uma proporção três vezes maior do que o MAT-1. Apesar de não terem sido encontrados nesse
estudo, existem estirpes de Fusarium spp., com os dois idiomorfos MAT-1 e MAT-2, no mesmo locus MAT. A
compreensão do processo de reprodução sexuada fornece maiores informações sobre a origem da diversidade
genética e possíveis estratégias para o manejo da fusariose ocasionada por essas estirpes.
APOIO
Instituto Agronômico de Pernambuco- IPA.
287
Genética de Microrganismos
IDENTIFICATION, CHARACTERIZATION AND FUNCTIONAL EVALUATION OF HPV16 E7
POLYMORPHISMS IN NF-κB SIGNALING PATHWAY
Rita de Cássia Pereira de Lima1; Marcelo Nazário Cordeiro1; Ruany Cristyne de Oliveira Silva1; Ana Paula
Ferreira Campos1; Daffany Luana Santos1; Ana Pavla Diniz Gurgel2; Aldo Venuti3; Bárbara Simas Chagas1;
Antonio Carlos de Freitas1.
E-mail: [email protected]
(1)
Department of Genetics, Laboratory of Molecular Studies and Experimental Therapy (LEMTE), Federal
University of Pernambuco, Recife, PE, Brazil.; (2)2 Department of Ecology, Federal University of Paraíba, Rio
Tinto, PB, Brazil.; (3)Head HPV Unit. UOSD Tumor Immunology and Immunotherapy. RIDAIT Dept. Regina
Elena National Cancer Institute Rome-Italy
RESUMO
Cervical cancer is the second most common neoplasia in women worldwide. Epidemiologic studies indicate that
high-risk human papillomavirus (HPV) persistent infection is the major cause of cervical neoplasia. High risk
HPV E7 proteins alter various aspects of human cell cycle. It is possible that polymorphisms may lead to altered
biological function with clinical consequences. Just a handful of studies have presented some data about HPV
epidemiology in Brazil northeastern population. This study have identified genotypes and its variants as
responsible for different HPV infection profiles in notheastern female population; Also, we have performed one of
the first functional analysis of polymorphisms in HPV based on NF-kB activity, an anti-viral cellular critical
pathway. HPV16 E7 single nuceotide polymorphisms (SNPs) from a high frequent variant have been tested in NFkB signaling pathway evaluation model. Thirty-seven HPV16 positive samples were amplified with specific
primers and sequencing has been performed. Comparative analysis of E7 oncogene with HPV16 reference
sequence has revealed that eight isolates presented three SNPs at positions 647, 789 and 795. One mutation was
missense at codon 29 (647) and the two remaining were silent ones. Phylogenetic tree has been generated from
HPV16 sequences and it were clustered into main groups called lineage C and D. Polymorphic E7 genes have
been design with all SNPs together, or only one of each, and have been cloned into pcDNA3.1 vector. Each HEK293 cell group was co-transfected with an NF-κB dependent firefly luciferase reporter, known as (κB)3-Luc
plasmid, and a renilla luciferase-expressing plasmid, used as luminescence normalizer. NF-κB activity was
measured by GloMax® 96 Microplate Luminometer. Statistical analysis was performed using ANOVA; p < 0.05
was considered significant. When compared with HPV16 E7 gene without SNPs, the HPV16 E7 that presents
simultaneously three SNPs has dramatically reduced NF-kB pathway activity. However, none of the E7 design
genes with only one SNP have showed significant NF-kB pathway disturb. This found may suggest a strictly
sinergic effect of these SNPs. Ongoing trials should provide data that allow a better characterization of HPV
variants clinical profile and the relevance of polymorphisms in HPV-associated cervical lesions development.
APOIO
This research was supported by FACEPE, CNPq and CAPES.
288
Genética de Microrganismos
INCIDÊNCIA DO PAPILOMAVÍRUS HUMANO (HPV) EM SANGUE PERIFÉRICO DE PACIENTES
SAUDÁVEIS E COM LESÕES CERVICAIS, NO ESTADO DE PERNAMBUCO, BRASIL
Kamylla Conceição Gomes Nascimento1; Ana Pavla Diniz Gurgel2; Dafne Carolina Alves Quixabeira3; Ruany
Cristyne de Oliveira Silva1; Rita de Cássia Pereira de Lima1; Antonio Humberto Pereira Silva Júnior1; Bárbara
Simas Chagas1; Elyda Gonçalves de Lima1; Talita Helena Araújo de Oliveira1; Marcelo Nazário Cordeiro1;
Jacinto da Costa Silva Neto3; Antonio Carlos de Freitas1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética, Laboratório de Estudos Moleculares e Terapia Experimental (LEMTE) Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE, Basil; (2)Departamento de Engenharia e Meio Ambiente
(DEMA) - Universidade Federal da Paraíba; (3)Departamento de Histologia e Embriologia - Universidade Federal
de Pernambuco
RESUMO
Estudos tem demonstrado o envolvimento do HPV em epitélios e mucosas não cervicais, tais como vagina, pênis,
mama, pulmão, cabeça e pescoço. Essas observações levantam questões sobre como o HPV poderia se estabelecer
nestes tecidos uma vez que não ocorre viremia. Especula-se que as células mononucleares do sangue periférico
(PBMC) infectadas podem se espalhar e infectar outros sítios corporais. Estudos tem demonstrado a presença de
DNA de HPV na corrente sanguínea de pacientes infectados com HPV e também pacientes sem lesões cervicais.
Ainda não está estabelecida a via pela qual o DNA do HPV é liberado na corrente sanguínea, várias suposições
vêm sendo levantadas. Dessa maneira, o objetivo do presente estudo é detectar a presença do DNA de HPVs e
identificar os tipos viriais mais prevalentes em amostras cervicais e sangue de pacientes com lesões e sem lesões
cervicais em mulheres do estado de Pernambuco, Brasil. Um total de 152 amostras de raspagem cervical e sangue
foram coletadas. A detecção do DNA do HPV foi realizada utilizando-se a reação em cadeia da polimerase (PCR)
com iniciadores degenerados MY09/11 seguida de nested com os primers GP05/06. Após a amplificação, as
amostras foram purificadas e sequenciadas. Setenta e duas amostras (47,3%) de sangue foram HPV positiva e
oitenta amostras (52,7%) de sangue foram HPV negativas. Sessenta e cinco amostras (42,7%) cervicais foram
positivas e oitenta e sete (57,3%) foram negativas. Das amostras positivas no sangue, quarenta e quatro (61,1%)
não apresentaram lesões cervicais, oito (11,1%) tiveram CIN I, cinco (6,9%) apresentavam NIC II e quatro (5,5%)
tinha câncer cervical. Foram detectados 5 tipos de HPVs no sangue periférico, nomeadamente os HPVs 16, 18, 33,
58 e 66. Os cinco genótipos virais mais frequentes foram os seguintes: HPV16 (48%), HPV18 (32%), HPV33
(13%), HPV58 (5,4%) e o HPV66 (1,8%). Os HPVs 16 e 31 são os mais frequentemente detectados na região
cervical de mulheres do Nordeste do Brasil. Considerando os tipos de HPVs presentes nos dois sítios pesquisados,
foram observados um percentual de 55% das pacientes apresentaram o mesmo tipo de HPV na região cervical e no
sangue periférico. Por outro lado, 45% das pacientes apresentou tipos de HPVs no sangue diferentes do
observados na região cervical. Esse estudo descreve a presença do DNA-HPV e os genótipos virais mais
frequentes encontrado no plasma de pacientes sem lesões cervicais e com lesões cervicais, no estado de
Pernambuco, Brasil.
APOIO
CAPES, FACEPE, CNPq
289
Genética de Microrganismos
INFLUÊNCIA DA DISPONIBILIDADE DE NITROGÊNIO NA EXPRESSÃO DE GENES DO
METABOLISMO CENTRAL DA LEVEDURA INDUSTRIAL DEKKERA BRUXELLENSIS
Irina Charlot PeÑa Moreno1; Denise Castro Parente1; Allison Andrade Mendonça1; Marcos Antonio de Morais
Jr1; Will de Barros Pita1; Irina Charlot PeÑa Moreno1.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pos graduação em Genêtica, Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Dekkera bruxellensis é uma espécie de levedura intimamente relacionada a processos de fermentação alcoólica
industrial, sendo encontrada na produção de cerveja, vinhos e em destilarias de etanol combustível. Na maioria
desses processos, incluindo a produção de bioetanol, D. bruxellensis é considerada uma levedura contaminante,
pois compete com Saccharomyces cerevisiae pelos substratos industriais. Na indústria de produção de etanol, a
disponibilidade de nitrogênio é um dos principais fatores limitantes do crescimento microbiano. Estudos prévios
mostraram que D. bruxellensis possui a habilidade de assimilar nitrato, uma fonte secundária de nitrogênio,
apontada como um importante fator de adaptação desta levedura nestes ambientes. Desta forma, é necessário
entender como fatores fisiológicos e genéticos tornam o nitrato um agente capaz de favorecer D. bruxellensis no
cenário industrial. O objetivo do presente trabalho foi descrever a influência da disponibilidade de várias fontes de
nitrogênio na expressão de genes do metabolismo central em D. bruxellensis em anaerobiose. Para avaliar a
expressão dos genes de interesse, células da levedura foram cultivadas em três diferentes combinações de fontes de
nitrogênio, em condições de micro-fermentação com controle de anaerobiose. Os resultados mostraram que os
genes do metabolismo do nitrato em D. bruxellensis são induzidos no meio que contém esta fonte, no entanto, na
presença de amônio no meio, eles não são completamente submetidos à repressão metabólica do nitrogênio, pelo
amônio. Adicionalmente, os genes que codificam permeases foram induzidos de maneira geral quando a
disponibilidade das fontes de nitrogênio estava reduzidas. Dessa forma, os genes do metabolismo central de D.
bruxellensis são regulados principalmente pela disponibilidade de nitrogênio no meio em detrimento à natureza da
fonte.Palavras-chave: metabolismo do nitrogênio; Metabolismo do nitrogênio; anaerobiose; expressão gênica,
fermentação alcoólica .
APOIO
CNPq, Capes e Facepe
290
Genética de Microrganismos
METABOLISMO DOS AMINOÁCIDOS PELA LEVEDURA DEKKERA BRUXELLENSIS
Denise Castro Parente1; Danielli Batista Bezerra Cajueiro1; Fernanda Cristina Bezerra Leite2; Will de Barros
Pita1; Marcos Antônio de Morais Júnior1.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO; (2)UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE
PERNAMBUCO
RESUMO
A levedura Dekkera bruxellensis tem despertado o interesse da comunidade científica devido a sua alta
adaptabilidade no processo industrial de fermentação alcoólica, a qual deve estar associada a sua grande
capacidade de assimilar os nutrientes disponíveis no substrato,especialmente aqueles limitantes ou que são
inacessível para Saccharomyces cerevisiae. No contexto industrial de produção de etanol, a disponibilidade de
nitrogênio é um dos fatores limitantes do crescimento microbiano. Estudos prévios mostraram o padrão diferencial
de assimilação nitrato, glutamato, glutamina e prolina como fonte de nitrogênio de D. bruxellensis. Entretanto,
pouco se sabe sobre o controle genético-metabólico de assimilação dos aminoácidos por essa levedura,
conhecimento de fundamental importância para se compreender os aspectos da adaptação de D. bruxellensis no
ambiente industrial. Diante desse contexto, este estudo avaliou aspectos fisiológicos e genéticos do metabolismo
dos aminoácidos nesta levedura. Os cultivos foram realizados em meio sintético YNB contendo glicose a
110mmol/L, um aminoácido ou uma mistura com todos os aminoácidos como fonte de nitrogênio numa
concentração inicial de 75mmol/L. Os cultivos foram conduzidos em um microfermentador Biolector com
controle de temperatura e humidade, a 30°C durante 72 horas. A disponibilidade de oxigênio foi dependente do
uso de ar comprimido (aerobiose) ou nitrogênio ultrapuro (anaerobiose). Foram avaliados o perfil de crescimento
(velocidade de crescimento exponencial e biomassa final). A extração de RNA, síntese de cDNA, marcação e
ensaio de qPCR foram realizados segundo previamente descritos para os genes de interesse(MEP1, GAP1, PUT4,
GDH1, GDH2, GLT1). Os resultados fisiológicos mostraram que cisteína promoveu o maior crescimento em
anaerobiose, o que é diferente da condição aeróbica na qual este aminoácido inviabiliza o crescimento. Em
aerobiose a asparigina promoveu o maior crescimento. Glutamato e glutamina foram igualmente utilizados em
aerobiose e em anaerobiose. O perfil de expressão gênica relativa revelou a existência de dois mecanismos de
regulação metabólica sobre o metabolismo do nitrogênio, um que controla a expressão dos genes que codificam as
permeases e outro que atua sobre a expressão dos genes que codificam as enzimas. Sendo assim, esses dados
permitem classificar os aminoácidos em diferentes níveis de assimilação e contribuem para entender a alta
adaptabilidade dessa levedura no processo industrial.
APOIO
Apoio Financeiro: CNPq e Capes.
291
Genética de Microrganismos
METAGENÔMICA NA IDENTIFICAÇÃO DAS COMUNIDADES BACTERIANAS PRESENTES EM
GRÃOS DE KEFIR
Natália Almeida Onofre1; José Antônio Santos Junior2; Maria Carolina de Oliveira Souza3; Cláudia Sampaio de
Andrade Lima3; Ricardo Yara2; Ederson Akio Kido4.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Antibióticos da Universidade Federal de Pernambuco; (2)Departamento de Engenharia
Biomédica da Universidade Federal de Pernambuco; (3)Departamento de Biofísica e Radiobiologia da
Universidade Federal de Pernambuco; (4)Departamento de Genética da Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Kefir é uma associação microbiana que, através de processo fermentativo produz um liquido de consumo in natura
e um exopolissacarídeo conhecido como kefirana. Técnicas dependentes de cultivo e métodos moleculares
tradicionais vêm sendo usados para caracterizar a microbiota do kefir. Entretanto, grande parte da diversidade não
é recuperada em meios de cultura. Com isso, o trabalho teve como objetivo analisar a população microbiana
presente em uma amostra de kefir de água utilizando método independente de cultivo. O DNA foi extraído
diretamente a partir dos grãos do kefir, as bibliotecas foram construídas utilizando iniciadores específicos para o
gene 16S rRNA e sequenciadas em plataforma Illumina 2500 HiSeq. As tags geradas a partir de montagem foram
filtradas e artefatos quiméricos, removidos. As sequencias foram então usadas para gerar o conjunto de unidades
taxonômicas operacionais (OTUs) e para anotação das espécies, onde sequências com ≥ 97% de similaridade
foram atribuídas a uma mesma OTU. Foram ainda estudadas as relações filogenéticas de diferentes OTUs e a
complexidade e diversidade das amostras (duas repetições), por análise de diversidade alfa. No total, 53.588 tags
efetivas com anotação foram obtidas, e as sequencias, atribuídas a 96 OTUs (assumindo 97% de similaridade). Em
media, 100 % das sequencias efetivas puderam ser agrupadas a nível de reino, filo, classe e ordem; 99% a nível de
família; 90% a nível de gênero e 68% a nível de espécie. Com base na análise da abundância relativa, ao nível do
filo, Proteobacteria (62%), Firmicutes (29%) e Actinobacteria (9%) foram os principais filos presentes. Análise do
Heat map mostrou que Sphingomonas wittichii; Clostridium tyrobutyricum; Ethanoligenens spp;
Bifidobacteriaceae e Clostridiaceae SMB53 foram as espécies mais abundantes, entretanto o gênero com maior
diversidade de espécies foi Lactobacillus. O número de tags efetivas foi suficiente para discriminar a diversidade
da amostra. Comparado com outros estudos que utilizaram abordagem metagenômica, os resultados sugerem que o
perfil da microbiota é variável, sendo possível identificar prevalência de novas espécies, o que amplia o
conhecimento sobre a diversidade microbiana do kefir. A pesquisa demonstrou, assim, que foi possível estabelecer
o padrão de composição bacteriana dos grãos de kefir em estudo.
292
Genética de Microrganismos
OBTENÇÃO DE LINHAGENS TRANSGÊNICAS DE LEISHMANIA INFANTUM PARA
INVESTIGAÇÃO IN VIVO DA FUNÇÃO DOS HOMÓLOGOS DE FATORES DE INICIAÇÃO DA
TRADUÇÃO EIF4E5 E EIF4E6
Thaíse Yasmine Vasconcelos de Lima Cavalcanti1; Gustavo Barbosa de Lima2; Amaranta Muniz Malvezzi2;
Osvaldo Pompílio de Melo Neto2.
E-mail: [email protected]
(1)
PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM GENÉTICA-PPGG/UFPE; (2)CENTRO DE PESQUISAS AGGEU
MAGALHÃES/FIOCRUZ-PE
RESUMO
Nos tripanossomatídeos o perfil da expressão gênica revela que vários genes são regulados predominantemente a
nível pós-transcricional, envolvendo eventos durante a tradução e pós-traducionais. Na tradução em eucariotos, a
etapa da iniciação é o evento mais regulado e que requer a cooperação de diversos fatores de iniciação,
denominados de eIFs (eukaryotic Initiation Factors). Dentre estes se destaca o complexo eIF4F, formado por três
subunidades (eIF4A, eIF4E e eIF4G). O eIF4E é uma proteína de ligação específica ao cap e que atua estimulando
a tradução cap-dependente participando do recrutamento do mRNA através de sua ligação específica com o
eIF4G, este que atua como âncora do complexo. Em tripanossomatídeos existem dois homólogos do eIF4E de L.
infantum que estão sendo estudados e não foram descritos formalmente, EIF4E5 e EIF4E6. Este trabalho teve
como objetivo a criação de ferramentas para estudar os fatores EIF4E5 e EIF4E6, seus principais domínios de
ligação e a sua importância para a viabilidade celular. Visto que já são conhecidos os sítios de interação do eIF4E
com o cap e com o eIF4G, os seguintes motivos foram mutados: W45A (ligação ao EIF4G), W53A (ligação ao
cap), Y45A (ligação ao EIF4G) e Y53A (ligação ao cap). Para isso, foi utilizada a técnica de Mutagênese por
PCR, subdividida em duas etapas: na primeira o início do gene foi amplificado até onde seria inserido a mutação, e
a mutação desejada foi inserida no primer reverso. Numa segunda PCR foi feita uma amplificação do gene
completo utilizando o produto da primeira PCR como um megaprimer iniciador com o primer reverso comum do
fim do gene. Assim foram obtidos os genes completos com as mutações desejadas. Estes mutantes passaram por
etapas de clonagem gênica no vetor pGEM®-T Easy Vector Systems. Em seguida as construções foram enviadas
para o sequenciamento e também confirmadas por digestão enzimática. Subsequentemente os fragmentos foram
subclonados em plasmídeo de expressão pSP-BT1-Y-Neo-alfa para transfectá-los em L. infantum a fim de analisar
a viabilidade, morfologia e crescimento celular. As células já estão sendo cultivadas para esta finalidade. Para as
análises de imunoprecipitação, foram produzidas e purificadas proteínas recombinantes do E5 e E6. Anticorpos
disponibilizados foram purificados e testados por Western Blot contra proteínas endógenas e recombinantes, estas
ferramentas moleculares geradas são essenciais para a investigação das funções desses fatores. Apoio: CAPES.
APOIO
CAPES
293
Genética de Microrganismos
PADRÕES DE EXPRESSÃO GÊNICA E ALTERAÇÕES MORFOLÓGICAS LIGADAS AO
SILENCIAMENTO DO GENE RHO1 DE MONILIOPHTHORA PERNICIOSA
Franscielly Maria Lopes Nakayama1; Elza Thaynara Cardoso de Menezes Assis2; Leila de Oliveira Dias3;
Patricia Alves Casaes Alves4; Virgínia Lúcia Fontes Soares5; Ana Cristina Caribe dos Santos5; Acássia Benjamim
Leal Pires6; Fátima Cerqueira Alvim5.
E-mail: [email protected]
(1)
Discente do curso de Agronomia DCAA/UESC; (2)Discente de pós-graduação em Genética e Biologia celular
PPGGBM/UESC; (3)Graduada em Biomedicina - UESC; (4)Discente de pós-graduação em Biologia e
Biotecnologia de Microrganismos PPGBBM/UESC; (5)Docente do Curso de Ciências Biológicas DCB/UESC;
(6)
Docente do Curso de Ciências Biológicas DCB/UNEB
RESUMO
O fungo basidiomiceto Moniliophthora perniciosa é o agente causal da doença vassoura-de-bruxa em Theobroma
cacao. A introdução do M. perniciosa na região cacaueira da Bahia afetou fortemente a produção de cacau. Porém,
essa ainda é a cultura que mais movimenta recursos no sul do estado. Com isso, desenvolver estratégias de
combate à doença é uma necessidade regional. Identificar genes essenciais ao desenvolvimento do ciclo de vida do
patógeno é uma tática importante, visando sugerir alvos moleculares no o progresso da doença. O gene Rho1 foi
detectado em bibliotecas de cDNA, representativas do ciclo de vida do M. perniciosa, tendo a expressão
aumentada no momento da formação do basideoma do fungo. RHO é uma GTPase de membrana, sua atividade foi
relacionada com crescimento e composição da parede celular de diversos eucariotos. Os objetivos deste trabalho
foram obter linhagens de M. perniciosa transgênicas, silenciadas via RNAi para rho1 e analisar as mudanças
morfológicas do micélio com a expressão deste gene diminuída. Foram obtidas 3 linhagens transgênicas e foi
comprovado, via de RTqPCR, que o nível de transcritos de rho era variável nas 3 linhagens. Esse nível foi menor
do que o observado nas linhagens controle (não silenciado), o resultado comprova que houve o silenciamento para
rho mantendo-se, contudo, um nível basal do transgene para que o organismo seja viável. Apesar da redução no
nível dos transcritos de rho1 não houve modificações de crescimento e morfologia do micélio analisadas em
microscopia. O comportamento micelial do M. perniciosa, silenciado e controle, também foi analisado quando
crescido na presença de glicose ou glicerol. Esta iniciativa foi feita pois trabalhos anteriores, sugeriram que o
glicerol poderia atuar como indutor na expressão de Rho1 em M. perniciosa. Análises de RTqPCR, demonstraram
que existe uma resposta diferenciada em nível de expressão gênica a depender da fonte de carbono utilizada pelo
fungo. Observamos que o nível de transcritos de Rho1 em M. perniciosa silenciado crescido em glicerol foi 3x
superior ao do fungo silenciado crescido na presença de glicose. Similarmente o fungo controle, crescido na
presença de glicerol, tem o nível de transcritos de rho aumentado em 6x quando comparado com o crescimento em
glicose. Esses resultados reforçam uma importância do glicerol como um sinalizador para a expressão de Rho1 no
patossistema, sendo esta a primeira vez que uma fonte de carbono é associada a expressão deste gene.
APOIO
Fapesb, Finep, Mapa
294
Genética de Microrganismos
PERFIL DE EXPRESSÃO DE MRNAS CODIFICANTES DA PROTEÍNA DE VIRULÊNCIA GP63 DE
LEISHMANIA BRAZILIENSIS
Artur Leonel de Castro Neto1; Antônio Mauro Rezende2; Franklin Barbalho Magalhães3; Osvaldo Pompilio de
Melo Neto2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco - UFPE; (2)Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães - CPqAM/FIOCRUZ;
(3)
Faculdade ASCES-UNITA
RESUMO
As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários flagelados da família
Trypanossomatidae e genêro Leishmania. Para sobreviver no hospedeiro mamífero, esses parasitos produzem
proteases, que os protegem da resposta imune inata do hospedeiro. Dentre essas proteases, a GP63 é a principal
representante, por ser a mais frequente na superfície celular e ter múltiplas funções no escape do sistema imune.
Essa proteína é codificada por múltiplos genes, que possuem quantidades variáveis entre as espécies de
Leishmania, possuindo um maior número nas espécies pertencentes ao subgênero Viannia, principalmente na L.
braziliensis. Este estudo buscou avaliar o perfil de expressão de mRNAs codificantes de GP63 de L. braziliensis,
investigando quantos, entre seus múltiplos genes, são expressos simultaneamente e avaliando diferenças nos níveis
de expressão entre os mesmos. Para isso optou-se pelo sequenciamento em larga escala dos mRNAs usando
ferramentas de sequenciamento de nova geração. Inicialmente, foi extraído o RNA total de células de L.
braziliensis cepa 2904 na fase logarítmica de crescimento de formas promastigota, seguida da construção de
biblioteca de cDNA e sequenciamento utilizando a plataforma Miseq (Illumina). Após o sequenciamento de
biblioteca e análises de bioinformática para obtenção dos resultados, transcritos de todos os genes anotados foram
identificados demonstrando a expressão simultânea de múltiplos genes, dado inédito na literatura. Entretanto, os
níveis dos mRNAs transcritos variaram bastante, sugerindo que alguns deles são preferencialmente expressos em
detrimento de outros. Os dados sugerem que o mecanismo de expressão desses genes não se assemelha ao de
Trypanosoma brucei, onde suas proteínas de defesa contra o sistema imune, as VSG's, apresentam um padrão não
simultâneo de expressão de seus mRNAs. Contudo, esses dados sugerem que a expressão diferencial e preferencial
de genes de GP63 de Leishmania possivelmente também esteja envolvida na evasão do reconhecimento pelo
sistema imune do hospedeiro.
APOIO
CAPES e CNPq
295
Genética de Microrganismos
PREVALÊNCIA E VARIABILIDADE INTRATÍPICA DO GENE L1 E DA REGIÃO LONGA DE
CONTROLE (LCR) DO PAPILOMAVÍRUS HUMANO TIPO 58 EM MULHERES INFECTADAS DA
REGIÃO NORDESTE DO BRASIL
Lígia Rosa Sales Leal1; Ana Pavla Almeida Diniz Gurgel1; Bárbara Simas Chagas1; Jacinto da Costa Silva Neto2;
Maria Tereza Cartaxo Muniz3; Antonio Carlos de Freitas1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Estudos Moleculares e Terapia Experimental (LEMTE), Departamento de Genética,
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Departamento de Histologia e Embriologia, Universidade Federal de
Pernambuco; (3)Laboratório de Biologia Molecular, Centro de Oncohematologia Pediátrica, Universidade de
Pernambuco
RESUMO
O câncer cervical é o quarto tipo de neoplasia mais prevalente no mundo, e em mais de 90% dos casos está
associado à infecção por Papilomavírus Humano (HPV) de alto risco oncogênico, sendo o HPV 58 um deles. No
entanto, apenas a infecção por HPV não é suficiente para o desenvolvimento de lesões cervicais ou câncer
cervical. Fatores ambientais e genéticos do hospedeiro e do vírus estão também relacionados a carcinogênese
cervical. Dentre os fatores genéticos do vírus, acredita-se que modificações nucleotídicas no gene L1 e na Região
Longa de Controle (LCR) podem estar relacionadas aos diferentes potenciais oncogênicos e capacidade de evasão
ao sistema imune de hospedeiros infectados entre diversos tipos virais. Assim, o presente estudo realizou uma
análise de prevalência do HPV 58 e variabilidade genética do gene L1 e LCR deste vírus em amostras de raspado
cervical de mulheres infectadas nos Estados de Pernambuco, Sergipe e Alagoas. Para isso, foi realizada a detecção
do DNA viral em 357 amostras biológicas, e amplificação de fragmentos do gene L1 e da LCR do HPV 58 através
da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), que foram posteriormente sequenciados. Com o auxílio de
ferramentas in silico, foram feitas análises em busca de polimorfismos e predições de epítopos de células B e T
para o gene L1, bem como a predição de sítios de ligação de fatores transcricionais celular e viral na LCR. Os
resultados obtidos no presente trabalho demonstram prevalência do HPV 58 de 6,4% em Pernambuco, 13,7% em
Sergipe e 17,9% em Alagoas. A partir da análise de variabilidade genética, foram observadas sete variações nãosinônimas inseridas em regiões de epítopos de células B e T no gene L1. Além disso, foram encontradas doze
alterações nucleotídicas em sítios de ligação para fatores transcricionais na LCR. Assim, são necessários estudos
funcionais com as alterações nucleotídicas encontradas para esclarecer o impacto dessas variações em relação a
progressão do câncer.
APOIO
Este trabalho foi financiado pelo Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e pela
Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco (FACEPE).
296
Genética de Microrganismos
PRIMEIRA IDENTIFICAÇÃO DE PRÓFAGO NA LINHAGEM INDUSTRIAL LACTOBACILLUS VINI
JP7.8.9
Tiago Luiz Santana Calazans1; Allyson Andrade Mendonça2; Marcos Antonio de Morais Jr3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Laboratório de genética microbiana; (2)Universidade Federal de
Pernambuco, pós-graduação em genética; (3)Universidade Federal de Pernambuco, departamento de genética
RESUMO
Lactobacillus vini é uma espécie homofermentadora capaz de fermentar pentoses e hexoses, inicialmente isolada
de mosto de uva da fermentação de vinho. No nordeste brasileiro, L. vini é abundante no final da fermentação
alcoólica(Lucena et al. 2010). O genoma de L. vini JP7.8.9 foi sequenciado e depositado sob o número de acesso
AHZA00000000(Lucena et al. 2012). Foram identificadas ORFs relacionadas a bacteriófago, presentes no contig
com o número de acesso AHZA00000138.1. Por serem associados com a transferência horizontal de genes, os
prófagos podem desempenhar um papel na diversificação dos genomas bacterianos. Este trabalho caracterizou in
silico um elemento profágico encontrado no genoma da linhagem JP 789 de L. vini. Com base nos dados de
anotação da ferramenta RAST foi realizada a montagem in silico do mapa genético do fago, utilizando a
ferramenta PHAST. Para confirmar a presença do fago foram desenhados primers, usando a ferramenta Primer 3
plus, para o gene Head Protein e o amplicon foi sequenciado. A análise in silico do contig AHZA00000138.1
demonstrou a existência de um prófago intacto, com conteúdo GC de 37,96%, semelhante ao fago descrito
em Lactobacillus plantarum Sha1. Os genes foram agrupados em quatro módulos: replicação, empacotamento,
estrutural e de lise. A presença do fago foi confirmada a partir do sequenciamento do gene Head Protein, que
gerou um amplicon com 100% de identidade com a sequência depositada. Com a construção do mapa físico, e a
comparação com os módulos de Sha1 observou-se alta similaridade entre os genes dos módulos estrutural e
empacotamento, os mais conservados entres os fagos da ordem caudovirales. Nesta comparação, apenas a proteína
da fibra da cauda está ausente. Os módulos de lise e replicação não tiveram similaridade significativa, com
exceção da proteína de replicação e o ativador transcricional RinA, indicando que o fago estudado não é Sha1 e
potencialmente uma nova espécie . Em adição, foi notada a ausência do anti-repressor, fator de transcrição
responsável pela ativação de genes da fase lítica. A presença de profagos no genoma bacteriano confere proteção à
infecção por fagos filogeneticamente próximos e pode conferir características seletivamente vantajosas ao
ambiente em linhagens específica. Esta é a primeira identificação de um prófago presente em linhagem industrial
de Lactobacillus vini.
297
Genética de Microrganismos
PRIMEIRO RELATO DE BLAOXA-143-LIKE EM ISOLADOS CLÍNICOS DE ACINETOBACTER
BAUMANNII NO NORDESTE DO BRASIL
Raíza Gabriela de Souza Santos1; Rodrigo Tenório Gomes Pereira1; Ana Caroline Oliveira Alves Ribeiro1;
Wendell Palôma Maria dos Santos1; Anna Carolina Soares Almeida2; Márcia Maria Camargo de Morais1; Felipe
Lira de Sá Cavalcanti3.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Resistência Microbiana, ICB/UPE ; (2)Laboratório de Resistência Microbiana, ICB/UPE e
Universidade Federal Rural de Pernambuco; (3)Laboratório de Resistência Microbiana, ICB/UPE e Departamento
de Microbiologia, CPqAM/Fiocruz
RESUMO
Acinetobacter baumannii é um cocobacilo Gram-negativo não fermentador que pode ser isolado do sangue, trato
respiratório e urinário muitas vezes como causa de infecção nosocomial. Isolados bacterianos resistentes a
múltiplas classes de antimicrobianos tem sido encontrado com frequência no ambiente hospitalar, levando a
necessidade de um maior entendimento a respeito dos mecanismos responsáveis por este fenótipo. Foram obtidos
dez isolados de um hospital de Recife. A identificação da espécie foi feita através de testes bioquímicos e do
sistema automatizado Vitek®. Para a tipagem molecular dos isolados, foi utilizada a REP (Repetitive Extragenic
Panlidromic) PCR. O teste fenotípico para identificação de metalo-beta-lactamases (MBLs) se deu através de
método disco-aproximação com 2-MPA. O DNA genômico dos isolados foi obtido através do kit Instagene. A
identificação dos genes que codificam as OXA (beta-lactamase de classe D), integrases (Intl1 e 2), KPC (betalactamase de classe A) e do elemento de inserção ISAba1 ocorreu por meio de PCRs multiplex e simplex. A
maioria dos isolados mostrou um perfil de resistência extremo às drogas (XDR), sendo sensíveis apenas à colistina
e tigeciclina. Na tipagem, quatro isolados foram considerados clones. O teste de MBL foi negativo para todos os
isolados. Na PCR multiplex, todos os isolados amplificaram o blaOXA-51-like, que se trata de um gene intrínseco,
confirmando a espécie. Também houve amplificação de todos os isolados para o blaOXA-143-like, mostrando a
presença de uma OXA recentemente descrita no Brasil e inédita no Nordeste. Dos nove isolados, um portava
simultaneamente dois genes de OXA adquirida (blaOXA-23 e blaOXA143), caso até o momento nunca descrito na
literatura. O gene blaKPC não foi detectado em nenhum dos isolados. Todos os isolados foram negativos para Intl1,
porém três isolados foram positivos para o Intl2, evidenciando a provável presença de integron de classe 2, que
está relacionado com a resistência a aminoglicosídeos. Houve amplificação de todos os isolados para a sequência
de inserção ISAba1, porém esta não estava associada aos genes de OXA em nenhum dos isolados. Esses achados
mostram que a produção de OXA parece ser um mecanismo de resistência importante em A. baumannii e que
medidas de controle e vigilância precisam ser melhoradas no hospital avaliado, ainda que a presença adicional de
outros mecanismos também deva ser considerada para justificar o perfil de alta resistência encontrado.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico ? CNPq
298
Genética de Microrganismos
PRODUÇÃO DE GLICOPROTEÍNA DO VÍRUS DA LARINGOTRAQUEITE INFECCIOSA DAS AVES
FUSIONADA A PROTEÍNA LIGANTE DE MALTOSE (MBP) EM BACTÉRIA ESCHERICHIA COLI
Laryssa Hayanne dos Santos Gomes1; Jackeline Gomes da Silva2; André Luiz Santos de Jesus2; Karin Florencio
Lins de Paiva Fontes2; Luiz Cosme da Silva Junior2; Roberto Soares Castro2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Centro Universitário Mauricio de Nassau, UNINASSAU,
Recife, PE; (2)Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Recife, PE
RESUMO
A Laringotraqueíte Infecciosa das Aves (LTI) é uma doença respiratória aguda e altamente contagiosa que
acomete o trato respiratório superior das aves. A infecção causada pelo vírus da laringotraqueíte infecciosa causa
perdas econômicas para a indústria avícola decorrentes da queda na produção de ovos, diminuição no desempenho
de frangos, alta morbidade e mortalidade. O vírus da LTI é um Herpesvírus Gallideo do tipo 1 pertencente à
família Herpesviridae e ao gênero Iltovirus. Este vírus tem uma afinidade com o epitélio respiratório das aves,
causando uma infecção aguda da laringe e traqueia. O genoma viral apresenta genes que codificam glicoproteínas
que atuam como fatores de virulência e sítios de reconhecimento virais para a célula hospedeira. A glicoproteína C
(gC) é uma das mais imunogênicas do LTI e tem sido alvo para a proteção vacinal e o diagnóstico da infecção. O
objetivo deste estudo foi o de produzir a proteína recombinante gC fusionada à proteína ligante de maltose (MBP)
em bactéria Escherichia coli para a identificação de animais infectados com o vírus da LTI. Atualmente, os kits
para diagnóstico da LTI utilizam partículas virais cultivadas em cultura de células, o que gera vários
inconvenientes. A proteína MBP ajudará na solubilidade da proteína recombinante diminuindo as chances de
formação de corpos de inclusão e aumentando a produtividade. Para tal objetivo, uma porção do gene que codifica
a glicoproteína gC foi clonada no vetor de expressão pMAL-c4x. A construção gC/pMAL foi confirmada por
digestão enzimática e sequenciamento. Depois disso, a E. coli estirpe BL21 foi transformada com a construção, a
fim de produzir o gC recombinante. A indução da expressão do gene gC foi realizada por IPTG (0,2 mM), 25º C,
durante 4 horas. O extrato proteico da cultura induzida foi analisado e uma banda de ~ 64 kDa foi detectada por
Western blot utilizando um anticorpo contra uma tag de Histidina adicionada a proteína recombinante. Em
seguida, a proteína gC foi avaliada quanto a sua capacidade para detecção de anticorpos contra o vírus da LTI
como antígeno em ELISA utilizando soros de animais infectados naturalmente com LTI. Os resultados do ELISA
foram satisfatórios com boa relação entre animais positivos e negativos (P/N), que mostra a funcionalidade da
proteína recombinante produzida em E. coli e a sua potencial utilização como antígeno em ELISA para o
desenvolvimento de um kit para diagnóstico da LTI.
APOIO
Apoio Financeiro: CNPq e FACEPE.
299
Genética de Microrganismos
PROSPECÇÃO E OBTENÇÃO DE UM BIOSSURFACTANTE DERIVADO DE UMA BIBLIOTECA
METAGENOMICA
Sinara Carla da Silva Araújo1; Rita de Cássia Barreto Silva Portela1; Daniel Chaves de Lima1; Uaska Bezerra da
Silva1; Lucymara Fassarella Agnez Lima1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFRN
RESUMO
Os microrganismos apresentam uma imensa diversidade genética e estão presentes em toda biosfera, no entanto
estima-se que apenas 1% das espécies pode ser cultivada por técnicas laboratoriais padrão. Dentro dessa
diversidade existe um enorme pool genético e biológico a ser explorado. A metagenômica tornou possível o acesso
direto aos genomas microbianos derivado de amostras ambientais. A metodologia permite obter informação
funcional de genes e proteínas, assim como a identificação de novos produtos com interesse biotecnológico nas
mais diversas áreas do conhecimento. Áreas contaminadas com petróleo são caracterizadas por um grande
acúmulo de hidrocarbonetos e os surfactantes são utilizados como coadjuvantes em biorremediação. Sendo assim,
a abordagem metagenônima foi utilizada para selecionar genes envolvidos no processo de degradação e
emulsificação de hidrocarbonetos. Em um trabalho anterior, o DNA ambiental (eDNA) foi extraído a partir de
amostras de sedimento coletadas em um rio salino do Rio Grande do Norte (Brasil), a biblioteca metagenômica foi
construída e analisada por seleção funcional. Os clones capazes de degradar o óleo foram avaliados quanto à
capacidade de sintetizar biossurfactante. Vários clones foram sequenciados e analisados, sendo um clone
selecionado para o presente estudo, revelou uma ORF com 897 pb, 298 aminoácidos, referente a uma proteína de
peso molecular próximo a 32 kDa. A busca por homologia no GenBank revelou similaridade com a sequência que
codifica uma proteína hipotética de representantes da família Halobacteriaceae, que foram mostradas recentemente
como produtoras de biossurfactantes. A presença da sequência codificante inserida e do fenótipo adquirido foram
confirmadas. Primers foram desenhados e sua ORFs amplificada por PCR. Em seguida, foram subclonadas em
vetor de expressão pHis-parallel1, que contem uma cauda de histidina, para expressão e posterior purificação da
proteína de interesse. O teste de emulsificação foi realizado, utilizando diferentes fontes de hidrocarbonetos, para
confirmação da atividade e apresentou resultado positivo. O biossurfactante foi purificado através de precipitação
ácida, apresentando também atividade emulsificante. Esse estudo foi o primeiro no Brasil a relatar uma possível
proteína com atividade biossurfactante obtida a partir de uma abordagem metagenômica.
APOIO
CNPq e CAPES.
300
Genética de Microrganismos
PROTEÔMICA DIFERENCIAL DE BACILLUS THURINGIENSIS COM NÍVEIS DISTINTOS DE
PATOGENICIDADE PARA DIATRAEA SACCHARALIS (FABR.) (LEPIDOPTERA: CRAMBIDAE)
Paulo Geovani Silva Martins1; Adauto Gomes Barbosa Neto2; Amaro de Castro Lira Neto3; Tercílio Calsa
Júnior2.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Genética, CCB, UFPE, Recife, PE;IInstituto Agronômico de Pernambuco, IPA, Recife, PE;
Departamento de Genética, CCB, UFPE, Recife, PE; (3)IInstituto Agronômico de Pernambuco, IPA, Recife, PE
(2)
RESUMO
O Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria Gram-positiva cosmopolita em forma de bastonete conhecida pela
expressão de cristais proteicos (proteínas Cry) com atividade entomopatogênica. Estes cristais são ativos contra
diversas ordens de insetos e seu mecanismo de ação é iniciado após ingestão, envolvendo receptores específicos
do intestino médio, e outros fatores de virulência expressos pelo Bt com ação sinérgica à das proteínas Cry.
Estudos em nível proteômico têm sido realizados buscando a identificação destes fatores de virulência e/ou
regulação para maior compreensão dos mecanismos envolvidos na sua patogenicidade. Este trabalho teve por
objetivo a comparação dos perfis proteômicos utilizando eletroforese bidimensional (2D-PAGE) dos isolados
Bt.Pri 4.7 e Bt.Pri 4.29; Bt.Pri 4.7 e da estirpe B. thuringiensis subsp. Kurstaki (HD-1), portadores do gene cry2 e
dos isolados Bt.CDi 1.3 e Bt.CDi 1.11, portadores do gene cry9. A escolha dos isolados para a comparação das
proteínas diferencialmente expressas foi atrelada aos graus divergentes de patogenicidade observados in vivo
contra Diatraea saccharalis, uma das mais importantes pragas da cultura da cana-de-açúcar. As proteínas totais
solúveis dos isolados foram extraídas após 48 h de crescimento. Após verificada a integridade em SDS-PAGE, as
proteínas foram focalizadas isoeletricamente, separadas por peso molecular e as imagens dos géis foram
digitalizados em scanner de transparência. Em seguida os géis foram analisados em software de análise
ImageMaster 2D Platinum v.7.05 (GE Life Sciences) que possibilitou a detecção de 1.830 spots, dos quais 229
foram considerados proteínas diferencialmente expressas (DEPs). As DEPs foram digeridas com tripsina para
identificação via espectrometria de massas. Os espectros gerados foram analisados para identificação presumível
das proteínas contra bancos de dados de acesso público através do programa Mascot. Entre as proteínas
identificadas, algumas estão envolvidas em diferentes funções; como fator de elongação G com ação imunogênica,
proteína ribosomal S2 que atua na mediação de toxicidade, shikimato quinase envolvida na produção de proteínas
de toxicidade inespecífica em Bt, e a proteína A do estágio IV de esporulação, necessária na produção de esporos e
cristais proteicos. Os resultados obtidos podem contribuir para o entendimento dos diferentes graus de
patogenicidade entre isolados de Bt que apresentam genes cry de mesma classe.
APOIO
CAPES, IPA
301
Genética de Microrganismos
PROTEOMICS ANALYSIS OF CHROMOBACTERIUM VIOLACEUM SUBMITTED TO SIMULATED
MICROGRAVITY
Jonathas Diego Lima Santos1; Daniel Chaves de Lima1; Bianca Alves Pauletti2; Silvia Regina Batistuzzo de
Medeiros1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Rio Grande do Norte; (2)Laboratório Nacional de Biociências - LNBio
RESUMO
Chromobacterium violaceum is a Gram-negative bacteria, which has been found at tropical and subtropical
regions. Some proteomic studies performed with this bacterium have demonstrated its ability to adapt to
environmental challenges such as high iron concentration and oxidative stress exposure. However, no study was
made with this specie submitted to simulated microgravity (SMG). SMG refers to conditions in which the gravity
is artificially reduced to less than 1 G. Life on Earth has evolved at 1 G and study SMG is important to understand
the overall changes that organisms might face in space travels. Therefore, the aim of this study was to characterize
the response of C. violaceum, as free-living model organism, cultured at SMG, using proteomics techniques in
order to understand how this bacterium response to this stress. SMG was achieved by rotating in a horizontal
direction parallel to the gravitational vector on the rotating cell culture systems. SMG was conducted at a speed of
40 rpm for a period of 24 hours to obtain the growth curve every 2 hours. Total protein extraction was made in two
times: 5 and 12 hours, corresponding to early (MG5) and late (MG12) exponential phase, respectively. After
trypsinization, samples were analyzed with Q-TOF mass spectrometer. In our results, we detected 155 proteins
during MG5, from which 18 proteins were upregulated, 19 down-regulated and 17 proteins were exclusive when
compared to GN5. In MG12 were identified 173 proteins, from which 17 were upregulated, 22 down-regulated
and 28 exclusive when compared to control. When comparing the amount of proteins identified in both early (5
hours) and late (12 hours) exponential phase, we detected 212 proteins during MG5 and 193 during MG12 from
which 145 of them are common to both phases. We also observed a decrease of C. violaceum growth at SMG
when compared to bacterial cultures submitted to normal gravity. Proteins correlated with transcriptional processes
and release of energy through aerobic pathways were down-regulated, while proteins involved with the inhibition
of transcription, anaerobic pathway and cell survival had their expression increased, indicating a decrease in
metabolism and proliferation of C. violaceum. SMG can cause alterations in respiratory metabolism, decreasing of
transcription and translation rates and, consequently, C. violaceum proliferation.These data can be understood as a
strategy for maintenance and survival at reduced gravity environment.
APOIO
CAPES; CNPq
302
Genética de Microrganismos
REDUÇÃO NA EXPRESSÃO DE GENES CENTRAIS DA SÍNTESE DO PEPTIDOGLICANO EM
LACTOBACILLUS VINI EM ESTRESSE ÁCIDO SUGERE UM MECANISMO DE CONSERVAÇÃO DE
ENERGIA
Allyson Andrade Mendonça1; Carolina Elztein2; Will de Barros Pita3; Marcos Antônio Morais Jr2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, programa de pós-graduação em genética; (2)Universidade Federal de
Pernambuco, departamento de genética; (3)Universidade Federal de Pernambuco, departamento de antibióticos
RESUMO
Lactobacillus vini é um importante componente da microbiota contaminante do processo de fermentação alcoólica
industrial predominando na população ao fim da fermentação. Como principal tratamento da contaminação, a
indústria emprega a lavagem com ácido sulfúrico de todos os microorganismos no processo levando a um intenso
estresse ácido. Para que L. vini consiga se estabelecer no processo é necessário que sobreviva a esse tratamento e
que mantenha suas estruturas celulares funcionais. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito do estresse por
ácidos orgânicos (láctico e acético) e por ácido hidroclorídrico na expressão dos genes envolvidos na biosíntese do
peptidoglicano. Foram realizados tratamentos de 1 hora em meio MRS contendo os agentes estressores em
concentrações sub-MIC de 60 mM de lactato, 150 mM de acetato e 300 mM H+ (HCl pH 3.5). Após os
tratamentos as células foram coletadas por centrifugação e o RNA foi extraído com o Trizol e purificado com o Kit
illustra RNAspin (GE). O RNA íntegro foi usado na síntes de cDNA com o kit ImProm-II™ Reverse
Transcription (Promega). Foram analisadas a expressão de genes representantes da via de síntese do
peptidoglicano, do operon DLT, da via de re-assimilação da parede celular e do metabolismo da D-alanina. Os
resultados indicam que o tratamento ácido e com ácido láctico promoveram redução na expressão de genes
centrais para síntese do peptidoglicano, mas não com o tratamento com ácido acético. Por outro lado, os genes da
via de re-absorção estavam levemente mais expressos. Estes dados mostram que os tratamentos promovem
redução na taxa de transcrição de genes importantes para a síntese da parede celular similar ao visto com sais de
bile. Isto sugere que nesses tratamentos a célula diminui o consumo do carbono para síntese da parede, tornando-o
mais disponível para produção de energia. Isto deve aumentar o aporte energético para lidar com os danos
induzidos pelo estresse.
APOIO
FACEPE
303
Genética de Microrganismos
REPORT OF COLLETOTRICHUM SCOVILLEI CAUSING ANTHRACNOSE ON BELL PEPPER IN
BRAZIL.
Emmanuelle Rodrigues Araújo1; Nelson Bernardi Lima1; Marília Wortmann Marques1; Rejane Rodrigues Costa
Carvalho1; Delson Laranjeira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Agronomia, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife, 52171-900, Pernambuco,
Brazil
RESUMO
Bell pepper fruits (Capsicum annuum L.) (cv. Atlante) showing anthracnose symptoms were observed in organic
farmings during surveys conducted in Pernambuco state, Brazil, in 2011. The aim of this word was to identify and
characterize molecularly an isolate of Colletotrichum spp. obtained organic peppers. Pieces (5 mm) of necrotic
tissue were surface sterilized for 1 min in 1.5% NaOCl, washed twice with sterile distilled water, and plated onto
potato dextrose agar (PDA). Plates were incubated at 28°C for 10 days and colonies that were morphologically
similar to species of Colletotrichum were transferred to PDA. Identification was made using phylogenetic analysis.
One isolate (CMM 0092) presented colonies that had white aerial mycelia and orange conidial mass, cylindrical,
aseptate and hyaline conidia. Morphological and cultural characterizations were consistent with the description of
Colletotrichum scovillei Damm. PCR amplification by primers GDF1 and GDR1 and partial sequencing of the
gene glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) were performed to confirm the identification. Using
published GAPDH data for C. scovillei, a phylogenetic analysis was made via Bayesian inferences, which show
that the isolated fungi belong to the C. scovillei clade. Sequence of the isolate obtained in this study was deposited
in GenBank (KF137639), and culture was deposited in the Culture Collection of Phytopathogenic Fungi of the
Universidade Federal Rural de Pernambuco (CMM, Recife, Brazil). Pathogenicity test was performed with the C.
scovillei strain on bell pepper fruits cv. Bruno. Fruits were wounded at the medium region by pushing the tip of
flamed needle through the surface of the skin to a depth of 3 mm, and 6 μl of conidial suspension (1x106
conidia/ml) was placed in shallow wounds. Sterile water without fungal conidia was used as control. Inoculated
fruits were maintained in humid chamber for 2 days at 25°C. The experiment was arranged in a completely
randomized design with four replicates per treatment (isolate or control) and four fruits per replicate. After 10 days
anthracnose symptoms developed that were typical of diseased fruit in the field. C. scovillei was successfully
reisolated from symptomatic fruits to fulfill Koch's postulates. C. scovillei was recently described from bell pepper
in Indonesia and Capsicum sp. in Thailand. To our knowledge, there are a few reports of C. scovillei causing
anthracnose on bell pepper in Brazil.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq
304
Genética de Microrganismos
SELEÇÃO DE TRICHODERMA SPP. PARA CONTROLE BIOLÓGICO: DIFERENTES MECANISMOS
DE ANTAGONISMO REVELAM VARIAÇÃO FENOTÍPICA INTER- E INTRAESPECÍFICA.
Rodinê de Oliveira Freitas Júnior1; Michael Carvalho Santos Lavigne1; Ronaldo Costa Argôlo Filho1; Leandro
Lopes Loguercio1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual de Santa Cruz
RESUMO
Existem vários fatores que podem interferir na bioprospecção microbiana. O genótipo do organismo, as condições
de incubação e o número de caracterizações são necessárias para tal fim. Trichoderma tem sido amplamente
utilizado como biofertilizante, indutor de resistência em plantas e antagonista de fitopatógenos. Este gênero
contém 256 espécies, mas variações genéticas podem aumentar indefinidamente o número de cepas com genótipos
distintos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a relação genótipo-fenótipo de Trichoderma spp. quanto sua ação
antagônica através de diferentes mecanismos. Foram utilizados 28 genótipos caracterizados pelas regiões ITS e
EF1A, sendo: 4 T. asperellum, 4 T. atroviride, 4 T. harzianum, 4 T. longibrachiatum, 4 T. koningiopsis, 3 T.
virens, 2 T. stromaticum, 1 T. ovalisporum, 1 T. viride e 1 T. cremeum. A produção de compostos antagônicos no
sobrenadante (SN), o antagonismo direto em ensaios de cultura dupla e a influência de compostos voláteis (CVs)
produzidos foram avaliados contra Aspergillus clavatus. Os cultivos foram realizados a 25ºC durante sete dias para
todos os experimentos. Os resultados obtidos demonstraram que 36% dos genótipos apresentaram efeito
antagônico significativo do seu SN sobre a germinação de A. clavatus. Todos os genótipos da espécie T.
longibrachiatum foram eficientes, demonstrando o potencial desta espécie especificamente para esse mecanismo.
No ensaio de cultura dupla, 71% dos genótipos cresceram sobre o micélio de A. clavatus, parasitando-o e causando
a interrupção do seu desenvolvimento. Foi observado que 75% dos genótipos produziram CVs antagônicos ao A.
clavatus, com ação fungistática. A maioria dos genótipos (64%) apresentou tanto produção de CVs quanto
micoparasitismo. A análise comparativa entre genótipos demonstrou variações fenotípicas (Efeitos Antagônicos)
tanto entre isolados de espécies diferentes quanto de mesma espécie. Assim, um mesmo genótipo de Trichoderma
pode apresentar diferentes respostas, isto é, ele pode ser um bom micoparasita, mas um mau produtor de
compostos antifúngicos e vice-versa. Portanto, durante processos de triagem em coleções, torna-se necessária a
avaliação de diferentes mecanismos antagônicos simultaneamente. Conclui-se que não somente alguns dos
genótipos avaliados possuem potencial biocontrolador do A. clavatus, mas também que a bioprospecção em
coleções microbianas deve levar em conta as variações genótipo-específicas para evitar descarte prematuro de
bons isolados.
APOIO
CAPES, CNPq e Fapesb.
305
Genética de Microrganismos
SUBTIPOS VIRAIS E CÓDONS DA REGIÃO POL DO HIV-1 ASSOCIADOS À RESISTÊNCIA AOS
ANTIRRETROVIRAIS ISOLADOS EM CENTROS DE TESTAGEM E ACONSELHAMENTO DE
PERNAMBUCO - BRASIL
Kledoaldo Lima1; Élcio Leal2; Ana M. S. Cavalcante3; Daniela M. Salustiano3; Heloísa R. Lacerda4.
E-mail: [email protected]
(1)
1Pós-graduação em Medicina Tropical. Universidade Federal de Pernambuco (UFPE); (2)Instituto de
Biotecnologia. Universidade Federal do Pará (UFPA), ; (3)Setor de Virologia. Laboratório Central de Saúde
Pública de Pernambuco (LACEN-PE); (4)Pós-graduação em Medicina Tropical. Universidade Federal de
Pernambuco (UFPE),
RESUMO
A alta diversidade do HIV-1 causa importantes diferenças nas suas propriedades virológicas e interação com o
organismo hospedeiro, incluindo variabilidade nas taxas de mutações, aquisição de droga-resistência e resposta
aos antirretrovirais utilizados na prática clínica. O objetivo deste trabalho foi avaliar quais os subtipos virais e os
códons da região pol do HIV-1 associados à resistência aos antirretrovirais. Foram obtidas 104 amostras
sanguíneas coletadas, individualmente, de indivíduos atendidos em Centros de Testagem e Aconselhamento
(CTAs) da Região Metropolitana do Recife - Pernambuco / Brasil, no período de 2007 a 2009. Posteriormente,
cada amostra foi sequenciada a região pol do HIV-1. O Subtipo viral foi determinado pelo REGA Automated Tool
for HIV 1 & 2 Subtyping versão 2.0. Mutações de droga-resistência (SDRM) e susceptibilidade aos antirretrovirais
foram determinados através do HIV Drug-Resistance Database e do HIVdb Program, respectivamente, ambos da
Universidade de Stanford. A frequência de resistência antirretroviral foi de 4.8% (05/104). Três cepas do HIV-1
pertenceram ao subtipo B, uma ao subtipo F e outra era um recombinante BF. Apenas um isolado apresentou
mutações maiores aos inibidores de protease (IP) (L82A, L90M), promovendo alto grau de resistência ao
atazanavir, indinavir, nelfinavir e saquinavir. Outra cepa apresentou as mutações V75L, F77L e M184V,
relacionadas à resistência aos inibidores da transcriptase reversa análogos de nucleosídeos (ITRN), o que a torna
resistente à lamivudina e emtricitabina. Quatro cepas apresentaram as seguintes mutações de resistência aos
inibidores de transcriptase reversa não-análogos de nucleosídeos (ITRNN): K101E, K103N, G190A, G190S e
P225H com altos níveis de resistência ao efavirenz e nevirapina. Desta forma, podemos concluir a importância no
sequenciamento e análise dos códons de resistência do HIV-1 com a finalidade de avaliar a susceptibilidade do
vírus aos antirretrovirais e suas possíveis transmissões de resistência.
APOIO
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior ? CAPES ? Ministério da Educação ? Brasil.
306
Genética de Microrganismos
VARIABILIDADE GENÉTICA DE FUNGOS FITOPATÓGENOS AO FEIJOEIRO USANDO
MARCADORES MOLECULARES ISSR E ITS-RFLP
Luciana Gonçalves de Oliveira1; Mariele Porto Carneiro Leão2; Antonio Félix da Costa1.
E-mail: [email protected]
(1)
Instituto Agronômico de Pernambuco; (2)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Micologia e
Instituto Agronômico de Pernambuco
RESUMO
Os fungos presentes no solo são os principais causadores de doenças para o feijoeiro comum, pois atacam o
sistema radicular, podendo atingir a parte aérea das plantas, causando perdas significativas na produtividade dessa
cultura. Algumas técnicas moleculares como ITS-RFLP e a utilização de marcadores moleculares ISSR têm sido
utilizadas para o conhecimento de fitopatógenos, auxiliando na identificação de genótipos, no estudo da
variabilidade genética, além de caracterizar a diversidade genética em populações de fungos fitopatogênicos,
obtendo diagnósticos mais rápidos e precisos. O trabalho objetivou avaliar a melhor estratégia de análise
da variabilidade genética de fungos de solo, patógenos ao feijoeiro comum, utilizando marcadores moleculares
ISSR e a técnica ITS-RFLP. 62 amostras de fungos, previamente identificadas morfologicamente, foram utilizadas
para o estudo, Fusarium oxysporum f sp. phaseoli (30), Macrophomina phaseolina (16) e Sclertotinia
sclerotiorum (16). Para análise de ISSR foram utilizados os iniciadores: UBC841, UBC817 e UBC881. Para a
amplificação do DNA da região ITS do rDNA foram utilizados os iniciadores ITS4 e ITS5. A digestão enzimática
dos produtos da PCR das regiões ITS do rDNA foi conduzida utilizando-se seis enzimas de restrição (EcoRI,
HaeIII, MspI, PstI, HindIII e AluI) separadamente. Os dendrogramas gerados a partir dos perfis de amplificação
utilizando os marcadores moleculares evidenciaram variabilidade genética intraespecífica, porém o iniciador
UBC841 mostrou maior polimorfismo intraespecífico, para as três espécies analisadas. A amplificação do locus
ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA gerou fragmentos de aproximadamente 600pb para todos os isolados de F. oxysporum e
S. sclerotiorum e de aproximadamente 700pb para os isolados de M. phaseolina. A enzima de restrição AluI foi
mais eficiente em demonstrar variabilidade intraespecífica nas três espécies estudada. Os resultados também
demonstraram que os marcadores moleculares de ISSR foram mais eficientes em evidenciar a variabilidade
genética intraespecífica do que as enzimas de restrição. Os resultados indicam que os iniciadores de ISSR
permitem a caracterização e diferenciação intraespecífica de F. oxysporum, M. phaseolina e S. sclerotiorum. A
variabilidade genética observada nesse trabalho é uma característica importante, pois, ao identificar o grau de
diversidade genética, pode-se analisar a ação do agente inibidor in vitro e planejar formas de controle e
monitoramento no campo.
APOIO
CNPq-FACEPE
307
Mutagênese e Farmacogenômica
ANÁLISE DA ATIVIDADE PROTETORA DA VITAMINA C (ÁCIDO ASCÓRBICO) SOBRE A
GENOTOXICIDADE DO ANTILEISHMANIAL MILTEFOSINE.
Patricia Valéria Castelo Branco Araujo1; Hugo José Alves1; Raissa Lacerda Pontes1; Muryllo Santos Castro1;
Silma Regina Ferreira Pereira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Maranhão
RESUMO
A leishmaniose é uma doença infecciosa causada pelo protozoário do gênero Leishmania, amplamente distribuída
pelo mundo, sendo a terceira doença transmitida por vetores de maior relevância. Os medicamentos de primeira
escolha recomendados pelo Ministério da Saúde e Organização Mundial da Saúde (OMS), utilizados para o
tratamento da leishmaniose são constituídos à base de antimônio. Um grande avanço no que diz respeito ao
tratamento da leishmaniose foi o desenvolvimento de uma droga oral efetiva - miltefosine (Impavido®),
facilitando a manutenção do tratamento, incluindo as infecções resistentes à terapia convencional com antimonial
pentavalente. Este trabalho objetivou avaliar a capacidade do antioxidante Vitamina C em reduzir os danos no
DNA causados pelo antileishmanial miltefosine. Para avaliação de genotoxicidade foi utilizado o ensaio do
Cometa e para avaliar o potencial mutagênico utilizou-se o teste do micronúcleo. Foram utilizados 6 grupos de
tratamento, sendo um grupo controle negativo, que recebeu água destilada via oral, um grupo tratado com
miltefosine (70mg/kg), um grupo tratado com Vitamina C (60mg/kg), além de três grupos tratados
simultaneamente com miltefosine (70mg/kg) e Vitamina C nas doses de 30, 60 e 120mg/kg, sendo o tratamento
realizado via oral por 24 horas. Nossos resultados mostraram que a Vitamina C não foi capaz de reduzir os danos
genotóxicos e mutagênicos (p > 0,05) causados ao DNA pelo miltefosine (70mg/kg) em nenhuma das doses
utilizadas no tratamento simultâneo.
APOIO
Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão - FAPEMA
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Capes
308
Mutagênese e Farmacogenômica
ANÁLISE CITOGENÉTICA DA TOXICIDADE DE AROMATIZANTES ALIMENTARES
SINTÉTICOS, DOS TIPOS ARTIFICIAIS, DE BAUNILHA, BISCOITO E TUTTI-FRUTTI.
Ila Monize Sousa Sales1; Maria Eduarda de Sousa e Silva1; Fabelina Karollyne Silva dos Santos1; Ana Paula
Peron2.
E-mail: [email protected]
(1)
Acadêmica do Curso de Ciências Biológicas, UFPI, Picos, PI; (2)Docente Programa de Pós-graduação em
Genética e Melhoramento, UFPI, Teresina, PI
RESUMO
Os aromatizantes alimentares são essenciais a indústria alimentícia devido conferirem propriedades sensoriais de
aroma e sabor aos mais variados tipos de alimentos industrializados. No entanto, tais aditivos alimentares são
considerados um avanço polêmico da área de ciência e tecnologia de alimentos por profissionais da área da saúde
em razão da escassez de estudos quanto sua toxicidade, em nível sistêmico e celular. Assim, objetivou-se neste
trabalho avaliar a citotoxicidade e a genotoxicidade de aditivos aromatizantes sintéticos, dos tipos artificiais de
Baunilha, Biscoito e Tutti-frutti. Tais aromatizantes foram escolhidos para análise por serem amplamente
utilizados nas indústria de alimentos na confecção de alimentos industrializados doces. A avaliação de toxicidade
se deu por meio das células meristemáticas de raízes de Allium cepa L., nos tempos de exposição de 24 e 48 horas,
onde os microingredientes foram analisados individualmente, nas doses de 0,3; 0,6; 0,9 ml. Após os tratamentos,
os meristemas de raízes foram fixados em fixador Carnoy, hidrolisados em ácido cloridrico e corados em orceína
acética a 2%, e em seguida analisados em microscópio óptico, em aumento de 40x, no qual avaliou se para cada
controle e tempo de exposição considerados um total de 5.000 células. Os dados obtidos foram submetidos ao teste
estatístico X2 (p>0,05). De acordo com os resultados observados verificou-se que as três doses do aromatizante de
Baunilha e Biscoito inibiram de forma significativa a divisão celular dos tecidos avaliados. As doses de Tutti-frutti
não alteraram o índice de divisão celular dos meristemas de raízes. Também foi verificado que todas as doses dos
aromatizantes de Biscoito e Tutti-frutti, tal como, a dose 0,6 ml do aditivo de Baunilha, induziram número
significativo de alterações de fuso mitótico, como as metáfases-C e pontes anáfasica e telofásicas, e micronúcleos.
Portanto, nas condições de análises estabelecidas, os aromatizantes de Baunilha e Biscoito demonstraram
expressivo potencial citotóxico e genotóxico, e o de Tutti-frutti, apesar de não citotóxico, apresentou atividade
genotóxica.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico- CNPq
309
Mutagênese e Farmacogenômica
ANÁLISE DA LETALIDADE E CITOTOXICIDADE DE SUSPENSÕES DE PONTOS QUÂNTICOS DE
CDTE SOBRE MOLUSCOS ADULTOS DE BIOMPHALARIA GLABRATA (SAY, 1818)
Lima, M.v.1; Silva, K.e.m.2; Pereira, M.i.a.1; Cabral Filho, P.e.1; Siqueira, W.n.2; Melo, A.m.m.a.1; Fontes, A.1.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Biofísica e Radiobiologia, UFPE, Recife/PE.; (2)Departamento de Biofísica e Radiobiologia,
UFPE, Recife/PE. Serviço de Monitoração Ambiental, CRCN, Recife/PE.
RESUMO
Introdução: Pontos quânticos (PQs) são nanocristais fluorescentes de semicondutores que vêm sendo cada vez
mais aplicados nas áreas biomédica e eletrônica. Este aumento tem provocado uma inevitável exposição humana e
ambiental aos nanomateriais, surgindo uma preocupação sobre os impactos causados ao meio ambiente e à saúde
humana. Dentro deste contexto, a utilização de bioindicadores ambientais altamente sensíveis, tais como os
moluscos Biomphalaria glabrata, se faz relevante para avaliação destes efeitos. Objetivo: Avaliar a toxicidade de
suspensões de PQs de Telureto de Cádmio (CdTe) em moluscos B. glabrata por meio da taxa de sobrevivência e
análise morfológica dos hemócitos. Metodologia: Foram utilizadas suspensões, em pH 7,0, de PQs de CdTe (3 nm
de diâmetro) estabilizados com ácido mercaptossuccínico (AMS). A síntese foi realizada na proporção de 5:1:6 de
Cd:Te:AMS. O excesso de precursores foi retirado por sucessivas lavagens com colunas de ultrafiltração de 10
kDa. Para análise da sobrevivência, moluscos adultos foram expostos por 24 horas às suspensões nas
concentrações de 62,5; 125 e 250 nM. O grupo controle (C) continha apenas água filtrada e declorada. Para análise
da toxicidade celular das suspensões de PQs frente aos moluscos foram avaliadas as células do sistema
imunológico, os hemócitos. Após a exposição à suspensão de PQs, os moluscos sobreviventes foram submetidos à
retirada e à análise dos hemócitos. Os parâmetros analisados foram células com micronúcleo (MN), binucleação
(BN) e apoptose (AP). A análise estatística foi calculada através do teste de Kruskal-Wallis. Resultados: A taxa de
mortalidade teve uma resposta dose-dependência. O número de moluscos inviáveis para 125 nM foi cerca de 50%
e para 250 nM aproximadamente 70%. As suspensões de PQs induziram alterações nos hemócitos todas as
concentrações testadas, observando a presença de MN, BN e AP. Para os indivíduos expostos a 250 nM foi
observada uma diferença significativa na frequência de AP em relação ao grupo controle e aos demais grupos
testados. Conclusão: O presente estudo indica que os PQs de CdTe induziram toxicidade nos moluscos B. glabrata
devido à letalidade induzida e à AP observada nas células hemocitárias. Contudo, para melhor elucidar os efeitos
tóxicos destas suspensões de nanopartículas ao meio ambiente, mais estudos estão sendo realizados.
APOIO
Agradecimentos: CAPES; CNPq; FACEPE.
310
Mutagênese e Farmacogenômica
ANÁLISE DE ALTERAÇÕES CROMOSSÔMICAS EM ESTUDO DE EXPOSIÇÃO PARCIAL À RAIOS
X
Aida Mayra Guedes de Andrade1; Mariana Esposito Mendes2; Fabiana Farias de Lima3; Julyanne Conceição
Goes de Mendonça4; Suy Ferreira Hwang3; Lais Melo da Silva1; Neide Santos5.
E-mail: [email protected]
(1)
Graduanda da Universidade Federal de Pernambuco (CB/UFPE); (2)Doutoranda do Departamento de Genética da
Universidade Federal de Pernambuco ((CB/UFPE); (3)Centro Regional de Ciências Nucleares do Nordeste
(CRCN-NE/CNEN); (4)Mestranda do Programa de Pós-graduação em Saúde Humana e Meio Ambiente
(CAV/UFPE)); (5)Departamento de Genética da Universidade Federal de Pernambuco (CB/UFPE)
RESUMO
Estudos mostram que a análise de alterações cromossômicas, envolvendo as células sanguíneas, particularmente
os linfócitos, pode fornecer uma estimativa real da dose absorvida após exposição à radiação ionizante. Um ponto
importante a ser observado é o impacto genético, consequentemente clínico, de uma exposição de corpo parcial,
que varia de acordo com a área do corpo exposto, e pode ser substancialmente diferente de uma exposição total do
corpo, mesmo com uma dose idêntica. O presente trabalho tem como objetivo avaliar as frequências de alterações
cromossômicas (dicêntrico, fragmento, anel) simulando irradiações parciais do corpo (25%, 50%). A irradiação do
material biológico coletado foi realizada com feixes de raios X de 250kVp no Serviço de Metrologia do CRCNNE com uma dose absorvida de 0,5Gy e 1Gy. Como o estudo simula irradiações parciais, a amostra foi diluída em
duas proporções (25% e 50%). As amostras irradiadas e controles (não irradiadas) tiveram seus linfócitos
cultivados em meios de cultura e, após o processamento do material, foram obtidas as metáfases mitóticas. De
acordo com os resultados obtidos, foi possível confirmar que quanto maior a proporção, maior foi o número de
alterações cromossômicas encontradas. A frequência de dicêntricos na proporção de 25% e 50%, na dose de
0,5Gy, é igual (0,006), mas a de fragmentos isolados encontrados na proporção de 50% é maior (25% - 0,064 e
50% - 0,8), atestando que o número de alterações cromossômicas é maior à medida que a proporção aumenta. Na
dose de 1Gy na proporção de 50% começa a aparecer a alteração cromossômica denominada cromossomo em
anel. A incidência de cromossomo em anel é menor, porque os raios X são caracterizados como uma radiação com
uma baixa transferência linear de energia. As proporções de 100% de 0,5Gy e de 50% de 1Gy estão equivalentes,
mostrando que os achados citogenéticos estão correspondendo corretamente. Os dados apresentados são
preliminares, novas doses e indivíduos serão analisados para confirmar se o padrão visto até agora se manterá e,
assim, atestar as hipóteses levantadas para esse estudo.
APOIO
Agradecimentos ao CNPq pelo apoio financeiro
311
Mutagênese e Farmacogenômica
APLICAÇÃO DO ENSAIO COMETA PARA AVALIAÇÃO DA ESTERILIDADE DE MACHOS DE
AEDES AEGYPTI ATRAVÉS DA RADIAÇÃO GAMA
Cícero Jorge Verçosa1; Sloana Giesta Lemos Florêncio2; Edvane Borges da Silva2; Maria Alice Varjal de Melo
Santos3; Carlos Messias de Mendonça3; Gabriel da Luz Wallau3; Claudia Rohde4.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco (UPE) e
Laboratório de Genética, Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE).;
(2)
Departamento de Energia Nuclear (DEN), Universidade Federal de Pernambuco (UFPE). ; (3)Departamento de
Entomologia do Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães/Fundação Oswaldo Cruz, Recife/PE.; (4)Laboratório de
Genética, Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE).
RESUMO
Aedes aegypti é um díptero da família Culicidae e vetor de arboviroses como, dengue, chikungunya e zika no
Brasil. Novas abordagens para o controle desta espécie de mosquito, como a Técnica do Inseto Estéril (TIE), são
importantes para reduzir a incidência destas doenças. A TIE compreende a criação massiva de machos, seguida da
esterilização e liberação em campo, com o intuito de que esses acasalem com as fêmeas selvagens e inviabilizem
suas proles. Um requisito importante na produção dos machos estéreis (ME) é a confirmação da esterilidade, cujo
método convencional consiste na verificação da fertilidade das fêmeas acasaladas com os ME. Este é um método
que além de indireto é laborioso e pode levar 10 ou mais dias para a obtenção dos resultados. Neste contexto, o
objetivo do trabalho foi investigar a eficácia do Ensaio Cometa como indicador direto da eficiência de
esterilização dos machos, submetidos à radiação gama. O Ensaio Cometa permite avaliar as alterações no DNA em
meio alcalino, verificando quebras de fitas-simples e locais álcali-lábeis. Para este estudo, grupos de pupas machos
de A. aegypti, provenientes da Ilha de Fernando de Noronha, expostos às doses de 40 Gy e 50 Gy foram avaliados,
além do grupo controle não exposto. Para aplicação do Ensaio Cometa foram extraídas células da hemolinfa das
pupas e o material foi centrifugado, sendo as lâminas montadas com agarose e expostas a uma solução de lise
celular por 72h. Ao término deste período as lâminas foram submetidas a uma corrida de eletroforese, sendo
depois neutralizadas em solução específica e fixadas em etanol absoluto. O material genético presente nas lâminas
foi corado com Gel RedTM e analisados em microscopia fluorescente. Os cometas visualizados foram classificados
do menor ao maior em uma escala de dano (0 a 4, respectivamente). A partir dos dados foram calculados o Índice
de Dano (ID) e a Frequência de Dano (FD%). Os resultados demonstraram um significativo aumento de ID tanto
no grupo exposto a 40Gy (p= 0,0463) quanto a 50Gy (p= 0,0493), em relação ao grupo controle. Houve também
diferença significativa entre as duas doses de radiação aplicadas (p= 0,0495). O segundo parâmetro observado,
FD%, também apresentou o mesmo comportamento. Os resultados apontam o Ensaio Cometa como um método
promissor para ser utilizado no controle de qualidade do material biotecnológico produzido para a TIE, com vistas
ao controle populacional de A. aegypti.
APOIO
CNPq; CAPES; FACEPE APQ-0345-2.13/13; APQ-1707-2.13/15; APQ- 0416.2.02/15; BCT-0159-2.13/16 e
PROPESQ-UFPE.
312
Mutagênese e Farmacogenômica
APLICAÇÃO PIONEIRA DO ENSAIO COMETA COM UMA LINHAGEM SELVAGEM E
INDIVÍDUOS ADULTOS DE DROSOPHILA MELANOGASTER COMO MARCADOR DO DANO
GENÉTICO
Cícero Jorge Verçosa1; Aroldo Vieira de Moraes Filho2; Ícaro Fillipe de Araújo Castro3; Robson Gomes dos
Santos3; Kênya Silva Cunha4; Ana Cristina Lauer Garcia3; Julio Alejandro Navoni5; Viviane Souza do Amaral5;
Claudia Rohde3.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco (UPE) e
Laboratório de Genética, Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE).;
(2)
Laboratório de Radiobiologia e Mutagênese, Universidade Federal de Goiás (UFG).; (3)Laboratório de Genética,
Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE). ; (4)Laboratório de Genética
Toxicológica, Universidade Federal de Goiás (UFG).; (5)Departamento de Biologia Celular e Genética,
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN).
RESUMO
O Ensaio Cometa é uma técnica que permite avaliar as alterações no DNA em meio alcalino, verificando quebras
de fitas-simples e locais álcali-lábeis. O organismo-modelo Drosophila melanogaster tem sido cada vez mais
utilizado em testes de genotoxicidade, devido a diversas informações acumuladas sobre seu genoma, rápido ciclo
de vida e facilidade na detecção de fenótipos, além de ser um organismo bem estabelecido como modelo de
estudos de doenças humanas. Na literatura, o uso do Ensaio Cometa utilizando o modelo D. melanogaster está
restrito ao uso da linhagem Oregon e no estágio de larva. O objetivo deste trabalho foi aperfeiçoar a técnica
aplicando-a de forma pioneira em uma linhagem selvagem e em indivíduos na fase adulta. Para tanto, foram
extraídos hemócitos presentes na hemolinfa de larvas da linhagem Oregon e selvagem e também de indivíduos
adultos. Para as larvas a obtenção da hemolinfa se deu depositando-as em uma placa de petri e resfriando-as a 4ºC
. Em seguida foi realizado um corte lateral na cutícula de cada indivíduo, em uma placa escavada, com um bisturi
e uma pinça. Já os indivíduos adultos, foram eterizados e transferidos para uma placa escavada contendo solução
de EDTA. Esse procedimento foi realizado em um microscópio estereoscópico, com uma pinça de relojoeiro nº 5 e
uma seringa de 1 mL. Foram realizadas duas lesões em cada indivíduo, uma no tórax e outra no abdômen. A
hemolinfa depositada no fundo da placa escavada tanto de larvas quanto de indivíduos adultos foi retirada com a
ajuda de uma micropipeta e colocada em um tubo de microcentrífuga. O material extraído foi centrifugado, as
lâminas foram montadas e foram postas em uma solução de lise por 72h. Ao término do período de lise celular as
lâminas foram submetidas a uma corrida de eletroforese, neutralizadas em solução específica e fixadas em etanol
absoluto e em seguida foram analisadas em microscopia fluorescente. Foram aplicados os testes estatísticos de
Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, com nível de significância p< 0,05. A aplicação do Ensaio Cometa para a
avaliação do dano genético foi sensível tanto na linhagem Oregon, tradicionalmente empregada nesta
metodologia, como na linhagem selvagem. Os resultados indicam que a linhagem selvagem também pode ser
empregada como modelo de estudo para esse fim. Além disso, o uso de indivíduos adultos de Drosophila
melanogaster também se mostrou como uma alternativa para este bioensaio, abrindo novas perspectivas para
estudos na área.
APOIO
CNPq; CAPES; FACEPE APQ- 0416.2.02/15 e PROPESQ-UFPE;
313
Mutagênese e Farmacogenômica
ATIVIDADE ANTICÂNCER DE EXTRATOS DE FOLHAS DE SUCUPIRA (BOWDICHIA
VIRGILIOIDES) EM CULTURA DE CÉLULAS
Marcus Vinícius Silva Weigel Gomes1; Tayhana Priscila Medeiros Souza1; Simone Lara de Omena Silva1; Heloisa
de Carvalho Matos1; Emiliano de Oliveira Barreto1; Renato Santos Rodarte1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Alagoas
RESUMO
Introdução: A fitoterapia caracteriza-se pelo uso de matérias-primas vegetais como agentes bioativos para
combater doenças. No Brasil, a utilização de ervas medicinais teve sua base na prática indígena que, influenciada
por culturas imigrantes, teve seu uso popularizado. A fim de comprovar as propriedades farmacológicas de
produtos populamente utilizados como fitoterápicos, o presente trabalho avaliou o potencial anticarcinogênico de
extratos bruto e fracionados de folhas de Bowdichia virgilioides, popularmente conhecida como Sucupira.
Objetivos: Avaliar, in vitro, o potencial anticâncer de extratos bruto e fracionados de folhas de B. virgilioides;
identificar qualitativamente os metabólitos presentes nos extratos. Metodologia: O efeito dos extratos brutos e
frações sobre a proliferação de linhagens tumorais de adenocarcinoma pulmonar (A549), melanoma (MDA-MB435) e leucemia linfoblastóide T (CCRF-CEM) foi realizado através do ensaio do MTT utilizando concentrações
de 120 a 0,9 µg/mL, seguido de avaliação dos potenciais genotóxico e apoptótico, pelos ensaios de micronúcleo,
cometa alcalino e apoptose por difusão em agarose. As análises estatísticas foram feitas pelo método One-Way
ANOVA, seguido pelo pós-teste Newman-Kewls, com nível de significância selecionado para p < 0,05. Resultados:
Os dados obtidos mostraram que o extrato bruto inibiu a proliferação da linhagem de adenocarcinoma pulmonar
em relação ao controle negativo, na concentração de 15 µg/mL (58,76 ± 4,32; 100 ± 3,23). O extrato BvF C
diminuiu a viabilidade celular em todas as linhagens testadas, sendo seu maior efeito em CCRF-CEM (IC50 = 110
µg/mL). No entanto, não induziu danos genômicos ou morte por apoptose. Conclusão: A fração clorofórmica
mostrou um potencial efeito anticâncer. Estudos posteriores são necessários para investigar seus efeitos sobre estas
células e em células normais, bem como análises fitoquímicas mais detalhadas para identificação de substâncias
responsáveis por tais efeitos.
APOIO
FAPEAL, CNPq e UFAL
314
Mutagênese e Farmacogenômica
ATIVIDADE ANTICÂNCER DE EXTRATOS DE FOLHAS DE SUCUPIRA (BOWDICHIA
VIRGILIOIDES) EM CULTURA DE CÉLULAS
Marcus Vinícius Silva Weigel Gomes1; Tayhana Priscila Medeiros Souza1; Simone Lara de Omena Silva1; Heloisa
de Carvalho Matos1; Emiliano de Oliveira Barreto1; Renato Santos Rodarte1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Alagoas
RESUMO
Introdução: A fitoterapia caracteriza-se pelo uso de matérias-primas vegetais como agentes bioativos para
combater doenças. No Brasil, sua utilização teve seu uso popularizado com base na prática indígena. A fim de
comprovar suas propriedades farmacológicas, o presente trabalho avaliou o potencial anticarcinogênico de extratos
bruto e fracionados de folhas de Bowdichia virgilioides, popularmente conhecida como Sucupira. Objetivos:
Avaliar, in vitro, o potencial anticâncer de extratos aquoso bruto e fracionados de folhas de B. virgilioides;
identificar qualitativamente os metabólitos presentes nos extratos. Metodologia: O efeito dos extratos bruto e
frações sobre a proliferação de linhagens tumorais de adenocarcinoma pulmonar (A549), melanoma (MDA-MB435) e leucemia linfoblastóide T (CCRF-CEM) foi realizado através do ensaio de MTT utilizando concentrações
de 120 a 0,9 µg/mL, seguido de avaliação dos potenciais genotóxico e apoptótico, pelos ensaios de micronúcleo,
cometa alcalino e apoptose por difusão em agarose, após 24 horas de tratamento. As análises estatísticas foram
feitas pelo método One-Way ANOVA, seguido pelo pós-teste Newman-Kewls, com nível de significância
selecionado para p < 0,05. Resultados: Os dados obtidos mostraram que o extrato bruto inibiu a proliferação da
linhagem de adenocarcinoma pulmonar na concentração de 15 µg/mL em relação ao controle de células sem
tratamento (58,76 ± 4,32; 100 ± 3,23), sendo mais efetivo que o quimioterápico utilizado (cisplatina - 40 μg/ mL
= 65,30 ± 3,40). A fração clorofórmica (BvF C) reduziu a viabilidade celular em todas as linhagens testadas,
inibindo mais de 50% apenas em CCRF-CEM (IC50 = 110 µg/mL). No entanto, não induziu danos genômicos,
nem morte por apoptose na linhagem de leucemia linfoblastóide T. Em células mononucleares normais isoladas de
sangue periférico não mostrou efeito citotóxico. Conclusão: O extrato bruto apresentou potencial anticâncer em
células A549, podendo ser atribuído tais efeitos ao sinergismo dos metabólitos secundários identificados no
extrato, tendo em vista que as frações não mostraram atividade inibitória em A549. A fração clorofórmica
mostrou um efeito seletivo às linhagens tumorais testadas, inibindo a proliferação de células tumorais sem causar
morte celular em células normais. Estudos estão sendo realizados para identificar a(s) substância(s) responsável(is)
por tais efeitos e avaliar os possíveis mecanismos e rotas metabólicas pelos quais os extratos agem.
APOIO
Apoio financeiro: FAPEAL, CNPq e UFAL.
315
Mutagênese e Farmacogenômica
ATIVIDADE PROTETORA DO EXTRATO DA FOLHA DE POINCIANELLA BRACTEOSA (TUL.) L.P.
QUEIROZ EM CÉLULAS MERISTEMÁTICAS DE ALLIUM CEPA L.
Bárbara Cristina Silva Holanda Queiroz1; Cleiane do Nascimento Monteiro2; Regina Maria Silva Sousa1; João
Gabriel Silva Morais1; Francielle Alline Martins1; Pedro Marcos de Almeida1.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVERSIDADE ESTADUAL DO PIAUÍ; (2)UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ
RESUMO
Neonothopanus gardneri Berk. ex Gardner (Marasmiaceae) é considerado o maior fungo bioluminescente do
Brasil e um dos maiores do mundo. As espécies dessa família são ricas em sesquiterpenos citotóxicos, exibindo
atividades antimalárica e antimicobacteriana, além de citotoxicidade contra linhagens celulares de alguns tipos de
câncer. No entanto, não há relatos sobre a atividade citogenotóxica de N. gardneri. Desse modo, o objetivo deste
estudo foi avaliar o potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico do extrato acetato de etila de N. gardneri,
utilizando o sistema-teste Allium cepa L. Espécimes de N. gardneri foram coletadas na cidade de São Francisco,
Maranhão, Brasil. Em seguida, os fungos foram congelados e submetidos à liofilização. Posteriormente, preparouse o extrato acetato de etila (Ext. AcOEt), que foi diluído em DMSO 0,2% mais solução salina 0,9%, obtendo-se
as concentrações testes de 50, 100, 250 e 500 µg/mL. Sementes de A. cepa foram germinadas em placas de Petri
contendo água destilada. Posteriormente, as mesmas foram transferidas para os controles e para as concentrações
citadas do Ext. AcOEt por 24 h. Como controle negativo (CN), foi utilizado DMSO 0,2% mais solução salina
0,9% e como controle positivo (CP), o metilmetanossulfonato (MMS, 10 mg/L). Em seguida, as raízes foram
fixadas em metanol: ácido acético (3:1), hidrolisadas em HCl por 10 min, lavadas em água destilada e coradas com
Reativo de Schiff, por 2 h no escuro. Cinco mil células meristemáticas por tratamento, 500 células por lâmina
(total de 10 lâminas), foram analisadas em microscópio óptico (400 x). As análises estatísticas foram avaliadas por
meio do teste de Kruskal-Wallis a 5% de significância no programa BioEstat 5.3. Os valores de CP foram
significativos em relação ao CN para os parâmetros de genotoxicidade e mutagenicidade. Quanto ao índice
mitótico, houve aumento significativo nas concentrações de 50, 250 e 500 µg/mL em relação ao CN, resultando no
efeito citotóxico. Quanto à genotoxicidade e à mutagenicidade, não houve diferença significativa entre as
concentrações e o CN. Os resultados obtidos demonstraram que o Ext. AcOEt de N. gardneri possui efeito
citotóxico na maioria das concentrações testadas e alterações cromossômicas não significativas. Adicionalmente,
análises sobre a composição química de N. gardneri e testes em outros bioensaios fazem-se necessários para a
elucidação da interferência quanto ao ciclo celular.
316
Mutagênese e Farmacogenômica
AVALIAÇÃO CITOGENOTÓXICA DE EFLUENTE TÊXTIL SINTÉTICO APÓS TRATAMENTOS
BIOLÓGICOS
Vanessa Cristina de Souza1; Dominick Spindola Correia1; Osmar Luiz Moreira Pereira Fonseca de Menezes1;
Sávia Gavazza1; Ana Christina Brasileiro Vidal1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFPE
RESUMO
A atividade têxtil no Agreste pernambucano está organizada sob a forma do Arranjo produtivo local de confecção
de jeans, sendo a mais importante atividade industrial desta região. Devido ao crescimento desordenado destas
indústrias, diversos problemas ambientais se desenvolveram. Os efluentes gerados nestes processos contêm, em
geral, elevada concentração de amido (liberado na desengomagem), corantes e sulfato (liberados na etapa de
tingimento). O descarte se dá nos recursos hídricos da região, em especial no rio Ipojuca. Neste trabalho, foi
avaliado o potencial citogenotóxico, mediante sistema-teste Allium cepa L. (cebola), de efluente têxtil sintético
não tratado, e após tratamento via processos biológicos (1) anaeróbio e (2) aeróbio, todos na concentração de
100%. As características físico-químicas também foram analisadas. Sementes de A. cepa foram germinadas em
amostras de efluentes não tratados e tratados, a fim de verificar a eficiência dos diferentes tratamentos. Foram
utilizados como controles negativo (CN), água ultrapura e positivos, o Metil metano-sulfonato (4x10-4 M) e a
Trifluralina (0,84 ppm de princípio ativo). Após germinação, raízes foram fixadas em Carnoy (etanol: ácido
acético, 3:1) e utilizadas na preparação das lâminas. Foram analisadas 5.000 células/tratamento. Os resultados
foram comparados ao CN mediante teste de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey (p<0,05). Nenhuma das
amostras apresentou potencial citotóxico. Nas amostras do efluente sintético não tratado e tratado por reator
anaeróbio, o número de alterações cromossômicas apresentou diferença significativa em relação ao controle
negativo, indicando atividade genotóxica para os referidos efluentes, porém, não detectada para o efluente sintético
tratado por processo aeróbio. No tratamento anaeróbio, ocorreu redução da cor do efluente pela quebra das
ligações azo (N=N), que são os grupos cromóforos dos corantes azo, porém resultou na formação de aminas
aromáticas, que devem ter sido responsáveis pela genotoxicidade observada. Dessa forma, indica-se que o
tratamento combinado anaeróbio/aeróbio deve ser realizado a fim de se ter maior remoção das aminas aromáticas e
consequentemente menor toxicidade nos corpos hídricos.
APOIO
CNPq
317
Mutagênese e Farmacogenômica
AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE CITOTÓXICA E MUTAGÊNICA DO BARBATIMÃO
(STRYPHNODENDRON ADSTRINGENS) EM BIOENSAIO COM ALLIUM CEPA
Herald Souza dos Reis1; Mary Helen Pestana da Costa2; Sheyla Michele de Souza Moraes1; José Augusto
Nascimento Monteiro2; Carlos Alberto Machado da Rocha1.
E-mail: [email protected]
(1)
Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Pará; (2)Instituto de Ciências Biológicas, Universidade
Federal do Pará
RESUMO
O barbatimão (Stryphnodendron adstringens) é planta da família Mimosaceae encontrada em várias regiões do
Brasil. Sua casca é intensamente usada na medicina popular principalmente por suas ações cicatrizantes e
antimicrobianas. O uso de produtos naturais sem conhecimento é um perigo à saúde humana. Muitos desses
produtos são dotados de grandes teores tóxicos para a célula e devem ser estudados. No bioensaio com Allium
cepa, após exposição por certo período, é possível avaliar tanto os efeitos citotóxicos pela redução do crescimento
de raízes ou decréscimo do índice mitótico, quanto os efeitos genotóxicos pela análise de micronúcleos ou de
anomalias na divisão celular. O objetivo geral deste trabalho foi identificar os efeitos tóxicos do barbatimão
(Stryphnodendron adstringens) sobre a germinação de sementes e desenvolvimento das raízes de cebola (Allium
cepa). O extrato aquoso foi preparado através da infusão da casca do caule do barbatimão em água destilada por
um período de 10 minutos. As sementes de Allium cepa foram divididas em quatro grupos: controle negativo,
regadas com água destilada; Tratamentos 1 e 2, regadas com extrato do barbatimão nas concentrações de 25% e
50% (m/v), respectivamente; controle positivo, regadas com solução de N-metil-N-nitrosourea (MNU) a 0,1 25
mg.L-1. Foram analisadas 4.000 células por tratamento, observando-se o número de células em cada fase do ciclo
celular. As mesmas lâminas também foram utilizadas para a contagem das alterações no ciclo celular. Os dados
obtidos foram submetidos a análises de variância, ao nível de significância de 5%. As análises estatísticas foram
efetuadas com o software estatístico BioEstat 5.0. Os quatro grupos não diferiram quanto à taxa de germinação e
ao índice mitótico (p > 0,05), porém as médias de comprimento e peso das radículas foram significativamente
menores no controle positivo (p < 0,05). Em relação aos efeitos genotóxicos, não houve diferenças significas dos
tratamentos com extrato de barbatimão comparados ao controle negativo (p > 0,05). No controle positivo,
entretanto, houve aumento significativo na frequência de micronúcleos (p = 0,0042) e de anomalias do ciclo
mitótico (p = 0,0076). Conclui-se que, nas condições de nosso experimento, o extrato de barbatimão não
apresentou efeitos citotóxicos e genotóxicos frente ao sistema teste de Allium cepa.
318
Mutagênese e Farmacogenômica
AVALIAÇÃO DA GENOTOXICIDADE DAS ÁGUAS DO RIO POTI NA CIDADE DE TERESINA, POR
MEIO DO ENSAIO COMETA EM DROSOPHILA MELANOGASTER
Rayane Santana da Silva1; Ícaro Fillipe de Araújo Castro1; Samuel Lima de Santana1; Renata de Barros
Oliveira1; Cícero Jorge Verçosa1; Rafael Diego Barbosa Soares2; Alisson dos Reis Barbosa2; Carlos Ernando da
Silva2; Claudia Rohde1; Ulisses Ramos Montarroyos3.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Universidade Federal do Piauí; (3)Universidade Estadual de Pernambuco
RESUMO
As atividades humanas, respaldadas em um estilo de vida de desenvolvimento, têm gerado crescentes danos a
qualidade da água, principalmente pelo lançamentos de efluentes e detritos industriais e domésticos nos recursos
hídricos. O Poti é um importante rio que corta a cidade de Teresina no Piauí, e recebe grande quantidade de
efluentes domésticos e industriais desta capital. Este trabalho objetivou caracterizar o efeito genotóxico associado
às águas do Rio Poti, em células somáticas de larvas de Drosophila melanogaster por meio do Ensaio Cometa. A
água foi coletada em dois pontos de Teresina, sendo um no início da cidade (ponto P0) e outro localizado na saída
da cidade (ponto P1). Após a coleta, a água foi levada ao laboratório em recipientes de vidro e mantida a -20°C.
Como controle negativo do experimento foi utilizada água destilada. Para o Ensaio Cometa, cinquenta larvas de D.
melanogaster em terceiro estágio foram expostas a água dos pontos P0, P1 e à água destilada (controle negativo).
Estas águas (3 mL) hidratam um meio de cultivo constituído por 0,9 gramas de purê de batata instantâneo, onde os
organismos ficaram expostos e se alimentaram por um período de 24 horas. Foram realizadas cinco repetições para
cada tratamento, totalizando uma amostra constituída por 750 indivíduos. Passado o período de exposição, foi
realizada coleta dos hemócitos, que foram processados e a quantificados para o efeito genotóxico ao material
genético, por meio do Ensaio Cometa. Foram calculados o Índice de Dano (ID) e a Frequência de Dano (FD%) e
aplicados os testes estatísticos ANOVA e pós-teste de Bonferroni. Foram observadas diferenças estatisticamente
significativas entre a genotoxicidade gerada no grupo controle negativo e os pontos P0 (p=0,0001) e P1
(p=0,0001), tanto para ID quanto FD%, o que indica que as águas do rio Poti na altura da cidade de Teresina têm
potencial efeito genotóxico. Como não houve diferenças entre as águas dos pontos P0 e P1, que correspondem aos
pontos antes e depois da cidade de Teresina, conclui se que este efeito genotóxico não está restrito apenas a um
local, e que pode estar afetando de forma significativa todo o ecossistema aquático do rio Poti. Por fim, cabe
destacar que o rio é uma importante fonte pesqueira da região, e por isso pode estar causando grande risco à
população Teresinense que se alimentam desses peixes.
APOIO
CAPES, CNPQ e FACEPE.
319
Mutagênese e Farmacogenômica
AVALIAÇÃO DA GENOTOXICIDADE DE LECTINAS DE MYRACRODRUON URUNDEUVA E
SCHINUS TEREBINTHIFOLIUS
Stéphanny Vanessa de Mesquita1; Matheus Cavalcanti de Barros1; Larissa Cardoso Corrêa de Araujo Videres1;
André Mariano Batista2; Jaciana dos Santos Aguiar1; Teresinha Gonçalves da Silva1; Patrícia Maria Guedes
Paiva1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Universidade Federal Rural de Pernambuco
RESUMO
As lectinas do cerne (MuHL) e das folhas (MuLL) de M. urundeuva possuem atividade larvicida contra Aedes
aegypti. Já SteLL, lectina obtida das folhas de Schinus terebinthifolius, possui atividade antifúngica
contra Candida albicans. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito genotóxico de MuHL, MuLL e
SteLL em células HepG2 (hepatocarcinoma humano). A genotoxicidade foi analisada através do ensaio cometa.
As concentrações utilizadas foram definidas a partir do teste do MTT (resultados prévios). As células foram
plaqueadas (4x104 células/mL) e tratadas com as lectinas, sendo cada tratamento realizado em duplicata. O
controle positivo foi o metilmetanosulfonato. Após 24 horas, uma alíquota das células foi misturada a agarose de
baixo ponto de fusão. Em seguida, esta suspensão celular foi gotejada sobre lâmina coberta com agarose padrão.
Após imersão em solução de lise, foi realizada a corrida de eletroforese (20 min, 40 V, 300 mA). A coloração foi
feita com brometo de etídio e a análise realizada em microscópio de fluorescência. 100 nucleoides por lâmina
foram analisados e classificados, de acordo com o tamanho da cauda, nas classes 0, 1, 2, 3 e 4. O índice de danos
foi calculado pelo somatório do número de células em cada classe multiplicado pelo valor da classe. A análise
estatística foi realizada por ANOVA seguida pelo teste de Newman-Keuls. O índice de danos para os controles
negativo e positivo foi de 28,50±2,88 e 238,75±5,61, respectivamente. Para MuHL o índice de danos foi de
59,50±4,5 na concentração de 25 µg/mL, 56,2 ±8,18 para 50 µg/mL e 60,75±6,39 para 100 µg/mL. Para MuLL o
índice de danos foi de 35,25±0,95 para 12,5 µg/mL, 44,5±3,41 para 25 µg/mL e 60,0±5,47 para 50 µg/mL. O
índice de danos para SteLL foi de 37,25±3,2 para 12,5 µg/mL, 33,0±2,94 para 25 µg/mL e 140,25±4,03 para 50
µg/mL. MuHL promoveu danos classe 1 nas três concentrações testadas. MuLL promoveu danos apenas nas
concentrações de 25 e 50 µg/mL, pertencentes à classe 1 em ambas. STeLL promoveu danos apenas na
concentração de 50 µg/mL, pertencentes à classe 3. Em comparação ao controle negativo, MuLL, MuHL e SteLL
em pelo menos uma das concentrações testadas apresentaram-se potencialmente danosas ao material genético,
sendo necessários outros estudos a fim de verificar a fundo os possíveis efeitos genotóxicos destas lectinas.
APOIO
FACEPE
320
Mutagênese e Farmacogenômica
AVALIAÇÃO DO POTENCIAL CITOTÓXICO, GENOTÓXICO E MUTAGÊNICO DO EXTRATO DO
FRUTO DE LIBIDIBIA FERREA (MART. EX TULL) L.P. QUEIROZ VAR. FERREA USANDO
SISTEMA-TESTE ALLIUM CEPA L.
Raisa Ferreira Costa1; Dominick Spindola Correia1; Ana Rafaela da Silva Oliveira1; Bárbara Schneyder Oliveira
Pereira da Fonseca2; Mychely Sheila Melo Luna3; Márcia Vanusa da Silva3; Ana Christina Brasileiro Vidal1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética; (2)Universidade Federal Rural de Pernambuco,
Departamento de Genética; (3)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Bioquímica
RESUMO
Resumo: A Libidibia ferrea (Mart. Ex Tul) L. P. Queiroz (Fabaceae), conhecida como pau-ferro-verdadeiro, jucá e
jucaína, apresenta grande importância medicinal devido a seus metabólitos secundários, que apresentam atividades
antifúngica, antimicrobiana, anti-inflamatória, analgésica e antitumoral. Contudo, há pouca informação sobre suas
propriedades tóxicas. Dessa forma, o presente trabalho visou avaliar o potencial de citotóxico, genotóxico e
mutagênico do extrato aquoso do fruto de L. ferrea, em diferentes concentrações, usando a cebola (A. cepa) como
sistema-teste. Sementes de A. cepa recém-germinadas foram expostas às concentrações de 0,125; 0,25 e 0,5
mg/mL do extrato do fruto de L. ferrea por 24 h. Como controles positivos, foram utilizados o MMS (metil
metano-sulfonato, 4x10-4 M) e o herbicida Trifuralina (0,84 ppm); como controle negativo, utilizou-se água
ultrapura. As raízes foram fixadas em Carnoy (etanol: ácido acético; 3:1) e coradas com Reativo de Schiff. No
total, foram analisadas 5.000 células de cebola por tratamento. Na análise das lâminas, foram consideradas: índice
mitótico em células meristemáticas (citotoxicidade), frequência de alterações cromossômicas em células
meristemáticas (genotoxicidade) e índice de formação de micronúcleos (MN) em células da primeira geração filial
(F1) (mutagenicidade). As concentrações de L. ferrea apresentaram atividades genotóxica, para as concentrações
0,25 e 0,5 mg/mL, e citotóxica e mutagênica, para a concentração mais alta (0,5 mg/mL). Dentre as alterações
cromossômicas encontradas, observou-se diferença significativa para a presença de brotos nucleares e de
micronúcleos, para ambas as concentrações, e de quebras cromossômicas, para a concentração de 0,5 mg/mL.
Dessa forma, sugere-se que o uso medicinal dessa espécie seja feito com cautela, pois concentrações mais elevadas
podem promover instabilidade cromossômica e quebras no DNA.
APOIO
Universidade Federal de Pernambuco(UFPE) e CAPES.
321
Mutagênese e Farmacogenômica
AVALIAÇÃO DO POTENCIAL MUTAGÊNICO DE EXTRATOS DE ALGAS RODOFÍCEAS
COLETADAS EM FLORESTAS DE MANGUE NA PENÍNSULA DE AJURUTERUA, BRAGRANÇA PARÁ
Herald Souza dos Reis1; Mary Helen Pestana da Costa2; Carlos Fellipe da Silva Carvalho1; Priscila Cordeiro
Costa da Silva1; Diana do Vale Leão3; Carlos Alberto Machado da Rocha1.
E-mail: [email protected]
(1)
Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Pará; (2)Instituto de Ciências Biológicas, Universidade
Federal do Pará; (3)Universidade da Amazônia
RESUMO
Uma das principais limitações no processo de desenvolvimento de fármacos anticâncer é o suprimento das
moléculas, tanto para a fase de estudos como para produção em maior escala. Nesse contexto, surgem as
revolucionárias implicações dos estudos com metabólitos secundários de organismos aquáticos. A enorme
biodiversidade brasileira sugere grandes possibilidades para a produção de metabólitos secundários
biologicamente interessantes. O objetivo geral deste projeto foi verificar a possível ação mutagênica do extrato
bruto de Algas Rodofíceas coletadas em florestas de mangue na península de Ajuruterua, Bragrança-Pará. As algas
foram coletadas, lavadas e o extrato foi produzido com o uso do acetato de etila como solvente. Para o teste de
mutagenicidade, foi utilizado o teste com Allium cepa. Foram estudados 5 grupos de tratamentos. Controle
positivo (N-nitroso-n-methylurea [NMU] em concentração de 15mg/ml), Controle negativo (Tratado com água
destilada), Branco (Tratado com Dimetilsulfóxido [DMSO]), 50µg/ml de extrato (Diluído em DMSO), 100µg/ml
de extrato (Diluído em DMSO). Após o período de tratamento as lâminas foram preparadas para a análise do
índice mitótico, anomalias do ciclo mitótico (metáfase irregular, ponte telofásica, ponte anafásica e cromossomo
vagante) e micronúcleos. Os dados obtidos foram submetidos a uma análise de variância (ANOVA). Os
tratamentos não alteraram significativamente os índices mitóticos e nem as frequências de anomalias do ciclo
mitótico. Por outro lado, verificou-se aumento significativo na freqüência de micronúcleos em todos os grupos
tratados, quando comparados ao grupo controle. Entretanto, o maior índice de células micronucleadas ocorreu no
grupo Branco (tratado com DMSO), sugerindo que este solvente interferiu na avaliação do efeito mutagênico do
extrato de rodofíceas. Portanto, para resultados mais eficazes, é necessária a substituição do solvente DMSO (na
diluição do extrato) em testes in vivo com Allium cepa.
APOIO
Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Pará - Diretoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Inovação.
322
Mutagênese e Farmacogenômica
AVALIAÇÃO DO POTENCIAL MUTAGÊNICO E CITOTÓXICO DO SUCO DE NONI (MORINDA
CITRIFOLIA) EM SISTEMAS DE ALLIUM CEPA
Matheus de Moraes Cunha Gonçalves1; João Marcelo Castro Sousa1; Leomá Albuquerque Matos1; Sandra Maria
Mendes de Moura Dantas1; Amanda Carvalho de Barros1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Piauí
RESUMO
As plantas medicinais são usadas como o único recurso terapêutico de uma parcela da população brasileira e de
mais de 2/3 da população do planeta. Porém, a ação das substâncias presentes nessas plantas ainda é pouco
estudada, e muitas dessas podem ser citotóxicas e induzirem alterações no material genético. O noni (Morinda
citrifolia) é usado na medicina popular no tratamento de doenças e/ou distúrbios como diabetes, diarreia,
hipertensão, artrite, estresse e câncer. Este trabalho objetivou avaliar os efeitos citotóxicos e mutagênicos
da Morinda citrifolia em sistemas de Allium cepa utilizando três concentrações do suco do fruto: Tratamento-1;2;3
(T1=180g/L (usual); T2= 540g/L; T3=720g/L), além de um controle negativo (água destilada) e um controle
positivo (sulfato de cobre à 0,006mg/ml), sendo realizados dois tempos de exposição: 24 e 48 horas. Os bulbos
foram enraizados em água destilada até apresentarem raízes de aproximadamente 1 cm, sendo posteriormente
transferidos para os diferentes tratamentos, os bulbos do controle negativo permaneceram na água destilada até o
fim do experimento. Após este tempo de exposição, as raízes foram coletas, fixadas em metanol/acético 3:1 por
24h e coradas com orceína acética 2%. Para a avaliação da citotoxicidade comparou-se o total de células em
divisão dos tratamentos com as dos controles. Para a avaliação de aberrações cromossômicas, foram comparadas
as quantidades de alterações encontradas nos tratamentos com as aberrações observadas nos controles. As
aberrações mais frequentes foram: anáfases e metáfases com pontes e com cromossomos perdidos ou atrasados.
Para a análise estatística foi utilizado o programa Statistica 8.0, onde foi realizado ANOVA unifatorial e Pós-teste
de Fisher LSD, em todos os testes foi considerado o nível de significância de 0,05. Os resultados da análise
citotóxica e de aberrações cromossômicas em células expostas por 24 horas mostraram que apenas as
concentrações de 540g/Le 720g/L foram citotóxicas e nenhuma das três mostrou-se mutagênica. Os resultados da
análise citotóxica e de aberrações cromossômicas em células expostas por 48 horas mostraram que todas as
concentrações foram citotóxicas e apenas a concentração de 540g/L mostrou-se mutagênica. A citotoxicidade e
mutagenicidade pode estar relacionado com os compostos ativos presentes no fruto. A partir dos resultados
obtidos, verifica-se a necessidade de cuidados à serem tomados no preparo e uso do suco de plantas medicinais.
APOIO
CNPq - UFPI
323
Mutagênese e Farmacogenômica
AVALIAÇÃO O PAPEL DAS VIAS NER E BER NA AGREGAÇÃO POLIGLUTAMÍNICA NO
MODELO TRANSGÊNICO DO CAENORHABDITIS ELEGANS PARA A DOENÇA DE HUNTINGTON
Marlon Barbosa Dantas de Carvalho1; Cesar Orlando MuÑoz Cadavid2; Lucymara Fassarela Agnez3; Riva de
Paula Oliveira3.
E-mail: [email protected]
(1)
Depto. Biologia Celular e Genética, UFRN; (2)Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, RENORBIO,
UFRN, RN; (3)Depto. Biologia Celular e Genética, UFRN e Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia,
RENORBIO, UFRN, RN
RESUMO
As doenças poli?glutamínicas (poliQ), como a Doença de Huntington (DH) e a atrofia muscular bulbo espinhal,
pertencem a uma categoria de desordens neurodegenerativas caracterizada pela presença de agregados e inclusões
corpusculares no sistema nervoso central originado a partir de proteínas contendo uma expansão anormal de
repetições de glutamina (Q). O aparecimento das primeiras manifestações das doenças poli?glutamínicas e a
severidade delas estão associadas diretamente com tamanho da expansão poliQ. O Caenorhabditis elegans é um
modelo vantajoso e único, com alto grau de conservação com os mamíferos, que permite que os mecanismos
genéticos da formação de agregados poliQ sejam facilmente investigados in vivo. A expressão de proteínas
PoliQn::YFP no C. elegans reproduz os aspectos da formação de agregados de maneira dependente do tamanho da
repetição e da idade como observado na DH. Tem sido demostrado que alterações nas vias de reparo de danos ao
DNA, principalmente via BER (Reparo por Excisão de Bases) e NER (Reparo por Excisão de Nucleotídeos) tem
sido associados a doenças neurodegenerativas como Mal Alzheimer (MA), doença de Parkinson (DP) e doença de
Huntington (DH). O objetivo deste trabalho é avaliar o papel dos sistema de reparo NER e BER na formação de
agregados poliglutamínicos (PoliQ) nos modelos transgênicos de C. elegans. Para isto, as cepas que superexpressam PoliQ35::YFP e PoliQ40::YFP no músculo foram submetidas ao RNA de interferência (RNAi) para os
genes csb-1 e xpa-1 da via NER e para o gene exo-3 da via BER. Como resultado, observamos que o knockdown
dos genes csb-1 e exo-3 provocou o aumento do número médio de agregados nos animais adultos de 3 dias da cepa
PoliQ35::YFP. Já para a cepa PoliQ40::YFP o knockdown dos três genes aumentou o número médio de agregados
dos animais adultos de 2 dias. Estes dados sugerem que as vias de reparo NER e BER contribuem para a inibição
da agregação poliglutamínica no C. elegans.
APOIO
CNPq
324
Mutagênese e Farmacogenômica
BIOENSAIO COM ALLIUM CEPA L. SUGERE EFEITO PROTETOR DO EXTRATO ETANÓLICO DE
AMBURANA CEARENSIS FRENTE À AÇÃO GENOTÓXICA DO TWEEN20.
Graziela Laís Maia Carvalho dos Santos1; Ilka Fernanda Mendes Pereira2; Cinthia Silva Santos1; Laysla dos
Santos Motta1; Draulio Costa Silva1; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Vale do São Francisco; (2)Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Amburana cearensis (Fabaceae; umburana de cheiro) apresenta efeitos farmacológicos como anti-inflamatório e
antinociceptivo, sendo utilizada para problemas respiratórios no semiárido nordestino. Considerando que seus
efeitos adversos ainda não foram avaliados, o presente trabalho investigou a toxicidade e citogenotoxicidade do
extrato etanólico das vagens de A. cearensis mediante o bioensaio com Allium cepa L. Para isto, sementes de
cebola cultivar 'Vale Ouro' IPA-11 foram germinadas em placas de Petri (30 sementes/placa; quatro
placas/tratamento), sendo expostas às diferentes concentrações do extrato (2,0, 1,5, 1,0 e 0,5 mg/mL), ao Tween20
0,2% (Controle Solvente), à água ultrapura (Controle Negativo), bem como ao MMS (metil metano-sulfonato,
4x10-4 Mv) e ao Herbicida Trifluralina (0,84 ppm de princípio ativo) (Controles Positivos). As raízes germinadas
foram coletadas, medidas e fixadas em Carnoy. Para preparação das lâminas, as raízes foram lavadas, hidrolisadas
em HCL 1N a 60 ºC, coradas com reativo de Schiff e carmim acético 2%. Foram confeccionadas 10
lâminas/tratamento, onde 500 células foram analisadas, totalizando 5000 células/tratamento. O Índice de
Germinação (IG), a Variação do Comprimento Médio das Raízes (VCMR), Índice Mitótico (IM) e Índice de
Alterações Cromossômicas (IAC) foram avaliados estatisticamente pelo teste de Kruskal-Wallis, seguido de um
teste a posteriori de Tukey (p<0,05). A redução dos IGs e das VCMRs, bem como a estimativa da fitotoxicidade
(IGC) sugeriram uma ação tóxica para as concentrações do extrato em comparação à água. Em relação ao IM e
IAC, não foram visualizadas ações citogenotóxicas para as concentrações testadas, com exceção de 0,5 mg/mL, a
qual evidenciou o menor IM (18,09) entre os tratamentos, ressaltando uma ação citotóxica. Entretanto, os testes
indicaram que o Tween20 0,2% induziu a diminuição do IG (44,16%) e VCMR (0,59 cm), sugerindo atividade
tóxica sobre as células de A. cepa, levantando-se a hipótese que a toxicidade das concentrações do extrato seja
decorrente da ação do solvente. Paralelamente, um potencial tóxico foi notado pelo IAC (0,70) para o solvente em
comparação a água (0,46); entretanto, as concentrações testadas do extrato apresentaram os menores IAC, sendo
os valores mais baixos observados para a concentração 2,0 mg/mL. Tal resultado sugere que o extrato de A.
cearensis apresenta um efeito protetor contra o potencial genotóxico do Tween20, fato que necessita ser melhor
investigado.
APOIO
CNPq, Ministério da Integração Nacional, UNIVASF
325
Mutagênese e Farmacogenômica
CITOTOXIC AND MUTAGENIC EVALUATION OF PYRIPROXYFEN, A NOVEL LARVICIDE USED
TO AEDES AEGIPTY CONTROL
Ataíde de Macedo Vieira Lima1; Lígia Ferreira Teles1; Larissa de Sousa Soares1; Victor Alves de Oliveira1;
Felipe Cavalcanti Carneiro da Silva1; Ana Paula Peron1; Leonardo Henrique Guedes de Morais Lima1; João
Marcelo de Castro e Sousa1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Piaui
RESUMO
Recently it was released a new larvicide called Pyriproxyfen , which is used in water tanks against Aedes aegipty.
Because of the microcephaly outbreak occurred in various regions of Brazil, it was raised the hypothesis that the
indiscriminate use of the larvicide could be associated with microcephaly, regardless the Zika virus. Given the lack
of studies showing the risks of using Pyriproxyfen for the human population as well as its genotoxic effects, our
study aimed to evaluated the cytotoxic and mutagenic potential of pyriproxyfen through the Allium Cepa test
system. we used a concentration of 10mg/ml (recommended concentration), and two additional concentrations of
5mg/ml and 0.5mg/ml. They were evaluated in three different exposure times (24, 48 and 72hours).Using two
controls: negative control - NC (distilled water) and positive-PC (cooper sulfate 0.0006mg/ml). The results
showed that the concentrations of 0.5 and 10mg/ml were cytotoxic in 48 and 72h, and the concentration 5mg/ml in
24 and 72h all compared in relation to NC. The concentration 5mg/ml and 10mg/ml were statistically equivalent to
CP in 03 TE, showing the high cytotoxic effect of these concentrations. For DNA damage, the concentration 0.5
mg / ml proved to be mutagenic in 72h, 5 mg/ml were mutagenic in 48h and the 10mg/ml was mutagenic in 24 and
48h all compared in relation to NC.None of the evaluated concentrations showed mutagenic effect to PC.
Larvicides contribute to economic growth and pest control, but also are responsible for many cases of poisoning
and genetic diseases in humans, such as cancer. The Pyriproxyfen caused mitotic cycle inhibitions, and genetic
instability through DNA breaks, losses and chromosomal delays which may favor the emergence of cancer in
humans (health workers, farmers and the general population). Therefore, it is concluded that even at low and
permitted concentrations, pyriproxyfen, is able to induce DNA damage, enhancing the importance of constant
evaluation through toxicological and genetic studies of new efficient larvicides potentially harmfull to humans.
Nevertheless, further studies are needed to elucidate the risk of birth deffects of Pyriproxyfen in animal systems,
such as mice.
326
Mutagênese e Farmacogenômica
CITOTOXICIDADE, GENOTOXICIDADE E MUTAGENICIDADE DE CLOROFILINA CUPRICA DE
SÓDIO [(CHL-CU(II)NA] EM ALLIUM CEPA
Márcia Ramos Jorge1; Maithon Mareco Rocha1; Bruno do Amaral Crispim1; Fabiane Silva Ferreira2; Alexeia
Barufatti Grisolia3; Anderson Rodrigues Lima Caires4; Cynthia Suzyhelen Caires4; Isaías Cabrini5; Eduardo José
de Arruda1.
E-mail: [email protected]
(1)
Faculdade de Ciências Exatas e Tecnologias, UFGD. Dourados-MS, Brasil. (2)Programa de Pós Graduação em
Recursos Naturais, UEMS. Dourados-MS, Brasil.; (3)Faculdade de Ciências Biológicas e Ambientais, UFGD.
Dourados-MS, Brasil. (4)Instituto de Física - Grupo de Óptica e Fotônica - UFMS - Campo Grande-MS, Brasil.
(5)
Instituto de Biologia, UNICAMP, Campinas-SP, Brasil.
RESUMO
O uso indiscriminado de inseticidas sintéticos/convencionais contribui para o aparecimento de organismos
resistentes, com sérios impactos na saúde pública. O controle fotodinâmico é uma estratégia emergente para
aplicação antimicrobiana e inseticida por produção de espécies radicais de oxigênio (EROs) "in situ", por interação
entre um fotossensibilizador FS) e irradiação solar e artificial. A clorofilina cúprica de sódio, [Chl-Cu(II)Na], é
uma molécula derivada da clorofila por modificações químicas e complexação com Cu(II), solúvel em água,
utilizada extensamente como corante/aditivo alimentar e que possui comprovado efeito antioxidante, anticarcinogênico e radioprotetor. O seu potencial fotossensibilizador tem sido extensamente estudado para
fotoinativação de bactérias gram-positivas e gram-negativas e até para o controle de larvas e adultos de Aedes
aegypti. Entretanto, é necessário garantir que o produto não apresente efeitos adversos, como citotoxicidade,
genotoxicidade e mutagenicidade. O objetivo do estudo foi avaliar a atividade biológica da [Chl-Cu(II)Na] em
diferentes concentrações (50, 100 e 200 mg L-1), utilizando o teste de Allium cepa. As sementes foram expostas
aos tratamentos por 96h a 22 ± 2°C. Os danos genéticos foram avaliados pelos índices mitótico (IM), alterações
cromossômicas (IAC) e de micronúcleos (IMT). Os resultados da análise genética indicam que não existem
diferenças estatísticas entre as concentrações, para todos os parâmetros, e para as concentrações em relação ao
controle negativo (CN), para IAC e IMT. No IM, verificou-se diferença significativa para as concentrações
testadas em relação ao CN (P < 0.05), tendo a clorofilina potencializado a divisão celular. Deste modo, o bioensaio
indica que a clorofilina sódica cúprica não apresenta potencial citotóxico, genotóxico ou mutagênico em A. cepa.
No entanto, outros testes sem e com irradiação serão realizados para entendimento do comportamento da [ChlCu(II)Na], de forma a usufruir dos seus benefícios sem prejuízos para o ambiente e saúde pública.
APOIO
CNPq, CAPES/PROCAD 2013, FUNDECT, UNICAMP, UFMS e UFGD.
327
Mutagênese e Farmacogenômica
CROMOSSOMO DICÊNTRICO NA AVALIAÇÃO DE DOSE ABSORVIDA
Mariana Esposito Mendes1; Julyanne Conceição de Goes Mendonça2; Fabiana Farias de Lima3; Neide Santos4.
E-mail: [email protected]
(1)
Estudante de Doutorado do PPG Genética / CB / UFPE; (2)Estudante de Mestrado do PPG em Saúde Humana e
Meio Ambiente / CAV / UFPE; (3)Centro Regional de Ciências Nucleares do Nordeste (CRCN-NE/CNEN-PE) /
Laboratório de Dosimetria Biológica; (4)4Universidade Federal de Pernambuco / Departamento de Genética
(CB/UFPE)
RESUMO
O cromossomo dicêntrico é uma das alterações cromossômicas utilizadas como biomarcador na dosimetria
biológica, auxiliando na estimativa de dose absorvida pelo organismo humano após exposição à radiação
ionizante. A média de cromossomos dicêntricos tem uma relação definida com o valor de dose absorvida, chamada
de dose-resposta, sendo representada por curvas de calibração dose-resposta. Estudo sobre a exposição à radiação
com feixes de taxas de dose baixas torna-se importante, pois os cenários acidentais de exposição envolvem
irradiações que diferem em intervalo de tempo, em distâncias e, portanto, simulam diferentes taxas de dose. O
objetivo deste trabalho foi construir a curva de calibração local, obtida no CNEN/CRCN-NE, e comparar os
resultados com diferentes curvas de calibração construídas com feixes de taxas de dose baixas. Testes estatísticos
como ANOVA e Turkey foram realizados nessa comparação. Cada ponto da curva de calibração é representado
por uma dose absorvida, e para cada dose, foi utilizado o teste u de Papworth para avaliar sua conformidade com a
distribuição de Poisson, modelo para esse tipo de radiação. A curva de calibração local apresentou-se de acordo
com a literatura. No estudo da comparação foi observado que quanto menor a taxa de dose há redução na média de
dicêntricos, pois ao diminuir a taxa de dose permite-se que o sistema de reparo celular atue, reduzindo a
probabilidade de encontrar os dicêntricos. Outra diferença encontrada foi o tempo de cultura dos linfócitos para a
análise de dicêntricos em metáfase, sendo necessário cumprir 48h de cultura, pois estima-se que com esse tempo
90% dos linfócitos estarão nessa fase. Logo, as curvas com o tempo abaixo disso reduziram ainda mais as chances
de encontrar os dicêntricos em suas células. Contudo, mesmo com essas diferenças de médias de dicêntrico, todas
as curvas de calibração produzidas estimam doses absorvidas similares, ou seja, sem diferenças estatísticas
confirmadas pelos testes. Assim, propomos que se um laboratório conhece a taxa de dose envolvida na exposição à
radiação e se o background de dicêntrico da região for espontâneo, a curva de calibração local e as demais poderão
ser usadas por qualquer outro laboratório, a fim de reduzir os recursos financeiros e tempo na construção de novas
curvas de calibração para esse tipo de radiação e com essas taxas de doses.
APOIO
CNPq, CAPES
328
Mutagênese e Farmacogenômica
DANOS GENOTÓXICOS E MUTAGÊNICOS EM OREOCHROMIS NILOTICUS EXPOSTOS A ÁGUAS
DO RIO MUNIM, MA, BRASIL
Muryllo Santos Castro1; Luis Fernando Carvalho Costa1; Ricardo Luvizotto Santos1; Marta Regina de Castro
Belfort1; Vanessa Ribeiro Moreira1; Patrícia Valéria Castelo Branco Araujo1; Vera Lucia Maciel Silva2; Silma
Regina Ferreira Pereira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Maranhão; (2)Universidade Estadual do Maranhão
RESUMO
Os ecossistemas aquáticos têm sido alvo de várias substâncias que podem ser consideradas genotóxicas e
mutagênicas, desencadeando processos nocivos aos organismos aquáticos. O uso de programas de
biomonitoramento com organismos bioindicadores e testes citogenéticos têm sido utilizados para avaliar a
qualidade ambiental das águas. Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial genotóxico e mutagênico de
amostras de água do rio Munim através dos testes do cometa e do micronúcleo em eritrócitos de peixes da
espécie Oreochromis niloticus. Os bioensaios foram montados com quatro amostras, duas contendo água do rio
Munim (das cidades de Chapadinha e Cachoeira Grande, MA) uma para controle negativo e uma para controle
positivo (ciclofosfamida 50 mg/kg). Os resultados do teste do cometa mostraram que o DNA dos peixes expostos à
água do rio Munim sofreram danos em ambos os pontos analisados. Da mesma forma, os dados do teste de
micronúcleo também indicaram que as amostras de águas do rio Munim foram capazes de causar mutações no
DNA de O. niloticus. As evidências apontam que as amostras de água de ambos os pontos de coleta se mostraram
genotóxicas e mutagênicas para o organismo estudado. O rio Munim tem sido alvo de várias atividades que podem
causar problemas em seu curso, como a proximidade de localidades povoadas, a implementação de projetos
agropecuários e a urbanização de suas margens. Isso vem acarretando sérios problemas ambientais, como o
aumento de compostos xenobióticos como os agrotóxicos e o despejo de esgotos domésticos sendo despejados no
leito do rio, que podem ocasionar danos no DNA dos organismos locais. A maioria dos moradores que residem
próximo ao rio Munim utilizam agrotóxicos para combater as pragas que ameaçam suas plantações. Outro possível
agente que pode estar provocando tais efeitos na água do Munim é o esgoto doméstico. Nas cidades onde foram
coletadas as amostras de água, não há um programa de saneamento básico, problema que acomete todo o Estado
do Maranhão, que possui apenas 11,6% de domicilio com redes de esgoto e 15% com fossas sépticas, resultando
em 73% da população maranhense utilizando meios inadequados para se desfazer do esgoto gerado, que pode estar
sendo lançado no rio. Concluímos que nos pontos amostrados existem substâncias capazes de gerar danos e
mutações no DNA de peixes, que podem estar afetando a biota local.
329
Mutagênese e Farmacogenômica
EFEITO ANTIMUTAGÊNICO DO ÁCIDO ASCÓRBICO SOBRE DANOS AO DNA CAUSADOS PELO
ANTILEISHMANIAL GLUCANTIME®
Raissa Lacerda Pontes1; Luis Claudio de Jesus Lima1; Vanessa Ribeiro Moreira1; Patricia Valeria Castelo
Branco Araújo1; Marta Regina de Castro Belfort1; Silma Regina Ferreira Pereira1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFMA
RESUMO
As leishmanioses são doenças infecciosas, não contagiosas, causadas por protozoários do gênero Leishmania. O
seu arsenal terapêutico é restrito ao uso do Glucantime® (antimoniato de meglumina), mesmo sendo reconhecidos
seus efeitos tóxicos, inclusive mutagênico, conforme descrito por nosso grupo. O mecanismo pelo qual este
fármaco causa danos ao DNA não são bem compreendidos, mas há evidências que seu efeito genotóxico é baseado
na geração de espécies reativas de oxigênio (ROS). Por outro lado, sabe-se que o ácido ascórbico possui inúmeros
benefícios que são atribuídos ao seu efeito antioxidante e antimutagênico. Assim, este trabalho se propôs a avaliar
se o ácido ascórbico é capaz de reduzir os danos ao DNA causados pelo Glucantime®, em um sistema in vivo, em
condições de pré-tratamento (PRE), pós-tratamento (POS) e tratamento simultâneo (S1, S2, S3). Assim, 45
camundongos da linhagem Swiss foram divididos em 9 grupos experimentais, sendo eles: controle negativo (CN:
água destilada), controle positivo (CP: ciclofosfamida 50mg/kg), Glucantime® (GLU: 810mg/kg), ácido ascórbico
(AA: 60mg/kg), S1 (AA 120mg/kg+GLU 810mg/kg), S2 (AA 60mg/kg+GLU 810mg/kg) e S3 (AA
30mg/kg+GLU 810mg/kg), pré-tratamento (AA 60mg/kg 24 horas antes do GLU 810mg/kg) e pós-tratamento
(AA 60mg/kg 24 horas depois do GLU 810mg/kg). Todos os tratamentos foram realizados via intraperitoneal e as
células foram colhidas 24 horas (tratamentos simultâneos) e 48 horas (pré e pós-tratamento), após o primeiro
tratamento. Os danos genéticos foram avaliados pelo Ensaio do Cometa e Teste do Micronúcleo, e os dados foram
analisados por ANOVA, seguido pelo Teste de Tukey, sendo consideradas significativas as diferenças com
p<0.05. Os resultados deste trabalho mostraram que o ácido ascórbico reduz lesões genômicas e frequência de
células micronucleadas induzidas pelo Glucantime® (14.4±1.43) em todas as doses do tratamento simultâneo e no
pós-tratamento (8.1±0.96), sendo que a dose de 60mg/kg no tratamento simultâneo (6.4±1.19) apresentou maior
efeito antimutagênico, reduzindo para um nível basal de células micronucleadas observado no controle negativo
(3.5±0.50). A observação de que o ácido ascórbico é capaz de reduzir os danos genéticos causados pelo
Glucantime® reforça as evidências que a geração de ROS é um dos mecanismos de ação da droga, bem como abre
perspectivas para a elaboração de novas abordagens que visem a modulação dos efeitos colaterais do
medicamento, sem afetar a sua ação terapêutica.
APOIO
FAPEMA e CNPq.
330
Mutagênese e Farmacogenômica
EFEITO ANTIPROLIFERATIVO E GENOTÓXICO DE ADITIVOS ALIMENTARES DE AROMA E
SABOR SINTÉTICOS, IDÊNTICOS AO NATURAL, DE LARANJA E MARACUJÁ.
Ila Monize Sousa Sales1; Fabelina Karollyne Silva dos Santos2; Maria Eduarda de Sousa e Silva2; Ana Paula
Peron3.
E-mail: [email protected]
(1)
Acadêmica do Curso de Ciências Biológicas, UFPI, Picos, PI; (2)Discente do Departamento de Ciências
Biológicas, UFPI, Picos, PI; (3)Docente Programa de Pós-graduação em Genética e Melhoramento, UFPI,
Teresina, PI
RESUMO
Os aromatizantes são aditivos alimentares com propriedades de conferirem e/ou reforçarem o aroma e o sabor dos
alimentos industrializados. Em função de sua relevância tecnológica para a indústria alimentícia, tais aditivos
devem ser constantemente avaliados quanto aos seus potencias toxicológicos. Dessa forma, objetivou-se neste
trabalho analisar o potencial citotóxico e genotóxico de aromatizantes alimentares sintéticos líquidos, idênticos aos
naturais, de Maracujá e Laranja. Esta avaliação foi realizada por meio das células meristemáticas de raízes de
Allium cepa L., nos tempos de exposição de 24 e 48 horas e nas doses de 0,2; 0,4 e 0,6 ml. As raízes foram fixadas
em solução de Carnoy, hidrolisadas em ácido clorídrico e coradas com orceína acética. Analisou-se, em
microscópio óptico em aumento de 40x, um total de 5.000 células para o controle e tempo de exposição de cada
dose. Os resultados da análise foram submetidos ao teste estatístico Qui-quadrado a 5%. A partir dos resultados foi
possível verificar que a dose de 0,2 ml de Maracujá no tempo de exposição 48 horas, e as de 0,4 e 0,6 ml do
aromatizante de Maracujá, bem como as três doses de Laranja, nos dois tempos de análises estabelecidos, foram
citotóxicas as células de meristema de raízes. Ainda, as doses 0,4 e 0,6 ml do aditivo de Maracujá promoveram
distúrbios de fuso mitótico em frequência significativa ao tecido analisado, demonstrando expressiva atividade
genotóxicas. Portanto, nas condições analisadas, os aromatizantes de Laranja e Maracujá alteraram
significativamente o funcionamento do ciclo celular das células meristemáticas de raízes de A. cepa
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico- CNPq
331
Mutagênese e Farmacogenômica
EFEITO DA GENOTOXICIDADE EM PHRYNOPS GEOFFROANUS (TESTUDINAE, CHELIDAE) A
PARTIR DA ANÁLISE DAS ALTERAÇÕES CROMOSSÔMICAS ESTRUTURAIS
João Carlos Farias Santana da Silva1; Paulo Mateus Martins Sobrinho2; Marcos da Silveira Regueira Neto3;
Geraldo Jorge Barbosa de Moura2; Vilma Loreto da Silva1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Genética e Citogenética Animal e Humana, UFPE, Recife, PE; (2)Laboratório de Estudos
Herpetológicos e Paleoherpetológicos, UFRPE, Recife, PE; (3)Laboratório de Bioinformática e Biologia Evolutiva,
UFPE, Recife, PE
RESUMO
Os ambientes aquáticos são frequentemente expostos a contaminantes oriundos de efluentes, que muitas vezes
possuem capacidades citotóxicas, genotóxicas ou carcinogênicas. Para estudos de contaminação, quelônios podem
ser utilizados como bioindicadores tendo em vista seus atributos ecológicos. A espécie Phrynops
geoffroanus possui ampla distribuição na América do Sul, e é encontrada em rios e riachos poluídos, contudo
também está presente em ambientes preservados. O objetivo deste estudo foi analisar o cariótipo da espécie e
avaliar as possíveis alterações cromossômicas de P. geoffroanus coletados em ambiente impactado por ação
antrópica (Riacho do Cavouco, Campus UFPE) e comparar com animais coletados em um ambiente preservado
(Açude do Prata - Dois Irmãos, Recife - PE). Foram coletadas amostras sanguíneas de exemplares da espécie para
obtenção das metáfases mitóticas por meio da técnica de cultura de linfócitos. Do ponto de vista cromossômico os
machos apresentaram número diploide 2n=57, as fêmeas possuem 2n=58, no entanto, no presente estudo não foi
determinado os cromossomos sexuais. Para avaliar a ocorrência de alterações cromossômicas foram realizadas
análises de 100 metáfases de dois espécimes de cada ambiente. No ambiente impactado, foram encontradas 33
células com alterações cromossômica, sabendo que algumas células apresentaram mais de uma alteração foram
quantificadas 29 quebras cromatídicas, 7 gaps cromatídicos e 2 quebras cromossômicas. Por sua vez, o ambiente
preservado apresentou 4 células com alterações sendo todas do tipo quebras cromatídicas. A maior parte das
alterações ocorreram em cromossomos acrocêntricos (47,6%) seguidos de metacêntricos (31%) e submetacêntricos
(21,4%). Os dados foram submetidos ao teste exato de Fisher que apresentou p<0,0001 e reforçado com o teste
qui-quadrado (25,05; α=5%) comprovando o aumento significativo no número de células com alterações. Quando
avaliado o grau de dano nos animais expostos ao ambiente poluído, em comparação com os animais coletados no
riacho não poluído, é evidente que houve maior quantidade e complexidade dos danos.
APOIO
CNPq
332
Mutagênese e Farmacogenômica
ESTUDO DA FREQUÊNCIA DE ALTERAÇÕES CROMOSSÔMICAS INSTÁVEIS EM LINFÓCITOS
DEVIDO À RADIAÇÃO IONIZANTE
Laís Melo da Silva1; Julyanne Conceição Góes de Mendonça2; Mariana Esposito Mendes3; Aida Mayra Guedes
de Andrade1; Suy Hwang4; Fabiana Farias de Lima4.
E-mail: [email protected]
(1)
graduanda em biomedicina (CB/UFPE); (2)mestranda em Programa de Pós graduação em saúde e Meio
Ambiente (CAV/UFPE); (3)doutaranda em Departamento de Genética (CB/UFPE); (4)Centro Regional de Ciências
Nucleares do Nordeste (CRCN-NE/CNEN)
RESUMO
Com o crescente uso dos raios X no meio médico e industrial e a utilização de doses mais elevadas, surge a
preocupação sobre os riscos de exposição excessiva a radiação ionizante. A dosimetria citogenética é uma técnica
biológica muito sensível, que estima a dose absorvida em indivíduos expostos à radiação ionizante por meio da
observação das frequências das alterações cromossômicas encontradas em sangue periférico humano.Esse trabalho
visa analisar as frequências das alterações cromossômicas instáveis induzidas por raios X em duas diferentes doses
absorvidas. Foram coletadas amostras com 10ml de sangue periférico em seringas estéreis descartáveis revestidas
com heparina de um doador saudável e não fumante. As amostras foram aliquotadas a fim de serem destinadas ao
controle (sem irradiação) e serem irradiadas com feixes de raios-X de 250 Kvp. Após o encaminhamento para a
cultura de linfócitos, foram obtidas as preparações citológicas usadas na confecção das lâminas que, foram coradas
com Giemsa para posterior contagem das alterações cromossômicas em microscópios ópticos por no mínimo dois
observadores habilitados. Foram lidas ao menos 1000 metáfases viáveis para cada dose absorvida e para o cálculo
do nível de significância foi utilizado o teste qui-quadrado, considerando diferenças relevantes entre as frequências
quando o valor de p<0,05. Os resultados mostraram que houve diferença significativa das frequências de
cromossomos dicêntricos, a saber, de 0,026 a 0,75Gy para 0,078 a 1,0Gy, entretanto, não houve diferença
estatisticamente significante entre as frequências dos fragmentos acêntricos sendo observada de 0,057 a 0,75Gy
para 0,069 a 1,0Gy e como também cromossomos em anel indo de 0,0069 a 0,75Gy para 0,0060 a 1,0Gy.O
número baixo de anéis encontrados é esperado e justificado, tendo em vista que, em linfócitos humanos irradiados
com radiação de baixa LET,como a usada no trabalho em questão, sua aparição é considerada rara em relação aos
dicêntricos. Quanto aos fragmentos acêntricos, sua aparição é inespecífica e sofre influencia de outros
agentes,sendo explicada assim sua quantidade randômica em relação aos dicêntricos por dose,podendo ou não ter
uma freqüência maior. Portanto, os resultados apontam que dicêntricos são os biomarcadores mais confiáveis na
estimativa de dose após exposição à radiação-X. Esses dois pontos irão compor a curva de calibração doseresposta que está sendo construída para o Laboratório de Dosimetria Biológica do CRCN-NE/CNEN.
333
Mutagênese e Farmacogenômica
ESTUDO DO EFEITO GENOTÓXICO E MUTAGÊNICO DO COMPOSTO LIQUÊNICO ÁCIDO
DIVARICÁTICO INVESTIGADO POR MEIO DO TESTE SMART E ENSAIO COMETA, EM
CÉLULAS SOMÁTICAS DE DROSOPHILA MELANOGASTER
Jessica Celerino dos Santos1; Érima Maria de Amorim1; André Severino da Silva1; Anadeje Celerino dos Santos
Silva1; Claudia Rohde1; Emerson Peter da Silva Falcão1.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO - CENTRO ACADÊMICO DE VITÓRIA DE SANTO
ANTÃO - UFPE/CAV
RESUMO
Os liquens são originados a partir da associação simbiótica entre fungos e algas ou cianobactérias, sendo utilizados
há séculos na medicina popular devido às suas propriedades terapêuticas. Os metabólitos secundários liquênicos
apresentam diversas propriedades, como antinflamatória, antitumoral, antimicrobiana, dentre outras, entretanto,
poucos trabalhos descrevem o potencial mutagênico e/ou genotóxico destes compostos. O ácido divaricático é um
fenol liquênico ainda pouco estudado quanto ao seu potencial biotecnológico, entretanto apresenta atividade
protetora contra radiação UV. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito tóxico-genético ácido divaricático
através do teste SMART e Ensaio Cometa em células somáticas de Drosophila melanogaster. O Teste de Mutação
e Recombinação Somática (SMART), está baseado na identificação dos fenótipos mutantes flr³ e/ou mwh que se
expressam nos pelos das asas de indivíduos adultos de D. melanogaster. E para o ensaio cometa foram coletados
hemócitos de larvas de D. melanogaster da linhagem Oregon-R. O ácido divaricático foi isolado a partir do extrato
etéreo do liquen Ramalina aspera. A pureza do composto foi avaliada através de cromatografia em camada
delgada e líquida de alta eficiência. Larvas D. melanogaster resultantes do cruzamento padrão (fêmeas flr³ e
machos mwh) foram submetidas ao composto nas concentrações: 0,32, 0,64, 1,26, 2,53, 5,05 e 10,11 mg/mL, no
teste SMART. E para o ensaio cometa, larvas da linhagem Oregon-R, foram submetidas ao ácido divaricático por
24 horas nas concentrações 0,32, 0,64, 1,26, 2,53 mg/mL. Também foram estabelecidos um grupo controle
positivo (mitomicina C a 1mg/mL para o SMART e ciclofosfamida à 1mg/mL no Ensaio Cometa), e um controle
negativo (água destilada, tween80 e etanol) para ambos os experimentos. Os resultados do teste SMART avaliados
por meio do teste condicional binomial de Kastembaum e Bowman indicaram que houve efeito tóxico apenas nas
concentrações 5,05 e 10,11 mg/mL (com morte superior a 70% dos indivíduos tratados) e ausência de efeito
mutagênico nas demais concentrações. E para o ensaio cometa foram utilizados os testes: Análise de Variância
(ANOVA) e o Bonferroni, os quais mostraram que não houve diferença estatisticamente significativa em nenhuma
das concentrações, indicando que nas condições testadas o composto não apresentou ação genotóxica. O conjunto
dos resultados atesta para a segurança do uso do Ácido divaricático, na composição de novos fármacos.
APOIO
FACEPE, CNPq, CAPES, PROPESQ-UFPE.
334
Mutagênese e Farmacogenômica
GENOTOXICIDADE E MUTAGENICIDADE DO ANTILEISHMANIAL GLUCANTIME ® EM
CAMUNDONGOS BALB/C INFECTADOS COM LEISHMANIA INFANTUM CHAGASI
Raissa Lacerda Pontes1; Vanessa Ribeiro Moreira1; Luis Claudio Lima de Jesus1; Rossy Eric Pereira Soares1;
Bruno Araujo Serra Pinto1; Luis Douglas Miranda Silva1; Antonio Marcus de Andrade Paes1; Silma Regina
Ferreira Pereira1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFMA
RESUMO
Leishmaniose é uma patologia infecciosa e crônica não contagiosa, altamente negligenciada, ocasionada por
protozoários parasitas do gênero Leishmania. O arsenal terapêutico contra a leishmaniose é baseado
principalmente nos antimoniais (antimoniato de meglumina-Glucantime® e o estibogluconato de sódioPentostam®). Glucantime® é o fármaco de primeira escolha recomendada pela Organização Mundial de Saúde e,
embora utilizado há mais de sete décadas, os mecanismos de ação dos antimoniais pentavalentes permanecem
obscuros. Nesse sentido, investigamos o mecanismo pelo qual o Glucantime® causa danos ao DNA
em camundongos BALB/c infectados com Leishmania infatum chagasi e tratados com Glucantime®. Os animais
foram divididos em quatro grupos, a saber: animais não infectados que receberam solução salina (CN); G1:
animais infectados sem tratamento com Glucantime®; G2: animais não infectados tratados com Glucantime®
durante 20 dias (20mg/kg/dia) e G3: animais infectados e tratados com Glucantime® durante 20 dias
(20mg/kg/dia) que foram avaliados quanto à frequência de danos genéticos pelo ensaio do cometa convencional
bem como pela sua versão enzimática (Formamidopirimidina-DNA-glicosilase- Fpg e Endonuclease III - ENDO
III), por meio da qual é possível avaliar a ocorrência de danos genéticos por oxidação das bases nitrogenadas do
DNA e a avaliação mutagênica foi realizada pelo ensaio do micronúcleo. Para análise estatística utilizou-se
ANOVA seguido de Tukey para os dados com distribuição normal e para os dados não paramétricos, Kruskal
Wallis seguido de Student New Keuls. Os dados deste trabalho mostraram que os grupos G1 (1.08±0.21), G2
(1.31±0.36) e G3 (0.84±0.17) apresentaram escores de danos maiores que o CN (0.35±0.08) revelando que tanto a
infecção quanto Glucantime® causam lesões genômicas. Observou-se que em todos os grupos houve diferença
significativa ao comparar-se os escores de danos obtidos pelo teste do cometa convencional e enzimático,
sugerindo que a infecção, assim como o Glucantime®, causam lesões genômicas por oxidação de bases
nitrogenadas do DNA. Além disso, os grupos tratados com Glucantime® apresentaram aumento significativo na
freqüência de micronúcleos em relação ao controle negativo, evidenciando que este fármaco é capaz de induzir
mutações. Esses dados sugerem que o antimonial Glucantime® causa danos ao DNA por oxidação de suas bases.
APOIO
FAPEMA, CNPq e CAPES
335
Mutagênese e Farmacogenômica
GUARANA (PAULLINIA CUPANA) EXTRACT PROTECTS CAENORHABDITIS ELEGANS MODELS
FOR HUNTINGTON AND ALZHEIMER DISEASES THROUGH ACTIVATION OF ANTIOXIDANT
AND PROTEIN DEGRADATION PATHWAYS
Patrícia Ferreira Boasquivis1; Giovana Melo Martins Silva2; Renata Cristina Resende3; Riva de Paula Oliveira4.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, NUPEB, UFOP, MG; (2)Depto. Biologia Celular e Genética,
UFRN, RN; (3)Depto. de Biodiversidade, UFOP, MG; (4)Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, NUPEB,
UFOP, MG; Depto. Biologia Celular e Genética, UFRN, RN; Depto. de Biodiversidade, UFOP, MG; Brasil
RESUMO
Guarana (Paullinia cupana) is a Brazilian plant which has emerged as a key ingredient in various sports and
energy drinks because of its antioxidant property and several pharmacological activities on the central nervous
system. Composition analysis shows that guaraná contains epicatechin, procyanidins, and phenolic compounds
mainly caffeine. In vitro studies showed that the hydroalcoholic extract of guaraná (HEG) presents strong
antioxidant activity against DPPH (1, 1?-diphenyl -2-picryl-hydrazyl) radicals. Here we investigated the protective
effects of HEG in Caenorhabditis elegans models of Huntington and Alzheimer diseases. HEG decreased
polyglutamine protein (polyQ40) aggregation expressed in the muscle and reduced neurotoxicity polyQ150
expressed in ASH neurons. Also, HEG delayed b-amyloid (Ab) induced paralysis in the transgenic C. elegans
model which expresses human Ab1-42 in the muscle. Inactivation of skn-1 by RNAi blocked the protective effects
of EHG, indicating that transcription factor SKN-1, the ortholog of Nrf2 in mammals is involved in the
mechanism of EHG protection. HEG treatment increased C. elegans tolerance to heat shock independently of any
effect on C. elegans development and bacterial growth. Analysis with GFP reporter strains revealed that HEG
treatment increased the expression of heat shock protein hsp16.2::GFP and superoxide dismutase sod-3::GFP but
not glutathione-S transferase gst-4::GFP. To determine whether the increased thermotolerance and chaperonin
expression induced by HEG has an effect on protein homeostasis, we measured proteasome and lysosomal
activity. HEG increased proteasome degradation activity by 2-fold relative to the control. We also observed the
accumulation of autophagosomes marked by GFP::LGG-1 transgenic line. Taken together, these results suggest
that in C. elegans HEG alleviated polyglutamine protein aggregation and b-amyloid induced toxicity in part,
through up-regulation of heat shock protein, increased protein degradation and SKN-1 pathway.
APOIO
UFOP, CAPES, FAPEMIG e CNPq
336
Mutagênese e Farmacogenômica
INVESTIGAÇÃO DO POTENCIAL TÓXICO E CITOGENOTÓXICO DA ÁGUA AÇUDE
ENTREMONTES (BACIA DO RIO BRÍGIDA, ESTADO DE PERNAMBUCO) MEDIANTE O
BIOENSAIO COM ALLIUM CEPA L.
Laysla dos Santos Motta1; Ilka Fernanda Mendes Pereira2; Cinthia dos Santos Silva1; Draulio Costa da Silva1;
Paula Tereza da Silva3; Ana Christina Brasileiro Vidal2; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti1.
E-mail: [email protected]
(1)
CCBIO/UNIVASF; (2)Departamento de Genética/UFPE; (3)Embrapa Semiárido
RESUMO
O açude Entremontes (Parnamirim-PE), pertencente a bacia do rio Brígida, é o segundo maior reservatório hídrico
do Estado, sendo explorado como fonte de sobrevivência pela população de vários municípios do semiárido
nordestino. Dada às atividades de piscicultura e agricultura exercidas na região, o presente trabalho investigou o
potencial tóxico e citogenotóxico de amostras de água coletadas neste açude e dois afluentes, durante as estações
seca (ES; Janeiro/2015) e chuvosa (EC; Maio/2015), mediante o bioensaio Allium cepa L. e sua correlação com
parâmetros físicos e químicos. Amostras de água foram coletadas em três pontos de amostragem: PI (03791759125027 24L UTM), PII (0385931 - 9116125 24L UTM) e no próprio açude PIII (0400921- 9090789 24L UTM).
Variáveis hidroquímicas foram medidas in situ, enquanto que as concentrações de metais pesados em laboratório.
Sementes de A. cepa foram submetidas às amostras coletadas e aos controles negativo (CN; água ultrapura) e
positivo [CP; Trifluralina (0,84 ppm de princípio ativo)]. Após germinação, raízes foram medidas, fixadas em
Carnoy e utilizadas na preparação das lâminas seguindo método de Feulgen. Foram analisadas 5000
células/tratamento. Os resultados foram comparados ao CN mediante teste de Kruskal-Wallis seguido do teste de
Tukey (p<0,05). Em se tratando do comprimento médio das raízes (VCMR), índice mitótico (IM) e índice de
alterações cromossômicas (IAC), os resultados obtidos não mostraram diferenças significativas em comparação ao
CN. Entretanto, uma diminuição do VCMR foi notada para o PII (ES; 0,16 cm) e PI (EC; 0,18 cm), enquanto que
os PIII [(ES; 0,25 cm) e (EC; 0,23 cm)] e PII (EC; 0,25 cm) apresentaram uma maior VCMR frente ao CN (0,21
cm). Em relação à citotoxicidade, as amostras PI (EC; 19,32%), PII [(ES; 19,24%) e (EC; 18,24%)] e PIII (ES;
21,57%) apresentaram IM superiores ao CN (17,5%), enquanto que o PI (ES; 16,86%) mostrou uma diminuição
deste índice. Por sua vez, um potencial genotóxico foi notado para PI (0,92%) e PII (0,82%) durante a ES, em
comparação ao CN (0,74%). Assim, os dados sugerem um potencial tóxico, citotóxico e/ou genotóxico para as
amostras avaliadas, seja inibindo e/ou estimulando a VCMR, IM e IAC, respectivamente. Tal fato pode está
associado às concentrações elevadas de metais pesados encontrados nos pontos amostrados, a exemplo de Ni, Fe,
Cu e Mn, os quais podem interagir de forma sinérgica e/ou antagônica, induzindo as alterações encontradas no
presente estudo.
APOIO
Ministério da Integração Nacional, CEMAFAUNA e Univasf.
337
Mutagênese e Farmacogenômica
MUTAGENICIDADE EM CARAMUJOS DA ESPÉCIE LITTORARIA ANGULIFERA DO MANGUEZAL
CHICO SCIENCE
Santos, K.m.b1; Silva, K.e.m.2; Cantinha,r.s.3; França, E.j.3; Melo, A.m.m.a.4.
E-mail: [email protected]
(1)
Departamento de Biofísica e Radiobiologia, UFPE, Recife/PE; Serviço de Monitoração Ambiental, CRCN,
Recife/PE.; (2)Departamento de Biofísica e Radiobiologia, UFPE, Recife/PE. Serviço de Monitoração Ambiental,
CRCN, Recife/PE.; (3)Serviço de Monitoração Ambiental, CRCN, Recife/PE.; (4)Departamento de Biofísica e
Radiobiologia, UFPE, Recife/PE.
RESUMO
Os manguezais apresentam características ambientais distintas, formando um microclima específico para a
ocorrência de flora e fauna exclusiva, além de ser considerado um berçário para diversas espécies de aves e peixes.
Devido à urbanização, esse ambiente é submetido a grande pressão antrópica, principalmente se localizado
próximo a regiões metropolitanas. Em razão da ausência de informações na literatura sobre a resposta dessa
pressão antrópica em nível genético em espécies de manguezais urbanos em Pernambuco este estudo, por meio do
teste do micronúcleo visou analisar os hemócitos do gastrópode Littoraria angulifera do Manguezal Chico
Science, no Espaço Ciência, em Pernambuco. A metodologia para extração da hemolinfa foi otimizada para esse
trabalho nos quais os hemócitos foram depositados na lâmina de microscopia com EDTA e mantidos em câmara
escura por 30 min. Posteriormente fixada com Gluteraldeído por 10 min e o excesso de reagentes e hemolinfa
removido com água destilada. Os hemócitos após fixação foram corados com Giemsa a 10% durante 7 minutos e
as lâmina com o esfregaço deixadas na vertical para secar em temperatura ambiente à 25ºC. Para obtenção da
frequência de micronúcleos a hemolinfa de quatro animas foram preparadas separadamente e um total de 4.000
hemócitos analisados. A frequência média de micronúcleos observada para L. angulifera nesse trabalho foi 0,35%,
frequência cinco vezes maior que a observada em estudo realizado com indivíduos de B. glabrata criados em
laboratório (0,07%) denotando que a pressão ambiental sofrida pelo ambiente estaria induzindo a mutagenicidade
na espécie. Resultados de um estudo em um manguezal impactado do município de Juréia, São Paulo, também
observou-se frequência de micronúcleo de 0,37% no crustáceo de manguezal Ucides cordatus. Desse modo, há
indícios de que a pressão ambiental sofrida pelos animais está induzindo mutagenicidade.
APOIO
Fundação de Amparo a Ciência e Tecnologia de Pernambuco (FACEPE), Comissão Nacional de Energia Nuclear
(CNEN) e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento CIentífico e Tecnológico (CNPq).
338
Mutagênese e Farmacogenômica
O GENOTÓXICO ANTILEISHMANIAL MILTEFOSINE (IMPAVIDO®) REDUZ CARGA
PARASITÁRIA DE CAMUNDONGOS BALB/C INFECTADOS POR LEISHMANIA INFANTUM
CHAGASI
Patrícia Valéria Castelo Branco1; Raissa Lacerda Pontes1; Hugo José Alves1; Vera Lucia Maciel Silva2; Silma
Regina Ferreira Pereira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Maranhão; (2)Universidade Estadual do Maranhão
RESUMO
O miltefosine é um fármaco usado há mais de uma década para o tratamento de leishmanioses em países asiáticos.
É considerado eficaz, de baixa toxicidade e de maior facilidade à adesão ao tratamento por ser administrado por
via oral. Contudo, há carência de trabalhos que investiguem o efeito dessa droga antigenotóxica em animais
infectados com Leishmania infantum chagasi, espécie que acomete os casos de leishmaniose visceral nas
Américas. Assim, foram utilizados 15 camundongos Balb/c infectados na pata com 1 x 107de L. infantum chagasi
(MOM/BR/1970/BH46), distribuídos igualmente em 3 grupos: G1: tratamento com salina; G2: tratamento com
Impavido® na dose de 2,5mg/kg por 28 dias; e, G3: tratamento com Impavido® na dose de 5,0 mg/kg por 14 dias.
O grupo G2 foi tratado com a dose e o tempo recomendados pela Organização Mundial da Saúde, enquanto que o
grupo G3 foi tratado com o dobro da dose pela metade do tempo estabelecido. Todos os tratamentos foram
realizados por via oral. Após o fim dos tratamentos, os animais foram sacrificados e retirados o baço e o linfonodo
poplíteo (linfonodo que drenou a lesão da pata infectada) para determinação da carga parasitária por diluição
limitante. Para tanto, foram feitas duplicatas dos tecidos amostrados em placas de 96 poços, os quais foram
analisados sob microscópio invertido, após 7 e 14 dias, para verificar qual o último poço da diluição que continha
pelo menos um parasito ativo. Nossos resultados mostraram que o medicamento foi capaz de reduzir mais de 80%
da carga parasitária (p < 0,05) nos linfonodos, tanto em 7 quanto em 14 dias de análise, em ambos os grupos. Em
relação ao baço, foi observada redução apenas nos animais do grupo G3 (p < 0,05), tratados com a dose de 5,0
mg/kg, no qual foi observado 99% de redução, tanto na análise de 7 quanto de 14 dias. Dessa forma, concluímos
que o Impavido® é eficiente na redução da carga parasitária de L. infantum chagasi e que a administração de uma
dose maior de miltefosine por um menor tempo de tratamento foi mais eficaz, o que pode ser importante para
diminuição do surgimento de cepas resistentes ao miltefosine. Estudos posteriores são necessários para avaliar o
efeito genotóxico dessa dose mais eficaz, de modo que os malefícios dessa droga não venham a ser maior que os
benefícios para os pacientes.
APOIO
Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico do Maranhão Fundação CAPES
339
Mutagênese e Farmacogenômica
POTENCIAL ANTIMUTAGÊNICO DA TIAZOLIDINONA LPSF/SF-13 MEDIANTE SISTEMA-TESTE
ALLIUM CEPA L.
Erlânia Alves Siqueira1; Silvany de Souza Araújo2; Dominick Spindola Correia2; Marina Galdino da Rocha
Pitta2; Ivan da Rocha Pitta2; Maria do Carmo Alves de Lima2; Moacyr Jesus Barreto de Melo Rego2; Ana
Christina Brasileiro Vidal2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco; (2)Univesidade Federal de Pernambuco
RESUMO
As tiazolidinas são constituídas por anéis heterocíclicos e apresentam múltiplas aplicações biológicas, destacandose diferentes atividades farmacológicas. Dentre os derivados tiazolidínicos, a molécula (5Z)-5-(3-bromobenzylidene)-3-(4-nitro-benzyl)-thiazolidine-2,4-dione LPSF/SF-13 vem sendo estudada para aplicação na terapia
combinada contra o câncer, uma vez que essa molécula mostrou atividade anticâncer significativa em quatro
linhagens celulares (HepG2, NG97, Jukart e Raji). Dessa forma, o presente trabalho visou avaliar o potencial
antimutagênico da molécula LPSF/SF-13 mediante sistema-teste Allium cepa L (cebola). Para realização do
experimento, sementes de cebola foram germinadas em água ultrapura e pré-tratadas com as concentrações da
molécula (50, 100 e 150 µM) por 24 h. Em seguida, foram transferidas para o Metilmetano sulfonato (MMS, 4x104
M), substância de reconhecida ação mutagênica. Posteriormente, as raízes foram fixadas e coradas com reativo
de Schiff. Foi utilizado como controle positivo (CP) o MMS e como controle negativo (CN) a água ultrapura.
Cinco mil células meristemáticas de cebola foram analisadas por tratamento. A atividade citotóxica foi
significativa apenas na concentração de 150 µM, havendo aumento do índice mitótico (26,36%) quando
comparado ao CN (18,21%). Porém, nenhuma concentração apresentou potencial genotóxico ou mutagênico.
Deste modo, foi analisada a atividade antimutagênica, observando-se uma redução de dano [RD = (média CP média CN)/ (média CP - média CN) x 100] significativa para alterações cromossômicas causadas pelo MMS para
a concentração de 100 µM (redução de 35,48%). Portanto, podemos inferir que a molécula LPSF/SF-13 apresenta
potencial protetor contra agentes mutagênicos e mostra-se promissora para terapia preventiva contra o câncer,
especialmente na concentração de 100 µM.
APOIO
PIBITI/CNPq-UFPE; PROPESQ/ UFPE
340
Mutagênese e Farmacogenômica
POTENCIAL CITOGENOTÓXICO DO EXTRATO ETANÓLICO DAS FOLHAS DE POINCIANELLA
BRACTEOSA (TUL.) L.P. QUEIROZ EM CÉLULAS MERISTEMÁTICAS DE ALLIUM CEPA L.
Regina Maria Silva Sousa1; João Gabriel Silva Morais1; Francielle Alline Martins1; Pedro Marcos Almeida2.
E-mail: [email protected]
(1)
Centro de Ciências da Natureza (CCN), Universidade Estadual do Piauí, Laboratório de Genética, Teresina, PI. ;
(2)
Centro de Ciências da Saúde (CCS), Universidade Estadual do Piauí (UESPI/FACIME), Departamento de
Genética, Laboratório de Genética, Teresina, PI.
RESUMO
Poincianella bracteosa (Tul.) L.P. Queiroz, conhecida popularmente como ''catingueira'', é uma leguminosa da
família Fabaceae, endêmica do Nordeste brasileiro e usada popularmente no tratamento de verminoses, flatulência,
diarreia, bronquite e resfriado. No entanto, compostos químicos presentes nesta planta podem ser tóxicos,
genotóxicos e/ou carcinogênicos. Dentre os métodos disponíveis para análise, destaca-se o bioensaio Allium cepa
L, por apresentar baixo custo, confiabilidade e concordância com outros testes de genotoxicidade. Sendo assim, o
presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito citogenotóxico do extrato etanólico das folhas de P.
bracteosa em células meristemáticas de A. cepa. As folhas da P. bracteosa foram secas em estufa (45°C) durante
cinco dias. Posteriormente, as mesmas foram trituradas, submetidas à extração em álcool etílico e rotaevaporadas
até obtenção do extrato etanólico bruto das folhas. Em seguida, o pó do extrato foi diluído em dimetilsulfóxido
(DMSO) a 1% e colocado em banho ultrassônico durante 6 h. O material foi filtrado obtendo-se as quatro
concentrações (2, 4, 8 e 16 mg/mL). As raízes previamente germinadas foram expostas aos controles, negativo
(DMSO 1%) e positivo (Metilmetanosulfonato, 10 mg/mL) durante 24 h. As raízes foram fixadas em metanol:
ácido acético (3:1), hidrolisadas em HCl por 10 min., lavadas em água destilada e coradas com Reativo de Schiff,
por 2 h no escuro. Um total de 2000 células meristemáticas, 500 células por lâminas (total de 4 lâminas) foram
analisadas em microscópio óptico (400 x) para avaliar o efeito citotóxico (índice mitótico) e genotóxico (alterações
cromossômicas) do extrato das folhas. Os dados foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis seguido "a
posteriori" pelo teste de Student-Newman-Keuls (p < 0,05) no programa BioEstat 5.3. Os resultados do presente
estudo evidenciaram que o controle positivo (CP) foi significativo apenas para as alterações cromossômicas em
relação ao controle negativo (CN). Quanto ao índice mitótico (IM), apenas a menor concentração (2 mg/mL) foi
citotóxica. Enquanto, na média total das alterações cromossômicas houve um aumento significativo apenas na
maior concentração (16 mg/mL). Desta forma, o uso da mesma deve ser realizado com prudência, para fins
terapêuticos. Adicionalmente, estudos com os fitoquímicos desta espécie são necessários para elucidar o
mecanismo de ação no ciclo celular e na formação de alterações cromossômicas.
APOIO
Uespi
341
Mutagênese e Farmacogenômica
POTENCIAL CITOTÓXICO E GENOTÓXICO DE AROMATIZANTES SINTÉTICOS, DOS TIPOS
IDÊNTICOS AO NATURAL, DE UVA E AMEIXA.
Ila Monize Sousa Sales1; Maria Eduarda de Sousa e Silva1; Fabelina Karollyne Silva dos Santos1; Ana Paula
Peron2.
E-mail: [email protected]
(1)
Acadêmica do Curso de Ciências Biológicas, UFPI, Picos, PI; (2)Docente Programa de Pós-graduação em
Genética e Melhoramento, UFPI, Teresina, PI
RESUMO
Os aromatizantes são considerados imprescindíveis para indústria alimentícia em razão de conferirem
propriedades sensoriais de aroma e sabor aos mais diversos tipos de alimentos industrializados. Apesar de
normatizados quanto a utilização por órgãos de segurança alimentar como o Food and Agriculture Organization
(FAO) e a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), tais aditivos, em geral, não possuem índices de
ingestão diária (IDA) estabelecidos em decorrência da escassez de estudos quanto a seus efeitos tóxicos,
principalmente a nível celular. Assim, objetivou-se no presente estudo avaliar o potencial citotóxico e genotóxico
de aromatizantes alimentares sintéticos, idênticos aos naturais, de Uva e Ameixa, muito utilizados na indústria na
confecção de balas, gomas, sorvetes, sucos, entre outros alimentos. A avaliação foi realizada por meio das células
meristemáticas de raízes de Allium cepa L., nos tempos de exposição 24 e 48 horas, no qual cada aditivo foi
avaliado nas doses de 0,2; 0,4 e 0,6 ml. Após os tratamentos, as raízes foram fixadas, hidrolisadas, coradas e
analisadas em microscópio óptico, onde se analisou para cada controle e tempo de exposição um total de 5.000
células. Os dados obtidos foram submetidos ao teste estatístico Qui-quadrado (p<0,05). A partir dos resultados
verificou-se que a dose 0,2 ml do aromatizante de Uva, no tempo de exposição 48 h, e as doses 0,2; 0,4 e 0,6 ml
dos aditivos de Ameixa, nos tempos de exposição 24 e 48 h, ocasionaram significativo efeito antiproliferativo aos
tecidos estudados. Ainda, a dose 0,2 ml de Uva no tempo de exposição 48 h, bem como as doses 0,2; 0,4 e 0,6 ml
de Ameixa, nos dois tempos de exposição estabelecidos, causaram aberrações celulares, como metáfases-C, pontes
anáfásicas e telofásicas, amplificações e micronúcleos, em número significativo aos meristemas de raízes.
Portanto, com base nas análises realizadas verificou-se que os aditivos de Uva e Ameixa foram citotóxicos e
genotóxicos as células meristemáticas de raízes de A. cepa.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico- CNPq
342
Mutagênese e Farmacogenômica
POTENCIAL CITOTÓXICO E MUTAGÊNICO DO LARVICIDA BENZOUREIA UTILIZADO PARA O
CONTROLE DO AEDES AEGYPTI
Ataide Macedo Vieira Lima1; Larissa de Sousa Soares1; Lígia Ferreira Teles1; Victor Alves de Oliveira1; Felipe
Cavalcante Carneiro da Silva1; Ana Paula Peron1; Leonardo Henrique Guedes de Morais Lima1; João Marcelo
de Castro e Sousa1; Euclides Xavier Leal1.
E-mail: [email protected]
(1)
Núcleo de Estudos em Oncologia e Genética molecular - NEOGEM. Departamento de Ciências Biológicas,
Universidade Federal do Piauí, Picos-PI.
RESUMO
O uso contínuo ou esporádico de inseticidas de síntese utilizados em campanhas de controle de vetores ou na
agricultura podem causar efeitos adversos ao homem a nível celular e sistêmico. Assim, o presente estudo visou
avaliar, utilizando o sistema teste animal (camundongos), o potencial citotóxico e mutagênico da Benzoureia,
composto químico utilizado atualmente no controle do Aedes aegypti. Os animais foram expostos durante sete dias
consecutivos ao produto, via gavagem, com diferentes concentrações: C1 - 0,006 g/ml; C2 - 0,012 g/ml; C3 0,024 g/ml (concentração de uso). Foram utilizados dois controles: Negativo - água destilada e Positivo ciclofosfamida (50 mg/kg). O bioensaio utilizado foi o teste do micronúcleo em sangue periférico coletado 48, 72
e 168 horas após o inicio do tratamento. Os resultados mostraram que as concentrações C1, C2 e C3 apresentaram
resultados significativos (p < 0,05) quanto à citotoxicidade no primeiro tempo de exposição (24h). A concentração
01 também apresentou resultados significantes (p < 0,05) no tempo de 72h e a concentração 03 no tempo de
168hs. Quanto à mutagenicidade desse larvicida, todas as concentrações foram significativas (p < 0,001) nos
tempos de exposição de 48 e 72hs quando comparados com o controle negativo. Muitos dos compostos químicos
utilizados com fins de controle de pragas são causadores de alterações significativas no DNA. A preocupação está
na utilização dos mesmos em larga escala e de forma não controlada, principalmente quando são utilizados em
reservatórios de água para consumo humano. Esse tipo de uso pode oferecer riscos à saúde humana, podendo
ocasionar algumas doenças, tais como câncer, devido à capacidade de causar problemas no ciclo celular e
instabilidade genética, como observado com a Benzoureia. Portanto, estudos do potencial toxicológico desses
compostos químicos sempre serão necessários para evitar intoxicações e futuras doenças genéticas humanas.
343
Mutagênese e Farmacogenômica
POTENCIAL GENOTÓXICO E MUTAGÊNICO DO FUNGO BIOLUMINESCENTE
NEONOTHOPANUS GARDNERI BERK. EX GARDNER EM CÉLULAS MERISTEMÁTICAS DE
ALLIUM CEPA L.
Bárbara Cristina Silva Holanda Queiroz1; Cleiane do Nascimento Monteiro2; Regina Maria Silva Sousa2; João
Gabriel Silva Morais2; Maria das Dores Alves de Oliveira1; Pedro Marcos de Almeida2; Francielle Alline
Martins2; Joaquim Soares da Costa Júnior3.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ; (2)UNIVERSIDADE ESTADUAL DO PIAUÍ; (3)INSTITUTO
FEDERAL DO PIAUÍ
RESUMO
Neonothopanus gardneri Berk. ex Gardner (Marasmiaceae) é considerado o maior fungo bioluminescente do
Brasil e um dos maiores do mundo. As espécies dessa família são ricas em sesquiterpenos citotóxicos, exibindo
atividades antimalárica e antimicobacteriana, além de citotoxicidade contra linhagens celulares de alguns tipos de
câncer. No entanto, não há relatos sobre a atividade citogenotóxica de N. gardneri. Desse modo, o objetivo deste
estudo foi avaliar o potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico do extrato acetato de etila de N. gardneri,
utilizando o sistema-teste Allium cepa L. Espécimes de N. gardneri foram coletadas na cidade de São Francisco,
Maranhão, Brasil. Em seguida, os fungos foram congelados e submetidos à liofilização. Posteriormente, preparouse o extrato acetato de etila (Ext. AcOEt), que foi diluído em DMSO 0,2% mais solução salina 0,9%, obtendo-se
as concentrações testes de 50, 100, 250 e 500 µg/mL. Sementes de A. cepa foram germinadas em placas de Petri
contendo água destilada. Posteriormente, as mesmas foram transferidas para os controles e para as concentrações
citadas do Ext. AcOEt por 24 h. Como controle negativo (CN), foi utilizado DMSO 0,2% mais solução salina
0,9% e como controle positivo (CP), o metilmetanossulfonato (MMS, 10 mg/L). Em seguida, as raízes foram
fixadas em metanol: ácido acético (3:1), hidrolisadas em HCl por 10 min, lavadas em água destilada e coradas com
Reativo de Schiff, por 2 h no escuro. Cinco mil células meristemáticas por tratamento, 500 células por lâmina
(total de 10 lâminas), foram analisadas em microscópio óptico (400 x). As análises estatísticas foram avaliadas por
meio do teste de Kruskal-Wallis a 5% de significância no programa BioEstat 5.3. Os valores de CP foram
significativos em relação ao CN para os parâmetros de genotoxicidade e mutagenicidade. Quanto ao índice
mitótico, houve aumento significativo nas concentrações de 50, 250 e 500 µg/mL em relação ao CN, resultando no
efeito citotóxico. Quanto à genotoxicidade e à mutagenicidade, não houve diferença significativa entre as
concentrações e o CN. Os resultados obtidos demonstraram que o Ext. AcOEt de N. gardneri possui efeito
citotóxico na maioria das concentrações testadas e alterações cromossômicas não significativas. Adicionalmente,
análises sobre a composição química de N. gardneri e testes em outros bioensaios fazem-se necessários para a
elucidação da interferência quanto ao ciclo celular.
APOIO
CAPES FAPEPI
344
Mutagênese e Farmacogenômica
POTENCIAL MUTAGÊNICO DO EXTRATO ETANÓLICO DE PINHÃO BRAVO (JATROPHA
MOLLISSIMA) (POHL) BAIL
Cleidiane Macêdo Santos1; Ana Luisa de Oliveira Lima1; Kelvim Crist Araújo Rocha1; Pedro Marcos de
Almeida2; Francielle Alline Martins1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Estadual do Piauí-UESPI- Centro de Ciências da Natureza-CCN; (2)Universidade Estadual do
Piauí-UESPI- Centro de Ciências da Saúde-CCS
RESUMO
Jatropha mollissima é uma planta endêmica do nordeste com ampla utilização medicinal. Estudos recentes da
avaliação do potencial bioinseticida do extrato foliar do pinhão bravo sobre as larvas do mosquito Aedes aegypti
revelaram atividade larvicida satisfatória do mesmo quando comparado ao Diflubenzuron, o inseticida
recomendado pelo Ministério da Saúde. Contudo a recomendação e uso do extrato de pinhão bravo não deve ser
realizada sem antes um estudo do potencial toxicológico desse ao ambiente e à saúde humana. Desta forma o
objetivo deste estudo foi avaliar o potencial mutagênico do extrato etanólico das folhas de J. mollissima em células
somáticas de Drosophila melanogaster por meio do teste SMART (Somatic Mutation and Recombination Test).
As folhas foram secas durante cinco dias em temperatura ambiente. Posteriormente, as mesmas foram trituradas e
submetidas à extração em álcool etílico (PA) até obtenção do extrato etanólico bruto. Em seguida, o extrato foliar
foi diluído em água destilada em banho maria ultrassônico por 30 min, filtrado e as soluções preparadas nas
concentrações 0,01, 0,1, 1, 10 e 100 mg/mL. Como controles, negativo (CN) e positivo (CP), foram utilizados
água destilada e doxorrubicina (0,125 mg/mL), respectivamente. Larvas no 3º estágio de desenvolvimento do
cruzamento padrão (Standard - ST), entre machos da linhagem mwh e fêmeas virgens da linhagem flr3, foram
tratadas com 5ml de cada solução. Após eclosão dos adultos as moscas foram fixadas em álcool 70%, as asas
destacadas e avaliadas ao microscópio quanto à quantidade de manchas simples pequenas, manchas simples
grandes e manchas gêmeas. Os dados foram avaliados de acordo com o teste binomial condicional. A frequência
para as três categorias de manchas avaliadas não diferenciou entre os tratamentos e o controle negativo, desta
forma não foi observada atividade mutagênica para o extrato nas concentrações avaliadas as quais apresentaram
atividade larvicida em estudos anteriores. Assim, o extrato etanólico foliar de Jatropha mollissima não representou
risco a saúde ambiental.
APOIO
Universidade Estadual do Piauí-UESPI
345
Mutagênese e Farmacogenômica
POTENCIAL MUTAGÊNICO DO EXTRATO ETANÓLICO FOLIAR DE JATROPHA MOLLISSIMA
(POHL) BAILL EM CÉLULAS MERISTEMÁTICAS DE ALLIUM CEPA L.
João Gabriel Silva Morais1; Regina Maria Silva Sousa1; Francielle Alline Martins1; Pedro Marcos de Almeida2.
E-mail: [email protected]
(1)
Centro de Ciências Naturais (CCN), Universidade Estadual do Piauí (UESPI), Laboratório de Genética,
Teresina, PI.; (2)Centro de Ciências da Saúde (CCS), Universidade Estadual do Piauí (UESPI/FACIME),
Departamento de Genética, Laboratório de Genética, Teresina, PI.
RESUMO
Jatropha mollissima (Pohl) Bail (Euphorbiaceae), conhecida como pinhão bravo, é uma espécie nativa do
semiárido brasileiro que se destaca pelo seu uso medicinal como cicatrizante, antitumoral e antifúngica. Contudo
estudos quanto à toxicidade ainda são incipientes. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar o
potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico do extrato etanólico das folhas de J. mollissima nas células
meristemáticas de Allium cepa L. As folhas foram secas em temperatura ambiente, trituradas, submetidas à
extração em álcool etílico e rotaevaporadas até obtenção do extrato etanólico bruto das folhas. O extrato foi
solubilizado em dimetilsulfóxido (DMSO) a 1% e colocado em Banho Ultrassônico durante 10 h. Em seguida, o
material foi filtrado em papel de filtro e realizou-se uma diluição seriada em DMSO 1% para obter as cinco
concentrações (100; 10; 1; 0,1 e 0,01 mg/mL). Como controles negativo (CN) e positivo (CP) foram utilizados o
DMSO 1% e o metilmetanossulfonato (MMS, 10 mg/L), respectivamente. As raízes de A. cepa foram expostas aos
controles e ao extrato foliar por 24 h. As mesmas foram fixadas em metanol: ácido acético (3:1), hidrolisadas
(HCl) por 10 min., lavadas em água destilada e coradas com Reativo de Schiff, por 2 h. Um total de 2000 células
meristemáticas foram analisadas em microscópio óptico (400 x) para avaliar o efeito citotóxico (índice mitótico),
genotóxico (alterações cromossômicas) e mutagênico (células com micronúcleos, MN). Os dados foram analisados
no teste de Kruskal-Wallis seguido "a posteriori" pelo teste de Student-Newman-Keuls (p < 0,05). Quanto ao
índice mitótico, houve aumento significativo nas concentrações de 0,1 (289,24 ± 47.46); 10 (310,48 ± 48,71) e 100
mg/mL (463,70 ± 19,15) em relação ao CN (63,48 ± 26,61), resultando no efeito citotóxico. A média total de
alterações cromossômicas nas concentrações de 0,01 (9,59 ± 1,93); 0,1 (5,67 ± 2,50) e 100 mg/mL (7,58 ± 3,41)
foram significativamente maiores quando comparadas com o CN (0,67 ± 0,87). A média de MN foi significativa
apenas na concentração de 0,01 (7,17 ± 2,62). Os resultados obtidos demonstraram efeito citotóxico, genotóxico e
mutagênico do extrato etanólico foliar de J. mollissima em determinadas concentrações. Ressalta-se ainda que
experimentos com camundongos estão sendo realizados pelo mesmo grupo de pesquisa para permitir uma
avaliação complementar sobre o possível efeito genotóxico e/ou mutagênico desse extrato.
APOIO
PIBIC/UESPI
346
Mutagênese e Farmacogenômica
POTENCIAL TÓXICO E CITOGENOTÓXICO DA ÁGUA E SEDIMENTO COLETADOS NO RIO SÃO
FRANCISCO, POLO PETROLINA (PE) / JUAZEIRO (BA), MEDIANTE BIOENSAIO COM ALLIUM
CEPA L.
Ilka Fernanda Mendes Pereira1; Cinthia Silva dos Santos2; Laysla dos Santos Motta2; Draulio Costa Silva2; Ana
Christina Brasileiro Vidal1; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti2.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Universidade Federal do Vale do São Francisco
RESUMO
Petrolina (PE) e Juazeiro (BA) destacam-se pelo desenvolvimento industrial, urbano e prática intensiva da
agricultura irrigada. Tais atividades geram resíduos despejados inadequadamente, que afetam a sanidade do
principal recurso hídrico da região, o rio São Francisco. Este trabalho visou avaliar o potencial tóxico e
citogenotóxico de possíveis contaminantes presentes nas águas e sedimentos do rio, em duas áreas receptoras de
efluentes urbano-agrícola (A1/Juazeiro) e urbano-industrial (A2/Petrolina), mediante bioensaio Allium cepa L. e
sua correlação com parâmetros físicos e químicos. Assim, amostras compostas de água e sedimento foram
coletadas em triplicata em cada área (estação seca - Agosto/2015), sendo determinados três pontos de amostragem:
à montante (M), no despejo (E) e à jusante (J) do efluente. Variáveis hidroquímicas foram medidas in situ e
concentrações de nutrientes (água) e metais pesados (água e sedimento) em laboratório. Sementes de A.
cepa foram submetidas às amostras coletadas e aos controles negativo (CN; água ultrapura) e positivos [Metil
metano-sulfonato (4x10-4 M) e Trifluralina (0,84 ppm de princípio ativo)]. Após germinação, raízes foram
medidas, fixadas em Carnoy e utilizadas na preparação das lâminas seguindo método de Feulgen. Foram
analisadas 7500 células/tratamento. Os resultados foram comparados ao CN mediante teste de Kruskal-Wallis
seguido do teste de Tukey (p<0,05). Em relação à toxicidade, observou-se uma diminuição do índice de
germinação nas amostras de água [(MA1; 64,7%); (EA2; 61,3%); (JA2; 60,7%)] e sedimento [(MA2; 68%); (JA2;
57,6%)], bem como no comprimento médio das raízes na maioria dos tratamentos analisados, exceto para uma
amostra de água (JA2; 0,77 cm) e duas de sedimento [(MA1; 0,67 cm); (MA2; 0,70 cm)]. A citotoxicidade, por
sua vez, foi observada para três amostras de sedimento [(EA1; 12,83%); (EA2; 11,40%); (JA2; 7,08%)], notada
pela diminuição do índice mitótico. Adicionalmente, a genotoxicidade foi evidenciada pelo aumento do índice de
alterações cromossômicas, visualizado em duas amostras de água [(EA1; 1,17%); (JA1; 0,92%)], em todas as
amostras de sedimento da A1 e em uma amostra de sedimento da A2 (MA2; 1,12%). Sugere-se que a interação
entre nutrientes e metais pesados (Ni, Pb, Cu, Fe, Zn, Mn e Cr), das amostras de água e/ou sedimento
influenciadas pelos efluentes, seja responsável pelas alterações no material genético de A. cepa, ressaltando a
importância do monitoramento ambiental deste rio.
APOIO
Facepe, Ministério da Integração Nacional, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Centro de Manejo de
Fauna da Caatinga.
347
Mutagênese e Farmacogenômica
SÍNTESE E ENSAIO CITOTÓXICO DE COMPLEXOS DE RUTÊNIO COM POTENCIAL USO NA
TERAPIA ANTITUMORAL.
Augusto Lima Teixeira Júnior1; Ana Cristina Gomes Rodrigues1; Israel Higino de Sousa1; Vera Lucia Maciel
Silva1; Ana Paula Silva de Azevedo dos Santos1; André Alvares Marques Vale1; Márcio Aurélio Pinheiro
Almeida1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Maranhão
RESUMO
Cânceres são caracterizados como um grupo de doenças que têm em comum o crescimento desordenado das
células. Sabe-se que o desenvolvimento dessas patologias está intrinsicamente associado a instabilidade genética,
ocasionado em geral por mutações que afetam genes importantes envolvidos no controle do ciclo celular. Na busca
pela compreensão de drogas capazes de inibir a atividade de células cancerígenas, estudos com complexos de
rutênio vêm demonstrando maior especificidade destes em relação a compostos a base de platina. O presente
trabalho visa sintetizar complexos de rutênio contendo na sua estrutura difosfina 1,4-bis (difenilfosfina) butano,
2,2-bipiridina e aminoácidos (iso-leucina e fenil-alanina) e realizar testes quanto sua capacidade antitumoral, bem
como avaliar a atividade citotóxica dos complexos de rutênio (II) em linhagens de câncer de mama (MCF-7). Os
complexos de rutênio, diferem no tipo de aminoácido inserido em sua estrutura, e foram sintetizados a partir do
precursor cis-[RuCl2(dppb)(bipy)] PF6, segundo metodologia descrita por Almeida (2009). A linhagem MCF-7 de
câncer de mama, foi obtidas do Banco de Células do Rio de Janeiro-Brasil (BCRJ-BR). Os ensaios de
citotoxicidade foram conduzidos pelo teste colorimétrico de redução do MTT 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)2,5-Difenil
Brometo de Tetrazolium), descrito por Mosman (1983) que consiste em medir indiretamente a viabilidade celular
pela atividade enzimática mitocondrial das células vivas e posterior análise de viabilidade por absorbância (540
nm). O valor de IC50 foi determinado por meio da curva dose resposta utilizando o programa estatístico GraphPad
Prism 6.02. Foram obtidos dois novos compostos inéditos com estrutura [Ru(Ile)(dppb)(bipy)]PF6 e
[Ru(Phe)(dppb)(bipy)]PF6, os quais foram testadas cinco concentrações (100 µM, 50 µM, 25 µM, 12,5 µM, 6,25
µM) quanto a atividade citotóxica. Ambos os compostos apresentaram atividade citotóxica para a linhagem de
célula MCF-7, contudo, o composto [Ru(Phe)(dppb)(bipy)]PF6 apresentou melhor atividade biologica com IC50 de
12,5 μM, enquanto o composto [Ru(Ile)(dppb)(bipy)]PF6 27,0 μM, o qual foi atribuído maior graus de
lipofilicidade. Os resultados deste trabalho reforçam a utilização de complexos de rutênio com alto potencial
citotóxico em células cancerígenas
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
348
Mutagênese e Farmacogenômica
SUCO LIOFILIZADO DE LARANJA (CITRUS SINENSIS L. OSBECK) DIMINUI A PARALISIA
INDUZIDA PELO PEPTÍDEO B-AMILOIDE NO NEMATODO CAENORHABDITIS ELEGANS
Flávia Toscano Moura1; Ricardo Basílio de Oliveira Caland2; Leandro PeÑa3; Riva de Paula Oliveira4.
E-mail: [email protected]
(1)
Depto. Biologia Celular e Genética, UFRN, RN; (2)Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, RENORBIO,
UFRN, RN; (3)Fundo de Defesa da Citricultura (Fundecitrus), Araraquara, SP; (4)Depto. Biologia Celular e
Genética, UFRN, RN e Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, RENORBIO, UFRN, RN
RESUMO
O Mal de Alzheimer (MA) é uma doença neurodegenerativa progressiva crônica do sistema nervoso central e é a
causa mais comum de demência nos idosos. O acúmulo de espécies reativas de oxigênio (ERO) e o depósito de
agregados b-amiloide 1-42 (Ab1-42) são considerados os principais responsáveis pelo agravamento dos sintomas
nos pacientes com MA. Um número crescente de trabalhos têm mostrado que antioxidantes nutricionais, tais como
compostos flavonóides e fenólicos, são capazes de bloquear a morte neuronal e diminuir efeitos neurotóxicos. A
laranja contem uma variedade de compostos antioxidantes, incluindo carotenoides e vitamina C. Já foi demostrado
que o tratamento com suco de laranja aumenta a resistência do organismo modelo Caenorhabditis elegans ao
estresse oxidativo. Neste trabalho, nós investigamos o efeito protetor do suco de laranja liofilizado (SLL) sobre o
perfil de paralisia induzido pela super-expressão do peptídeo Ab1-42 no tecido muscular em C. elegans. Nós
observamos que o tratamento 2, 5 e 10% de SLL retarda de maneira dose dependente a progressão da paralisia em
comparação com animais não tratados. Uma vez que é sabido que Escherichia coli, alimento para C. elegans, tem
um efeito patogênico sobre ele, o que afeta seu tempo de vida e resistência ao estresse, nós investigamos se o
efeito protetor do SLL observado era resultado da inibição de crescimento bacteriano. Nós observamos que o
crescimento de E. coli OP50 ao longo de 5 horas foi inibido com as 3 concentrações testadas do SLL. Apesar
disto, quando os animais que foram alimentados com E. coli previamente morta com Kanamicina, o tratamento
com 2% de SLL ainda continuou retardando o perfil de paralisia dos animais transgênicos com super-expressão do
peptídeo Ab1-42. Estes resultados indicam que o tratamento com SLL protege contra o toxicidade induzida pelo
peptídeo Ab1-42 de maneira independente do seu efeito bactericida.
APOIO
Fundecitrus
349
Mutagênese e Farmacogenômica
TESTE DA QUALIDADE DA ÁGUA DE EMBALAGENS PLÁSTICAS AVALIADA POR MEIO DO
ENSAIO COMETA EM DROSOPHILA MELANOGASTER
Renata de Barros Oliveira1; Rayane Santana da Silva1; Ícaro Fillipe de Araújo Castro1; Samuel Lima de
Santana1; Cícero Jorge Verçosa1; Claudia Rohde1; Jéssica Celerino dos Santos1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco
RESUMO
Dentro do mercado de bebidas, o consumo de água mineral apresentou um grande salto nos últimos cincos anos.
Em decorrência desse crescimento expressivo, a embalagem PET (Tereftalato de Etileno) surgiu como uma nova
tendência por ser prática e barata para as indústrias. Apesar disso, a embalagem pode estar associada a riscos de
contaminação ao consumidor pela capacidade de liberar substâncias e alterar as propriedades físicas e químicas da
água mineral embalada. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito genotóxico da água contida em garrafas
PET, após as embalagens serem submetidas a diferentes condições de armazenamento. Para o experimento, foi
testada a água mineral da marca Santa Joana, embalada há sete dias e mantida a 25°C dentro do laboratório
(denominada Tratamento 1, ou controle negativo); a mesma água transferida por cinco dias a 25°C para outra
garrafa Santa Joana, porém com 6 meses de fabricação (Tratamento 2); e água Santa Joana de embalagem de sete
dias, porém deixada por cinco dias no interior de um carro e exposta a elevadas temperaturas (Tratamento 3). Para
os testes in vivo, larvas de Drosophila melanogaster (Insecta, Diptera) foram expostas a cada um dos Tratamentos
(1, 2 e 3) por meio de ingestão e metabolização da água que hidratou o meio de cultivo dos insetos, constituído de
0,9 gramas de purê de batata instantâneo e 3mL de água. As larvas permaneceram neste meio por um período de
24 horas. Para cada Tratamento foram expostas 250 larvas, divididas em cinco grupos (réplicas). De cada grupo
foram retirados hemócitos presentes na hemolinfa, que foram processados, analisados e quantificados para o efeito
genotóxico, por meio do Ensaio Cometa, sendo comparados estatisticamente os resultados do Índice de Dano (ID)
e a Frequência de Dano (FD%). O Tratamento 1 e o Tratamento 2 não diferiram estatisticamente, o que significa
que, nas condições experimentais deste estudo, as garrafas PET Santa Joana antigas não representam um risco
genotóxico. Entretanto, houve diferenças significativas nas comparações entre os resultados do Tratamento 1 e o
Tratamento 3, tanto para ID (p=0,0001) quanto para FD% (p=0,0001). Neste caso, conclui-se que garrafas PET
expostas a elevadas temperaturas dentro de veículos, por alguns dias, representam um risco genotóxico à saúde da
população. Os resultados apontam para a necessidade de mais estudos nesta linha de pesquisa, para que haja
garantia da segurança do consumo de água diário pela população.
APOIO
PROPESQ-UFPE, FACEPE e CAPES
350
Mutagênese e Farmacogenômica
TOXICIDADE DE AROMATIZANTES ALIMENTARES SINTÉTICOS, DOS TIPOS ARTIFICIAIS DE
BAUNILHA, BISCOITO E TUTTI-FRUTTI, ASSOCIADOS ENTRE SI, AO CICLO CELULAR DE
MERISTEMAS DE RAÍZES DE ALLIUM CEPA L..
Ila Monize Sousa Sales1; Fabelina Karollyne Silva dos Santos2; Maria Eduarda de Sousa e Silva2; Ana Paula
Peron3.
E-mail: [email protected]
(1)
Acadêmica do Curso de Ciências Biológicas, UFPI, Picos, PI; (2)Discente do Departamento de Ciências
Biológicas, UFPI, Picos, PI; (3)Docente Programa de Pós-graduação em Genética e Melhoramento, UFPI,
Teresina, PI
RESUMO
Os aromatizantes são substâncias com propriedades odoríferas e/ou sápidas capazes de promoverem ou
intensificarem o aroma e/ou sabor dos alimentos industrializados. Entretanto, tais aditivos contribuem
significativamente para o empobrecimento da dieta, e suscitam uma série de dúvidas quanto aos seus potenciais
efeitos citotóxicos e genotóxicos, uma vez que, estudos sobre a toxicidade em nível celular de tais ingredientes são
praticamente inexistentes na literatura científica. Dessa forma, foi objetivo do presente trabalho avaliar a
citotoxicidade e genotoxicidade de aromatizantes artificiais, de Biscoito, Tutti-frutti e Baunilha, aditivos
comumente encontrados associados em biscoitos recheados, bolachas wafer, cakes, cookies, flans, entre outros
alimentos industrializados. As doses de análise de cada aromatizante, determinadas com base nas especificações
de suas embalagens comerciais, foram três, 0,3; 0,6 e 0,9 ml. Já as associações estabelecidas foram
Biscoito/Tutti/frutti, Biscoito/Baunilha e Baunilha/Tutti-frutti. Para cada associação de aromatizantes estipulou-se
três tratamentos em combinações de doses iguais, ou seja, para cada combinação associou-se uma dose de um
aromatizante a mesma dose do outro aromatizante. Assim, as combinações de doses ou tratamentos definidos para
cada associação foram 0,3 ml + 0,3 ml; 0,6 ml + 0,6 ml e 0,9 ml+ 0,9 ml. Para a avaliação toxicológica de tais
tratamentos utilizou-se as células meristemáticas de raízes de Allium cepa L., e cada combinação de doses foi
avaliada nos tempos de exposição 24 e 48 horas. Cada tratamento foi constituído de cinco bulbos de cebolas,
previamente enraizados em água destilada. Antes de colocar as raízes em contato com os seus respectivos
tratamentos, coletou-se raízes que serviram de controle do próprio bulbo. Após cada tempo de exposição, raízes
foram coletadas, fixadas, hidrolisadas, coradas e analisadas em microscópio óptico, no qual se avaliou para cada
grupo controle e grupo tempo de exposição 5.000 células. Os resultados obtidos foram analisados pelo teste Quiquadrado, a 5%. Todas as combinações analisadas reduziram drasticamente a divisão celular e ocasionaram
número estatisticamente significativo de alterações de fuso mitótico e micronúcleos nas células do sistema teste
utilizado. Dessa forma, os aromatizantes alimentares de Tutti-frutti, Biscoito e Baunilha nas condições de análises
estabelecidas foram citotóxicos e genotóxicos as células de meristemas de raízes de A. cepa.
APOIO
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico- CNPq
351
Mutagênese e Farmacogenômica
VITAMINA C NÃO REPARA LESÕES GENÔMICAS INDUZIDAS PELO MILTEFOSINE
(IMPAVIDO®) EM CAMUNDONGOS INFECTADOS COM LEISHMANIA INFANTUM CHAGASI
Patrícia Valéria Castelo Branco1; Muryllo Santos Castro1; Iraine Duarte de Souza1; Vera Lucia Maciel Silva1;
Silma Regina Ferreira Pereira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Maranhão
RESUMO
O miltefosine (Impavido®), droga inicialmente desenvolvida para ser antitumoral, é um fármaco promissor para o
tratamento das leishmanioses. Pouco se conhece sobre seu mecanismo de ação e sua interação com o material
genético. Recentemente, nosso laboratório demonstrou que o miltefosine causa danos ao DNA por oxidação de
bases, além de apoptose e necrose em célula de mamíferos. Assim, este trabalho objetivou avaliar o potencial
antimutagênico da vitamina C sobre danos genômicos causados pelo Impavido® em camundongos infectados com
Leishmania infantum chagasi (MOM/BR/1970/BH46). Realizou-se o teste do COMETA alcalino em células do
sangue periférico de camundongos Balb/c infectados. Foram utilizados 30 animais infectados na pata com 1 x 10 7
do parasito, tratados por via oral, e distribuídos igualmente em 6 grupos: G1: controle infectado tratado com água
destilada; G2: tratamento com Impavido® (2,5mg/kg por 28 dias); G3: tratamento com Impavido® (5,0 mg/kg por
14 dias); G4: tratamento com Impavido® (2,5 mg/kg) + Ácido Ascórbico (15 mg/kg) por 28 dias; G5: tratamento
somente com Ácido ascórbico (15 mg/kg por 28 dias) e, G6: controle não infectado tratado com salina. O grupo
G2 foi tratado com a dose e o tempo recomendados pela Organização Mundial da Saúde (OMS), enquanto que o
grupo G3 foi tratado com o dobro da dose pela metade do tempo estabelecido. Nossos resultados ratificaram o
efeito genotóxico do Impavido® na dose recomendada pela OMS (p < 0,05) e aumento significativo desse dano
com o aumento da dose (p < 0,0001). A Vitamina C não foi genotóxica na dose testada, porém seu efeito
antioxidante não foi observado no grupo tratado simultaneamente com a droga (p > 0,05), embora tenha havido
uma redução de 37,5% dos danos. Dessa forma, concluímos que a Vitamina C na dose de 15mg/kg por 28 dias,
não é capaz de reparar os danos genômicos do antileishmanial Impavido®, sendo necessários testes com doses
mais elevadas.
APOIO
Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico do Maranhão- FAPEMA Fundação CAPES
352
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ANÁLISE FILOGENÉTICA DE PRASIOLA CRISPA BASEADA NOS GENES MARCADORES RBCL E
PSAB
Filipe Zimmer Dezordi1; Evelise Leis Machado1; Luiz Fernando Duarte da Silva1; Laís Ceschini Machado1;
Pablo Echeverria Macedo1; Darlene Lopes Rangel1; Jessica Silva Tápia1; Thalita Fonseca Araujo1; Marcos
Paulo Figueiró Wanderley França1; Marlon dos Reis Matsumoto1; Paulo Marcos Pinto1.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Proteômica Aplicada, Universidade Federal do Pampa
RESUMO
A alga verde Prasiola crispa (Lightfoot) Kützing, presente em áreas de degelo da Antártica, tolera repetidos ciclos
de congelamento/descongelamento, temperaturas negativas e altos níveis de radiação UV. Contudo ainda são
poucos estudos taxonômicos sobre P. crispa. O posicionamento filogenético de espécies que sobrevivem à
condições ambientais extremas é essencial para compreender as possíveis adaptações que possuem. Análises
filogenéticas em plantas utilizam genes plastidiais, como rbcL e psaB, para inferir as relações evolutivas entre
grupos de organismos. Estes genes apresentam sequências altamente conservadas, com baixa taxa de mutações,
além de fácil amplificação e alinhamento. O objetivo deste estudo foi realizar uma análise filogenética de P. crispa
baseada nos genes marcadores rbcL e psaB. As sequências dos genes rbcL e psaB foram obtidas do banco de
dados NCBI. A análise filogenética foi realizada com os genes codificantes para rbcL de 136 espécies de
organismos e genes codificantes para psaB de 96 espécies organismos. As sequências gênicas foram alinhadas
com MAFFT, editadas com Gblocks e concatenadas com Phyutility 2.2.6. A reconstrução filogenética bayseana
foi realizada com MrBayes 3.2.1. Nossa análise filogenética para rbcL, com Acutodesmus obliquus e Dunaliella
salina como grupo externo, posiciona P. crispa (aLTR-like=1) dentro do clado Prasiola crispa, composto por 19
espécies deste gênero. Todas as análises apresentaram alto suporte de ramo exceto no nó do agrupamento dos
isolados P. crispa Galway, Columbia, Ireland, Cork, Switzerland, P. crispa P25, P24, P23 e P21 (aLTRlike=0,6752). Na filogenia para psaB, com Acutodesmus obliquus como grupo externo, P. crispa agrupou
consistentemente (aLTR-like=1) com outros organismos do mesmo gênero dentro do clado P. crispa, composto
por 13 espécies. No clado P. crispa todas as análises para psaB apresentaram alto suporte de ramo, exceto no nó
do agrupamento P. crispa P29, P13 e Prasiola calophylla (aLTR-like=0,5526). No presente trabalho nós
estabelecemos o posicionamento filogenético de P. crispa com base nos genes marcadores plastidiais rbcL e psaB.
Nosso estudo posicionou P. crispa no clado P. crispa, composto por isolados do mesmo gênero. Os resultados
deste estudo fornecem novos e substanciais insights sobre o posicionamento de P. crispa que podem ser bases para
estudos futuros e corrobora a aplicabilidade dos genes rbcL e psaB como marcadores para estudos filogenéticos.
APOIO
Capes;Fapergs;NCT-APA
353
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ANÁLISE EVOLUTIVA DE ELEMENTOS DA SUPERFAMILIA PENELOPE PRESENTES NO
GENOMA DA VESPA PARASITÓIDE LEPTOPILINA BOULARDI
Filipe Zimmer Dezordi1; Alexandre Freitas da Silva2; Elgion Lúcio da Silva Loreto3; Paulo Marcos Pinto4;
Gabriel da Luz Wallau5.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Proteômica Aplicada, Universidade Federal do Pampa; (2)Técnico Bolsista, Fundaçao Oswaldo
Cruz-CpqAM; (3)Professor Associado; Universidade Federal de Santa Maria; Santa Maria; (4)Professor Adjunto;
Universidade Federal do Pampa; (5)Departamento de Entomologia - Fundação Oswaldo Cruz CPqAM.
RESUMO
Elementos Transponíveis (TEs, do inglês Transposable Elements), foram descobertos em Zea mays por
McClintock em 1940 e desde então, têm sido descritos em uma grande variedade de eucariotos. Vespas
parasitóides são fortes candidatos como organismos modelo no estudo de processos de Transferência Horizontal
de Transposons, (HTT, do inglês Horizontal Transposon Transfer), evento no qual ocorretransferência de material
genético entre organismos de espécies isoladas sexualmente, uma vez que durante a inoculação do veneno são
inoculadas juntamente partículas virais que podem atuar como vetores para TEs. Análises preliminares
determinaram a existência de TEs pertencentes a 15 superfamílias distintas no genoma de uma vespa parasitoide,
Leptopilina boulardi, sendo uma delas a Penelope, uma superfamília envolvida em diversos processos de HTT
entre espécies do gênero Drosophila. Desta forma, este trabalho tem como objetivo a análise da história evolutiva
de elementos da superfamília Penelope. Foi realizado sequenciamento via sistema Solexa Illumina Hiseq 2000,
gerando um dataset de 30912162 reads de 100pb, estes reads foram então agrupados em clusters e relacionados à
diferentes superfamílias de TEs através de análises da plataforma RepeatExplorer, reads correspondentes à
superfamília Penelope foram montados em contigs com a ferramenta CAP3, foi realizada uma análise na literatura
e no banco de dados RepBase de sequências correspondentes à elementos Penelope e foi utilizada a ferramenta
ORF-Finder para obtenção de sequências de aminoácidos de proteínas estruturais, foi utilizado o software MAFFT
que permite o alinhamento múltiplo de sequências, a ferramenta AliView para remoção de gaps, o ProtTest para
identificar o melhor modelo de substituição de aminoácidos e a ferramenta PhyML 3,0 do software Seaview para
montagem da árvore filogenética. Ocorreu a formação de um clado com alto suporte de ramo aLRT (1.0)
composto por um elemento da superfamília Penelope de L. boulardi, com elemento Penelope-1 de Nasonia
vitripennis, e um elemento ainda não caracterizado de outra vespa parasitoide (Trichogramma pretiosum). Vespas
parasitoides são organismos próximos evolutivamente e a similaridade entre TEs de diferentes vespas verificada
na análise pode ser explicada por eventos de co-evolução destes diferentes elementos com seus respectivos
genomas hospedeiro. Portanto, não foram apresentadas evidências que indiquem a ocorrência de HTT de
elementos da superfamília Penelope.
APOIO
CNPq
354
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ANÁLISE INTERESPECÍFICA IN SILICO DE GENES RELACIONADOS À PLURIPOTÊNCIA
Priscila Germany Corrêa da Silva1; Jéssica Barboza da Silva2; Marcelo Tigre Moura1; Ludymila Furtado
Cantanhêde1; Valeska Andrea Ático Braga1; Pábola Santos Nascimento1; Maiana Silva Chaves1; José Carlos
Ferreira Silva1; Roberta Lane de Oliveira Silva2; Ana Maria Benko Iseppon2; Marcos Antonio Lemos de
Oliveira1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Departamento de Medicina Veterinária, Laboratório de Biotécnicas
Aplicadas à Reprodução, Recife, PE. ; (2)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética,
Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Recife, PE.
RESUMO
As células pluripotentes possuem a capacidade de se diferenciar em todos os tecidos que formam o feto. A
manutenção da pluripotência é controlada por diversos fatores, dentre eles, os genes relacionados à pluripotência
(GRP). Apesar do crescente entendimento sobre os GRPs em humanos e camundongos, pouco se conhece em
ruminantes. O objetivo foi analisar e caracterizar in silico de genes relacionados à pluripotência de ovinos e
bovinos, para estimar a similaridade quanto as funções entre estas espécies. As sequências dos GRPs SOX2,
OCT4, SALL4, RONIN, REX1 e NANOG foram submetidas no NCBI via tBLASTn para selecionar sequências
candidatas com e-value igual ou inferior a e-10. As sequências foram anotadas, traduzidas e tiveram seus domínios
conservados identificados com o auxílio das ferramentas BLAST, ORF-Finder e CD-Search no NCBI. A partir do
JVirGel 2.0 foi realizada a predição do peso molecular o ponto isoelétrico das sequências proteicas, já a
localização subcelular foi obtida pelo Cell-PLoc 2.0. Foi obtida apenas uma sequência para cada GRPs nas
espécies analisadas, embora os genes NANOG, SALL4 e REX1 tenham apresentado duas isoformas em ovinos.
Foi verificado que 77,78% e 16,66% representavam sequências preditas para ovinos e bovinos, respectivamente.
As proteínas candidatas apresentaram grande variação quanto ao tamanho, de 285 a 1063 aminoácidos. Os
melhores quadros de leitura foram +1, +2 e +3. O ponto isoelétrico variou de 4,68 e 10,40 e o peso molecular de
32,54 a 110,78 kDa. Os domínios identificados nos genes OCT4, SOX2, REX1 e RONIN são completos e
conforme descrito em outras espécies. O domínio PGC7-Stella na isoforma X2 do RONIN ovino possui variação
quanto à região C-terminal. A isoforma X1 do SALL4 ovino apresenta quatro zinc fingers, enquanto que as demais
sequências de SALL4 apresentam seis. Os GRPs foram descritos como proteínas nucleares em humanos, embora
SOX2 e REX1 possam ser encontrados no citoplasma e núcleo. As duas isoformas do REX1 apresentaram maior
similaridade entre si do que com a de bovinos. No entanto, NANOG e SALL4 de ovinos apresentaram uma
isoforma (X1) mais conservada em relação aos bovinos, enquanto que a isoforma X2 apresentou maior variação
entre elas. As análises in silico demonstram que os GRPs são muito conservados entre ovinos e bovinos, embora a
variação entre algumas sequências sugira que ovinos possam apresentar variações quanto ao controle da
pluripotência, possivelmente mediados por isoformas específicas.
APOIO
CNPq; CAPES; Facepe
355
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
IDENTIFICAÇÃO IN SILICO DE AQUAPORINAS EM CALOTROPIS PROCERA
Maria Reis Velois Coêlho1; Rebeca Rivas1; João Pacífico Bezerra Neto2; Valesca Pandolfi2; Stephani Soares
Rodrigues dos Santos2; Ana Maria Benko Iseppon2; Mauro Guida Santos1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Botânica, Laboratório de Fisiologia Vegetal, Recife,
PE.; (2)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Laboratório Genética e Biotecnologia
Vegetal, Recife, PE
RESUMO
As aquaporinas (AQPs), proteínas de membrana transportadoras de água (MIP, Membrane Intrinsic Protein), estão
envolvidas com a homeostase hídrica, influenciando fatores relacionados com o crescimento e desenvolvimento do
vegetal. A prospecção de aquaporinas em plantas é de grande importância, principalmente visando a obtenção de
genótipos mais tolerantes as condições de seca e salinidade. O objetivo deste trabalho foi identificar sequências de
aquaporinas no transcriptoma de Calotropis procera sob condições de salinidade. Para tanto, foi realizada a
extração de RNA total do tecido foliar de plantas de C. procera expostas a salinidade (NaCl 100 mM) por 0h, 30
min, 2 h, 8 h, 45 dias após à imposição do sal e controle 45 dias (sem sal). Após o sequenciamento (via HiSeq2500
Illumina) foi realizada uma montagem 'de novo' via ferramenta Trinity, para a obtenção do transcriptoma da
espécie. Sequências de aquaporinas (obtidas no banco de dados NCBI e UNIPROT) foram usadas como sondas
para busca (via tBlastn) de aquaporinas no transcriptoma de C. procera (programa BioEdit). As sequências
identificadas, após traduzidas pela ferramenta ORFinder, foram submetidas ao CD-Search para a seleção de
sequências com domínio MIP completo. Por meio do programa MEGA foi realizado um alinhamento com
sequências de aquaporinas de C. procera, Arabdopsis thaliana e Hevea brasiliensis, e construída uma árvore
fenética, utilizando o método de Neighbor Joining (Bootstrap 1.000 repetições). Foram identificadas 33
sequências como possíveis aquaporinas, sendo nove com o domínio MIP completo. O alinhamento das sequências
permitiu a detecção dos motivos conservados NPA, localizados nos loops B e E de aquaporinas de C. procera,
com exceção das XIPs que apresentaram o resíduo alanina substituído pelo de valina no loop B. A análise fenética
das sequencias foram distribuídas em três grupos ortólogos, sendo PIP (seis membros), NIP (um membro) e XIP
(dois membros). Porém, não permitiu a identificação dos grupos de aquaporinas TIP e SIP, ambos encontrados em
plantas. Houve a formação de clusters menores para PIP, que foi subdivida em dois subgrupos: PIP 1 e PIP 2.
Com base nesse estudo, foi possível identificar e caracterizar membros das subfamílias MIP igualmente
importantes para outras espécies da família Apocynaceae.
APOIO
Financiamento: CAPES, CNPq.
356
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ARHGAPS FAMILY HISTORY: GAIN AND LOSS OF THE PROTEIN DOMAINS
Hallana Souza Santos1; Pamela Laiz Paré da Rosa2; Maria Cátira Bortolini2; Vanessa Rodrigues Paixão Côrtes1.
E-mail: [email protected]
(1)
UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA; (2)UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL
RESUMO
The ARHGAP (RHO GTPASE ACTIVATING PROTEIN) family has 41 paralogs genes involved in various
processes of cellular signaling as the SLIT-ROBO pathway and the activation of proteins RhoGTPases. Some of
them are active during the neurodevelopment of humans and other vertebrates. In this group, there are 4 genes
(SRGAP2B, SRGAP2C, SRGAP2D and ARHGAP11B) that were associated with the emergence of human
cognitive adaptive novelties. To describe the evolutionary history of this family, we performed a comparative
analysis of synteny and neighborhood of the human chromosomes that have ARHGAPs genes using the browser
Genomicus (84V), with a distance of 15 flanking genes to both sides. The sequences of all human ARHGAPs were
collected from Ensembl (v.84) and aligned using the MUSCLE algorithm available in Mega7. The PHYLOGENY
web server was used for the construction of a maximum likelihood phylogenetic tree, with 500 Bootstrap. We
found 150 gene families present in the neighborhood of the ARHGAPs, ranging from 8 to 31 in to pairwise shared
genes. The ARHGAP28 shares 31 family genes with the ARHGAP36 and ARHGAP9. It may indicate that these
genes may have arisen from duplication of a same chromosome segment. In addition, they share 3 protein domains
(PH, RHO-GAP, SH3), which suggests that perhaps these genes may have the same origin, that data are not
supported by the phylogenetic tree. The ARHGAP19 shared few neighbor genes with the ARHGAP25 and
ARHGAP1, and are 8 and 9 genes, respectively, indicating an unconserved neighborhood. Analyzing the tree,
some branches have a high confidence (100%), these are the branches where proteins share more domains, such as
the SH3BP1, ARHGAP17, ARHGAP44, which have in common F-BAR AND RHO-GAP domains. The proteins
SRGAP2A, SRGAP2B, SRGAP2C, SRGAP2D, SRGAP1, SRGAP3, and ARHGAP4 also were grouped with
100% of support, they all share the same domains (RHO-GAP, F-BAR and SH3). All of them are expressed
during the formation, maturation and migration of neurons. The ARHGAPs are very different among themselves
and there is no domain shared by all of them. This may occur due to the diversity of roles that these genes have
and the various cell compartments where they are expressed. Further analyzes are needed to relate the molecular
changes lead to evolutionary innovations.
APOIO
FAPESB
357
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
IN SILICO MODELING OF THE SOYBEAN SEED ALCOHOL DEHYDROGENASE (ADH) PROTEIN
Oliveira, Lailson Kavein Ruas1; Siqueira, Giovano Sousa2; Barbosa, Rafael Marani3; Pirovani, Carlos Priminho4.
E-mail: [email protected]
(1)
Graduando em Engenharia Agronômica, Universidade Estadual de Santa Cruz - UESC, Rodovia Jorge Amado,
Km 16, Bairro Salobrinho, CEP 45662-900. Ilhéus/BA. ; (2)Mestrando em Genética e Biologia Molecular,
Universidade Estadual de Santa Cruz - UESC, Rodovia Jorge Amado, Km 16, Bairro Salobrinho, CEP 45662-900.
Ilhéus/BA. ; (3)Professor Adjunto, Universidade Estadual de Santa Cruz - UESC, Rodovia Jorge Amado, Km 16,
Bairro Salobrinho, CEP 45662-900. Ilhéus/BA.; (4)Professor Titular, Universidade Estadual de Santa Cruz - UESC,
Rodovia Jorge Amado, Km 16, Bairro Salobrinho, CEP 45662-900. Ilhéus/BA.
RESUMO
Although there are many problems found in deteriorated seeds, injuries and other problems in the cellular
membrane systems are pointed out as the main changes that occur when deterioration starts taking place,
especially the damages caused to the inner mitochondrial membrane. This leads to aerobic metabolism failure and
decreases the oxidative phosphorylation, reducing energy production and by so affecting the development
metabolism of seeds. Under such conditions, cells start producing energy through anaerobic fermentation releasing
ethanol at the end of the process. The enzyme Alcohol Dehydrogenase (ADH) plays an important role therefore, as
it metabolizes the ethanol, functioning as an important biological marker for the physiological quality of seeds.
Homology models of proteins are of great interest for planning and analyzing biological experiments when no
experimental three-dimensional structures are available. In order to better understand the metabolic pathway of
fermentation in soybean seeds, the homology modeling of the three-dimensional structure of the ADH protein was
performed by using gene sequences available in the GENOSOJA database. The ADH protein is a constitutive
enzyme and it is present in many living organisms such as plants, animals, and microorganisms. For the in silico
modeling of the soybean seed ADH protein (GmADH1), the ADH PDB:4RQT mold of Arabidopsis thaliana var.
columbia (AtADH1) was used with 83,96 % of sequence identity. With a 748 amino acids (aa) residues sequence,
the GmADH1 protein has 2 chains, 36 segments on beta sheets and 32 alpha helices. Many common features and
high similarity were observed between the two proteins (GmADH1 vs. AtADH1), including the conservation of
key residues required to allow the interaction with Zn2+ ions. The generated model was validated with
PROCHECK, in which Ramachandran graph showed 100% of aa located in favorable energy regions. Analysis
using ANOLEA revealed an energy of -1,131.79 E / kT and the QMEAN server, a score of 0,80. Our results
showed that both models presented functional domains and structure similarity with the AtADH1 protein, as well
as many common conserved sequences with similar configuration.
358
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
A STUDY ON ECO-GEOGRAPHICAL INFLUENCE ON HYDROCARBON-DEGRADING AND
SURFACTANT PRODUCING GENE DIVERSITY USING PUBLIC-DATA
Jorge S. Oliveira1; Wydemberg J. Araújo2; Ricardo M. Figueiredo3; Rita C. B. Silva Portela2; Alaine de Brito
Guerra2; Sinara Carla da Silva Araújo2; Carolina Minnicelli2; Aline Cardoso Carlos2; Ana Tereza Ribeiro de
Vasconcelos4; Ana Teresa Freitas3; Lucymara F. Agnez Lima2.
E-mail: [email protected]
(1)
Laboratório de Biologia Molecular e Genômica, Departamento de Biologia Celular e Genética, Centro de
Biociências, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal-RN, Brazil a; INESC-ID/IST Instituto de
Engenharia de Sistemas e Computadores/Instituto Superior Técnico, Universidade de Lisboa, Lisboa, Portugal b;
(2)
Laboratório de Biologia Molecular e Genômica, Departamento de Biologia Celular e Genética, Centro de
Biociências, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal-RN, Brazil; (3)INESC-ID/IST Instituto de
Engenharia de Sistemas e Computadores/Instituto Superior Técnico, Universidade de Lisboa, Lisboa, Portugal ;
(4)
Laboratório de Bioinformática, Laboratório Nacional de Computação Científica, Petrópolis, RJ, Brazil
RESUMO
Introduction: The symbiotic action of biosurfactants and degradation enzymes in crude oil bioremediation has
been in the spotlight, mainly due to the awareness for ecosystem pollution, caused by crude oil accidents and use.
Initially, the scientific community studied the role of individual microbial species by characterizing and
optimizing its biosurfactant and oil degradation genes, studying their distribution one by one. However, with the
advances in genomics, especially with New-Generation-Sequencing and Metagenomics, these new techniques,
allow gene studies in different pathways and their interaction with other genes. Objective: It is, thus a new
opportunity to reveal and understand the interconnected role of microorganisms, and the natural role of
degradation and biosurfactant genes in an ecosystem, allowing the development of new biotechnological and
bioinformatics tools for bioremediation. Now it is possible, notwithstanding more challenging, to obtain the DNA
information of an entire microbial community and automatically characterizing it. Methods: In this work, 71
metagenomes, spanning 22 different biomes, obtained from different research projects were first analyzed. Our
pipeline contains a common part, containing quality control in the beginning, clustering and statistics in the end
and two parallel approaches in between: (1) A more sensitive domain-specific database alignment performed using
the BioSurfDB website, that uses blastp and (2) a global approach using the RefSeq non-redundant protein
database and a less sensitive alignment program - LAST. This combined approach enabled more efficient
processing of such large amount of data, when compared with traditional pipelines. Results: The function-based
clustering clearly separated some microbiomes based on their richness of genes involved in biodegradation and
biosurfactant production. These biomes have one thing in common - they are near the equatorial region. Statistical
tests confirmed these results. Conclusion: This work takes advantage of the value of public data, performing a
global-wide microbioecological study, using DNA-seq samples from terrestrial and aquatic ecosystems all across
the globe The results presented, suggest that latitude affects the biodegradation and biosurfactants production gene
abundance, which is also a starting point for further research in other areas of environmental microbiology,
including in the development of new bioremediation strategies.
APOIO
This work was supported by the Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientí?co e Tecnológico (CNPq-Brazil),
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES-Brazil), Fundação de Amparo à Pesquisa
do Rio de Janeiro and Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) with reference UID/CEC/50021/2013.
359
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ABORDAGEM METAGENÔMICA DA RIZOSFERA DE SISAL (AGAVE SISALANA) E DO AGAVE
HÍBRIDO 11648 CULTIVADOS NO SEMIÁRIDO DA BAHIA
Caroline Lopes Damasceno1; Eliane Leal Candeias2; Maria Luíza do Carmo Santos2; Lorena Brito Pimental
Rodrigues dos Santos2; Jeferson dos Santos de Souza2; Thiago Alves Santos de Oliveira2; Elizabeth Amélia Alves
Duarte2; Lenaldo Muniz de Oliveira1; Ana Cristina Fermino Soares2.
E-mail: [email protected]
(1)
PPGBiotec, Universidade Estadual de Feira de Santana (UEFS); (2)CCAAB, Universidade Federal do Recôncavo
da Bahia (UFRB)
RESUMO
O sisal (Agave sisalana Perrine Ex Engelm) caracteriza-se por ser uma espécie adaptada a climas semiáridos,
inclusive do nordeste do Brasil. A partir das folhas de sisal são obtidas as fibras duras as quais abastecem 70% do
mercado mundial de diversos segmentos industriais e artesanais. Contudo, nos últimos anos tem ocorrido declínio
na produção de sisal devido a doença podridão vermelha causada por Aspergillus niger. Devido a robustez da
cultura e ausência de manejo e tratos culturais o controle biológico é a alternativa viável para retomada da
produção de sisal. Para tanto, faz-se necessário conhecer a comunidade microbiana do patossistema, sobretudo
com abordagem metagenômica. Destarte, foi realizado o estudo da comunidade de bactérias da rizosfera de sisal
(A. sisalana) e do Agave Hibrido 11468 por NGS para fins de comparação da dinâmica populacional de ambas.
Considerando que a podridão vermelha é reportada em A sisalana e esporadicamente no Hibrido 11468 coletou-se
amostras de raiz de sisal com (COMD) e sem (SEMD) sintomas da doença e do Agave Hibrido 11468 SEMD,
coletadas de cultivos em Conceição do Coité, Bahia, Brasil. Para extração do DNA total de raízes utilizou-se o kit
UltraClean® Microbial DNA Isolation (MoBio). A integridade e a quantidade do DNA foi verificada no Qubit 2.0
Fluorometer (Invitrogen®). As bibliotecas foram construídas a partir das amplificações com os primers 515F e
806R da região V4-V5 do gene 16S rRNA, enriquecidas e aplicadas no Ion 318™ Chip Kit v2 para
sequenciamento na plataforma Ion Torrent PGM do laboratório de Bioquímica de Microrganismos e Plantas,
UNESP - Jaboticabal. As OTUs (Unidade Taxonômica Operacional) foram definidas utilizando o Mothur v.1.32.0
após filtrar as sequências a partir do MiSeq SOP, adotando a distância genética de 3% para agrupar as sequências
em OTUs e assim, classificar os microrganismos. De maneira geral os filos: Proteobacteria, Cyanobacteria,
Actinobacteria e Acidobacteria foram abundantes tanto em raiz de A. sisalana quanto do Híbrido 11648. Ao nível
de gênero destacou-se o grupo Burkholderia sp. com maior representatividade nos tecidos radiculares do agave
Híbrido 11648 (26,2%) seguido e em menor taxa em A. sisalana COMD (11,4%) e SEMD (1,7%). Burkholderia
spp. são microrganismos saprófitas, cuja associação com A. sisalana e o Híbrido 11648 pode estar relacionada à
atuação do grupo enquanto promotores do crescimento vegetal, antagonistas à fitopatógenos e produtores de
antimicrobianos.
APOIO
UFRB, CNPq, CAPES e FAPESB
360
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ABUNDÂNCIA DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO DA FAMÍLIA AREB/ABF EM FEIJÃO-CAUPI SOB
DESIDRATAÇÃO RADICULAR
João Pacífico Bezerra Neto1; Artemisa Nazaré Costa Borges1; Carolline de Jesús Pires1; José Ribamar Costa
Ferreira Neto1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Centro de Ciências Biológicas, Departamento de Genética,
Recife, PE, Brasil.
RESUMO
Proteínas AREB/ABF são fatores de transcrição (TFs) pertencentes à superfamília bZIP que se ligam ao
elemento cis ABRE, presentes na região promotora de vários genes regulados por ABA (ácido abscísico). São
conhecidos por seu envolvimento na regulação da resposta vegetal frente ao estresse hídrico. O presente estudo
objetivou analisar in silico a abundância de potenciais TFs AREB/ABF em diferentes acessos de Vigna
unguiculata [Pingo de Ouro (PO) - tolerante e Santo Inácio (SI) - sensível] sob condições de déficit hídrico. Para
isto, uma sequência de TF AREB/ABF (Uniprot: Q9M7Q3) foi usada como sonda contra bibliotecas de RNA-Seq
(banco NordEST) via tBLASTn (cut off ≤ e-05). Os transcritos identificados foram analisados em relação à sua
abundância nas três bibliotecas utilizadas na montagem do transcriptoma (T0 - controle, T75 - desidratação
radicular 75 min e T150 - desidratação radicular 150 min). Para isso, os valores de RPKM (Reads Per Kilobase
Million) foram usados para gerar um heat-map com os programas Cluster 3.0 e TreeView. Foram identificadas 81
sequências candidatas com domínio completo, sendo 19 encontradas em PO e 60 em SI. Os TFs AREB/ABF
mostraram-se expressos em todas as bibliotecas, indicando que a família de TFs estudada apresenta expressão
basal tanto em condições normais como sob estresse. Sabe-se que apenas alguns membros dessa família estão
relacionados diretamente à sinalização por intermédio de ABA no estresse hídrico. Com relação à abundância de
reads nos genótipos contrastantes, observou-se que em PO, as bibliotecas sob estresse foram mais similares entre
si quando comparadas com o controle, conforme observado para o transcrito PO16223.1 que apresentou maior
RPKM (70,62 e 62,06) nas bibliotecas T75 e T150 em relação à biblioteca controle T0 (14,3). Em contrapartida,
para SI observou-se que a biblioteca T75 é mais relacionada com o controle, indicando que a modulação
transcricional frente ao estresse aplicado ocorre tardiamente no genótipo sensível, enquanto que no genótipo
tolerante uma resposta precoce parece promover a ativação de mecanismos relacionados à tolerância. Assim, o
presente trabalho agrega informações valiosas a respeito da abundância e expressão de fatores AREB/ABF em
feijão-caupi sob desidratação radicular, fornecendo valiosos recursos genéticos com aplicabilidade em programas
de melhoramento e mapeamento genético da referida cultura.
APOIO
CAPES, CNPq e FACEPE.
361
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ACUMULAÇÃO PREFERENCIAL DE SEQUÊNCIAS REPETITIVAS DO TIPO
RETROTRANSPOSONS LTR TY3/GYPSY NO GENOMA DE PAYPAYROLA BLANCHETIANA TUL.
(VIOLACEAE)
Mariana Báez1; Marcus Braun1; Magdalena Vaio2; Andrea Pedrosa Harand1.
E-mail: [email protected]
(1)
UFPE; (2)Universidad de la República
RESUMO
O gênero Paypayrola Aubl. compreende seis espécies, sendo P. blanchetiana endêmica da Mata Atlântica do
leste do Brasil. Esta espécie habita o sub-bosque de florestas úmidas de baixada, onde ocorre localmente em
densidades altas. Nenhuma informação citogenética está disponível para o gênero, mas dados genômicos foram
gerados para análises genéticas populacionais. O estudo visa investigar a composição de sequências repetitivas no
genoma dessa espécie para auxiliar o entendimento da evolução genômica. Isto vai facilitar comparações com os
dados populacionais e assim ajudar no entendimento da complexa biologia floral desta espécie. O DNA genômico
foi extraído, purificado e submetido a sequenciamento do tipo Illumina, gerando 331000 reads de 250 pb cada.
Análises das sequências foram realizadas por meio da plataforma Galaxy/RepeatExplorer, o qual agrupa as
sequências com base em similaridade, gerando clusters para diferentes famílias de DNA repetitivo. Essas famílias
foram classificadas através de buscas em várias bases de dados e dos layouts dos gráficos dos clusters gerados.
Foram incluídas no agrupamento 517.214 sequências, num total de 5 Mpb. As sequências foram agrupadas em
27.262 clusters contendo de 2 a 5.105 sequências, correspondendo cada um dos 350 maiores clusters a pelo menos
0,01% no genoma. Em conjunto, todas as famílias repetitivas corresponderam a 28,4% do genoma da espécie,
sugerindo um genoma de pequeno tamanho. As análises permitiram classificar 10 linhagens de elementos
transponíveis do tipo retrotransposons LTR, vários transposons de DNA, sequências LINE e RNA ribossomal. Os
elementos repetitivos mais abundantes foram os retrotransposons do tipo LTR, representando 19,4% do genoma.
Os elementos LTR Ty3/Gypsy representaram mais da metade do total da fração repetitiva no genoma com um
15,1%, excedendo ~8 vezes os elementos Ty1/copia, sendo os dois mais abundantes das linhagens Athila e
Chromovirus com 5,8% e 5,5% respectivamente. Vários clusters da linhagem Chromovirus apresentaram o
domínio específico da região centromérica. Seis linhagens de elementos Ty1/copia também foram identificadas,
constituindo 1,9% do genoma, sendo as linhagens mais abundantes AleI/Retrofit e Maximus com 0,68% e 0,62%
respectivamente. Esta análise permitiu identificar um acúmulo de elementos repetitivos do tipo retrotransposon
LTR Ty3/Gypsy, em particular das linhagens Athila e Chromovirus, sugerindo uma amplificação preferencial
dessa família nessa espécie.
APOIO
Suporte financeiro: CNPq/FACEPE
362
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ANÁLISE DE SINTENIA DA FAMÍLIA GÊNICA PR-10 DE VIGNA UNGUICULATA NOS GENOMAS
DE VIGNA RADIATA E PHASEOLUS VULGARIS
Bruna Piereck1; Carolline de Jesús Pires1; Flávia Tadeu de Araújo1; Artemisa Nazaré Costa Borges1; José
Ribamar Ferreira Costa Neto1; Ana M. Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética
RESUMO
As proteínas da família PR-10 são pequenas, fortemente acídicas, resistentes a proteases e estão associadas à
resposta a estresses bióticos e abióticos. O presente estudo visou ancorar nos genomas de Vigna radiata
(Vr) e Phaseolus vulgaris (Pv) as sequências de PR-10 identificadas no transcriptoma do feijão-caupi (variedades
tolerante e sensível), observando a sintenia entre as mesmas. Primeiramente, foi realizado um BLASTn
localmente, promovendo a ancoragem dos transcritos contrastantes de V. unguiculata nos genótipos Pingo de Ouro
(PO) e Santo Inácio (SI), tolerante e sensível à seca, respectivamente. De posse dos dados da ancoragem, foram
gerados os links, excluindo os scaffolds, analisando-se as sondas dos genótipos contrastantes separadamente. A
visualização dos dados foi feita a partir de um mapa circular, gerado com o programa Circos. Foram observados
113 loci de PR-10 em V. radiata e 123 em P. vulgaris. Ao se analisar o genótipo tolerante PO foram identificados
49 loci em três cromossomos (5, 7 e 9) de V. radiata, a maioria no cromossomo 9 (20 loci). Por sua vez, em P.
vulgaris o cromossomo 3 foi o mais abundante, com 32 loci de um total de 46, distribuídos nos cromossomos 2, 3
e 19. Para o genótipo sensível SI foi visto um maior número de sítios de sintenia nas duas leguminosas estudadas,
sendo 68 loci localizados nos cromossomos 2, 5, 7 e 9 de V. radiata e 72 loci difundidos em quatro cromossomos
(2, 3, 9 e 11) de P. vulgaris. Os cromossomos mais abundantes foram Vr07 e Pv03 para V. radiata e P. vulgaris,
respectivamente. Esses dados justificam-se em virtude do maior tamanho do genoma de P. vulgaris. Além disso,
foi identificada a formação de clusters dos genes PR-10 e duplicações em tandem. Tal observação já foi relatada
em outras espécies, sendo indicativo de processos evolutivos por meio de duplicação em tandem. Detectou-se que
tanto sondas de SI quanto de PO não distinguem seu padrão de distribuição, havendo uma localização preferencial
no braço longo dos cromossomos de P. vulgaris. Com exceção dos cromossomos Vr09 e Vr02, todos os outros
apresentaram sequências nas porções mais distais do cromossomo (em torno de 30-40 Mb). O presente trabalho
agregou informações a cerca da distribuição dos transcritos de PR-10 de feijão-caupi em outras duas leguminosas
relacionadas, o que reforça a hipótese de que o principal mecanismo de evolução dessa família gênica está
associado a eventos de duplicação gênica.
APOIO
Financiamento: CAPES, CNPq, FACEPE.
363
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ANÁLISE DE TRANSCRIPTOMA REVELA A PRESENÇA DO GENE ÁCIDO FARNESÓICO OMETILTRANSFERASE (FAMET) NAS FASES LARVAIS E ADULTA DO MACROBRACHIUM
AMAZONICUM.
Soraia Costa de Carvalho1; Carlos Murilo Maciel1; Maria Iracilda Sampaio1; Cristiana Ramalho Maciel1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal do Pará, Instituto dos Estudos Costeiros, Bragança-PA
RESUMO
A enzima ácido farnesóico O-metiltransferase (FAMeT) catalisa a síntese do hormônio Metil farnesoate (MF), o
qual é considerado o hormônio juvenil dos crustáceos e está envolvido na morfogênese, muda, desenvolvimento e
reprodução de pelo menos oito espécies desse grupo. O Macrobrachium amazonicum é um camarão com elevado
potencial econômico e ecológico, podendo estar sujeito às implicações do gene FAMeT ao longo de seu
desenvolvimento ontogenético. Portanto, esse trabalho teve como objetivo detectar a presença de transcritos do
gene FAMeT em M. amazonicum nas fases larvais (I, V e PL), e adulta nos tecidos ovário, aparelho reprodutor
masculino (testículo e glândula androgênica) e hepatopâncreas, usando a tecnologia do sequenciamento de nova
geração. As larvas e tecidos foram macerados em nitrogênio líquido para posterior extração de RNA. Após o
isolamento dos mRNAs, foi preparada a biblioteca de cDNA seguido pelo sequenciamento no Ion TorrentTM em
chip 318. Os reads obtidos foram montados no software Trinity numa abordagem De Novo. Os transcritos foram
submetidos ao BLASTx usando o banco de dados de proteínas do Uniref90 e Uniprot. Para a anotação funcional
(Gene Ontology) foi utilizado o software Blast2GO. Foram obtidos 5 transcritos referentes ao gene putativo da
FAMeT e análises no banco de dados Gene Ontology revelaram que este gene é expresso nas fases larvais V e PL
e nos órgãos reprodutores masculino e feminino dessa espécie. Os valores de RPKM (Kilobase de exon por milhão
de reads mapeados) registrados para os órgãos reprodutores foram altos, indicando que a expressão do gene
FAMeT talvez não seja sexo-específica nessa espécie. Além disso, os fragmentos revelaram uma elevada
similaridade (94%) com as FAMeTs de outros crustáceos, sugerindo que a FAMeT de M.
amazonicum possivelmente esteja envolvido nos processos fisiológicos, reprodutivos, de muda e desenvolvimento
dessa espécie. Esse é o primeiro estudo que revela a presença do gene FAMeT na fase larval e adulta de M.
amazonicum e tais informações poderão fornecer subsídios para pesquisas posteriores de caracterização e
expressão do gene FAMeT nessa espécie, além de vislumbrar possíveis estratégias de intervenção em
biotecnologia para M. amazonicum.
APOIO
CNPq (Universal Processo 447954/2014)
364
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ANÁLISE DE TRANSCRITOS HIPERMODULADOS EM SEMENTES DE ACESSOS
CONTRASTANTES DE MILHO SUBMETIDAS À INFECÇÃO POR FUSARIUM VERTICILLIOIDES
José Ribamar Costa Ferreira Neto1; Carolline de Jesus Pires1; Artemisa Nazaré da Costa Borges1; Gizele de
Andrade Luz2; Maria Fernanda da Costa Gomes2; Ana Maria Benko Iseppon1; Ederson Akio Kido1.
E-mail: [email protected]
(1)
Universidade Federal de Pernambuco; (2)Universidade Federal do Piauí
RESUMO
Diversos grupos de pesquisa têm utilizado bancos de dados de valor agregado (BDVA) para comparar seus dados
com outros e/ou minerar situações específicas não investigadas em dados publicados. Este trabalho recai sobre a
segunda alternativa. Para tanto, minerou-se informações contidas nos transcritomas de milho estudados no
manuscrito "e;Functional genomic analysis of constitutive and inducible defense responses to Fusarium
verticillioides infection in maize genotypes with contrasting ear rot resistance"e; (PMID: 25155950), disponível
na BDVA Expression Atlas (código "e;E-MTAB-4219"e;). Teve-se como intuito analisar, em sementes, transcritos
hipermodulados (Adjusted p-value cutoff ≤ 0.05 e Log2-fold change cutoff ≥ 3.5), ou seja, aqueles com um número
de cópias, no mínimo, dez vezes maior após a infecção por Fusarium verticillioides, quando comparado à situação
controle (mock). Pressupõe-se que transcritos com tal característica de modulação possam estar intimamente
associados à reposta ao patógeno sob análise. Nesses termos, foram encontrados 533 transcritos para o acesso
resistente (CO441) e 64, para o acesso suscetível (CO354), nas bibliotecas RNA-Seq analisadas. Adotou-se a
estratégia de "e;Gene Set/Pathway Enrichment Analysis"e; (Fisher-exact, FDR < 0,01) para alçar significado
biológico ao conjunto de transcritos identificados. As dez vias metabólicas mais enriquecidas nos dois conjuntos
de transcritos analisados variaram parcialmente. Tal fato seria esperado, uma vez que os acessos analisados são
fisiologicamente contrastantes. Adicionalmente, observou-se que as vias de sinalização dos hormônios jasmonato
e salicílico foram as mais enriquecidas para ambos acessos, demonstrando a importância da participação hormonal
na reposta de milho ao fungo em questão. Das três funções moleculares associadas aos termos GO mais
enriquecidos, duas foram idênticas entre os conjuntos de transcritos analisados: "e;resposta à injúria"e;
(GO:0009611), e o termo genérico "e;atividade de ATPase"e; (GO:0016887). Presume-se que o termo
"e;GO:0009611"e; esteja enriquecido devido à injuria mecânica realizada para a inoculação do fungo no vegetal.
As funções moleculares "e;transporte de cátion"e; (GO:0006812) e "e;biossíntese de ácidos graxos"e;
(GO:0006633), foram específicas para os acessos resistente e suscetível, respectivamente. Tal dado é um
indicativo das especificidades da fisiologia molecular dos acessos analisados e pode atuar na diferenciação dos
mesmos.
APOIO
PNPD-CAPES; Rede Intersis
365
Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ANÁLISE FENÉTICA DE PROTOZOÁRIOS DO GÊNERO LEISHMANIA, AGENTES ETIOLÓGICOS
DAS LEISHMANIOSES
Lucas Christian de Sousa Paula1; Moezio de Vasconcellos Costa Santos Filho2.
E-mail: [email protected]
(1)
Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Pernambuco - UFPE; (2)Programa
de Pós-graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco - UFPE
RESUMO
As Leishmanioses são um grupo de doenças tropicais negligenciadas causadas por protozoários parasitas do
gênero Leishmania. Esta doença está presente em cerca de 98 países causando mais de 1,5 milhões de casos por
ano e levando, aproximadamente, 350 milhões de pessoas ao risco de infecções. O gênero Leishmania pertence à
família Trypanosomatidae que é composta obrigatoriamente por organismos parasitas. Os membros desta família
podem parasitar insetos e outros hospedeiros, incluindo organismos monoxênicos tal como Crithidia, Leptomonas,
Herpetomonas e Blastocrithidia. Durante o ciclo infeccioso no hospedeiro vertebrado, a Leishmania precisa
sobreviver a um rigoroso ambiente oxidante nos macrófagos e o gene TRYR (trypanothione reductase) e seus tióis
subordinados desempenham um papel essencial na manutenção de um ambiente redutor intracelular para proteger
esses parasitas contra danos oxidativos, resultantes do seu metabolismo aeróbico e, externamente, pela resposta
imunitária do hospedeiro mamífero. Tendo em vista este fator, objetivou-se separar espécies de Leishmania
utilizando uma abordagem fenética. Foi realizada uma busca no banco de dados do
NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) e selecionado o gene TRYR de Leishmania infantum. A sequência seed foi
comparada com o banco de dados do próprio NCBI utilizando a ferramenta BLASTn. A partir do BLAST foram
selecionadas oito sequências de espécies diferentes do gênero Leishmania e duas sequências dos gêneros
Leptomonas e Crithidia respectivamente para o outgroup. Para alinhamento das sequências nucleotídicas foi
utilizado o pacote de programas MEGA7 (http://www.megasoftware.net/) e o algoritmo ClustalW e também a
geração de árvore fenética e matriz de distância. O gene TRYR mostrou uma taxa de conservação considerável
dentro do gênero Leishmania. A partir da similaridade das sequências nucleotídicas foi possível agrupar
Leishmania infantum e L. donovani em um clado, o que se era esperado devido a esses organismos fazerem parte
de um complexo de espécies. Todos os ramos do fenograma tiveram nós com valores de bootstrap entre 97-100%.
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Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ANÁLISE FENÉTICA DE TFS DA FAMÍLIA MYB EM ANGIOSPERMAS
Danubia Rita de Sá Leal1; Mitalle Karen da Silva Matos1; Carolline de Jesús Pires1; Ana Maria Benko Iseppon1.
E-mail: [email protected]
(1)
Manoel Fernando Leal e Rita Eloina de Sá Leal
RESUMO
Para se adaptar e sobreviver aos estresses ambientais, as plantas são induzidas a produzir uma série de respostas
fisiológicas e bioquímicas. Os fatores de transcrição (FTs) atuam como reguladores centrais da expressão gênica,
desempenhando papel fundamental na resposta de aclimatação e adaptação às condições desfavoráveis. A família
MYB (myeloblastosis) de FT compreende uma das maiores famílias gênicas, sendo o domínio do tipo R2R3-MYB
o mais prevalente em plantas. O presente trabalho objetivou realizar uma análise fenética com os FTs MYB em
vegetais. Para isso, foi realizada uma busca no banco de sequências não-redundantes do NCBI (National Center
for Biotechnology Information) por sequências homólogas à proteína VuMYB_23 do feijão-caupi [Vigna
unguiculata (L.) Walp.], utilizando o algoritmo PSI-BLAST. Foram selecionadas 32 sequências proteicas e
nucleotídicas com base nos melhores valores de e-value (cut-off de 7e-143), as quais foram alinhadas utilizando a
ferramenta Clustal Ômega contida no Unipro UGENE 1.19. Para as análises fenéticas, foram realizadas edições
manuais no alinhamento, sendo construídos fenogramas no programa MEGA 6, utilizando o método de NeighborJoining, com 1000 replicações de bootstrap. Das 32 sequências de TF MYB selecionadas, 29 sequências
envolveram espécies de dicotiledôneas e 3 do grupo das monocotiledôneas (classe Liliopsida) representando o
grupo externo. No fenograma gerado a partir das sequências proteicas, verifica-se que alguns agrupamentos
formados, em nível de ordem ou níveis menores, apresentaram valores de bootstraps relativamente altos (82% a
100%), como observado nos valores dos agrupamentos que reúnem as sequências proteicas de espécies das
famílias Fabaceae e Rosaceae, indicando que as sequências de TF MYB apresentam-se bastante similares nestes
grupos. Verifica-se ainda uma elevada proporção de similaridade nos nós que representam os agrupamentos
formados pelas espécies de monocotiledôneas (grupo externo) e dicotiledôneas (99% e 96%, respectivamente).
Comparativamente, no fenograma obtido a partir das sequências de nucleotídeos, percebe-se que os organismos
estão agrupados de forma muito semelhante e com proporções de replicações ainda mais elevados nos nós que
formam os agrupamentos citados anteriormente, indicando que as sequências nucleotídicas são mais informativas
para este tipo de análise, comparativamente às sequências proteicas.
APOIO
Capes, Facepe, CNPq
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Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas
ANÁLISE IN SILICO DE ESTS DE CANA-DE-AÇÚCAR RESPONSIVOS A SECA NA VIA DE
SINALIZAÇÃO DO ÁCIDO SALICÍLICO (AS).
Samara Alves da Silva1; Amanda Thamires Batista do Nascimento2; Valquiria da Silva1; Vinicius Torres Guerra3;
Elvson Wallacy da Silva3; Éderson Akio Kido4.
E-mail: [email protected]
(1)
Aluna de Graduação em Ciências Biológicas / Bach - UFPE; (2)Programa de Pós-graduação em Genética - CB UFPE; (3)Aluno de Graduação em Ciências Biológicas / Bach - UFPE; (4)Professor Associado do Departamento de
Genética - CB - UFPE
RESUMO
A cana de açúcar (Saccharum spp.) é uma gramínea de grande importância agrícola, porém seu cultivo enfrenta
perdas significativas devido à ocorrência de estresses abióticos, principalmente aquele relacionado a seca. Os
fitormônios atuam na indução e repressão de genes, apresentando papel fundamental na resposta da planta sob
estresses (a)bióticos. Em vista disso, o presente trabalho teve como objetivo analisar a expressão, sob estresse de
seca (24 h após supressão de rega), de transcritos de cana-de-açúcar (tags de 26 pb) codificadores de proteínas
participantes da via de sinalização do fitormônio ácido salicílico (AS), um regulador de crescimento endógeno,
cuja a função de sinalizador em estresses (a)bióticos também é relatada. Estavam disponíveis quatro bibliotecas
HT-SuperSAGE [controle negativo vs tratamento (supressão de rega 24 h)] de bulk de quatro acessos tolerantes e
outro s